ومولت جزئيا هذا البحث من المعاهد الوطنية للصحة ، ومنحة R01 EB007594 ، ووزارة الدفاع سرطان الثدي برنامج البحوث واقتراح BCO74699P7 ، ومؤسسة سوزان جي كومين منح 26152/98188972.

1. Microendoscope الجمعية ينبغي النظر في microendoscope عالية الدقة الموصوفة هنا (الشكل 1A) ، وتكوين قاعدة ممكنة مع وجود اختلافات عدة في التجمع والتطبيق. نحن تصف بالتفصيل هنا تجسيدا للمنصة التي صممت ليتم استخدامها مع بروفلافين كعامل النقيض من الفلورسنت. بروفلافين النووية هو مشرق وصمة عار على امتصاص موجات الذروة والانبعاثات من 445 نانومتر و 515 نانومتر على التوالي. واستخدام عوامل التباين الأخرى تتطلب من المستخدم لتحديد الإثارة ، والانبعاثات ، ومرشحات مزدوج اللون مناسب. عدة عناصر من microendoscope عالية الدقة والنوعية ، ويمكن الحصول عليها من بائعين متعددين. على سبيل المثال ، والمكونات الميكانيكية المواقع المتوفرة من Thorlabs ، نيوبورت ، ينوس بين الآخرين. كاميرات CCD المدمجة المتوفرة من الشركات بما في ذلك نقطة رمادية البحوث وProsilica وRetiga ؛ ينبغي اختيار حساسية الكاميرا مع النظر في سطوع fluorophore لاستخدامها ، وكذلك معدل الإطار المطلوب. ويمكن الحصول على الطاقة العالية الثنائيات الخفيفة (المصابيح) من Luxeon ، كري ، وNichia من بين آخرين. الألياف البصرية وتتوفر باقات من سوميتومو ، فوجيكورا ، وشوت. في اختيار مكونات لتطبيق معين ، يجب على المستخدم النظر في العلاقات الملازمة لالمجهري مضان بين تركيز fluorophore ، photobleaching وشدة الإضاءة ، وحساسية الكاميرا ، والكسب ، ومدة التعرض. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل 6 &quot;قضبان القفص إلى 1.5&quot; قضبان القفص ، لتشكيل زوج من 7.5 &quot;قضبان طويلة. برغي هذه القضبان في وجه واحد من وحدة المرآة أضعاف. برغي 0.5&quot; قضبان في وجه الآخر. الشريحة المكعب على قضبان القفص قفص ، عن طريق خفض اثنين من خلال الثقوب. المسمار 2 &quot;في وجه قضبان الجانب من المكعب قفص (1B الشكل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق الكاميرا إلى لوحة قفص باستخدام C - جبل لمحول SM1. تأمين لوحة قفص على قضبان القفص 0.5 &quot;، تدفق مع وحدة مواجهة مرآة أضعاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج &quot;أنبوب&quot; العدسة في 3 &quot;أنبوب عدسة طويلة وتأمين العدسة مع الاحتفاظ حلقة ، وينبغي تحديد البعد البؤري للعدسة بحيث يتم أخذ عينات من النوى من حزمة من الألياف البصرية من قبل اثنين على الاقل من المتوقع عندما بكسل على الكاميرا. إسقاط مرشح الانبعاثات في الأنبوب على الجزء العلوي من الحلقة الأولى الاستنادية ، وإضافة حلقة أخرى لضمان التصفية في المكان. الالتزام باتفاقية اتجاه تصفية من قبل الشركة المصنعة أشارت التصفية. برغي أنبوب العدسة إلى جانب قفص مكعب أقرب إلى الكاميرا CCD. 1C لاحظ أنه في الشكل ، وتظهر هذه العدسة والفلتر دون أنبوب العدسة 3 &quot;للوضوح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل الكاميرا بجهاز كمبيوتر وعرض الصور على الشاشة. المباشرة الجمعية الكائن في قفص بعيد وحرك المكعب القفص على طول القضبان حتى يظهر في صورة التركيز. تأمين المكعب قفص في هذا الموقع. (وهذا هو طريقة بسيطة لضمان أن أنبوب العدسة وتكوين صورة مركزة عند دمجها مع عدسة اللانهاية لتصحيح الهدف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مزدوج اللون في مرآة ومكان حامل في 45 درجة في المكعب القفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسمار العدسة الهدف ، عبر RMS إلى محول الصفحات SM1 وأنبوب العدسة قابل للتعديل ، في وجه من المكعب قفص قبالة أنبوب حامل العدسة. ويمكن استخدام Z - مترجم بدلا من أنبوب العدسة قابل للتعديل لتسهيل التركيز. المسمار موصل SMA إلى لوحة القفص ويشن هذا على القضبان ، وعلى مسافة نحو العمل للعدسة الهدف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شن LED على طبق من القفص والانزلاق على نهاية 2 &quot;قضبان. إضافة إلى عدسة 0.5&quot; أنبوب العدسة بحيث عندما يتم شد هذا الأنبوب الى جانب من المكعب القفص ، فإنه سيتم تشكيل صورة LED الذي يملأ الفتحة الخلفية للعدسة الهدف. وهذا التكوين (كولر الإضاءة) ضمان مضاءة بشكل موحد لمواجهة القريبة من حزمة من الألياف البصرية. إضافة الإثارة إلى تصفية الانبوب 0،5 عدسة &quot;وآمنة في مكان مع الاحتفاظ حلقة (الشكل 1C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق موصل SMA إلى حزمة من الألياف البصرية. المسمار حزمة SMA connectorized في وعاء SMA محمولة على قضبان القفص. المباشرة في نهاية البعيدة للحزمة النطاق العريض نحو مصدر الضوء (الإضاءة الفلورسنت تكفي) ومراقبة صورة الوجه حزمة الداني على الكاميرا CCD. ضبط موضع العدسة الهدف من خلال الشد داخل أو خارج القفص حتى المكعب صورة حزمة الألياف يظهر في التركيز. ينبغي أن النوى الفردية تكون مرئية بشكل واضح (الشكل 2). </li></ol> 2. غرين لنس الجمعية ويمكن زيادة هذا القرار المكاني للmicroendoscope عن طريق ربط عدسة الصغيرة أو التجميع العدسة إلى الطرف البعيد من حزمة من الألياف. تم تكوين هذه البصريات مثل أنه بدلا من وضع ربطة طرف مباشرة على الأنسجة ، والتقط طرف على سطح الانسجة مع demagnification ، وبالتالي زيادة وتيرة أخذ العينات المكانية التي تفرضها GUID الخفيفجي النوى من حزمة من الألياف. درجة demagnification يتوافق مع الزيادة في القرار المكانية ، وفي الوقت نفسه ، إلى انخفاض متناسب في مجال الرؤية من. عدسة مكونات مؤشر الانحدار (غرين) متوافقة مع الألياف البصرية وتتوفر من GrinTech ، NSG ، شوت ، من بين أمور أخرى ، ويمكن المستعبدين مباشرة إلى الطرف البعيد من حزمة من الألياف. