مجموعة من المصفوفة تحت البطانية من مزارع الخلايا البطانية الوعائية الدقيقة للشبكية (REC) لقياس صلابة مجهر القوة الذرية (AFM)

للبدء ، اشطف زلات الغطاء المطلي بالجيلاتين المتشابك في PBS الذي يحتوي على مغنيسيوم الكالسيوم حوالي خمس مرات على شاكر مداري. خلال عمليات الشطف الثلاث الأولى ، ارفع زلات الغطاء باستخدام ملاقط معقمة للسماح بشطف الجلوتارالديهايد جيدا. بعد ذلك ، استبدل وسط استزراع RECs للفأر بوسط جديد مكمل بحمض الأسكوربيك المعقم والمفلتر.

بعد 15 يوما من العلاج ، اشطف الخلايا باستخدام PBS الخالي من الكالسيوم والمغنيسيوم. احتضان الخلايا في 250 ميكرولتر من المخزن المؤقت الدافئ لإزالة الخلايا لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق. تأكد من إزالة الخلايا من الخلايا تحت مجهر تباين الطور.

قم بإخراج الماصة برفق من المخزن المؤقت دون إزعاج المصفوفة البطانية تحت البطانية المفرزة من REC. ثم أضف 0.5 مل من PBS في كل بئر. بعد إزالة PBS ، أضف 200 ميكرولتر من DNase الخالي من RNase.

احتضان الخليط على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لإزالة جميع الحطام الخلوي. بعد ذلك ، اعرض المصفوفة تحت البطانية الليفية الكبيرة تحت مجهر تباين الطور. ثم استخدم مجهرا متحد البؤر لعرض ألياف المصفوفة النانوية الدقيقة بتكبير 100x.

لوحظت مجاميع المصفوفة تحت البطانية على زلات الغطاء الزجاجي بعد نزع الخلايا من مزارع 10 أيام أو 15 يوما من RECs البشرية أو الفأر. أظهر الفحص المجهري متحد البؤر للمصفوفات منزوعة الخلايا مصفوفة الكولاجين الليفي النانوية الكثيفة والفيبرونيكتين.