تحضير معلق الجنين أحادي الخلية لتحليل قياس التدفق الخلوي لتقييم زراعة الأعضاء في الورم

للبدء ، احصل على أجنة الزرد المحقونة بخلايا سرطان الدم الملطخة مسبقا ب CM-Dil. انقل الأجنة المخدرة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر وباستخدام ماصة P200 ، قم بإذابة صفار البيض في 100 ميكرولتر من محلول الرنين الخالي من الكالسيوم لمدة خمس دقائق. احتضان كل عينة من الأجنة منزوعة الأصباغ بملل لتر واحد من محلول كولاجيناز التربسين عند 29 درجة مئوية لمدة 30 إلى 35 دقيقة.

باستخدام طرف P1000 ، ماصة الأجنة لأعلى ولأسفل في هذا المحلول كل خمس دقائق حتى يصبح هيكل العمود الفقري غير مرئي. لإيقاف التفاعل ، أضف 200 ميكرولتر من FBS إلى الأنبوب. تخلط جيدا واحتضان لمدة خمس دقائق إضافية.

بيليه تعليق الخلية عند 300 غرام لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. بمجرد التخلص من المادة الطافية ، اغسل حبيبات الخلية مرتين في برنامج تلفزيوني مبرد وقم بتصفية الخلايا من خلال مصفاة خلية 70 ميكرومتر. بعد غسل الخلايا ، أعد تعليق حبيبات الخلية في وسط التلوين الذي يحتوي على جسم مضاد تفاعلي مع الخلايا المزروعة.

احتضان الخلايا عند أربع درجات مئوية لمدة 20 دقيقة. حبيبات الخلايا وإعادة تعليقها في 200 ميكرولتر من وسط تلطيخ ، تحتوي على حلزون ميكرومولي واحد و P Blue. انقل مزيج الخلايا إلى أنبوب بولي كربونات دائري القاع سعة خمسة ملليلتر وقم بإجراء قياس التدفق الخلوي.

سمح وضع العلامات المزدوجة بقياس الاختلافات في عبء الورم بين التلقيح الجيد مقابل البلعة السفلية.