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد عدسة غرين مع التكبير والمسافة المطلوبة للعمل التطبيق الخاص بك. تأكد من أن قطره يفوق العدسة للحزمة الألياف كنت تخطط للعمل مع. نوصي بأن يتم تنظيمها حزمة الألياف وعدسة غرين على 3 محاور منفصلة مراحل لتحديد المواقع دليل تحت المجهر منخفضة الطاقة أو المجسام للمحاذاة دقيقة قبل الرابطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطرة من مادة لاصقة البصرية (مثل العلاج بالأشعة فوق البنفسجية لاصقة نورلاند) على عدسة أو مواجهة حزمة. جعل هذين العنصرين في اتصال باستخدام positioners اليدوي. يعرض واجهة لضوء الأشعة فوق البنفسجية للجرعة الموصى بها من قبل الشركة المصنعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسعها لحماية العدسة غرين واجهة المستعبدين ، وطولها أقل من أنابيب الألومنيوم الشعرية (شركة أجزاء صغيرة) يمكن استخدامها لإحاطة مشتركة. الشريحة أكثر من الأنبوب المشترك وآمنة في مكان مع الايبوكسي. ويمكن استخدام أنابيب الحرارة يتقلص إلى الانتهاء من التجميع. </li></ol> 3. Microendoscope التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق عامل على النقيض من الخلايا أو الأنسجة ليمكن تصوير. مع بروفلافين (0.01 ٪ W / V في برنامج تلفزيوني) ، يمكن التصوير في المختبر من الخلايا في الثقافة ستؤديها حضانة قصيرة (&lt;1 دقيقة) وشامل الشطف. التصوير عينات الأنسجة الحية أو السابقين في أنسجة الجسم الحي هو ممكن التطبيق الموضعي التالية للصباغة. تم العثور على امتصاص بروفلافين في ظل هذه الظروف أن تكون شبه فورية ، والتصوير ممكنا في غضون بضع ثوان ودائم لعدة دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع حزمة من الألياف البصرية في ضوء الاتصال مع عينة ليمكن تصوير. التصوير الخلايا عندما تكون في الثقافة أو السابقين عينات الأنسجة الحية ، نوصي تصاعد نهاية البعيدة للحزمة الألياف لاعبا اساسيا في تأمين مراحل مع تحديد المواقع دليل على محاور XYZ لتحقيق الاستقرار أثناء التصوير. </li></ol> 4. ممثل النتائج : عند تجميعها بشكل صحيح ، سوف تعمل كما microendoscope مجهرا برنامج التحصين الموسع ومضان ، نقلت من خلال حزمة من الألياف البصرية متماسكة. من أجل تحقيق النتائج المثلى التصوير ، ينبغي إيلاء الاهتمام لضمان تلبية ثلاثة شروط رئيسية هي : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي تصوير الوجه القريبة من حزمة من الألياف على الكاميرا CCD دون يزيل التباؤر ، من أجل تحقيق حل كامل للنظام. الشكل 2A ، ب ، ج يبرهن على وجود جزء من حزمة من الألياف تصوير مع تركيز الفقراء ، ويزيل التباؤر طفيفة ، والتركيز جيدا على التوالي. تم العثور على التركيز الأمثل عن طريق ضبط الموقف المحوري للعدسة الهدف النسبي لمواجهة حزمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي مواجهة القريبة من حزمة ألياف ضوئية بشكل منتظم على طول قطرها الكامل (حقل من رأي). كما هو موضح في نص البروتوكول (1.7) ، ويتم تحقيق هذا عن طريق تكوين البصريات إنارة لإضاءة كوهلر. ويبين الشكل 2D صورة مضيئة المكتسبة عند عينة موحدة فلوري في هذا التكوين المفضل ، مع 2E الشكل يدل على نتيجة المقابلة تحت الإضاءة الحرجة. في الحالة الأخيرة ، يتم تصوير هيكل الصمام على وجه حزمة الألياف ، مما أدى إلى ظهور هذا النمط غير المرغوب فيه فرضه على هيكل العينة الحقيقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب على وجوه القريبة والبعيدة من حزمة من الألياف تكون نظيفة وخالية من الخدوش ورقائق البطاطس. الرقم 2F يوضح وجود الحطام التي تعلق على وجه حزمة ، مع الضرر في شكل شريحة صغيرة في 5:00 على محيط من الألياف. يمكن إزالة الحطام من حزمة يواجه عن طريق تنظيف في نفس منوال موصلات الألياف البصرية التقليدية ، مع ورقة العدسة والأيزوبروبانول ، أو معيار أدوات تنظيف الألياف البصرية. إذا خدش طرفي حزمة الألياف أو متكسرة ، أو إذا كانت حزمة فواصل على طوله ، ويمكن مصقول الوجه المسطح بواسطة دليل القياسية ، أو تلميع التقنيات الميكانيكية. نوصي 12-15 ميكرومتر اللف ورقة لتلميع an الخشنة الأولية ، مع تلميع النهائي على الورق 0،5-1،0 ميكرون. </li></ol> يوضح الشكل 3A التصوير من 1483 الخلايا في المختبر ، وبعد وضع العلامات مع التنسيب وبروفلافين ضوء حزمة الألياف عارية على العينة. الرقم 3B يدل على تحسن في القرار المكانية وانخفاض في مجال الرؤية من توفرها العدسة 2.5x غرين المستعبدين الى الطرف ملزمة. 1 يوضح الفيلم في التصوير المجراة من منصة الدهون الثدي في نموذج الفأر. هنا ، تم تمرير حزمة من الألياف مع قطر 0.5 مم الخارجي (330 ميكرون حقل من رأي) من خلال إبرة عيار 21 ومتقدمة في الأنسجة. الخلايا الدهنية تكون مرئية بشكل واضح ، مع الحركة نظرا لدورة القلب الظاهر في هذه الصفقة في 15لقطة في الثانية. يوضح الشكل 3C التصوير من الغشاء المخاطي للفم في المتطوعين الأصحاء الإنسان ، وهذه المرة باستخدام حزمة أكبر من الألياف مع قطر 1.5 مم الخارجي (1،4 مم حقل من رأي). في جميع الأمثلة المعروضة ، كان يستخدم كعامل بروفلافين العلامات النقيض الفلورسنت النووية. <img src="/files/ftp_upload/2306/2306fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. تجميع وmicroendoscope عالية الدقة (HRME). (أ) رسم تخطيطي لنظام HRME. (ب) الجمعية العامة لهيكل الدعم الميكانيكية الرئيسية. (ج) إضافة العناصر البصرية ، وإنارة LED ، وكاميرا CCD. (د) من نظام تصوير HRME ، وتعبئتها في 10 &quot;× 8&quot; الضميمة س &quot;2.5. <img src="/files/ftp_upload/2306/2306fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. إعداد HRME. أمثلة من التصوير مع حزمة من الألياف البصرية في التركيز الفقراء (أ) و (ب) على مقربة من التركيز جيدا ، (ج) التركيز المثالية. في (د) ، يتم تصوير هدف موحد الفلورسنت في ترجيح كفة حزمة من القاصي تحت الإضاءة (موحد) كولر. (ه) وتصوير هدف موحد تحت الإضاءة الفلورسنت حرجة ، مع بنية مصدر الظاهر على الكائن. (و) يمكن قطع الأنسجة والخلايا التمسك مواجهة حزمة الألياف ، التي هي أيضا عرضة لاضرار طفيفة في محيطه. <img src="/files/ftp_upload/2306/2306fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. التصوير مع HRME. (أ) 1483 الخلايا في المختبر ، التقط مع حزمة الألياف العارية (IGN-08/30) بعد وضع العلامات مع 0.01 ٪ بروفلافين (ث / ت). (ب) ونفس الثقافة خلية 1483 كما هو مبين في الفقرة (أ) ، تصوير مع مجموعة من الألياف مع 2.5x عدسة غرين المرفقة. (ج) صورة طبيعية عن طريق الفم المخاطية الإنسان في الجسم الحي ، وبعد التطبيق الموضعي لل0.01 ٪ بروفلافين (ث / ت). الفيلم 1. التصوير لوحة الدهون من الثدي ماوس عبر ادراج 450 ميكرومتر الخارجي قطرها حزمة الألياف داخل تجويف إبرة عيار 21 تمريرها إلى الأنسجة. وتم تسليم بروفلافين 0.01 ٪ (W / V) إلى موقع التصوير من خلال إبرة نفسه قبل الإدراج من الألياف التصوير. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/2306/5-11-1 2306_Pierce_movie1.avi">اضغط هنا لمشاهدة الفيديو</a>

