تحضير أقسام أنسجة رئة الفئران لتلوين الإيزولكتين B4 لتقييم كثافة الأوعية الدموية الدقيقة الرئوية

للبدء ، ضع أنسجة رئة الفأر في 4٪ بارافورمالدهيد ، أي 10 أضعاف حجم الأنسجة. بعد ثلاث ساعات من التثبيت ، افصل الفصوص الرئوية الخمسة وقم بتضمين الفصوص القحفية والوسطى والملحقات للرئة اليمنى بشكل منفصل ، مع التوجيه في اتجاه اتصال الفص الرأسي إلى الشعب الهوائية. ثم قم بتقطيع الفص الذيلي للرئة اليمنى إلى قطعتين بمقدار أربعة ملليمترات من اليسار إلى اليمين في الاتجاه العمودي على اتصال الفص الرئوي والشعب الهوائية ، وقم بتضمين الشرائح في كتلة شمعية ، بحيث يكون السطح المقطوع متجها لأعلى.

لإجراء ثلاث جروح في فص الرئة الأيسر ، قم بقصها بشكل عرضي فوق تقاطع الشعب الهوائية الرئيسي ، ملليمترين تحت الجزء العلوي. قم بعمل القطع الثاني بشكل عرضي فوق تقاطع الشعب الهوائية الرئيسي ، خمسة ملليمترات تحت الأعلى. قم بعمل القطع الثالث في نهاية الفص ، ثمانية ملليمترات تحت الأعلى.

بعد التخلص من الجزء العلوي من الأنسجة ، قم بتغليف القطع الثلاث المتبقية في كتلة شمعية ، بحيث يكون السطح المقطوع متجها لأعلى. بعد إعادة التثبيت ، اشطف كتلة الأنسجة تحت الماء المتدفق لمدة 15 دقيقة. اغمر الأنسجة بالتتابع في تركيزات الإيثانول المتصاعدة ، متبوعا بالزيلين والشمع الناعم.

املأ القالب بكمية مناسبة من البارافين السائل ، وباستخدام الملقط ، ضع الأنسجة في إطار التضمين في المنتصف. ضع القالب والأنسجة في منطقة التجميد لآلة التضمين. عندما يبدأ البارافين في التبييض قليلا ، ضع إطار التضمين المكشوف بسرعة أعلى القالب وقم بإجراء حقن الشمع الثاني ، وإغلاق الثقوب الموجودة في الجزء السفلي من إطار التضمين.

ثم انقل القالب بالكامل إلى طاولة التجميد. بعد تثبيت كتلة الشمع على آلة التقطيع ، قم بقص الكتلة لتكشف عن سطح قطع أملس ومسطح. قم بتدوير كرنك عجلة الميكروتوم لقطع شرائح بسمك أربعة ميكرومترات.

ضع الأقسام التي تمت إزالتها بسلاسة على سطح الماء بالتتابع. بمجرد تمديد الأقسام بالكامل ، افصل القطع المكسورة عند التقاطعات بين كل قسم. قم بإمالة شريحة زجاجية أسفل القسم ، وعند ملامسها ، ارفع الشريحة ببطء وبشكل متساو من سطح الماء بحركة رأسية.