طلاء الفبرونيكتين وبذر الخلايا A431 للتثقيب الكهربائي المسامي القائم على الركيزة

لبدء طلاء الفبرونيكتين ، حدد 12 إدراج و 2 لوحة 24 بئر. ضع الإدخالات في لوحة بئر واحدة ، مما أدى إلى إنشاء صفين من ستة. تحضير ميكروغرام واحد لكل مليلتر محلول الفبرونيكتين عن طريق خلط 52 ميكرولتر من محلول مخزون الفبرونيكتين و 1.2 ملليلتر من PBS في أنبوب 1.5 ملليلتر.

توزيع 100 ميكرولتر من محلول الفبرونيكتين في كل إدراج. احتضان الإدخالات في لوحة البئر عند 37 درجة مئوية لمدة ثلاث ساعات. بعد الحضانة ، قم بإزالة محلول الفبرونيكتين الزائد من كل إدراج.

اغسل الحشوات مرتين بإضافة 100 ميكرولتر من الماء المقطر المعقم لكل إدراج. قم بإزالة الماء بنفس الترتيب الذي تمت إضافته به لضمان وقت غسيل ثابت بين الإدخالات. الآن اغسل الإدخالات ب 100 ميكرولتر من وسائط زراعة الخلايا ، ثم قم بإزالة الوسائط من الإدراجات.

بعد ذلك ، قم بزرع 200 ميكرولتر من تعليق خلية A431 في الإدراجات. للتحكم السلبي ، ماصة 200 ميكرولتر من وسائط زراعة الخلايا في الإدراجات. باستخدام علامة دائمة ، ارسم خطا يقسم صفيحة البئر الثانية إلى عمودين بعرض ثلاثة آبار.

افصل كل عمود إلى صفوف. قم بتسمية كل منطقة في الشبكة بالمعلمات ذات الصلة. أضف ملليلتر واحد من وسائط زراعة الخلايا إلى كل بئر.

انقل الحشوات من لوحة التحضير إلى موقعها المناسب في لوحة التجربة المسماة واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 12 ساعة.