الكتاب أشكر السيدة جنيفر M. وميل وتارا Rognan N. لصيانة النباتات Arabidopsis. وأيد هذا العمل من جانب صناديق المبتدئة من جامعة سانت لويس والمعاهد الوطنية للصحة منح 1R15GM086846 - 01 - 01S1 و3R15GM086846 إلى شياو دبليو.

أولا معبر الوراثية 1. يضعف الأصل الإناث من أجل التمييز بين الأم والأب الأليلات باستخدام الحمض النووي تسلسل تعدد الأشكال ، وهما ecotypes مختلفة ، وسيتم اختيار مثل كولومبيا - 0 (العقيد - 0) ، ولير ، والآباء والأمهات من الإناث والذكور. وينبغي أن تكون النباتات من الشباب والأصحاء. يمكن للمرء أن تؤدي إلى إضعاف الوالد الإناث باستخدام مجهر تشريح ، اقي المكبرة ، أو بالعين المجردة. تحديد المرحلة الزهور - 12 (سميث وآخرون ، 1990) ، وإزالة أي الزهور أو siliques فوق وتحت لهم لقطة قاعدة ساق مع المقص. تعقيم بواسطة ملقط غمس قاعدة غيض برفق في كوب من الايثانول 95 ٪ ، مما سيزيل أي حبوب اللقاح على ملقط وقتل حبوب اللقاح كذلك. حدق بلطف بعيدا عن براعم الزهور باستخدام الملقط ، وإزالة بلطف 4 سيبالس ، بتلات 4 و 6 الأسدية ، وترك المدقة العارية وسليمة. في محاولة لتجنب الأضرار التي لحقت كربلات خلال هذه العملية. 2. اختيار الجهة المانحة حبوب اللقاح والاضطلاع التلقيح وanthesed المانحين أفضل لقاح الزهور فتح في المرحلة 14 مع بتلات تمتد بزاوية 90 درجة إلى المدقة (سميث وآخرون ، 1990) ، وفيه الكثير من غبار الطلع ذرف. الاستيلاء على زهرة في القاعدة وعادل فوق ساق ، والذي يؤدي إلى انتشار الزهرة مفتوحة. الغبار وصمة العار التي أعدت من المدقة مع العضو الذكري. بعد التلقيح ، ستتم تغطية وصمة العار مع حبوب اللقاح أصفر ، والتي يمكن ملاحظتها بسهولة تحت المجهر. 3. وسم الصليب بعد تلقيح جميع المدقات عاجزة عن محطة ، ونحن مع التسمية الصليب علامة المجوهرات والمعلومات من الآباء الذكور والإناث والتاريخ. مكان حصة في التربة بالقرب من المصنع ، استخدام سلسلة لادراك التعادل ، تنبع من الإزهار للخطر ، وتغطية التلقيح المدقات بكيس من البلاستيك. II. عزلة مناديل السويداء في Arabidopsis 1. إعداد المواد عادة ما نحصل على المواد اللازمة جاهزة قبل الحصاد والسويداء وأنسجة الجنين : خزان النتروجين السائل والنيتروجين السائل ، ومجهر تشريح ، واثنين من أزواج جديدة من غرامة غيض ملقط (5 INOX بواسطة FST البيولوجيا دومون ، سويسرا) ، الشرائح الزجاجية المجهر ( 3 &quot;X 1&quot; X 1.0 ملم) ، ودرجة الحموضة 5.7 0.3 حل M السوربيتول وزارة التربية والعلم 5 ملم. 2. جمع siliques في 7 -- 8 أو يوما بعد التلقيح (DAP) ، والبذور جاهزة للحصاد في منتصف إلى مرحلة متأخرة من التطور الجنيني نسف والسويداء وتشريح للجنين. في بعض الأحيان ، قد يستغرق 9-10 DAP إذا الزهور عاجزة صغار جدا. 3. عزل السويداء والجنين منذ بذور Arabidopsis ضئيلة ، ونحن استخدام مجهر تشريح لعزل السويداء والجنين. وضع silique 8 - DAP تحت المجهر ، واستخدام زوج من ملقط لعقد عنيقة silique واستخدام غيض من زوج آخر من ملقط لفتح الشريحة silique في الهامش حيث اثنين كربلات الصمامات. استخدام زوج من ملقط لالتقاط بذرة واحدة على 5.7 درجة الحموضة حلول 0.3 M السوربيتول و 5 ملي زارة التربية والعلم ، وجعل قطع صغير في نهاية micropyle تنزلق إلى الجنين ، تضغط على نهاية غير المصقول على طرد السويداء والسويداء منفصلة عن معطف البذور (كينوشيتا وآخرون ، 2004). وضع الجنين والسويداء في microtubes منفصلة في النيتروجين السائل. علينا مواصلة هذا العمل حتى تتراكم الجنين أو السويداء 10-15 siliques وتخزينها ثم الأنبوب في الفريزر -80 درجة مئوية. في بعض الحالات ، السويداء لا بد من فصل من معطف البذور ، أي يمكن للمرء أن عزل الحمض النووي الريبي مجموع من السويداء والبذور مزيج معطف لتحليل البصمة الجينية. III. تسلسل بيسلفيت 1. الكواشف المطلوبة Cetyltrimethyl بروميد الأمونيوم (CTAB) لإعداد الحمض النووي الجيني ، والانزيمات التقييد ، 3 M هيدروكسيد الصوديوم (الطازجة) ، 6،42 م م الصوديوم اليوريا / 4 بيسلفيت (2 ميتابيسلفيت الصوديوم M ، سيغما الدريخ ، S9000 ، Na2S2O5 ، الوزن الجزيئي : 190) ، الهيدروكينون 10 مم ، طقم تنقية الحمض النووي (DNA Promega معالج تنظيف النظام ، القط. # A7280) ، TE العازلة ، 6.3 M هيدروكسيد الصوديوم (الطازجة) ، و 10 M NH 4 OAC ، 20 ميكروغرام / ميكرولتر الحمض الريبي النووي النقال ، والإيثانول بنسبة 100 ٪ . 2. تفاصيل بروتوكول العلاج بيسلفيت <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الحمض النووي أو السويداء الجينومية الجنين باستخدام إجراء CTAB (روجرز وBendich ، 1988). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 نانوغرام هضم -- 2 ميكروغرام من الحمض النووي الجيني في 20 ميكرولتر إلى 100 الحجم الإجمالي ميكرولتر مع تقييد الانزيمات التي تقطع من خارج المنطقة لتحليلها. لالمروج MEA ، ونحن نستخدم XhoI ، NdeI وPstI أو HindIII. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفسد الانزيمات التقييد غليان الحمض النووي لمدة خمس دقائق ثم تطفئ على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 09/01 حجم (2.2 ميكرولتر الحمض النووي لاستيعاب 20 ميكرولتر) من هيدروكسيد الصوديوم واحتضان م 3 عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل لنقل أنبوب 250 PCR ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 7.5 غرام من اليوريا في 10 مل من الماء المقطر المعقم ، ويضاف ببطء 7.6 غرام من الصوديوم ميتابيسلفيت خلال 1-2 ساعات وعادة ما يساعد على حل التدفئة ؛ ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 5 الطازجة مع هيدروكسيد الصوديوم M 10 ؛ إضافة الماء المقطر المعقم إلى النهائي إلى حجم 20 مل. هذا هو 6،24 م اليوريا / 4 بيسلفيت الصوديوم حل M. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة اليوريا 6.24 م / 4 بيسلفيت الصوديوم M حل لتركيز النهائي من 5.36 م وM 3.44 ، على التوالي (بولين وآخرون ، 1998). على سبيل المثال ، إضافة 208 ميكرولتر من اليوريا 6.42 م / 4 بيسلفيت الصوديوم M حل لميكرولتر 22.2 أعلاه من الحمض النووي الجينومي متمسخ (شياو وآخرون ، 2003). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الهيدروكينون 10 ملم الى الحمض النووي في التركيز النهائي من 0.5 مم (12 ميكرولتر الهضم لمدة 20 ميكرولتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج السلوك بيسلفيت في جهاز PCR : 30 دورات من 55 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة وثانية 95 درجة مئوية لمدة 30. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Desalt بيسلفيت الحمض النووي DNA المعالجة باستخدام معالج تنظيف النظام من Promega ومتابعة البروتوكول (جاكوبسن وآخرون ، 2000). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس حجم بالضبط TE تعافى من العمود بعد إزالة الملوحة وإضافة هيدروكسيد الصوديوم 6.3 M إلى التركيز النهائي لاحتضان 0.3 م في 37 دقيقة لمدة 15 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 M NH 4 OAC (الرقم الهيدروجيني 7.0) إلى تركيز النهائي من 3 م ، 2 ميكرولتر من 20 ميكروغرام / ميكرولتر الحمض الريبي النووي النقال ، و 3 مجلدات من الإيثانول بنسبة 100 ٪ ومن ثم المزيج. أجهزة الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 14000 دورة في الدقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مرة واحدة مع بيليه الايثانول 70 ٪ ، لا جهاز للطرد المركزي قصيرة ، وإزالة الايثانول اضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه الجافة في speedvac لمدة 5-10 دقائق وresuspend في 25-100 العازلة TE ميكرولتر اعتمادا على المبلغ ابتداء من الحمض النووي. بيسلفيت الصوديوم المعاملة الحمض النووي هو الآن على استعداد لتحليل PCR. </li></ol> 3. PCR التضخيم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منذ يتم تحويلها إلى cytosines unmethylated اليوراسيل ، فإنه من الصعب تضخيم شظية كبيرة باستخدام الحمض النووي بيسلفيت المعاملة كقالب. وبالتالي ، فإننا عادة تصميم الاشعال لتضخيم منتج لم يعد من 500 سنة مضت. لتسلسل المروج MEA - 4 كيلوبايت ، قمنا بتصميم مجموعات كثيرة من أجهزة الاشعال وتضخيم 14 شظايا متداخلة لتغطية المنطقة بأسرها (شياو وآخرون ، 2003). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتسلسل الأعلى الجديلة ، في تصميم التمهيدي إلى الأمام ، وأنا) اختيار (G جوانين) المنطقة الغنية من أجل الحصول على أعلى درجة حرارة الصلب دون نكليوتيد اضافية في الاشعال ؛ الثاني) تغيير C (سيتوزين) إلى ص ( البيريميدين) في الفريق الاستشاري والسياقات CNG وتغيير C المتبقية T (الثايمين). في تصميم التمهيدي العكسي ، I) اختيار منطقة C - الغنية ؛ الثاني) لتغيير G R (البيورين) في سياقات CG والغاز الطبيعي المضغوط وتغيير G المتبقية A (الأدنين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتسلسل أسفل الجديلة ، في تصميم التمهيدي إلى الأمام ، وأنا) اختيار منطقة C - الغنية ؛ الثاني) لتغيير G R CG في سياقات والغاز الطبيعي المضغوط وتغيير G المتبقية أ في تصميم التمهيدي العكسي ، I) اختر منطقة G - الغنية ؛ الثاني) C لتغيير Y (بيريميدين) في سياقات CG والغاز الطبيعي المضغوط وتغيير C المتبقية إلى T. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نستخدم عادة 1-2 ميكرولتر من الحمض النووي لمعاملة بيسلفيت الصوديوم كقالب لكل PCR التضخيم (شياو وآخرون ، 2003). PCR المنتج يجب أن يكون عن طريق تحليل الكهربائي للهلام لتأكيد الحجم الصحيح للقطعة ، ثم لابد من تنقية جل والمستنسخة في TOPO TA pCR2.1 ناقلات الاستنساخ (Invitrogen) باعتبارها إدراج. يتم اختيار مستعمرة واحدة حتى والمثقف ؛ الحمض النووي المستخرج البلازميد وأرسلت للتسلسل. </li></ol> 4. تحليل تسلسل مبدأ التسلسل بيسلفيت أنه سيتم تحويلها إلى السيتوزين unmethylated اليوراسيل بسبب نزع الأمين حلمهي بواسطة تركيزات عالية من الصوديوم في بيسلفيت pH5.0 التي سوف تتضخم والثايمين في الناتج PCR ، في حين لن يتم 5 ميثيل سيتوزين يمكن تعديلها بواسطة بيسلفيت الصوديوم ويبقى أن السيتوزين بعد التضخيم PCR (كلارك وآخرون ، 1994 ؛. فرومر وآخرون ، 1992). بعد الحصول على نتيجة التسلسل قارناه مع القالب حبلا الخاصة التي تستخدم لتضخيم PCR. إذا بقايا السيتوزين في قالب يقرأ باعتباره الثايمين في النتيجة التسلسل ، فإنه يشير إلى أن ليس لميثليته السيتوزين. إذا بقايا السيتوزين في قالب يبقى السيتوزين في التسلسل ، فإن ذلك يعني أن ميثليته والسيتوزين. رابعا. ممثل النتائج <img src="/files/ftp_upload/2327/2327fig1.jpg" alt="الشكل 1 /" /> الشكل 1.