<ol>
	<li>Pierce, M. C., Javier, D. J., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+contrast+agents+and+imaging+systems+for+detection+and+diagnosis+of+cancer.">Optical contrast agents and imaging systems for detection and diagnosis of cancer.</a> Int. J. Cancer. 123, 1979-1990 (2008).</li><li>Muldoon, T. J., Pierce, M. C., Nida, D. L., Williams, M. D., Gillenwater, A., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular-resolution+molecular+imaging+within+living+tissue+by+fiber+microendoscopy.">Subcellular-resolution molecular imaging within living tissue by fiber microendoscopy.</a> Opt. Express. 15, 16413-16423 (2007).</li><li>Muldoon, T. J., Anandasabapathy, S., Maru, D., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+imaging+in+Barrett's+esophagus:+a+novel,+low-cost+endoscopic+microscope.">High-resolution imaging in Barrett's esophagus: a novel, low-cost endoscopic microscope.</a> Gastrointest. Endosc. 68, 737-744 (2008).</li><li>Muldoon, T. J., Thekkek, N., Roblyer, D., Maru, D., Harpaz, N., Potack, J., Anandasabapathy, S., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+quantitative+image+analysis+criteria+for+the+high-resolution+microendoscopic+detection+of+neoplasia+in+Barrett's+esophagus.">Evaluation of quantitative image analysis criteria for the high-resolution microendoscopic detection of neoplasia in Barrett's esophagus.</a> J. Biomed. Opt. 15, 026027-026027 (2010).</li><li>Zhong, W., Celli, J. P., Rizvi, I., Mai, Z., Spring, B. Q., Yun, S. H., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+high-resolution+fluorescence+microendoscopy+for+ovarian+cancer+detection+and+treatment+monitoring.">In vivo high-resolution fluorescence microendoscopy for ovarian cancer detection and treatment monitoring.</a> Br. J. Cancer. 101, 2015-2022 (2009).</li><li>Dubaj, V., Mazzolini, A., Wood, A., Harris, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+fibre+bundle+contact+imaging+probe+employing+a+laser+scanning+confocal+microscope.">Optic fibre bundle contact imaging probe employing a laser scanning confocal microscope.</a> J. Microsc. 207, 108-117 (2002).</li><li>Dromard, T., Ravaine, V., Ravaine, S., L&#233;v&#234;que, J. -. L., Sojic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+in+vivo+imaging+of+human+skin+corneocytes+by+means+of+an+optical+fiber+bundle.">Remote in vivo imaging of human skin corneocytes by means of an optical fiber bundle.</a> Rev. Sci. Inst. 78, 053709-05 (2007).</li><li>Udovich, J. A., Kirkpatrick, N. D., Kano, A., Tanbakuchi, A., Utzinger, U., Gmitro, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+background+and+transmission+characteristics+of+fiber+optic+imaging+bundles.">Spectral background and transmission characteristics of fiber optic imaging bundles.</a> Appl. Opt. 47, 4560-4568 (2008).</li><li>Barretto, R. P. J., Messerschmidt, B., Schnitzer, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fluorescence+imaging+with+high-resolution+microlenses.">In vivo fluorescence imaging with high-resolution microlenses.</a> Nat. Methods. 6, 511-512 (2009).</li><li>Rouse, A. R., Kano, A., Udovich, J. A., Kroto, S. M., Gmitro, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+demonstration+of+a+miniature+catheter+for+a+confocal+microendoscope.">Design and demonstration of a miniature catheter for a confocal microendoscope.</a> Appl. Opt. 43, 5763-5771 (2004).</li><li>Kester, R. T., Christenson, T., Richards-Kortum, R., Tkaczyk, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+cost,+high+performance,+self-aligning+miniature+optical+systems.">Low cost, high performance, self-aligning miniature optical systems.</a> Appl. Opt. 48, 3375-3384 (2009).</li></ol>

