إثراء عينة الرئة للخلايا التائية عن طريق إثراء الخرزة المغناطيسية

للبدء ، أضف 50 ميكرولترا من ميكروبيدات CD90.2 المضادة للفأر إلى خلايا الرئة المعزولة. بعد دوامة الخليط ، احتضانه لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية. بعد ذلك ، ضع عمود فصل الخلايا البارامغناطيسية على مغناطيس فصل خلية واحد أو أربعة مواضع.

ضع أنبوبا مخروطيا مفتوحا سعة 15 ملليلترا أسفل كل عمود لالتقاط التدفق من خلاله. قم بتجهيز العمود بثلاثة ملليلتر من المخزن المؤقت للفرز البارد ، مما يسمح للعمود بالتصريف عن طريق الجاذبية في الأنبوب المخروطي أدناه. بعد تحضين الخلايا بالميكروبيدات لمدة 10 دقائق ، أضف محلول فارز بارد إلى حجم ملليلتر واحد وانقل الخليط من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر موضوعة فوق العمود.

اجمع تدفق العمود إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 15 ملليلتر يوضع أسفل العمود. بمجرد أن يتم تصريف تعليق الخلية تماما من خلال العمود ، أضف ثلاثة ملليلتر إضافية من المخزن المؤقت للفرز البارد إلى الأنبوب الأصلي وقم بتطبيقه على العمود من خلال الشبكة قبل إزالة المصفاة. عندما يتم تصريف العينة تماما في العمود ولا يخرج أي تدفق آخر من خلالها ، قم بإزالة العمود من المغناطيس وضعه فوق أنبوب مخروطي جديد سعة 15 ملليلتر.

أضف خمسة ملليلتر من المخزن المؤقت للفارز البارد إلى العمود. لاستئصال الخلايا المرتبطة ، ادفع مكبس العمود لأسفل بحركة واحدة مستمرة ، مما أجبر المخزن المؤقت على الخروج من القاع إلى أنبوب جديد. أجهزة الطرد المركزي العينات المستخلصة عند 400 × جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية.

استنشق بعناية طاف ، وترك ما يقرب من 100 ميكرولتر من طافد وبيليه الخلية. في المتوسط ، تستعيد عملية التخصيب أكثر من 99٪ من جميع الخلايا التائية الإيجابية CD90.2 من الرئتين بنقاوة تزيد عن 90٪.