<ol>
	<li>Clark, S. J., Harrison, J., Paul, C. L., Frommer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+sensitivity+mapping+of+methylated+cytosines.">High sensitivity mapping of methylated cytosines.</a> Nucleic Acids Res. 22, 2990-2997 (1994).</li><li>Cokus, S. J., Feng, S., Zhang, X., Chen, Z., Merriman, B., Haudenschild, C. D., Sriharsa Pradhan, S., Nelson, S. F., Pellegrini, M., Jacobsen, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shotgun+bisulphite+sequencing+of+the+Arabidopsis+genome+reveals+DNA+methylation+patterning.">Shotgun bisulphite sequencing of the Arabidopsis genome reveals DNA methylation patterning.</a> Nature. 452, 215-219 (2008).</li><li>Frommer, M., McDonald, L. E., Millar, D. S., Collis, C. M., Watt, F., Grigg, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genomic+sequencing+protocol+that+yields+a+positive+display+of+5-methylcytosine+residues+in+individual+DNA+strands.">A genomic sequencing protocol that yields a positive display of 5-methylcytosine residues in individual DNA strands.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 89, 1827-1831 (1992).</li><li>Gehring, M., Huh, J. H., Hsieh, T. F., Penterman, J., Choi, Y., Harada, J. J., Goldberg, R. B., Fischer, R. L. D. E. M. E. T. E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+glycosylase+establishes+MEDEA+polycomb+gene+self-imprinting+by+allele-specific+demethylation.">DNA glycosylase establishes MEDEA polycomb gene self-imprinting by allele-specific demethylation.</a> Cell. 124, 495-506 (2006).</li><li>Henderson, I. R., Chan, S. R., Cao, X., Johnson, L., Jacobsen, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+sodium+bisulfite+sequencing+in+plants.">Accurate sodium bisulfite sequencing in plants.</a> Epigenetics. 5, 47-49 (2010).</li><li>Hsieh, T. F., Ibarra, C. A., Silva, P., Zemach, A., Eshed-Williams, L., Fischer, R. L., Zilberman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+demethylation+of+Arabidopsis+endosperm.">Genome-wide demethylation of Arabidopsis endosperm.</a> Science. 324, 1451-1454 (2009).</li><li>Jacobsen, S. E., Sakai, H., Finnegan, E. J., Cao, X., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+hypermethylation+of+flower-specific+genes+in+Arabidopsis.">Ectopic hypermethylation of flower-specific genes in Arabidopsis.</a> Curr. Biol. 10, 179-186 (2000).</li><li>Kinoshita, T., Miura, A., Choi, Y., Kinoshita, Y., Cao, X., Jacobsen, S. E., Fischer, R. L., Kakutani, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-way+control+of+FWA+imprinting+in+Arabidopsis+endosperm+by+DNA+methylation.">One-way control of FWA imprinting in Arabidopsis endosperm by DNA methylation.</a> Science. 303, 521-523 (2004).</li><li>Lister, R., O'Malley, R. C., Tonti-Filippini, J., Gregory, B. D., Berry, C. C., Millar, A. H., Ecker, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+integrated+single-base+resolution+maps+of+the+epigenome+in+Arabidopsis.">Highly integrated single-base resolution maps of the epigenome in Arabidopsis.</a> Cell. 133, 523-536 (2008).</li><li>Lister, R., Pelizzola, M., Dowen, R. H., Hawkins, R. D., Hon, G., Tonti-Filippini, J., Nery, J. R., Lee, L., Ye, Z., Ngo, Q. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+DNA+methylomes+at+base+resolution+show+widespread+epigenomic+differences.">Human DNA methylomes at base resolution show widespread epigenomic differences.</a> Nature. 462, 315-322 (2009).</li><li>Paulin, R., Grigg, G. W., Davey, M. W., Piper, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urea+improves+efficiency+of+bisulfite-mediated+sequencing+of+5'-+methylcytosine+in+genomic+DNA.">Urea improves efficiency of bisulfite-mediated sequencing of 5'- methylcytosine in genomic DNA.</a> Nucl. Acids Res. 26, 5009-5010 (1998).</li><li>Rogers, S. O., &amp;amp, B. e. n. d. i. c. h., J, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+DNA+from+plant+tissues.">Extraction of DNA from plant tissues.</a> Plant Molecular Biology Manual. A6, 1-10 (1988).</li><li>Smyth, D. R., Bowman, J. L., Elliot, M., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Flower+Development+in+Arab&#237;dopsis.">Early Flower Development in Arab&#237;dopsis.</a> Plant Cell. 2, 755-767 (1990).</li><li>Xiao, W., Gehring, M., Choi, Y., Margossian, L., Pu, H., Harada, J. J., Goldberg, R. B., Pennell, R. I., Fischer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinting+of+the+MEA+Polycomb+gene+is+controlled+by+antagonism+between+MET1+methyltransferase+and+DME+glycosylase.">Imprinting of the MEA Polycomb gene is controlled by antagonism between MET1 methyltransferase and DME glycosylase.</a> Dev. Cell. 5, 891-901 (2003).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

