وأيد هذا العمل من قبل صندوق أبحاث السرطان المبيض [منح LT/UIC/01.2011] ، ومركز اتحاد المحاكم الإسلامية للعلوم الطبية وبالحركة ، ومركز السرطان UIC ، والمعاهد الوطنية للصحة منح C06RR15482. وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها AAALAC تحت رعاية الحيوانات البروتوكولات المعتمدة من قبل لجنة رعاية الحيوان ، واستخدم في المحاكم الاسلامية. إيواء الحيوانات لهذا المشروع في غرف الحاجز في مختبر الموارد البيولوجية (BRL) في جامعة إلينوي في شيكاغو. ويبلغ عدد موظفي BRL البيطرية تماما أن تراقب الحيوانات على الأقل مرتين يوميا ، ويقدم المشورة بشأن رعاية الحيوان.

1. تشريح الانسجة المبيض والعزلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول 0.5 ٪ (وزن / حجم) من الجينات الصوديوم ، وإعداد نسخة معدلة من البروتوكول سبق وصفها 5 ، وذلك باستخدام برنامج تلفزيوني العقيمة والحرارة إلى 37 درجة مئوية. مزيج من قبل انقلاب أو الهزاز ، ولكن لا الدوامة. رسم ألجينات في 1 مل حقنة بإبرة G 25 و 37 في الحفاظ على درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 10MM العقيمة CaCl 2 حل لهذه الجينات عند يشابك نسيج التغليف ودافئة إلى 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1mL المتوسطة الثقافة (αMEM + 5 وحدات البنسلين والستربتوميسين 5 ميكروغرام / مل) بشكل جيد في كل لوحة 24 جيد لكل تجربة. وتشمل العقاقير المختلفة ، والببتيدات ، أو الفيروسات في المتوسط ​​الثقافة. لترنسفكأيشن قبل الجهاز التغليف ، مع احتضان الأنسجة Lipofectamine 2000 و DNA البلازميد لمدة أربع ساعات في 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الأعضاء من الحيوان ، وإزالة أي نوع من الأنسجة الدهنية أو المتبقية ، برفق خارج الغشاء المحيط جراب المبيض ، وقطع قناة البيض في المبيض أو أربع قطع من قبل تتوسط الجهاز. الموت الرحيم كانت الحيوانات خنقا CO 2 تليها خلع عنق الرحم. للقناة البيض ، uncoil بلطف الأنسجة عن طريق سحب بعيدا الأغشية ربط وتمديد تاريخ إنتهاء من الأنبوب في اتجاهين متعاكسين باستخدام الملقط قبل القطع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطرة واحدة ألجينات (~ ميكرولتر 1-3) في الصعود إلى شبكة الألياف تعقيمها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط معقم ، حرك قطعة من الجهاز في قطيرة الجينات ومركز الحبرية باستخدام ملقط أو إبرة معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عكس الحبرية التي تحتوي على قطعة الجهاز (ورم) عن طريق شبكة الألياف استيعاب مع ملقط معقم وتحويلها رأسا على عقب للسماح لقوة الجاذبية في الجينات إلى انخفاض شنقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على ملقط على حافة 10cm طبق بتري تحتوي 10MM CaCl 2 الحل بحيث تراجع يقع في الحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 2 دقيقة ، مع إزالة ملعقة العقيمة التي تحتوي على مسام اضافية للافراج عن 10MM CaCl 2 ، ونقل إلى متوسطة الثقافة. ويمكن تحويل ما يصل الى المواد الهلامية الجينات الأربعة في بئر واحدة من لوحة تحتوي على 24 بئرا في المتوسط ​​الثقافة. الثقافة لفترة زمنية محددة. </li></ol> 2. تدهور ألجينات ومجموعة من الخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لsolubilization من هلام الجينات ، في احتضان ثقافات ياز ألجينات (3.4 ملغ / مل) المنحل في وسائل الإعلام 15 - L يبوفيتش في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقائق أو حتى يذوب تماما هلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأنسجة من ياز الجينات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحصيل OSE ، احتضان للورم مع 500 وحدة من كولاجيناز في وسائل الإعلام ليبوفيتش - 15 L : 1 ساعة 8. دوامة في 2 البقول الثاني (2 و 2 ثانية دوامة ثانية راحة) على السلطة متوسطة لمدة 1 دقيقة ، تليها البقول 1 ثانية (1 +1 دوامة الثاني وبقية الثانية) لمدة 1 دقيقة. اسمحوا قطع الجهاز ينخفض ​​إلى أسفل أنبوب microcentrifuge وطاف ماصة جديدة في أنبوب microcentrifuge العقيمة. 3 دقائق للطرد المركزي في 3000 دورة في الدقيقة لظهارة المبيض بيليه السطح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحصيل ظهارة الأنبوبي ، وقطع بالطول ومكان أنبوب من البلاستيك على زراعة الأنسجة في DMEM مع 5 وحدات البنسلين و 5 ميكروغرام / مل الستربتوميسين و 4 ٪ (V / V) FBS. على مدى 3-5 أيام ، سوف الخلايا &quot;الزحف&quot; للخروج من سدى الأنبوبي وتنمو على زراعة الأنسجة plastic9. </li></ol> 3. تثبيت الثقافات ألجينات جهاز تغليف للأقسام البارافين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع ألجينات تغليف حبة متوسطة من الثقافة في نقطة زمنية محددة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Recrosslink في الجينات لتشديد الجل بإسقاط الثقافة في حل عقيم 10MM 2 CaCl لمدة دقيقتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الجهاز ألجينات مغلفة في بارافورمالدهيد 2 ٪ سكروز يحتوي على 50 ملم ، 10 ملم CaCl 2 و 50 ملي كاكوديلات الصوديوم للتأكد من أن جل يبقى متينا وتلخص تماما الأنسجة أثناء التثبيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد معالجة الأنسجة ، وترسيخ ثقافة بأكملها الجهاز ألجينات ، مغلفة في قطعة البارافين والباب مع مشراح لتوليد 5 أقسام ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسيتم حل الجينات وإزالتها من الشريحة اذا أداء المناعية بسبب الحرارة على استرجاع مستضد. سوف تبقى وصمة عار ألجينات ليوزين يقف تحت الهيماتوكسيلين وتلطيخ يوزين. </li></ol> 4. ممثل النتائج : ويرد مثال للثقافة الجهاز ثلاثية الأبعاد من المبيض وقناة البيض في الشكل 1. ويمكن خفض حجم المبيضين الى قطع مختلفة ، وOSE تتكاثر وتهاجر إلى السطح إصلاح الذي كان الجرحى من شق مع مشرط. خلال هذه العملية ، هو الحفاظ على التوجه الصحيح للبيئة نظام التشغيل بالنسبة إلى سدى الكامنة ، مع بيئة نظام التشغيل التغليف المبيض. كما هو مبين في الشكل 2 ، OSE المبايض في قطع نصف تغليف المبيض أكثر تماما بالمقارنة مع المبيضين مقطعة إلى أرباع أو أثمان. إصلاح الجرح من المبيضيمكن دراستها في سياق سطح المبيض بأكمله وربما تسلط الضوء على كيفية التبويض وإصلاح السطح يدفع المبيض تحول السطح. نقطة النهاية لهذه التجربة يعتمد على المعلومات المطلوبة. يمكن رصدها بسهولة بنية الأنسجة ، والتشكل الخلوي ، ومحددة معدلات النمو الخلوي باستخدام أقسام البارافين. على سبيل المثال ، يلاحظ وجود طبقة واحدة من سطح ظهارة المبيض بعد زراعتها في المصل خالية αMEM لمدة 7 أيام (الشكل 3A) ، في حين إضافة 5 ميكروغرام / مل الانسولين لمدة 7 أيام الحث المفرط لظهارة المبيض من المياه السطحية وتكوين طبقات متعددة من الخلايا (الشكل 3B). بإضافة bromodeoxyuridine على ثقافات بتركيز نهائي من 10 ساعة 24 ميكرومتر قبل التثبيت ، يمكن قياس انتشار الخلايا (أقحم 3A و 3B). للثقافات في الحفاظ على المصل خالية αMEM ، حوالي 3-5 ٪ من الخضوع OSE الانتشار