Анализ ресборки расщепленной люциферазы для измерения контактов эндоплазматических ретикулум-митохондрий в живых клетках

В моей лаборатории мы изучаем межорганную коммуникацию, которая принимает форму мембранного контакта, и их роль в поддержании здоровья клеток, а также в патогенезе заболеваний. Мы особенно заинтересованы в мембранных контактах между митохондриями и эндоплазматическим ретикулумом и пытаемся понять, как они регулируются и как их нарушение регуляции может привести к нейродегенерации. Хотя мы знаем, что контакты митохондрий ER важны для здоровья клеток, а их нарушение регуляции связано со многими заболеваниями, мы мало знаем о том, как регулируется их уровень.

Первым шагом к решению этой проблемы является создание простого и надежного протокола для измерения уровня контактов митохондрий ER в клетках. Наш анализ расщепленной люциферазы предлагает более простой и быстрый способ количественной оценки контактов митохондрий ER в живых клетках по сравнению с большинством анализов. Мы используем две разделенные половинки рениллы люциферазы, одна половина которой направлена на ER, а другая на митохондрии.

Они могут быть собраны вместе только в том случае, если мембраны ER и митохондрий имеют тесный контакт, что приводит к восстановлению люциферазы с полной ферментативной активностью. Этот метод прост, подходит для высокопроизводительных скринингов и легко доступен для многих лабораторий. Мы надеемся, что это поможет продвинуться вперед в области нейродегенеративных заболеваний за счет выявления молекулярных и генетических модуляторов контактов митохондрий ER, которые могут быть в дальнейшем использованы в терапевтических агентах.

Наши результаты проложили путь к важным вопросам, таким как как влияние различных лекарств или комбинаций препаратов на контакты митохондрий ER и каковы важные молекулярные игроки, стоящие за этими контактами. Из этих вопросов мы можем лучше понять механизм контактов митохондрий ER и найти способы борьбы с связанными с этим заболеваниями.