للبدء ، اقلب بلطف أنابيب الدم الكاملة 10 ملليلتر 10 مرات في درجة حرارة الغرفة. باستخدام دوار دلو متأرجح ، قم بطرد الأنابيب عند 800 جرام لمدة 10 دقائق عند 22 درجة مئوية مع تشغيل الفرامل. ثم ضع العينات في خزانة السلامة البيولوجية وتحقق من الطبقات الثلاث المتميزة.
قم بتسمية ثلاثة أنابيب بوليسترين سعة خمسة ملليلتر بأحرف A و B و C.Swirl واجمع ملليلترا واحدا من معطف buffy عن طريق الشفط وانقله إلى الأنبوب المسمى A.ثم أضف 60 ميكرولترا من 0.1 مولار EDTA إلى الأنبوب A الذي يحتوي على معطف buffy. أضف 50 ميكرولترا من مزيج الكوكتيل إلى أنبوب A.Pipette لأعلى ولأسفل ثلاث مرات على الأقل لخلطه واحتضانه لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، أضف 890 ميكرولترا من PBS إلى الأنبوب A واخلطها عن طريق السحب ثلاث مرات على الأقل.
بعد ذلك ، دوامة أنبوب حبة مغناطيسية لمدة 30 ثانية. أضف 50 ميكرولترا من الخرز المغناطيسي إلى الأنبوب A والماصة ثلاث مرات على الأقل لخلط الخرزات جيدا. ضع الأنبوب A على الفور في حامل المغناطيس واحتضانه لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
ثم قم بسحب تعليق الخلية المخصب بعناية في الأنبوب B ، وجمع الجزء الصافي بدون خلايا دم حمراء أو الحد الأدنى منها لاستعادة PBMC الأمثل. بعد ذلك ، قم بإزالة الأنبوب A من حامل المغناطيس وتخلص منه. بعد ذلك ، أضف 50 ميكرولترا من الخرز المغناطيسي إلى تعليق الخلية في الأنبوب B والماصة لأعلى ولأسفل ثلاث مرات على الأقل.
ضع الأنبوب B على الفور في حامل المغناطيس واحتضانه لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ماصة بعناية تعليق الخلية المخصب في الأنبوب C ، وجمع فقط الجزء الواضح. أخرج الأنبوب B من حامل المغناطيس وتخلص منه.
ثم ضع الأنبوب C على الفور في حامل المغناطيس واحتضانه لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ماصة بعناية تعليق الخلية المخصب في أنبوب الطرد المركزي المسمى وأعلى ما يصل إلى ملليلتر مع PBS. انقل 50 ميكرولترا من تعليق الخلية إلى كوب عينة من عداد الخلية الآلي.
أضف 450 ميكرولترا من PBS لعدد خلايا التخفيف من 1 إلى 10.