النائب وليس لديهم ما DY الكشف عنها. RRK يحمل براءات الاختراع المتعلقة microendoscopic منصات التصوير.

وصف microendoscopy تقنية عالية القرار ينص هنا الباحثين في مجالات البحوث الطبية الحيوية الأساسية والسريرية مع طريقة مرنة وقوية وفعالة من حيث التكلفة لتصور بالتفصيل الخلوية في الموقع. وقد وصفت لدينا بروتوكول لتجميع نظام التصوير وأظهر استخدامها في زراعة الخلايا في المختبر ، والحيوان ، والأنسجة البشرية في الجسم الحي. في حين أن نتائج التصوير المقدمة هنا تستخدم بروفلافين كعامل النقيض الفلورسنت ، وقد أثبتت جماعات أخرى إصدارات نظام الإضاءة LED مع موجات والمرشحات المختارة لمباراة الإثارة / الانبعاثات أطياف الأصباغ الأخرى 5-7. في البداية يتم تحديد القرار والنظر في الميدان من جانب تباعد الأساسية إلى النواة وقطرها التصوير من حزمة من الألياف البصرية. وقد استخدمنا حزم مع ما يقرب من 4 تباعد الجوهرية الأساسية ميكرون ، وبأقطار من 330 ميكرومتر التصوير (فيلم 1) ، 720 ميكرون (الشكل 2 ، الشكل 3A ، ب) ، و 1400 ميكرون (الشكل 3C). يمكن أن ينتقل عن طريق حزم أصغر الإبر أضيق قياس وبشكل ملحوظ أكثر مرونة من أكبر الألياف. نحن وآخرون 8 ، في بعض الحالات ، لاحظت ظهور انبعاثات تألق ذاتي من ألياف الحزمة نفسها. عند محاولة لإثارة موجات الأشعة فوق البنفسجية في fluorophores ، أو جمع الانبعاثات في النطاق الطيفي حمراء ، ينبغي إيلاء الاهتمام إلى مستوى تألق ذاتي حزمة الألياف المساهمة في إشارة الشاملة قياسه. في حين أن معظم أعمال microendoscopy عالية الدقة وذكرت إلى الآن لم تستخدم حزمة الألياف العارية ، يمكن تقديم التكبير إضافية عن طريق استخدام العدسات غرين المستعبدين إلى الطرف البعيد. العدسات غرين توفر وسيلة مباشرة واقتصادية لزيادة دقة المكاني ، على الرغم من الاعتراف أيضا تعرضها للالانحرافات البصرية وNA محدودة. يمكن إذا غرين الأداء عدسة غير كافية لتطبيق معين ، غرين الهجين / الأهداف عدسة كروية مصغرة 9 أو التجمعات عدسة يكون الهدف العاملين 10-11. وصف microendoscope عالية الدقة هنا أساسا تعمل بوصفها ومضان المجهر البرنامج الموسع للتمنيع واسعة المجال ، وبالتالي لا sectioning البصري (كما في المجهر مبائر أو غير الخطية) ليكون هو متوقع. في تجربتنا ، وذلك باستخدام 455 نانومتر ضوء الإثارة وبروفلافين موضعي كعامل النقيض من ذلك ، يتم جمعها في المقام الأول من الضوء على عمق المقابلة لطبقات الخلايا قليلة. يجب على هذا البروتوكول لتمكين القارئ لتجميع microendoscope عالية الدقة على الفوق ، مع مساحة صغيرة من 10 &quot;× 8&quot;. إذا رغبت في ذلك ، قد يتم تضمينه في النظام في خانة والمكونات الكهربائية (الصمام والكاميرا) مدعوم من البطارية (1D الشكل). يمكن أن تعمل بالطاقة العديد من الكاميرات المدمجة التي IEEE - 1394 (السلك الناري) ومنافذ USB لجهاز الكمبيوتر المضيف.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>CCD camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Point Grey Research</td>
<td>GRAS-14S5M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LED</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>M455L2</td>
<td>Selected for use with proflavine &#x2013; other fluorophores may require different parts</td>
</tr>
<tr>
<td>Excitation filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Semrock</td>
<td>452/45</td>
<td>Selected for use with proflavine &#x2013; other fluorophores may require different parts</td>
</tr>
<tr>
<td>Emission filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Semrock</td>
<td>550/88</td>
<td>Selected for use with proflavine &#x2013; other fluorophores may require different parts</td>
</tr>
<tr>
<td>Dichroic mirror</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chroma</td>
<td>485 DCLP</td>
<td>Selected for use with proflavine &#x2013; other fluorophores may require different parts</td>
</tr>
<tr>
<td>Objective lens</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs (Olympus)</td>
<td>RMS 10X</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tube lens</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>AC-254-150-A1</td>
<td>Select focal length to achieve required magnification to CCD</td>
</tr>
<tr>
<td>Condenser lens</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>ACL2520</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cage cube unit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>C6W, B1C, B3C, B5C, SM1CP2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cage rods and plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>ER05 (x4), ER1.5 (x2), ER2 (x2), ER6 (x2), CP02 (x3)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fold mirror unit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>KCB1, PF10-03-G01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lens tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>SM1L05, SM1L30, SM1V05 (or SM1Z)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adapters / couplers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>SM1A3, SM1A9, SM1T2 (x2)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SMA connectors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>SM1SMA, 11040A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LED driver</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thorlabs</td>
<td>LEDD1B TPS001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fiber optic bundle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sumitomo</td>
<td>IGN-08/30</td>
<td>Larger or smaller bundles are available (Sumitomo / Fujikura)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

