للبدء ، احصل على عضويات معدية بشرية تنمو بنشاط بأقطار تتراوح بين 200 و 700 ميكرومتر. قم بإذابة المصفوفة خارج الخلية ، أو ECM ، على الجليد لمدة 45 دقيقة على الأقل. وألواح زراعة الخلايا المسخنة عند 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪.
بعد إزالة الوسائط من آبار لوحة الاستزراع ، تثلج الماصة PBS على كل قطرة ECM. وخدش الجل بطرف ماصة P-1000. اجمع برنامج تلفزيوني مع شظايا ECM التي تحتوي على مواد عضوية في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر.
جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 200 جرام عند أربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق. بعد شفط المادة الطافية ، أضف 350 ميكرولترا من 0.25٪ Trypsin-EDTA في كل أنبوب واخلطه برفق. احتضان الأنابيب في حمام مائي ، خفف عند 37 درجة مئوية لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق.
أضف 600 ميكرولتر من الثلج البارد DMEM ، مع استكمال البنسلين والستربتومايسين إلى كل أنبوب ، وماصة بقوة لأعلى ولأسفل 40 مرة. أجهزة الطرد المركزي الأنبوب كما هو موضح ، وإعادة تعليق لوحة الخلية في ECM السائل البارد الجليدي. لكل عينة ، لوحة 40 ميكرولتر من ECM السائل تحتوي على شظايا عضوية في خط أفقي رفيع على طول قطر طبق سفلي زجاجي 35 ملم.
بعد 15 إلى 30 دقيقة من الحضانة ، أضف بعناية ملليلتر من وسائط التمدد العضوية إلى اللوحة على طول حافة الطبق دون إزعاج الجل المبلمر.