Saggio di riassemblaggio della split-luciferasi per misurare i contatti reticolo-mitocondri endoplasmatici in cellule vive

Nel mio laboratorio, studiamo la comunicazione interorganale che assume una forma di contatto con la membrana e il loro ruolo nel mantenimento della salute cellulare, nonché nella patogenesi della malattia. Siamo particolarmente interessati ai contatti di membrana tra i mitocondri e il reticolo endoplasmatico e stiamo cercando di capire come sono regolati e come la loro disregolazione può portare alla neurodegenerazione. Sebbene sappiamo che i contatti con i mitocondri ER sono importanti per la salute delle cellule e la loro disregolazione è associata a molte malattie, non sappiamo molto su come sia regolato il loro livello.

Il primo passo per affrontare questo problema è stabilire un protocollo semplice e affidabile per misurare il livello di contatti dei mitocondri ER nelle cellule. Il nostro test della luciferasi frazionata offre un modo più semplice e veloce per quantificare i contatti dei mitocondri ER nelle cellule vive rispetto alla maggior parte dei saggi. Sfruttiamo due metà divise della luciferasi renilla, una metà mirata all'ER e l'altra ai mitocondri.

Possono essere riassemblati insieme solo dove l'ER e le membrane dei mitocondri sono a stretto contatto, il che si traduce in luciferasi ricostituita con una piena attività enzimatica. Questo metodo è semplice, adatto per screening ad alta produttività e facilmente accessibile per molti laboratori. Speriamo che possa far progredire il campo delle malattie neurodegenerative identificando modulatori molecolari e genetici dei contatti dei mitocondri ER che possono essere ulteriormente sviluppati in agenti terapeutici.

I nostri risultati hanno aperto la strada a domande importanti come il modo in cui diversi farmaci o combinazioni di farmaci influenzano i contatti dei mitocondri ER e quali sono gli importanti attori molecolari dietro questi contatti. Da queste domande, possiamo ottenere una migliore comprensione del meccanismo dei contatti con i mitocondri del ER e trovare modi per combattere le malattie correlate.