high-resolution fiber-optic microendoscopy for in situ cellular imaging

كثير من الدراسات السريرية والبيولوجية وتتطلب دراسة وتحليل طولية الشكل والوظيفة لقرار المستوى الخلوي. تقليديا ، يتم تشغيل تجارب متعددة في موازاة ذلك ، مع إزالة عينات فردية من هذه الدراسة في وقت نقاط متتابعة لتقييم بواسطة المجهر الضوئي. وقد تم تطوير تقنيات intravital عدة ، مع مبائر ، multiphoton ، والفحص المجهري التوافقي second يتظاهرون جميع قدرتهم على استخدامها في التصوير في الموقع 1. مع هذه الأنظمة ، ومع ذلك ، فإن البنية التحتية المطلوبة هي عملية معقدة ومكلفة ، والتي تشمل نظم الليزر والمسح الضوئي ومصادر الضوء المعقدة. هنا نطرح على بروتوكول لتصميم وتجميع لmicroendoscope ذات الدقة العالية التي يمكن أن تبنى في يوم واحد باستخدام الجاهزه - مكونات تحت 5،000 دولار أمريكي. منصة يوفر مرونة من حيث دقة وضوح الصورة ، الحقل من رأي ، وتعمل الطول الموجي ، ونحن تصف كيف يمكن تعديل هذه المعلمات بسهولة لتلبية الاحتياجات المحددة للمستخدم النهائي. لقد اكتشفنا وغيرهم على استخدام microendoscope عالية الدقة (HRME) في المختبر في زراعة الخلايا 2-5 ، في 6 استئصاله والأنسجة الحية الحيوانية 2،5 ، والأنسجة البشرية في الجسم الحي 2،7. وأفاد شاهد على استخدام عدة عوامل التباين الفلورسنت مختلفة ، بما في ذلك بروفلافين 2-4 ، benzoporphyrin المشتقة خاتم monoacid A 5 (BPD - MA) ، و 6،7 fluoroscein ، والتي تلقى كامل ، أو موافقة من ادارة الاغذية والعقاقير الفحص لاستخدامها في البشر. عالية الدقة microendoscopy ، في شكل الموصوفة هنا ، قد نداء الى مجموعة واسعة من الباحثين العاملين في مجال العلوم الأساسية والسريرية. هذه التقنية تتيح مقاربة فعالة واقتصادية ، التي تكمل التقليدية المجهري الفوق ، من خلال تمكين المستخدم من أداء عالية الدقة ، والتصوير الطولي في الموقع.

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging at JoVE.com

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

في كثير من الحالات السريرية والبيولوجية وأنه من المفيد لدراسة العمليات الخلوية لأنها تتطور في المكروية وطنهم. نحن هنا وصف التجمع ، واستخدام المجهر الألياف البصرية المنخفضة التكلفة التي يمكن أن توفر الوقت الحقيقي التصوير في خلية ثقافة والدراسات الحيوانية ، والدراسات السريرية المريض.

ذات دقة عالية الألياف الضوئية للMicroendoscopy في الموقع الخلوية التصوير

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution.  ...

high-resolution-fiber-optic-microendoscopy-for-situ-cellular

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

34.3K Views.  Rice University. في كثير من الحالات السريرية والبيولوجية وأنه من المفيد لدراسة العمليات الخلوية لأنها تتطور في المكروية وطنهم. نحن هنا وصف التجمع ، واستخدام المجهر الألياف البصرية المنخفضة التكلفة التي يمكن أن توفر الوقت الحقيقي التصوير في خلية ثقافة والدراسات الحيوانية ، وال...