فمن السهل نسبيا لفصل جنين من السويداء ، ومعطف البذور ، لكنها مملة لفصل السويداء من معطف البذور ، وخاصة بالنسبة للبذور في مرحلة مبكرة أو منتصف الطوربيد ، من مرحلة التطور الجنيني. منذ معطف البذور يساهم سوى كمية صغيرة جدا من الأنسجة ، وبالنسبة لبعض الجينات ، مثل الشرق ...

لوازم <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح مجهر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقص </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الملقط تلميح غرامة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العلامة الحلي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مصنع ستيكس </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السلسلة أو تويست ، ربطات عنق </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4 &quot;X 2&quot; X 8 أكياس البولي ايثيلين &quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3 &quot;X 1&quot; X الشرائح مجهر 1.0 ملم </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> النتروجين السائل </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حاويات النتروجين السائل </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحرارة بلوك </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PCR أنابيب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Thermocycler </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Microcentrifuge أنابيب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Microcentrifuge </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هلام إستشراد مرفق </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Arabidopsis thaliana كولومبيا - 0 النباتات </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Arabidopsis thaliana ندسبرغ النباتات عمودي </li></ul> الكواشف <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70 ٪ إيثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 95 ٪ إيثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإيثانول بنسبة 100 ٪ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.3 م و 5 ملي سوربيتول MES - 5.7 درجة الحموضة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cetyltrimethyl بروميد الأمونيوم (CTAB) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإيثانول بنسبة 100 ٪ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cholorform </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييد الانزيمات </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3 M هيدروكسيد الصوديوم </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هيدروكسيد الصوديوم 6.3 M </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 6.24 M اليوريا / 4 بيسلفيت الصوديوم M </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقطر معقم H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 ملي هيدروكينون </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحمض النووي المعالج تنظيف النظام (Promega) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 M NH 4 OAC </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 20 ميكروغرام / ميكرولتر الحمض الريبي النووي النقال </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> TE العازلة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وTOPO TA الاستنساخ كيت (Invitrogen) </li></ul>

determination of dna methylation of imprinted genes in arabidopsis endosperm

thaliana Arabidopsis هو كائن نموذجا ممتازا لدراسة آليات جينية. أحد الأسباب هو متحولة خالية من خسارة وظيفة من methyltransferases الحمض النووي قابلة للحياة ، وبالتالي توفير نظام لدراسة كيفية فقدان الحامض النووي في الجينوم يؤثر على النمو والتنمية. يطبع التعبير يشير إلى الفرق الأليلات الأم والأب ، ويلعب دورا هاما في عملية التنمية في كل من استنساخ الثدييات والنباتات. الحامض النووي هو أمر حاسم لتحديد ما إذا كان يتم التعبير عن الأب أو الأم الأليلات لجينة مطبوع أو إسكاته. في النباتات المزهرة ، وهناك حدث الإخصاب مزدوجة في الاستنساخ : خلية واحدة يخصب الحيوان المنوي البويضة لتشكيل خلية الجنين والصمامات الحيوانات المنوية الثاني مع الخلية المركزية تثير السويداء. السويداء هو الأنسجة حيث يطبع يحدث في النباتات. MEDEA ، مجموعة مجموعة الجينات Polycomb المجال ، وFWA ، وهو عامل النسخ تنظيم المزهرة ، هم أول اثنين من الجينات أظهرت أن تكون مطبوعة في السويداء والتعبير عنها هي التي تسيطر عليها الحامض النووي ونزع الميثيل في النباتات. من أجل تحديد الوضع يطبع من الجينات ونمط مثيلة في السويداء ، ونحن بحاجة إلى أن تكون قادرة على عزل السويداء الأول. منذ البذور صغيرة في Arabidopsis ، فإنه لا يزال تحديا لعزل السويداء Arabidopsis ودراسة مثيلة لها. في هذا البروتوكول الفيديو ، فإننا تقرير كيفية إجراء عبر الجينية ، لعزل نسيج السويداء من البذور ، وتحديد حالة مثيلة بواسطة التسلسل بيسلفيت.

