مقايسة إعادة تجميع لوسيفيراز سبليت لقياس ملامسات الشبكة الإندوبلازمية والميتوكوندريا في الخلايا الحية

في مختبري ، ندرس الاتصال بين الأعضاء الذي يتخذ شكلا من أشكال ملامسة الغشاء وأدوارها في الحفاظ على صحة الخلايا ، وكذلك في التسبب في المرض. نحن مهتمون بشكل خاص بملامسات الغشاء بين الميتوكوندريا والشبكة الإندوبلازمية ونحاول فهم كيفية تنظيمها وكيف يمكن أن يؤدي عدم تنظيمها إلى التنكس العصبي. على الرغم من أننا نعلم أن ملامسات الميتوكوندريا ER مهمة لصحة الخلايا وأن عدم تنظيمها يرتبط بالعديد من الأمراض ، إلا أننا لا نعرف الكثير عن كيفية تنظيم مستواها.

تتمثل الخطوة الأولى لمعالجة هذا الأمر في إنشاء بروتوكول بسيط وموثوق به لقياس مستوى ملامسات الميتوكوندريا ER في الخلايا. يوفر اختبار لوسيفيراز الانقسام طريقة أسهل وأسرع لتحديد ملامسات الميتوكوندريا ER في الخلايا الحية مقارنة بمعظم المقايسات. نستفيد من نصفين منقسمين من رينيلا لوسيفيراز ، نصفهما يستهدف ER والآخر للميتوكوندريا.

يمكن إعادة تجميعها معا فقط عندما يكون لأغشية ER والميتوكوندريا اتصال وثيق ، مما يؤدي إلى إعادة تكوين لوسيفيراز بنشاط إنزيمي كامل. هذه الطريقة بسيطة ومناسبة للفحوصات عالية الإنتاجية ويمكن الوصول إليها بسهولة للعديد من المختبرات. نأمل أن يؤدي ذلك إلى تعزيز مجال الأمراض التنكسية العصبية من خلال تحديد المعدلات الجزيئية والجينية لاتصالات الميتوكوندريا ER التي يمكن تطويرها بشكل أكبر إلى عوامل علاجية.

مهدت نتائجنا الطريق لأسئلة مهمة مثل كيف تؤثر الأدوية المختلفة أو تركيبات الأدوية على ملامسات الميتوكوندريا في ER ، وما هي الجهات الجزيئية المهمة وراء هذه الاتصالات. من هذه الأسئلة ، يمكننا اكتساب فهم أفضل لآلية اتصالات الميتوكوندريا ER ، وإيجاد طرق لمكافحة الأمراض ذات الصلة.