للبدء ، أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت للصور الخالي من البروتين إلى القناة 3 من خلية التدفق. امزج اثنين من نانومولار من خميرة الخميرة NAP1 واثنين إلى خمسة نانومولار من أوكتامر هيستون H4 المسمى LD655 مع 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت 1X HR. أضف هذا الخليط إلى القناة 4 من خلية التدفق.
قم بتدفق جميع القنوات عند 1.0 بار لمدة 30 ثانية لشطفها بالعينات. اضبط التدفق على 0.2 بار ، وانقل المصائد البصرية إلى القناة 1 لالتقاط زوج مناسب من الخرز المطلي بالستربتافيدين. بعد ذلك، انقل الملائمات اللونية الضوئية إلى القناة 3.
قم بإيقاف تشغيل التدفق ، وقم بإجراء معايرة قسرية لزوج الخرز. قم بتشغيل الليزر أحمر متحد البؤر ، وقم بمعايرة منطقة التصوير. بعد ضبط التدفق على 0.2 بار ، انقل المصائد الضوئية إلى القناة 2 لالتقاط الحمض النووي الحيوي.
ثم حرك الملائمات البصرية إلى القناة 3 ، وأوقف التدفق. قم بزيادة المسافة بين المصائد البصرية لتمديد الحمض النووي ، ومراقبة منحنى المسافة القسري المرتبط لتأكيد وجود حبل DNA واحد. ضبط البعد بين المصائد بصرية [س ثت] يقرأ ال [دنا] توتر تقريبا واحدة [بكونوتون].
قم بتشغيل مسح الخط لبدء جمع جهاز التصوير الحربي مع تشغيل الليزر الأحمر. ثم انقل المصائد الضوئية إلى القناة 4 مع إيقاف التدفق لتشكيل نيوكليوسومات على طول حبل الحمض النووي. لفك غلاف النيوكليوسومات ، انقل المصائد البصرية إلى القناة 3.
اضبط قراءة القوة على 0 والسرعة إلى 0.1 ميكرومتر في الثانية، حرك المصيدة البصرية 1 بعيدا عن المصيدة البصرية 2. امزج 10 نانومولار من الرابط المسمى Cy3 هيستون H1.4 إلى 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت للصورة وأضفه إلى القناة 5. بعد تكوين حبل الحمض النووي الذي يحتوي على نيوكليوسومات ، قم بتشغيل الليزر الأخضر ، بالإضافة إلى الليزر الأحمر ، وانقل المصائد البصرية إلى القناة 5 للتصوير في الوقت الفعلي لارتباط H1 بالكروماتين.
تم تصور تكوين النيوكليوسوم على طول حبل الحمض النووي على أنه بؤر فلورية حمراء ثابتة في مسح ثنائي الأبعاد وتصوير الحرج. أظهر تحليل التبييض الضوئي أحداث التبييض الضوئي المكونة من خطوة واحدة أو خطوتين ، مما يشير إلى وجود أحادي النوكليوسومات. في غياب NAP1 ، ارتبطت أوكتامير هيستون بالحمض النووي ، لكنها ظلت في الغالب غير مغلفة ، مما يشير إلى التوتر المستمر.
باستخدام H2A المسمى Cy3 ، تم الحصول على نتائج تجميع نيوكليوسوم مماثلة ، كما هو الحال مع H4 المسمى LD655. أدى فك غلاف النيوكليوسوم إلى زيادة مسافة الحبل بمرور الوقت ، وهي مرئية على جهاز التصوير الحاربي ، وولدت منحنيات مسافة قسرية مع تمزقات مميزة تشير إلى فك غلاف النيوكليوسومات الفردية. تمت الإشارة إلى ارتباط هيستون H1 بالكروماتين من خلال بؤر فلورية خضراء ذات مسارات ثابتة مزدوجة اللون تمثل ارتباط H1 بالنيوكليوسومات ، والمسارات الخشنة الخضراء التي تمثل مسارات H1 المنتشرة.
