للبدء ، قم بحصاد بذور النباتات الطافرة و X134 ، واتركها تجف بشكل طبيعي في درجة حرارة الغرفة حتى يصل محتوى الرطوبة إلى حوالي 13 إلى 15٪ بعد تنشيط آلة التقشير ، أدخل 10 جم من حبوب الأرز في وحدة التغذية لإزالة قشرة الغلوم بكفاءة. انقل بذور الأرز المقشرة إلى مطحنة الأرز وقم بتشغيل الماكينة لمدة 60 ثانية للتخلص من طبقة الألورون التي تنتج أرزا مصقولا. بعد ذلك ، ضع الأرز المصقول في مطحنة الأنسجة.
اضبط تردد الطحن على 60 هرتز وقم بتشغيل المطحنة لمدة 15 ثانية لمدة دورتين لإنتاج مسحوق الأرز. ضعي مسحوق الأرز المطحون في طبق بتري وضعيه في فرن محمى على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 12 ساعة. ثم أضف 100 مجم من مسحوق الأرز إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 2 مل ، واضغط برفق على الأنبوب.
أضف 180 لترا من الماء النقي إلى الأنبوب واغلي العينة في حمام مائي لمدة 20 دقيقة. بعد أن تبرد العينة ، أدخل 4 مل من AMG المحتوي على أميليز ألفا البنكرياس في الأنبوب. بعد ذلك ، امزج المحتويات على مذبذب دوامة ، واحتضان الأنبوب عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة مع التحريك المستمر.
الآن ، أضف 4 مل من الإيثانول واخلط العينة باستخدام دوامة. ثم قم بالطرد المركزي للأنبوب عند 1 ، 500 جم لمدة 10 دقائق. بعد صب المادة الطافية ، أضف 2 مل من 50٪ من الإيثانول ، متبوعا ب 6 مل من 50٪ IMS إلى الأنبوب واخلطه.
بعد الطرد المركزي للأنبوب ، اسكب المادة الطافية بعناية واقلب الأنبوب لتصريف السوائل الزائدة. ضع الأنبوب في حمام جليدي ، أضف 2 مل من 2 هيدروكسيد البوتاسيوم المولي إليه ، وحرك العينة لمدة 20 دقيقة لإعادة تعليق القطيع وإذابة النشا المقاوم. أضف 8 مل من 1.2 مولي أسيتات الصوديوم المعدلة إلى درجة الحموضة 3.8 إلى الأنبوب واخلطها باستخدام أداة تقليب مغناطيسية.
ثم أدخل على الفور 0.1 مل من AMG في الخليط واخلطه جيدا. احتضان العينة لمدة 30 دقيقة عند 50 درجة مئوية في حمام مائي مع خلط متقطع باستخدام دوامة. بعد الحضانة ، قم بالطرد المركزي للأنبوب عند 1 ، 500 جم لمدة 10 دقائق.
الآن انقل 0.1 مل من المادة الطافية إلى أنبوب زجاجي جديد. أضف 3 مل من كاشف الجلوكوز أوكسيديز بيروكسيداز واحتضان العينة عند 50 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. ضع الماصة بعناية 200 لتر من كل محلول عينة فارغ ومحلول قياسي في لوح سعة 96 بئرا.
قم بقياس امتصاص كل عينة عند 510 نانومتر مقابل المحلول الفارغ واحسب محتوى النشا المقاوم باستخدام الصيغة. أخيرا ، قدم للمشاركين 50 جم من الأرز المحضر مع 200 مل من الماء. بعد الوجبة ، اجمع عينات الدم الوريدية في نقاط زمنية مختلفة لإجراء تحليل جلوكوز الدم.
كان محتوى النشا المقاوم أعلى بكثير في طفرة SBEIIb بنسبة 5.2٪ مقارنة بالنوع البري. أدى استهلاك الأرز المحضر إلى استجابة أبطأ ومنخفضة للجلوكوز عند 15 و 30 دقيقة مع انخفاض بنسبة 9.7٪ و 3.7٪ على التوالي.