Watch this Scientific Journal Video about Determination of DNA Methylation of Imprinted Genes in Arabidopsis Endosperm at JoVE.com

Determination of DNA Methylation of Imprinted Genes in Arabidopsis Endosperm

يطبع ظاهرة التكاثر في النباتات والثدييات. الحامض النووي يلعب دورا مهما في آليات يطبع. عزل وتحديد مركز السويداء مثيلة من الجينات في مطبوع<em&gt; Arabidopsis</em&gt; يمكن أن يكون صعبا. في هذا البروتوكول ، ونحن تصف كيفية عزل السويداء وتحديد التسلسل مثلأيشن بواسطة بيسلفيت.

تقرير من الحامض النووي من الجينات في مطبوع Arabidopsis السويداء

Arabidopsis thaliana is an excellent model organism for studying epigenetic mechanisms. One of the reasons is the loss-of-function null mutant of DNA ...

determination-dna-methylation-imprinted-genes-arabidopsis

Research

JoVE Journal

Biology

Determination of DNA Methylation of Imprinted Genes in Arabidopsis Endosperm

17.4K Views.  Saint Louis University. يطبع ظاهرة التكاثر في النباتات والثدييات. الحامض النووي يلعب دورا مهما في آليات يطبع. عزل وتحديد مركز السويداء مثيلة من الجينات في مطبوع Arabidopsis يمكن أن يكون صعبا. في هذا البروتوكول ، ونحن تصف كيفية عزل السويداء وتحديد التسلسل مثلأيشن بواسطة بيسلفيت.

Video: Determination of DNA Methylation of Imprinted Genes in Arabidopsis Endosperm

DNA Methylation: Bisulphite Modification and Analysis

Epigenetics describes the heritable changes in gene function that occur independently to the DNA sequence. The molecular basis of epigenetic gene regulation is complex, but essentially involves modifications to the DNA itself or the proteins with which DNA associates. The predominant epigenetic modification of DNA in mammalian genomes is methylation of cytosine nucleotides (5-MeC). DNA methylation provides instruction to gene expression machinery as to where and when the gene should be expressed. The primary target sequence for DNA methylation in mammals is 5'-CpG-3' dinucleotides (Figure 1). CpG dinucleotides are not uniformly distributed throughout the genome, but are concentrated in regions of repetitive genomic sequences and CpG "islands" commonly associated with gene promoters (Figure 1). DNA methylation patterns are established early in development, modulated during tissue specific differentiation and disrupted in many disease states including cancer. To understand the biological role of DNA methylation and its role in human disease, precise, efficient and reproducible methods are required to detect and quantify individual 5-MeCs.
This protocol for bisulphite conversion is the "gold standard" for DNA methylation analysis and facilitates identification and quantification of DNA methylation at single nucleotide resolution. The chemistry of cytosine deamination by sodium bisulphite involves three steps (Figure 2). (1) Sulphonation: The addition of bisulphite to the 5-6 double bond of cytosine (2) Hydrolic Deamination: hydrolytic deamination of the resulting cytosine-bisulphite derivative to give a uracil-bisulphite derivative (3) Alkali Desulphonation: Removal of the sulphonate group by an alkali treatment, to give uracil. Bisulphite preferentially deaminates cytosine to uracil in single stranded DNA, whereas 5-MeC, is refractory to bisulphite-mediated deamination. Upon PCR amplification, uracil is amplified as thymine while 5-MeC residues remain as cytosines, allowing methylated CpGs to be distinguished from unmethylated CpGs by presence of a cytosine "C" versus thymine "T" residue during sequencing.
DNA modification by bisulphite conversion is a well-established protocol that can be exploited for many methods of DNA methylation analysis. Since the detection of 5-MeC by bisulphite conversion was first demonstrated by Frommer et al.1 and Clark et al.2, methods based around bisulphite conversion of genomic DNA account for the majority of new data on DNA methylation. Different methods of post PCR analysis may be utilized, depending on the degree of specificity and resolution of methylation required. Cloning and sequencing is still the most readily available method that can give single nucleotide resolution for methylation across the DNA molecule.

The gold standard for DNA methylation analysis is genomic sequencing of bisulphite converted DNA. This method takes advantage of the increased sensitivity of cytosine compared with 5-methylcytosine (5-MeC) to bisulphite deamination under acidic conditions. Unmethylated cytosines can be distinguished from methylated cytosines after PCR amplification of the target genomic DNA.

الحامض النووي : Bisulphite تعديل وتحليل

Epigenetics describes the heritable changes in gene function that occur independently to the DNA sequence. The molecular basis of epigenetic gene ...

Chromosomics: Detection of Numerical and Structural Alterations in All 24 Human Chromosomes Simultaneously Using a Novel OctoChrome FISH Assay