Video: High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

Non-destructive volume visualization can be achieved only by tomographic techniques, of which the most efficient is the x-ray micro computerized tomography (&mu;CT).
High resolution &mu;CT is a very versatile yet accurate (1-2 microns of resolution) technique for 3D examination of ex-vivo biological samples1, 2. As opposed to electron tomography, the &mu;CT allows the examination of up to 4 cm thick samples. This technique requires only few hours of measurement as compared to weeks in histology. In addition, &mu;CT does not rely on 2D stereologic models, thus it may complement and in some cases can even replace histological methods3, 4, which are both time consuming and destructive. Sample conditioning and positioning in &mu;CT is straightforward and does not require high vacuum or low temperatures, which may adversely affect the structure. The sample is positioned and rotated 180&deg; or 360&deg;between a microfocused x-ray source and a detector, which includes a scintillator and an accurate CCD camera, For each angle a 2D image is taken, and then the entire volume is reconstructed using one of the different available algorithms5-7. The 3D resolution increases with the decrease of the rotation step. The present video protocol shows the main steps in preparation, immobilization and positioning of the sample followed by imaging at high resolution.

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

Non-destructive volume visualization can be achieved only by tomographic techniques, of which the most efficient is the x-ray micro computerized tomography ( CT).

عالية الدقة 3D تصوير السابقين فيفو العينات البيولوجية بواسطة CT مايكرو

Non-destructive volume visualization can be achieved only by tomographic techniques, of which the most efficient is the x-ray micro computerized ...

Video-rate Scanning Confocal Microscopy and Microendoscopy

Confocal microscopy has become an invaluable tool in biology and the biomedical sciences, enabling rapid, high-sensitivity, and high-resolution optical sectioning of complex systems. Confocal microscopy is routinely used, for example, to study specific cellular targets1, monitor dynamics in living cells2-4, and visualize the three dimensional evolution of entire organisms5,6. Extensions of confocal imaging systems, such as confocal microendoscopes, allow for high-resolution imaging in vivo7 and are currently being applied to disease imaging and diagnosis in clinical settings8,9.
Confocal microscopy provides three-dimensional resolution by creating so-called "optical sections" using straightforward geometrical optics. In a standard wide-field microscope, fluorescence generated from a sample is collected by an objective lens and relayed directly to a detector. While acceptable for imaging thin samples, thick samples become blurred by fluorescence generated above and below the objective focal plane. In contrast, confocal microscopy enables virtual, optical sectioning of samples, rejecting out-of-focus light to build high resolution three-dimensional representations of samples.
Confocal microscopes achieve this feat by using a confocal aperture in the detection beam path. The fluorescence collected from a sample by the objective is relayed back through the scanning mirrors and through the primary dichroic mirror, a mirror carefully selected to reflect shorter wavelengths such as the laser excitation beam while passing the longer, Stokes-shifted fluorescence emission. This long-wavelength fluorescence signal is then passed to a pair of lenses on either side of a pinhole that is positioned at a plane exactly conjugate with the focal plane of the objective lens. Photons collected from the focal volume of the object are collimated by the objective lens and are focused by the confocal lenses through the pinhole. Fluorescence generated above or below the focal plane will therefore not be collimated properly, and will not pass through the confocal pinhole1, creating an optical section in which only light from the microscope focus is visible. (Fig 1). Thus the pinhole effectively acts as a virtual aperture in the focal plane, confining the detected emission to only one limited spatial location.
Modern commercial confocal microscopes offer users fully automated operation, making formerly complex imaging procedures relatively straightforward and accessible. Despite the flexibility and power of these systems, commercial confocal microscopes are not well suited for all confocal imaging tasks, such as many in vivo imaging applications. Without the ability to create customized imaging systems to meet their needs, important experiments can remain out of reach to many scientists.
In this article, we provide a step-by-step method for the complete construction of a custom, video-rate confocal imaging system from basic components. The upright microscope will be constructed using a resonant galvanometric mirror to provide the fast scanning axis, while a standard speed resonant galvanometric mirror will scan the slow axis. To create a precise scanned beam in the objective lens focus, these mirrors will be positioned at the so-called telecentric planes using four relay lenses. Confocal detection will be accomplished using a standard, off-the-shelf photomultiplier tube (PMT), and the images will be captured and displayed using a Matrox framegrabber card and the included software.

The complete construction of a custom, real-time confocal scanning imaging system is described. This system, which can be readily used for video-rate microscopy and microendoscopy, allows for an array of imaging geometries and applications not accessible using standard commercial confocal systems, at a fraction of the cost.

فيديو معدل الميكروسكوب متحد البؤر المسح الضوئي وMicroendoscopy

Confocal microscopy has become an invaluable tool in biology and the biomedical sciences, enabling rapid, high-sensitivity, and high-resolution optical ...

Continuous High-resolution Microscopic Observation of Replicative Aging in Budding Yeast

We demonstrate the use of a simple microfluidic setup, in which single budding yeast cells can be tracked throughout their entire lifespan. The microfluidic chip exploits the size difference between mother and daughter cells using an array of micropads. Upon loading, cells are trapped underneath these micropads, because the distance between the micropad and cover glass is similar to the diameter of a yeast cell (3-4 &mu;m). After the loading procedure, culture medium is continuously flushed through the chip, which not only creates a constant and defined environment throughout the entire experiment, but also flushes out the emerging daughter cells, which are not retained underneath the pads due to their smaller size. The setup retains mother cells so efficiently that in a single experiment up to 50 individual cells can be monitored in a fully automated manner for 5 days or, if necessary, longer. In addition, the excellent optical properties of the chip allow high-resolution imaging of cells during the entire aging process.

We describe here the operation of a microfluidic device that allows continuous and high-resolution microscopic imaging of single budding yeast cells during their complete replicative and/or chronological lifespan.

المستمر الملاحظة المجهرية عالية الدقة من تنسخي الشيخوخة في الخميرة الناشيء.

