للبدء ، ماصة 1.5 ملليلتر من 0.1 ملليغرام لكل ملليلتر محلول يوديد البروبيديوم في كل بئر في مجموعة الأقطاب الكهربائية. ضع ملحقا في كل بئر في صفيف الأقطاب الكهربائية ، وقم بتركيب أقدام الملحق في أخاديد المحاذاة بحيث يكون الملحق متدفقا مع السطح العلوي للبئر. قم بربط لوحة الدوائر المطبوعة بالقطب العلوي بأعلى آبار صفيف الأقطاب الكهربائية وقم بتوصيل صفيف القطب الكهربائي بالتثقيب الكهربائي للركيزة المسامية ، أو جهاز PSEP.
ضع مصفوفة الأقطاب الكهربائية في حاضنة 37 درجة مئوية لموازنة درجة الحرارة. انقر فوق القائمة المنسدلة بجوار الغشاء في الزاوية العلوية اليسرى من واجهة المستخدم الرسومية وانقر فوق 400 نانومتر GBO. على الجانب الأيسر من واجهة المستخدم الرسومية ، اكتب واحدة في حقل تحرير دقيقة مدة نبض النشر.
الآن ، انقر فوق زر التشغيل وأدخل الأسماء المناسبة للآبار من واحد إلى ثلاثة ومن أربعة إلى ستة عندما يطلب منك ذلك. ثم ، انقر فوق "موافق" لبدء التجربة. بعد ساعة واحدة ، قم بإزالة مجموعة الأقطاب الكهربائية من الحاضنة ونقل الإدخالات مرة أخرى إلى المواقع الأصلية في لوحة التجربة.
امزج ميكرولتر من Hoechst 33342 وخمسة ميكرولترات من الكالسيين AM مع 123 ميكرولتر من وسائط زراعة الخلايا في أنبوب سعة 200 ميكرولتر. ماصة بلطف 10 ميكرولتر من محلول وصمة عار في كل إدراج نبض آخر ووضع إدراج مرة أخرى في الحاضنة لمدة خمس دقائق. انقل لوحة البئر إلى حامل لوحة مجهر الفلورسنت بهدف تكبير 5x.
صورة باستخدام برايتفيلد ومضان كل بقعة. ماصة 1.5 ملليلتر من وسائط زراعة الخلايا في كل بئر في مجموعة الأقطاب الكهربائية. ضع عينة الخلية في الآبار من واحد إلى ثلاثة وإدراج التحكم في الآبار من أربعة إلى ستة ، مع تركيب أقدام الإدخال في أخاديد المحاذاة.
قم بربط لوحة الدوائر المطبوعة بالقطب العلوي بأعلى آبار صفيف الأقطاب الكهربائية وقم بتوصيل صفيف الأقطاب الكهربائية بجهاز PSEP. ضع مصفوفة الأقطاب الكهربائية في حاضنة 37 درجة مئوية لموازنة درجة الحرارة. انقر فوق القائمة المنسدلة بجوار الغشاء في الزاوية العلوية اليسرى من واجهة المستخدم الرسومية وانقر فوق 400 نانومتر GBO.
الآن ، انقر فوق زر التشغيل وأدخل الأسماء المناسبة للآبار من واحد إلى ثلاثة ومن أربعة إلى ستة عندما يطلب منك ذلك. ثم ، انقر فوق "موافق" لبدء التجربة. بعد ساعة واحدة ، قم بإزالة مجموعة الأقطاب الكهربائية من الحاضنة ونقل الإدخالات مرة أخرى إلى المواقع الأصلية في لوحة بئر التجربة.
بعد تحضير Hoechst 33342 ، والكالسيين AM ، ويوديد البروبيديوم في وسط زراعة الخلايا ، امزج وماصة 10 ميكرولتر من محلول البقع برفق في كل إدخال نبضي لاحق ، ثم ضع الحشوات مرة أخرى في الحاضنة لمدة خمس دقائق. على مجهر الفلورسنت ، قم بتصوير عينة الخلية التي يتم إدخالها باستخدام برايت فيلد ومضان كل بقعة. لم يظهر المنحنى الصحي المحسن أي انخفاض تحت خط الأساس وأكبر زيادة في TEEI.
كشف تصوير ما بعد PSEP للطبقة الأحادية للخلية عن موت ضئيل للخلايا وطبقة أحادية الخلية صحية متقاربة تماما. أدت البيانات غير الصحية المحسنة إلى تضاؤل استجابة TEEI. كشف تصوير ما بعد PSEP عن موت الخلايا بالقرب من الصفر وانخفاض كفاءة التوصيل بسبب عدد أقل من الخلايا في الطبقة الأحادية.
أدى تطبيق الأشكال الموجية غير المحسنة إلى انخفاض كبير في استجابة TEEI ، مما يشير إلى موت الخلايا بشكل كبير وانخفاض كفاءة التوصيل.