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique that allows specific DNA sequences to be detected on metaphase or interphase chromosomes in cell nuclei1. The technique uses DNA probes with unique sequences that hybridize to whole chromosomes or specific chromosomal regions, and serves as a powerful adjunct to classic cytogenetics. For instance, many earlier studies reported the frequent detection of increased chromosome aberrations in leukemia patients related with benzene exposure, benzene-poisoning patients, and healthy workers exposed to benzene, using classic cytogenetic analysis2. Using FISH, leukemia-specific chromosomal alterations have been observed to be elevated in apparently healthy workers exposed to benzene3-6, indicating the critical roles of cytogentic changes in benzene-induced leukemogenesis. 
Generally, a single FISH assay examines only one or a few whole chromosomes or specific loci per slide, so multiple hybridizations need to be conducted on multiple slides to cover all of the human chromosomes. Spectral karyotyping (SKY) allows visualization of the whole genome simultaneously, but the requirement for special software and equipment limits its application7. Here, we describe a novel FISH assay, OctoChrome-FISH, which can be applied for Chromosomics, which we define here as the simultaneous analysis of all 24 human chromosomes on one slide in human studies, such as chromosome-wide aneuploidy study (CWAS)8. The basis of the method, marketed by Cytocell as the Chromoprobe Multiprobe System, is an OctoChrome device that is divided into 8 squares, each of which carries three different whole chromosome painting probes (Figure 1). Each of the three probes is directly labeled with a different colored fluorophore, green (FITC), red (Texas Red), and blue (Coumarin). The arrangement of chromosome combinations on the OctoChrome device has been designed to facilitate the identification of the non-random structural chromosome alterations (translocations) found in the most common leukemias and lymphomas, for instance t(9;22), t(15;17), t(8;21), t(14;18)9. Moreover, numerical changes (aneuploidy) in chromosomes can be detected concurrently. The corresponding template slide is also divided into 8 squares onto which metaphase spreads are bound (Figure 2), and is positioned over the OctoChrome device. The probes and target DNA are denatured at high-temperature and hybridized in a humid chamber, and then all 24 human chromosomes can be visualized simultaneously. 
OctoChrome FISH is a promising technique for the clinical diagnosis of leukemia and lymphoma and for detection of aneuploidies in all chromosomes. We have applied this new Chromosomic approach in a CWAS study of benzene-exposed Chinese workers8,10.

A novel fluorescence in situ hybridization (FISH) method that simultaneously examines both numerical and structural chromosome alterations, particularly the specific chromosomal translocations associated with leukemia and lymphoma, of all 24 human chromosomes on a single device in one hybridization, is described.

Chromosomics: الكشف عن التغيرات العددية والهيكلية في جميع الكروموسومات 24 الإنسان وقت واحد باستخدام رواية الفحص FISH OctoChrome

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique that allows specific DNA sequences to be detected on metaphase or interphase chromosomes in cell ...

A Seed Coat Bedding Assay to Genetically Explore In Vitro How the Endosperm Controls Seed Germination in Arabidopsis thaliana

The Arabidopsis endosperm consists of a single cell layer surrounding the mature embryo and playing an essential role to prevent the germination of dormant seeds or that of nondormant seeds irradiated by a far red (FR) light pulse. In order to further gain insight into the molecular genetic mechanisms underlying the germination repressive activity exerted by the endosperm, a &#34;seed coat bedding&#34; assay (SCBA) was devised. The SCBA is a dissection procedure physically separating seed coats and embryos from seeds, which allows monitoring the growth of embryos on an underlying layer of seed coats. Remarkably, the SCBA reconstitutes the germination repressive activities of the seed coat in the context of seed dormancy and FR-dependent control of seed germination. Since the SCBA allows the combinatorial use of dormant, nondormant and genetically modified seed coat and embryonic materials, the genetic pathways controlling germination and specifically operating in the endosperm and embryo can be dissected. Here we detail the procedure to assemble a SCBA.

A Seed Coat Bedding Assay to Genetically Explore In Vitro How the Endosperm Controls Seed Germination in Arabidopsis thaliana

We present the procedure to assemble a seed coat bedding assay (SCBA) from Arabidopsis thaliana seeds. The SCBA was shown to be a powerful tool to explore genetically and in vitro how the endosperm controls seed germination in dormant seeds and in response to light cues. The SCBA is in principle applicable under any situation where the endosperm is suspected to influence embryonic growth.

معطفا البذور الفراش الفحص لاستكشاف وراثيا<em&gt; في المختبر</em&gt; كيف إنبات البذور في الضوابط السويداء<em&gt; نبات الأرابيدوبسيس thaliana</em

The Arabidopsis endosperm consists of a single cell layer surrounding the mature embryo and playing an essential role to prevent the germination of ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the development of diverse techniques to visualize individual RNA transcripts in single living cells. One promising technique that has recently been described utilizes an oligonucleotide-based optical probe, ratiometric bimolecular beacon (RBMB), to detect RNA transcripts that were engineered to contain at least four tandem repeats of the RBMB target sequence in the 3&#8217;-untranslated region. RBMBs are specifically designed to emit a bright fluorescent signal upon hybridization to complementary RNA, but otherwise remain quenched. The use of a synthetic probe in this approach allows photostable, red-shifted, and highly emissive organic dyes to be used for imaging. Binding of multiple RBMBs to the engineered RNA transcripts results in discrete fluorescence spots when viewed under a wide-field fluorescent microscope. Consequently, the movement of individual RNA transcripts can be readily visualized in real-time by taking a time series of fluorescent images. Here we describe the preparation and purification of RBMBs, delivery into cells by microporation and live-cell imaging of single RNA transcripts.

Ratiometric bimolecular beacons (RBMBs) can be used to image single engineered RNA transcripts in living cells. Here, we describe the preparation and purification of RBMBs, delivery of RBMBs into cells by microporation and fluorescent imaging of single RNA transcripts in real-time.