خلال فترة 24 ساعة وسم (3A أقحم) ، في حين أن نسبة كبيرة من الخلايا المحببة تتكاثر. إضافة إلى وسائل الإعلام الانسولين الثقافة زيادات نسبة انتشار OSE إلى حوالي 30 ٪ من مجموع OSE (3B أقحم). المناعي ويمكن للبروتين الفلورية الخضراء (GFP) يمكن تصور من خلال هلام ألجينات المجهري مع المعيار التالي ترنسفكأيشن [كدنا] (الشكل 3C). بينما الجينات الثقافة الجهاز يوفر للنمو وتحليل ظهارة سطح المبيض وبصيلات الابتدائي ، ينبغي الإشارة إلى أن تنضج ، بصيلات الثانوية تفشل في البقاء على قيد الحياة في هذا النظام الثقافة (الشكل 3D). وقد وصفت ثقافة الفرد إلى النضج بصيلات ضمن الجينات مصفوفة هيدروجيل 10 في مكان آخر. ويمكن تحليل التغيرات في الحمض النووي الريبي من البروتين أو الجهاز بأكمله أو من أنواع معينة من الخلايا باستخدام تدهور الأنزيمية (الشكل 4). علاج organoids المبيض مع مثقف كولاجيناز يترك سدى الكامنة سليمة (الشكل 4C) ، في حين يسمح لتخصيب OSE بيليه في الخلية التي تم الحصول عليها بعد العلاج ، على الرغم من عزل بعض الخلايا اللحمية (الشكل 4D). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/2804/2804fig1.jpg" /> الرقم المبيض الماوس 1. ثلاثي الأبعاد نظام استخدام الثقافة للنشر OSE بعد اصابة. أ) تحت المجهر ، وإزالة الجراب وسادة المحيطة الدهون. B) المبيض سليمة (O) مع أنبوب بوقي (T) وسادة دهنية (F). C) مع جراب المبيض وسادة إزالة الدهون (يسار) وuncoiled قناة البيض (يمين). D) وضعت المبيض أو بوقي organoids إلى قطرة الجينات. E) أسقطت organoids الجيني المغطى في يشابك CaCl حل (2) والجينات لتشكيل مادة هلامية. F) الجيني مغلفة ورم المبيض. G) مغلفة بوقي عضوي الشكل الجيني. H) المحتضنة organoids الجيني مغلفة في المتوسط ​​الثقافة. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/2804/2804fig2.jpg" /> الشكل 2. المساحة السطحية بواسطة مجدد المبيض تقاس cytokeratin 8. تغليف organoids المبيض قبل OSE بعد أن يقتطع أرباع أثمان ، ونصفين ، مثقف في وسط جيش صرب البوسنة ، وتقاس عن طريق التحليل المناعى باستخدام cytokeratin 8 (CK8) الأجسام المضادة. <img alt="الشكل 3" src="/files/ftp_upload/2804/2804fig3.jpg" /> ثقافة الشكل الجيني 3. نظام يسمح بمرور عوامل النمو وترنسفكأيشن من [كدنا] في بيئة نظام التشغيل ، ولكن لا دعم النمو السريع ونضوج المسام. أ) ورم المبيض تربيتها لمدة 7 أيام في المتوسط ​​القاعدية تحليلها لCK8 التعبير ، والذي يصادف OSE. أقحم ، الفرع المسلسل الملون لإدراجها BrdU. ب) إضافة إلى وسائل الإعلام الانسولين يدفع ثقافة تضخم من بيئة نظام التشغيل. أقحم ، الفرع المسلسل الملون لإدراجها BrdU. C) ورم المبيض transfected مع [كدنا] للتعبير عن GFP. D) النظام الجيني الثقافة تدعم نمو بصيلات البدائية (رأس السهم الأحمر) ، ولكن لم تنضج بصيلات الثانوية (السهم الأسود). <img alt="الشكل 4" src="/files/ftp_upload/2804/2804fig4.jpg" /> يمكن الرقم 4. OSE تكون معزولة عن ثقافة التحليل التالي. أ) ورم المستزرعة في المتوسط ​​ليصل الى 2 أسابيع. ب) يتم التعامل مع عضوي الشكل مغلف ياز ألجينات لمغادرة عضوي سليمة. اتسخت المبيض مع CK8 لOSE العلامة. ج) يتم التعامل مع ورم كولاجيناز إلى بيئة نظام التشغيل منفصلة عن سدى الكامنة. وتبقى قطعة نسيج ملون مع CK8 لتسليط الضوء على إزالة سطح المبيض. D) هي الخلايا التي يتم جمعها المخصب بعد العلاج لبيئة نظام التشغيل والملون لCK8 (الحمراء). وcounterstained الخلايا مع دابي بمناسبة النوى.

