hSATMVEC-Adipocyte Co-Synturturing للتحقيق في المحادثات الخلوية المتقاطعة في المرضى الذين يخضعون لزرع CIED

للبدء ، قم بإذابة الممر ، وهو عبارة عن خلايا بشرية بيضاء تحت الجلد ، وأضف الخلايا إلى دورق T75 يحتوي على 12 إلى 15 ملليلتر من وسائط نمو الخلايا preadipocyte-2 الدافئة. بعد أن تصل الخلايا إلى التقاء 90٪ ، اغسلها باستخدام PBS واحتضانها بمليلتر واحد من محلول 0.25٪ Trypsin-EDTA لمدة دقيقتين. باستخدام المجهر الضوئي ، تأكد من انفصال الخلية وأضف 23 ملليلتر من وسائط نمو الخلايا preadipocyte-2 إلى الخلايا.

قم بتوزيع ملليلتر واحد من تعليق الخلية في كل بئر من صفيحة مصاحبة للثقافة المشتركة مكونة من 24 بئرا واحتضان اللوحة للوصول إلى التقاء الخلايا. ثم استبدل الوسائط بملليلتر واحد من وسط تمايز الخلايا preadipocyte واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 10 أيام. في اليوم السادس من التمايز ، بذرة خمسة في 10 إلى قوة أربعة من MVECs SAT البشرية في 500 ميكرولتر من وسائط نمو MVEC الكاملة على ملحق transwell.

ضع الملحق في بئر يحتوي على 500 ميكرولتر من وسائط نمو MVEC الكاملة واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم 10 ، عندما يتم تمييز الخلايا الشحمية تماما ، قم بإزالة نصف الوسائط من كل بئر ونقل إدخالات البئر التي تحتوي على التقاء SAT MVEVs إلى كل بئر. احتضان اللوحة لمدة 24 ساعة للحصول على ثقافة مشتركة.

عندما تصبح الخلايا البشرية البيضاء تحت الجلد أكثر تمايزا ، يمكن ملاحظة تطور فجوات الدهون.