التصوير في الوقت الحقيقي من واحدة المهندسة رنا النصوص في الخلايا الحية عن طريق Ratiometric ثنائي الجزيء منارات

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

In vitro Methylation Assay to Study Protein Arginine Methylation

Protein arginine methylation is one of the most abundant post-translational modifications in the nucleus. Protein arginine methylation can be identified and/or determined via proteomic approaches, and/or immunoblotting with methyl-arginine specific antibodies. However, these techniques sometimes can be misleading and often provide false positive results. Most importantly, these techniques cannot provide direct evidence in support of the PRMT substrate specificity. In vitro methylation assays, on the other hand, are useful biochemical assays, which are sensitive, and consistently reveal if the identified proteins are indeed PRMT substrates. A typical in vitro methylation assay includes purified, active PRMTs, purified substrate and a radioisotope labeled methyl donor (S-adenosyl-L-[methyl-3H] methionine). Here we describe a step-by-step protocol to isolate catalytically active PRMT1, a ubiquitously expressed PRMT family member. The methyl transferase activities of the purified PRMT1 were later tested on Ras-GTPase activating protein binding protein 1 (G3BP1), a known PRMT substrate, in the presence of S-adenosyl-L-[methyl-3H] methionine as the methyl donor. This protocol can be employed not only for establishing the methylation status of novel physiological PRMT1 substrates, but also for understanding the basic mechanism of protein arginine methylation.

In vitro Methylation Assay to Study Protein Arginine Methylation

Protein arginine methylation, catalyzed by a class of enzymes viz., protein arginine methyl transferases (PRMTs), is the process of enzymatic addition of methyl group(s) to arginines within proteins. The in vitro methylation assay is the most dependable tool for assessing the methylation status of known or novel PRMT substrates.

في المختبر مثلأيشن الفحص لدراسة البروتين أرجينين مثلأيشن

Protein arginine methylation is one of the most abundant post-translational modifications in the nucleus. Protein arginine methylation can be identified ...

Enhanced Reduced Representation Bisulfite Sequencing for Assessment of DNA Methylation at Base Pair Resolution

DNA methylation pattern mapping is heavily studied in normal and diseased tissues. A variety of methods have been established to interrogate the cytosine methylation patterns in cells. Reduced representation of whole genome bisulfite sequencing was developed to detect quantitative base pair resolution cytosine methylation patterns at GC-rich genomic loci. This is accomplished by combining the use of a restriction enzyme followed by bisulfite conversion. Enhanced Reduced Representation Bisulfite Sequencing (ERRBS) increases the biologically relevant genomic loci covered and has been used to profile cytosine methylation in DNA from human, mouse and other organisms. ERRBS initiates with restriction enzyme digestion of DNA to generate low molecular weight fragments for use in library preparation. These fragments are subjected to standard library construction for next generation sequencing. Bisulfite conversion of unmethylated cytosines prior to the final amplification step allows for quantitative base resolution of cytosine methylation levels in covered genomic loci. The protocol can be completed within four days. Despite low complexity in the first three bases sequenced, ERRBS libraries yield high quality data when using a designated sequencing control lane. Mapping and bioinformatics analysis is then performed and yields data that can be easily integrated with a variety of genome-wide platforms. ERRBS can utilize small input material quantities making it feasible to process human clinical samples and applicable in a range of research applications. The video produced demonstrates critical steps of the ERRBS protocol.

Enhanced Reduced Representation Bisulfite Sequencing is a method for the preparation of sequencing libraries for DNA methylation analysis based on restriction enzyme digestion combined with cytosine bisulfite conversion. This protocol requires 50 ng of starting material and yields base pair resolution data at GC-rich genomic regions.

المحسن انخفاض التمثيل بيسلفيت تسلسل لتقييم الحامض النووي في قرار قاعدة زوج

DNA methylation pattern mapping is heavily studied in normal and diseased tissues. A variety of methods have been established to interrogate the cytosine ...

Correlating Gene-specific DNA Methylation Changes with Expression and Transcriptional Activity of Astrocytic KCNJ10 (Kir4.1)

DNA methylation serves to regulate gene expression through the covalent attachment of a methyl group onto the C5 position of a cytosine in a cytosine-guanine dinucleotide. While DNA methylation provides long-lasting and stable changes in gene expression, patterns and levels of DNA methylation are also subject to change based on a variety of signals and stimuli. As such, DNA methylation functions as a powerful and dynamic regulator of gene expression. The study of neuroepigenetics has revealed a variety of physiological and pathological states that are associated with both global and gene-specific changes in DNA methylation. Specifically, striking correlations between changes in gene expression and DNA methylation exist in neuropsychiatric and neurodegenerative disorders, during synaptic plasticity, and following CNS injury. However, as the field of neuroepigenetics continues to expand its understanding of the role of DNA methylation in CNS physiology, delineating causal relationships in regards to changes in gene expression and DNA methylation are essential. Moreover, in regards to the larger field of neuroscience, the presence of vast region and cell-specific differences requires techniques that address these variances when studying the transcriptome, proteome, and epigenome. Here we describe FACS sorting of cortical astrocytes that allows for subsequent examination of a both RNA transcription and DNA methylation. Furthermore, we detail a technique to examine DNA methylation, methylation sensitive high resolution melt analysis (MS-HRMA) as well as a luciferase promoter assay. Through the use of these combined techniques one is able to not only explore correlative changes between DNA methylation and gene expression, but also directly assess if changes in the DNA methylation status of a given gene region are sufficient to affect transcriptional activity.

Correlating Gene-specific DNA Methylation Changes with Expression and Transcriptional Activity of Astrocytic KCNJ10 Kir4.1

DNA methylation is capable of maintaining stable levels of gene expression as well as allowing for dynamic changes in gene expression in response to a variety of stimuli. We detail techniques that allow the study of gene-specific changes in DNA methylation and the effect of these changes on gene expression.

ربط الجينات المحددة الحامض النووي التغييرات مع التعبير والترانسكربتي آخر من نجمي<em&gt; KCNJ10</em&gt; (Kir4.1)

DNA methylation serves to regulate gene expression through the covalent attachment of a methyl group onto the C5 position of a cytosine in a ...

