الكيمياء المناعية متعددة الإرسال لتحليل النوع الفرعي لخلايا الرحم القاتلة الطبيعية في أنسجة بطانة الرحم

للبدء ، احصل على قسم أنسجة بطانة الرحم البشرية على شريحة زجاجية للكيمياء المناعية متعددة الإرسال ، واخبز أقسام الأنسجة عند 60 درجة مئوية لمدة ساعتين. بعد ذلك ، اغمر الشريحة بالتتابع في المحاليل المناسبة لإزالة الشمع والترطيب والتثبيت. أضف 200 مل من المخزن المؤقت AR6 أو AR9 المعني لكل جسم مضاد إلى كاسيت استرجاع مستضد مقاوم للحرارة.

بعد وضع الأقسام في المخزن المؤقت لاسترجاع المستضد ، قم بتسخينها في الميكروويف على طاقة عالية حتى الغليان. غطي الكاسيت بشكل غير محكم وسخنيه على طاقة منخفضة لمدة 15 دقيقة. بعد أن تبرد الشريحة ، اشطفها بالماء المقطر المزدوج ، متبوعا ب PBST.

ثم قم بإزالة المحلول الزائد بورق ماص ، وارسم دائرة كاملة حول الأنسجة بقلم حاجز مسعور. ثم احتضان الأقسام بنسبة 3٪ بيروكسيد الهيدروجين لمدة ثماني دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، ضع محلول مانع ، واحتضنه لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد إزالة محلول الحجب ، ضع 150 ميكرولترا من الجسم المضاد الأولي الأول ، CD49a ، على كل شريحة بتخفيف من 1 إلى 1000 في مخفف الجسم المضاد 1x. قبل تطبيق الجسم المضاد الثانوي ، قم بإزالة الرطوبة الزائدة باستخدام ورق ماص. أضف أربع إلى خمس قطرات من الجسم المضاد الثانوي لبيروكسيداز الفجل الحار 1x المضاد للفأر والأرانب في كل شريحة.

ثم قم بتخفيف تضخيم إشارة التيراميد أو صبغة TSA من 1 إلى 100 مرة في مخفف التضخيم. وأضف 150 ميكرولترا من هذا المحلول المخفف إلى كل شريحة واحتضنها. للتخلص من الفلوروفورات غير المنضمة ، قم بغلي الأقسام في 200 مل من المخزن المؤقت AR6 داخل كاسيت مقاوم للحرارة في الميكروويف لمدة دقيقتين.

ثم قم بتحويل الميكروويف من طاقة عالية إلى طاقة منخفضة لمدة 15 دقيقة. أضف 150 ميكرولترا من محلول عمل DAPI المخفف في PBST بالتنقيط. جفف الأقسام بالكامل في منطقة مظلمة لمدة 30 دقيقة تقريبا.

ضع قطرة واحدة من حامل الفلورسنت المضاد للتبريد ، وضع غطاء بعناية.