للبدء ، احتضان محلول الدهون الثلاثية عند 60 درجة مئوية. قم بإزالة ثلاثة أنابيب من شريط الحبيبات RPA من الفريزر. اضغط على أنابيب الشريط برفق على مقعد المختبر لإخراج الكريات البيضاء.
انقل جميع الكريات الثلاثة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مليلتر A.Pipette 25 ميكرولتر من الماء الخالي من النوكلياز لشطف أي مسحوق RPA متبقي في الأنابيب الشريطية. انقل محلول الشطف إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد سعة 1.5 ملليلتر ب.ثم أضف 10 ميكرولتر من محلول الدهون الثلاثية 0.57 مولار و 10 ميكرولتر من مزيج التمهيدي إلى أنبوب المزيج الرئيسي B. بعد الدوامة والدوران أسفل الأنبوب ، ضعه على الثلج. بعد ذلك ، أضف 28.4 ميكرولتر من المخزن المؤقت RPA خمس مرات إلى أنبوب المزيج الرئيسي B. امزج جيدا عن طريق النقر القوي أو الاهتزاز عدة مرات.
انقل الكريات التي تم جمعها في الأنبوب A إلى أنبوب المزيج الرئيسي B واقلب الأنبوب أو اضغط على قاع الأنبوب بإصبعك عدة مرات للخلط. لاحظ ما إذا كان المحلول يبدو متجانسا وأحادي الطور. ضع الأنبوب على الثلج.
ثم أضف 0.71 ميكرولتر من النسخ العكسي و 2.84 ميكرولتر RNase H إلى أنبوب الخلط الرئيسي. اضغط برفق على أنبوب المزيج الرئيسي أو اقلبه لأعلى ولأسفل عدة مرات. قم بتدوير الأنبوب لفترة وجيزة قبل وضعه على الجليد.
الآن ، قم بنقل 8.4 ميكرولتر من محلول الخلط الرئيسي إلى 10 أنابيب 1.5 ملليلتر مبردة مسبقا ووضع الأنابيب على الجليد. بعد الاقتباس ، ضع الأنابيب في رف معدني مغمور في النيتروجين السائل لإعدادها للتجميد بالتجميد. في مجفف التجميد ، تحقق من درجات حرارة المجمع والرف.
الآن ، قم بتغطية الأنابيب المفتوحة في الرف المعدني بورقة بيضاء للتنظيف. ضع الرف المعدني مع الأنابيب المفتوحة في رف مجفف التجميد وأغلق باب الرف. ثم حدد البرنامج المطلوب واضغط على ابدأ.
بعد 30 دقيقة من خطوة التجفيف الثانوية ، اضغط على إيقاف. حرر الضغط عن طريق فتح صمام تحرير الفراغ. بعد إزالة الرف من الرف ، قم بتغطية الأنابيب على الفور.