Targeted DNA Methylation Analysis by Next-generation Sequencing

The role of epigenetic processes in the control of gene expression has been known for a number of years. DNA methylation at cytosine residues is of particular interest for epigenetic studies as it has been demonstrated to be both a long lasting and a dynamic regulator of gene expression. Efforts to examine epigenetic changes in health and disease have been hindered by the lack of high-throughput, quantitatively accurate methods. With the advent and popularization of next-generation sequencing (NGS) technologies, these tools are now being applied to epigenomics in addition to existing genomic and transcriptomic methodologies. For epigenetic investigations of cytosine methylation where regions of interest, such as specific gene promoters or CpG islands, have been identified and there is a need to examine significant numbers of samples with high quantitative accuracy, we have developed a method called Bisulfite Amplicon Sequencing (BSAS). This method combines bisulfite conversion with targeted amplification of regions of interest, transposome-mediated library construction and benchtop NGS. BSAS offers a rapid and efficient method for analysis of up to 10 kb of targeted regions in up to 96 samples at a time that can be performed by most research groups with basic molecular biology skills. The results provide absolute quantitation of cytosine methylation with base specificity. BSAS can be applied to any genomic region from any DNA source. This method is useful for hypothesis testing studies of target regions of interest as well as confirmation of regions identified in genome-wide methylation analyses such as whole genome bisulfite sequencing, reduced representation bisulfite sequencing, and methylated DNA immunoprecipitation sequencing.

Bisulfite amplicon sequencing (BSAS) is a method for quantifying cytosine methylation in targeted genomic regions of interest. This method uses bisulfite conversion paired with PCR amplification of target regions prior to next-generation sequencing to produce absolute quantitation of DNA methylation at a base-specific level.

استهدفت DNA تحليل مثلأيشن من قبل الجيل المقبل من التسلسل

The role of epigenetic processes in the control of gene expression has been known for a number of years. DNA methylation at cytosine residues is of ...

Chromatin Immunoprecipitation Assay for the Identification of Arabidopsis Protein-DNA Interactions In Vivo

Intricate gene regulatory networks orchestrate biological processes and developmental transitions in plants. Selective transcriptional activation and silencing of genes mediate the response of plants to environmental signals and developmental cues. Therefore, insights into the mechanisms that control plant gene expression are essential to gain a deep understanding of how biological processes are regulated in plants. The chromatin immunoprecipitation (ChIP) technique described here is a procedure to identify the DNA-binding sites of proteins in genes or genomic regions of the model species Arabidopsis thaliana. The interactions with DNA of proteins of interest such as transcription factors, chromatin proteins or posttranslationally modified versions of histones can be efficiently analyzed with the ChIP protocol. This method is based on the fixation of protein-DNA interactions in vivo, random fragmentation of chromatin, immunoprecipitation of protein-DNA complexes with specific antibodies, and quantification of the DNA associated with the protein of interest by PCR techniques. The use of this methodology in Arabidopsis has contributed significantly to unveil transcriptional regulatory mechanisms that control a variety of plant biological processes. This approach allowed the identification of the binding sites of the Arabidopsis chromatin protein EBS to regulatory regions of the master gene of flowering FT. The impact of this protein in the accumulation of particular histone marks in the genomic region of FT was also revealed through ChIP analysis.

Chromatin Immunoprecipitation Assay for the Identification of Arabidopsis Protein-DNA Interactions In Vivo

Chromatin immunoprecipitation is a powerful technique for the identification of DNA binding sites of Arabidopsis proteins in vivo. This procedure includes chromatin cross-linking and fragmentation, immunoprecipitation with selective antibodies against the protein of interest, and qPCR analysis of bound DNA. We describe a simple ChIP assay optimized for Arabidopsis plants.

مناعي لونين الفحص لتحديد نبات الأرابيدوبسيس التفاعلات-DNA البروتين<em&gt; في فيفو</em

Intricate gene regulatory networks orchestrate biological processes and developmental transitions in plants. Selective transcriptional activation and ...

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

Plant cells are surrounded by a cell wall, the composition of which determines their final size and shape. The cell wall is composed of a complex matrix containing polysaccharides that include cellulose microfibrils that form both crystalline structures and cellulose chains of amorphous organization. The orientation of the cellulose fibers and their concentrations dictate the mechanical properties of the cell. Several methods are used to determine the levels of crystalline cellulose, each bringing both advantages and limitations. Some can distinguish the proportion of crystalline regions within the total cellulose. However, they are limited to whole-organ analyses that are deficient in spatiotemporal information. Others relying on live imaging, are limited by the use of imprecise dyes. Here, we report a sensitive polarized light-based system for specific quantification of relative light retardance, representing crystalline cellulose accumulation in cross sections of Arabidopsis thaliana roots. In this method, the cellular resolution and anatomical data are maintained, enabling direct comparisons between the different tissues composing the growing root. This approach opens a new analytical dimension, shedding light on the link between cell wall composition, cellular behavior and whole-organ growth.

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

Crystalline cellulose is an important constituent of the plant cell wall. However, its quantification at a cellular resolution is technically challenging. Here, we report the use of polarized light technology and root cross sections to obtain information of cell wall composition at a spatiotemporal resolution.

قرار الكمي عال من بلوري السليلوز تراكم في<em&gt; نبات الأرابيدوبسيس</em&gt; جذور لرصد الأنسجة محددة جدار الخلية تعديلات

Plant cells are surrounded by a cell wall, the composition of which determines their final size and shape. The cell wall is composed of a complex matrix ...