تصنيع الإبرة الدقيقة باستخدام الإكسوسومات المعزولة من خلايا سرطان المبيض الظهارية للفأر

للبدء ، امزج المكونات A و B من polydimethylsiloxane ، أو PDMS ، بنسبة 10 إلى واحد. بعد تحريك الخليط جيدا ، صب الخليط في قالب رئيسي. ضع قالب PDMS تحت ضغط رطل واحد لكل بوصة مربعة لمدة 15 دقيقة لإزالة فقاعات الهواء.

عالج قالب PDMS عند 60 درجة مئوية لمدة ساعتين. إزالة العفن للحصول على قالب إنتاج الإبرة الدقيقة. بعد ذلك ، قم بتنظيف قالب الإنتاج بماء نقي للغاية قبل الاستخدام.

حدد محتوى البروتين في محلول الإكسوسوم المحضر باستخدام مجموعة مقايسة BCA. أضف كمية مناسبة من DPBS إلى محلول exosome. الآن ، تحضير محلول من 200 ملليغرام لكل ملليلتر من تريهالوز باستخدام DPBS كمذيب.

يقلب لمدة 20 دقيقة لضمان الذوبان الكامل. بعد ذلك ، قم بإعداد محلول من حمض الهيالورونيك والبولي فينيل بيروليدون ، أو PVP ، باستخدام DPBS والإيثانول كمذيب ، على التوالي. يقلب طوال الليل لضمان الذوبان الكامل.

امزج محلول الإكسوسوم ومحلول تريهالوز بنسبة متساوية. أضف كمية متساوية من محلول حمض الهيالورونيك واخلطه جيدا للحصول على محلول الأطراف. باستخدام منظف البلازما ، قم بمعالجة سطح قالب PDMS لمدة 30 ثانية بدرجة منخفضة لتعزيز ماء.

أضف 40 ميكرولترا من محلول الطرف إلى قالب PDMS. أجهزة الطرد المركزي في 3 ، 000G لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة لضمان أن السائل يملأ طبقة إبرة القالب. قم بإزالة السائل الزائد من القالب وجففه في درجة حرارة الغرفة في فرن تجفيف بالتفريغ لمدة يوم واحد.

ثم أضف 200 ميكرولتر من محلول PVP إلى قالب PDMS. أجهزة الطرد المركزي عند 3،000 جرام لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة لضمان أن السائل يملأ طبقة دعم القالب. بعد تجفيف القالب ليوم واحد ، قم بإزالة العفن للحصول على رقعة الإبرة الدقيقة المحملة بالإكسوسوم.