We demonstrate the use of a simple microfluidic setup, in which single budding yeast cells can be tracked throughout their entire lifespan. The ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., kinetics, coexistence of different states and populations, transient interactions), which are typically hidden in ensemble measurements, such as those obtained with standard biochemical or microscopy methods. Thus, dynamic events, such as receptor-receptor interactions, can be followed in real time in a living cell with high spatiotemporal resolution. This protocol describes a method based on labeling with small and bright organic fluorophores and total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy to directly visualize single receptors on the surface of living cells. This approach allows one to precisely localize receptors, measure the size of receptor complexes, and capture dynamic events such as transient receptor-receptor interactions. The protocol provides a detailed description of how to perform a single-molecule experiment, including sample preparation, image acquisition and image analysis. As an example, the application of this method to analyze two G-protein-coupled receptors, i.e., &#946;2-adrenergic and &#947;-aminobutyric acid type B (GABAB) receptor, is reported. The protocol can be adapted to other membrane proteins and different cell models, transfection methods and labeling strategies.

This protocol describes how to use total internal reflection fluorescence microscopy to visualize and track single receptors on the surface of living cells and thereby analyze receptor lateral mobility, size of receptor complexes as well as to visualize transient receptor-receptor interactions. This protocol can be extended to other membrane proteins.

عالية الدقة تحليل الزمانية المكانية من مستقبلات حيوية من قبل جزيء واحدة الإسفار الميكروسكوب

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

Preparation of Mica Supported Lipid Bilayers for High Resolution Optical Microscopy Imaging

Supported lipid bilayers (SLBs) are widely used as a model for studying membrane properties (phase separation, clustering, dynamics) and its interaction with other compounds, such as drugs or peptides. However SLB characteristics differ depending on the support used. 
Commonly used techniques for SLB imaging and measurements are single molecule fluorescence microscopy, FCS and atomic force microscopy (AFM). Because most optical imaging studies are carried out on a glass support, while AFM requires an extremely flat surface (generally mica), results from these techniques cannot be compared directly, since the charge and smoothness properties of these materials strongly influence diffusion. Unfortunately, the high level of manual dexterity required for the cutting and gluing thin slices of mica to the glass slide presents a hurdle to routine use of mica for SLB preparation. Although this would be the method of choice, such prepared mica surfaces often end up being uneven (wavy) and difficult to image, especially with small working distance, high numerical aperture lenses. Here we present a simple and reproducible method for preparing thin, flat mica surfaces for lipid vesicle deposition and SLB preparation. Additionally, our custom made chamber requires only very small volumes of vesicles for SLB formation. The overall procedure results in the efficient, simple and inexpensive production of high quality lipid bilayer surfaces that are directly comparable to those used in AFM studies.

We present a method of preparing mica supported lipid bilayers for high resolution microscopy. Mica is transparent and flat on an atomic scale, but rarely used in imaging because of handling difficulties; our preparation results in even deposition of the mica sheet, and reduces the material used in bilayer preparation.

إعداد ميكا المدعومة الدهون طبقات ثنائية لارتفاع القرار المجهر الضوئي التصوير

Supported lipid bilayers (SLBs) are widely used as a model for studying membrane properties (phase separation, clustering, dynamics) and its interaction ...

Multimodal Imaging and Spectroscopy Fiber-bundle Microendoscopy Platform for Non-invasive, In Vivo Tissue Analysis

Recent fiber-bundle microendoscopy techniques enable non-invasive analysis of in vivo tissue using either imaging techniques or a combination of spectroscopy techniques. Combining imaging and spectroscopy techniques into a single optical probe may provide a more complete analysis of tissue health. In this article, two dissimilar modalities are combined, high-resolution fluorescence microendoscopy imaging and diffuse reflectance spectroscopy, into a single optical probe. High-resolution fluorescence microendoscopy imaging is a technique used to visualize apical tissue micro-architecture and, although mostly a qualitative technique, has demonstrated effective real-time differentiation between neoplastic and non-neoplastic tissue. Diffuse reflectance spectroscopy is a technique which can extract tissue physiological parameters including local hemoglobin concentration, melanin concentration, and oxygen saturation. This article describes the specifications required to construct the fiber-optic probe, how to build the instrumentation, and then demonstrates the technique on in vivo human skin. This work revealed that tissue micro-architecture, specifically apical skin keratinocytes, can be co-registered with its associated physiological parameters. The instrumentation and fiber-bundle probe presented here can be optimized as either a handheld or endoscopically-compatible device for use in a variety of organ systems. Additional clinical research is needed to test the viability of this technique for different epithelial disease states.

Multimodal Imaging and Spectroscopy Fiber-bundle Microendoscopy Platform for Non-invasive, In Vivo Tissue Analysis

The assembly and use of a multimodal microendoscope is described which can co-register superficial tissue image data with tissue physiological parameters including hemoglobin concentration, melanin concentration, and oxygen saturation. This technique can be useful for evaluating tissue structure and perfusion, and can be optimized for individual needs of the investigator.

المتعدد الوسائط التصوير ومنهاج Microendoscopy الطيفي الألياف الرزمة لغير الغازية،<em&gt; في فيفو</em&gt; تحليل الأنسجة

Recent fiber-bundle microendoscopy techniques enable non-invasive analysis of in vivo tissue using either imaging techniques or a combination of ...

Proper Positioning and Restraint of a Rat Hind Limb for Focused High Resolution Imaging of Bone Micro-architecture Using In Vivo Micro-computed Tomography

The use of in vivo micro-computed tomography (&#181;CT) is a powerful tool which involves the non-destructive imaging of internal structures at high resolutions in live animal models. This allows for repeated imaging of the same rodent over time. This feature not only reduces the total number of rodents required in an experimental design and thereby reduces the inter-subject variation that can arise, but also allows researchers to assess longitudinal or life-long responses to an intervention. To acquire high quality images that can be processed and analyzed to more accurately quantify outcomes of bone micro-architecture, users of in vivo &#181;CT scanners must properly anesthetize the rat, and position and restrain the hind limb. To do this, it is imperative that the rat be anesthetized to a level of complete relaxation, and that pedal reflexes are lost. These guidelines may be modified for each individual rat, as the rate of isoflurane metabolism can vary depending on strain and body size. Proper technique for in vivo &#181;CT image acquisition enables accurate and consistent measurement of bone micro-architecture within and across studies.

