للبدء ، ضع عين فأر رسمية وثابتة على قطعة من ورق الشمع تحت مجهر تشريح. باستخدام زوج من الملقط الدقيق ، امسك بقايا العضلات والعصب البصري. ثم وجه العين بحيث تواجه القرنية جانبا واحدا.
استخدم الآن شفرة جراحية لعمل شق بطول واحد إلى ملليمترين خلف الطرف وموازيته. ضع قوة لأسفل بالشفرة مع تثبيت العين في مكانها حتى ينفصل الجزء الأمامي عن الطرف الخلفي. ثم تجاهل الجزء الأمامي والعدسة.
انقل الجزء الخلفي إلى طبق طوله ستة سنتيمترات مليء ب PBS. استخدم ملعقة صغيرة لاستخراج شبكية العين مع إمساك العصب البصري في نفس الوقت باستخدام ملقط صغير. لشطف شبكية العين ، انقلها إلى بئر من صفيحة مكونة من 12 بئرا تحتوي على ستة آبار مملوءة بالماء المقطر المزدوج.
استخدم ماصة P1000 لنقل الماء بعناية لأعلى ولأسفل بجوار شبكية العين أثناء نفخ الماء لإحداث تحريض لطيف. بعد ذلك ، استخدم ماصة زجاجية مقلوبة لنقل شبكية العين إلى البئر الثاني. لهضم شبكية العين ، انقل شبكية العين المغسولة إلى محلول التربسين في صفيحة من 12 بئرا باستخدام ماصة زجاجية مقلوبة.
ضع طرف ماصة P200 مبللة بالتربسين على العصب البصري. ثم قم بعمل ماصة شبكة الأوعية الدموية بأكملها لأعلى ولأسفل لفصل الأنسجة غير الوعائية. الآن ، استخدم ماصة زجاجية مقلوبة مغسولة مسبقا في التربسين لنقل الأوعية الدموية في الشبكية إلى بئر يحتوي على ماء مقطر مزدوج في صفيحة من ستة آبار.
قم بتدوير اللوحة، ثم قم بتدوير الأوعية الدموية لأعلى ولأسفل باستخدام ماصة زجاجية مغسولة بالتربسين مقلوبة لإزالة أي أنسجة غير وعائية متبقية. انقل الأوعية الدموية في الشبكية بعناية إلى مركز المنطقة المحددة على شريحة مجهرية سطحية مشحونة. ثم استخدم ماصة P200 لإزالة الماء الزائد بعناية من حافة واحدة.
ضع الشريحة في خزانة السلامة الحيوية بالقرب من الجانب الأمامي للسماح للماء المتبقي بالتبخر. عندما تكون الأوعية الدموية جافة تقريبا ، قم بنقلها تحت مجهر تباين الطور. استخدم ماصة P200 لإضافة الماء المقطر المزدوج ببطء على جانب واحد من المنطقة المحددة لإعادة ترطيب الأوعية الدموية بعناية.
أدى تثبيت الأوعية الدموية المعزولة للشبكية إلى أنسجة قوية من الناحية الهيكلية ومتينة بما فيه الكفاية مناسبة لقياسات AFM. في المقابل ، أصبحت أوعية الشبكية المعزولة عن العيون غير الثابتة أو الثابتة لفترة وجيزة مجزأة وانهارت.
