العزلة والتعرف السلوكي لمسببات الأمراض الفطرية من Monochamus alternatus

بعد جمع منشار الصنوبر ، خنافس Monochamus alternatus ، ضع الخنفساء في أنبوب معقم يحتوي على أغصان طازجة. قم بتربية الخنافس في حاضنة غير رطبة عند 25 درجة مئوية. بعد الحضانة ، تظهر الخنافس القياسية انخفاض التغذية والتنقل.

نقل الخنافس الميتة القاسية إلى الغرف الرطبة. تشريح الخنافس المصابة بالتهابات فطرية إلى مواضع رئيسية مثل الهوائيات والرأس والصدر والبطن والأجنحة والساقين. باستخدام المقص ، قم بقص تكامل كل موضع إلى قطع صغيرة.

اضغط برفق على السطح الخارجي لهذه القطع على لوحة PDA التي تحتوي على المضادات الحيوية. ختم لوحة مع parafilm واحتضان في 25 درجة مئوية حتى يتم تغطية الأنسجة بالكامل من قبل mycelium. ثم انقل المستعمرة المفردة وفقا لخصائص النمط الظاهري إلى لوحة PDA جديدة.

استخرج الحمض النووي الجينومي باستخدام مجموعة عزل الحمض النووي الجينومي للفطريات. تحضير خليط تفاعل البوليميراز المتسلسل مع البادئات ITS1 و ITS4 لتضخيم منطقة rDNA-ITS من الحمض النووي. استخدم كاميرا لالتقاط مورفولوجيا مستعمرة نقية فطرية ناضجة على الجانبين الأمامي والخلفي للوحة المساعد الرقمي الشخصي.

نتف كونيديا من المستعمرات الفطرية النقية بإبرة تلقيح ونقلها إلى شريحة زجاجية مع قطرة ماء معقمة. ثم ضع غطاء على العينة دون إدخال فقاعات. قطع كتلة أجار خمسة ملليمترات بمشرط من حافة المستعمرة الفطرية ونقلها إلى شريحة زجاجية نظيفة مع قطرة من الماء المعقم.

باستخدام إبرة دقيقة ، افصل الفطريات بعناية عن الآجار لمراقبة هياكل محددة. تحت المجهر الضوئي ، لاحظ التحول اللاجنسي للفطريات ، بما في ذلك وضعية الخيوط ، و conidiophores ، و phialides ، و conidia.