Proper Positioning and Restraint of a Rat Hind Limb for Focused High Resolution Imaging of Bone Micro-architecture Using In Vivo Micro-computed Tomography

This paper instructs users of in vivo micro-computed tomography (&#181;CT) scanners how to anesthetize, correctly position and restrain the hind limb of a rat for minimal movement during high-resolution imaging of the tibia. The result is high quality images that can be processed to accurately quantify bone micro-architecture.

تحديد المواقع المناسبة وضبط النفس من أطرافهم هند الفئران لتصوير مركزة عالية الدقة للعظام باستخدام الهندسة المعمارية الدقيقة في فيفو المحسوبة الدقيقة التصوير المقطعي

The use of in vivo micro-computed tomography (&#181;CT) is a powerful tool which involves the non-destructive imaging of internal structures at high ...

Optimized Setup and Protocol for Magnetic Domain Imaging with In Situ Hysteresis Measurement

This paper elaborates the sample preparation protocols required to obtain optimal domain patterns using the Bitter method, focusing on the extra steps compared to standard metallographic sample preparation procedures. The paper proposes a novel bespoke rig for dynamic domain imaging with in situ BH (magnetic hysteresis) measurements and elaborates the protocols for the sensor preparation and the use of the rig to ensure accurate BH measurement. The protocols for static and ordinary dynamic domain imaging (without in situ BH measurements) are also presented. The reported method takes advantage of the convenience and high sensitivity of the traditional Bitter method and enables in situ BH measurement without interrupting or interfering with the domain wall movement processes. This facilitates establishing a direct and quantitative link between the domain wall movement processes&#8211;microstructural feature interactions in ferritic steels with their BH loops. This method is anticipated to become a useful tool for the fundamental study of microstructure&#8211;magnetic property relationships in steels and to help interpret the electromagnetic sensor signals for non-destructive evaluation of steel microstructures.

Optimized Setup and Protocol for Magnetic Domain Imaging with In Situ Hysteresis Measurement

This paper elaborates the sample and sensor preparation procedures and the protocols for using the test rig particularly for dynamic domain imaging with in situ BH measurements in order to achieve optimal domain pattern quality and accurate BH measurements.

الإعداد الأمثل وبروتوكول لتصوير المجال المغناطيسي مع القياس التباطؤ في الموقع

This paper elaborates the sample preparation protocols required to obtain optimal domain patterns using the Bitter method, focusing on the extra steps ...

High Resolution 3D Imaging of the Human Pancreas Neuro-insular Network

Using traditional histological methods, researchers are hampered in their ability to image whole tissues or organs in large-scale 3D. Histological sections are generally limited to &#60;20 &#181;m as formalin fixed paraffin section on glass slides or &#60;500 &#181;m for free-floating fixed sections. Therefore, extensive efforts are required for serial sectioning and large-scale image reconstruction methods to recreate 3D for samples &#62;500 &#181;m using traditional methods. In addition, light scatters from macromolecules within tissues, particularly lipids, prevents imaging to a depth &#62;150 &#181;m with most confocal microscopes. To reduce light scatter and to allow for deep tissue imaging using simple confocal microscopy, various optical clearing methods have been developed that are relevant for rodent and human tissue samples fixed by immersion. Several methods are related and use protein crosslinking with acrylamide and tissue clearing with sodium dodecyl sulfate (SDS). Other optical clearing techniques used various solvents though each modification had various advantages and disadvantages. Here, an optimized passive optical clearing method is described for studies of the human pancreas innervation and specifically for interrogation of the innervation of human islets.

Here, we present a protocol to image human pancreas sections in three dimensions (3D) using optimized passive clearing methods. This manuscript demonstrates these procedures for passive optical clearing followed by multiple immunofluorescence staining to identify key elements of the autonomic and sensory neural networks innervating human islets.

التصوير عالية الدقة 3D الشبكة العصبية الجزر البنكرياس البشري

Using traditional histological methods, researchers are hampered in their ability to image whole tissues or organs in large-scale 3D. Histological ...

High-resolution Patterned Biofilm Deposition Using pDawn-Ag43

Spatial structure and patterning play an important role in bacterial biofilms. Here we demonstrate an accessible method for culturing E. coli biofilms into arbitrary spatial patterns at high spatial resolution. The technique uses a genetically encoded optogenetic construct&#8212;pDawn-Ag43&#8212;that couples biofilm formation in E. coli to optical stimulation by blue light. We detail the process for transforming E. coli with&#160;pDawn-Ag43, preparing the required optical set-up, and the protocol for culturing patterned biofilms using pDawn-Ag43 bacteria. Using this protocol, biofilms with a spatial resolution below 25 &#956;m can be patterned on various surfaces and environments, including enclosed chambers, without requiring microfabrication, clean-room facilities, or surface pretreatment. The technique is convenient and appropriate for use in applications that investigate the effect of biofilm structure, providing tunable control over biofilm patterning. More broadly, it also has potential applications in biomaterials, education, and bio-art.

We demonstrate a method for depositing Escherichia coli bacterial biofilms in arbitrary spatial patterns with a high resolution using optical stimulation of a genetically encoded surface-adhesion construct.

عالي الاستبانة "منقوشة استخدام الترسيب بيوفيلم" بدون-Ag43

Spatial structure and patterning play an important role in bacterial biofilms. Here we demonstrate an accessible method for culturing E. coli biofilms ...