تحضير معلق نخاع العظم أحادي الخلية من فأر كالفاريا لدراسة الاستجابة المناعية لاضطرابات الدماغ

لتحضير تعليق نخاع العظم أحادي الخلية من كالفاريا الفأر ، تحت مجهر تشريح ، قم بتقشير الأم الجافية بعناية من الجمجمة المعزولة باستخدام ملقط حاد. ضع الكالفاريا في طبق يحتوي على PBS محفوظ على الثلج واستخدم ماصة ملليلتر واحد لشطفها ، مما يضمن إزالة بقايا الدم من سطحها. انقل الكالفاريا إلى طبق جديد يحتوي على ما يكفي من برنامج تلفزيوني بارد طازج يكفي لغمره.

استخدم مقصا معقما لتقطيع الكالفاريا إلى ما يقرب من ثلاثة ملليمترات في شظايا ثلاثة ملليمترات في برنامج تلفزيوني بارد. باستخدام إبرة قياس 18 ، قم بعمل ثقب في قاع أنبوب طرد مركزي صغير سعة 500 ميكرولتر. أدخل هذا الأنبوب في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر يحتوي على 20 ميكرولترا من برنامج تلفزيوني بارد.

ثم نقل شظايا كالفاريا إلى أنبوب 500 ميكرولتر. أجهزة الطرد المركزي الإعداد في 10،000 غرام لمدة 30 ثانية عند أربع درجات مئوية. إعادة تعليق خلايا نخاع العظم كالفاريا التي تم جمعها في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتحلل خلايا الدم الحمراء ، واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 ثانية.

نقل التعليق إلى أنبوب طرد مركزي 15 ملليلتر يحتوي على أربعة ملليلتر من PBS الباردة. أجهزة الطرد المركزي عند 400 غرام لمدة ست دقائق عند أربع درجات مئوية. اغسل مرة أخرى بخمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني بارد.

أخيرا ، أعد تعليق الحنك الخلوي في مخزن مؤقت مناسب.