تلطيخ الخلايا التائية الخاصة بالمستضد بالببتيد: رباعيات MHC لتحليل التدفق الخلوي والفرز

بعد إثراء عينة الرئة للخلايا التائية ، أضف ملليلتر واحد من 10 ملليمولار داساتينيب إلى كل عينة. دوامة الخليط واحتضان لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. أضف PE أو APC الببتيد المترافق MHC tetramer إلى تركيز نهائي يبلغ 10 نانومولار.

بعد دوامة الخليط ، احتضانه في الظلام لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بينما تكون العينة ملطخة برباعيات الببتيد MHC ، قم بإعداد مزيج رئيسي من الأجسام المضادة لتلطيخ علامات سطح الخلية مع بقاء 15 دقيقة في فترة حضانة تلطيخ tetramer ، أضف المزيج الرئيسي للأجسام المضادة السطحية بتخفيف من 1 إلى 100. أضف 50،000 حبة عد قياس التدفق الخلوي ومخزن فارز بارد للوصول إلى حجم نهائي يبلغ حوالي خمسة ملليلتر ، ثم أضف محلول فارز بارد إلى حجم 15 ملليلتر وطرد مركزي الأنبوب عند 400 × جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية.

استنشق بعناية طاف ، وترك ما يقرب من 100 ميكرولتر من طافد وبيليه الخلية. الآن أعد تعليق العينة ب 200 ميكرولتر إضافية من المخزن المؤقت للفارز وانقلها إلى أنبوب FACS سعة خمسة ملليلترات.