تجميع النيوكليوسوم في الموقع للقوة الترابطية أحادية الجزيء والفحص المجهري الفلوري

تقنيات الجزيء الفردي هي أدوات قوية لدراسة ميكانيكا وتنسيق وتكوين أنظمة الكروماتين. وبالتالي ، يبحث الباحثون دائما عن طرق أفضل لتوليد ركائز النيوكليوسوم. نصف هنا بروتوكولا لتكوين النيوكليوسومات عبر الحمض النووي في C2 في جزيء واحد القوة المترابطة والمجهر الفلوري.

عادة ما يتم تصنيع ركائز النيوكليوسوم عن طريق تجميع النيوكليوسومات على الحمض النووي الذي يحتوي على تسلسلات تحديد المواقع القوية عن طريق غسيل الكلى الملحي. على الرغم من أن هذا له مزايا ، إلا أنه يولد نيوكليوسومات مستقرة صناعيا وهو ثقيل مع الكواشف. يقوم بروتوكولنا بإعداد ركائز النيوكليوسوم للقوة المرتبطة بالجزيء الفردي والفحص المجهري الفلوري بدون تسلسل محدد للحمض النووي وبكواشف أقل بكثير في غضون دقائق.

يتيح هذا البروتوكول تجميع النيوكليوسومات على تسلسل الحمض النووي الأصلي ، وسهولة ضبط كثافة النيوكليوسوم ، بالإضافة إلى تقليل وقت التحضير واستخدام الكواشف. بالإضافة إلى ذلك ، فإن تكوين حبال الحمض النووي النووي في C2 يتيح سير عمل تجريبي أبسط وراحة تصور الجزيء الفردي المدمج ومعالجته. عندما لا يكون وضع النيوكليوسوم المنتظم والمحدد جزءا أساسيا من التجربة ، يمكن أن تساعد النتائج التي توصلنا إليها العلماء في دراسة الكروماتين وبروتينات التعدين الخاصة به على مستوى الجزيء الفردي بشكل أكثر كفاءة.

مع توفير الوقت والموارد ، يمكن إجراء المزيد من التجارب لمزيد من التحقيق في المتغيرات والظروف الإضافية. تشمل مجالات البحث القابلة للتطبيق التي نفكر فيها حاليا ميكانيكا الكروماتين التي تنظمها متغيرات الهيستون وغيرها من التعديلات اللاحقة للترجمة. نحن نفكر أيضا في الارتباطات الفيزيائية الحيوية والحركية لبروتينات ربط الكروماتين الأخرى.

وأخيرا، نحن نفكر أيضا في عمليات التجميع ذات الترتيب الأعلى التي تحركها النيوكليوسومات مثل التكثيف الجزيئي الحيوي.