<ol>
	<li>Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2009.">Cancer statistics, 2009.</a> CA Cancer J Clin. 59, 225-249 (2009).</li><li>Auersperg, N., Woo, M. M., Gilks, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+of+ovarian+carcinomas:+a+developmental+view.">The origin of ovarian carcinomas: a developmental view.</a> Gynecol Oncol. 110, 452-454 (2008).</li><li>Crum, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distal+fallopian+tube:+a+new+model+for+pelvic+serous+carcinogenesis.">The distal fallopian tube: a new model for pelvic serous carcinogenesis.</a> Curr Opin Obstet Gynecol. 19, 3-9 (2007).</li><li>Jackson, K. S., Inoue, K., Davis, D. A., Hilliard, T. S., Burdette, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ovarian+organ+culture+as+a+tool+to+study+normal+ovarian+surface+epithelial+wound+repair.">Three-dimensional ovarian organ culture as a tool to study normal ovarian surface epithelial wound repair.</a> Endocrinology. 150, 3921-3926 (2009).</li><li>Rowley, J. A., Madlambayan, G., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+hydrogels+as+synthetic+extracellular+matrix+materials.">Alginate hydrogels as synthetic extracellular matrix materials.</a> Biomaterials. 20, 45-53 (1999).</li><li>Augst, A. D., Kong, H. J., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+hydrogels+as+biomaterials.">Alginate hydrogels as biomaterials.</a> Macromol Biosci. 6, 623-633 (2006).</li><li>Amsden, B., Turner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion+characteristics+of+calcium+alginate+gels.">Diffusion characteristics of calcium alginate gels.</a> Biotechnol Bioeng. 65, 605-610 (1999).</li><li>Symonds, D. A., Miller, K. P., Tomic, D., Flaws, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+methoxychlor+and+estradiol+on+cytochrome+p450+enzymes+in+the+mouse+ovarian+surface+epithelium.">Effect of methoxychlor and estradiol on cytochrome p450 enzymes in the mouse ovarian surface epithelium.</a> Toxicol Sci. 89, 510-514 (2006).</li><li>Umezu, T., Hanazono, M., Aizawa, S., Tomooka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+newly+established+clonal+oviductal+cell+lines+and+differential+hormonal+regulation+of+gene+expression.">Characterization of newly established clonal oviductal cell lines and differential hormonal regulation of gene expression.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 39, 146-156 (2003).</li><li>Xu, M., Kreeger, P. K., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+follicles+produce+live,+fertile+offspring.">Tissue-engineered follicles produce live, fertile offspring.</a> Tissue Eng. 12, 2739-2746 (2006).</li><li>Wilson, R. F., Wiencek, R. G., Balog, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+and+preventing+infection+after+abdominal+vascular+injuries.">Predicting and preventing infection after abdominal vascular injuries.</a> J Trauma. 29, 1371-1375 (1989).</li><li>Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Oocyte+Maturation+and+Preantral+Follicle+Culture+from+the+Luteal+Phase+Baboon+Ovary+Produce+Mature+Oocytes.">In Vitro Oocyte Maturation and Preantral Follicle Culture from the Luteal Phase Baboon Ovary Produce Mature Oocytes.</a> Biol Reprod. , .</li><li>Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+grown+human+ovarian+follicles+from+cancer+patients+support+oocyte+growth.">In vitro grown human ovarian follicles from cancer patients support oocyte growth.</a> Hum Reprod. 24, 2531-2540 (2009).</li><li>Jen, A. C., Wake, M. C., Mikos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Hydrogels+for+cell+immobilization.">Review: Hydrogels for cell immobilization.</a> Biotechnol Bioeng. 50, 357-364 (1996).</li><li>Iwamoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+bifunctional+alginate+lyase+from+Alteromonas+sp.+strain+no.+272+and+its+action+on+saturated+oligomeric+substrates.">Purification and characterization of bifunctional alginate lyase from Alteromonas sp. strain no. 272 and its action on saturated oligomeric substrates.</a> Biosci Biotechnol Biochem. 65, 133-142 (2001).</li><li>Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cultured+human+ovarian+surface+epithelial+cells:+phenotypic+plasticity+and+premalignant+changes.">Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes.</a> Lab Invest. 71, 510-518 (1994).</li><li>Auersperg, N., Ota, T., Mitchell, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+events+in+ovarian+epithelial+carcinogenesis:+progress+and+problems+in+experimental+approaches.">Early events in ovarian epithelial carcinogenesis: progress and problems in experimental approaches.</a> Int J Gynecol Cancer. 12, 691-703 (2002).</li><li>Kruk, P. A., Uitto, V. J., Firth, J. D., Dedhar, S., Auersperg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+interactions+between+human+ovarian+surface+epithelial+cells+and+adjacent+extracellular+matrix.">Reciprocal interactions between human ovarian surface epithelial cells and adjacent extracellular matrix.</a> Exp Cell Res. 215, 97-108 (1994).</li><li>West, E. R., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+properties+of+alginate+hydrogels+and+their+effects+on+in+vitro+follicle+development.">Physical properties of alginate hydrogels and their effects on in vitro follicle development.</a> Biomaterials. 28, 4439-4448 (2007).</li><li>Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+surface+epithelium:+biology,+endocrinology,+and+pathology.">Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology.</a> Endocr Rev. 22, 255-288 (2001).</li><li>Choi, J. H., Wong, A. S., Huang, H. F., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropins+and+ovarian+cancer.">Gonadotropins and ovarian cancer.</a> Endocr Rev. 28, 440-461 (2007).</li><li>Fathalla, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incessant+ovulation--a+factor+in+ovarian+neoplasia.">Incessant ovulation--a factor in ovarian neoplasia.</a> Lancet. 2, 163-163 (1971).</li><li>Espey, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+the+hypothesis+that+mammalian+ovulation+is+comparable+to+an+inflammatory+reaction.">Current status of the hypothesis that mammalian ovulation is comparable to an inflammatory reaction.</a> Biol Reprod. 50, 233-238 (1994).</li></ol>

لا يوجد شيء في الكشف عنها.

تطوير نظام الجهاز ثقافة ثلاثي الأبعاد باستخدام الجينات الهلاميات المائية يمثل تنوعا طريقة لتحليل العديد من أنواع الأنسجة المختلفة من طائفة واسعة من الكائنات الحية. ويمكن تمديد استخدام الثقافات 3D لمجالات هندسة الأنسجة والطب التجديدي ، حيث انها توفر منصة الاعدام عل?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> يبوفيتش L - 15 المتوسط </td><td> Gibco </td><td> 11415 </td><td></td></tr><tr><td> αMEM المتوسطة </td><td> Gibco </td><td> 12000-022 </td><td></td></tr><tr><td> ألجينات الصوديوم </td><td> Novamatrix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الصوديوم كاكوديلات </td><td> سيغما الدريتش </td><td> C0250 </td><td></td></tr><tr><td> شبكة الألياف البولي بروبلين </td><td> ماكماستر كار </td><td></td><td> 45 &quot;لفة واسعة ؛ 0.0041&quot; فتح </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 </td><td> Invitrogen </td><td> 11668 </td><td></td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتوميسين </td><td> Gibco </td><td> 15070-063 </td><td></td></tr><tr><td> ألجينات ياز </td><td> سيغما الدريتش </td><td> A1603 </td><td></td></tr><tr><td> A1603 </td><td> سيغما الدريتش </td><td> C9697 </td><td> من نسج كلوستريديوم </td></tr><tr><td> ألبومين المصل البقري </td><td> النائب Biomedicals </td><td> 103700 </td><td></td></tr><tr><td> مصل بقري جنيني </td><td> Gibco </td><td> Gibco </td><td></td></tr><tr><td> ITS الحل </td><td> روش </td><td> 11074547001 </td><td> الانسولين / ترانسفيرين / الصوديوم زيلونيت </td></tr><tr><td> Cytokeratin 8 الأضداد </td><td> الدراسات التنموية ورم هجين الضفة </td><td> TROMA - 1 </td><td> استخدامها في 1:200 </td></tr><tr><td> دابي </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> H1200 </td><td></td></tr><tr><td> Bromodeoxyuridine </td><td> سيغما </td><td> B50002 - 1G </td><td> التركيز النهائي 10 ميكرومتر </td></tr></tbody></table>

alginate hydrogels for three-dimensional organ culture of ovaries and oviducts

سرطان المبيض هو السبب الرئيسي الخامس للوفيات السرطان في النساء ويبلغ معدل الوفيات 63 ٪ في الولايات المتحدة 1. نوع خلية من خلايا المنشأ لسرطان المبيض ما زال في السؤال ، وربما تكون إما سطح المبيض الظهارة (OSE) أو ظهارة القاصية من 2،3 خمل قناة فالوب. سوف زراعة الخلايا العادية بوصفها ثقافة الأولية في المختبر تمكن العلماء من طراز تغييرات محددة قد تؤدي إلى الإصابة بسرطان المبيض في ظهارة متميزة ، وبالتالي تحديد نوع الخلية نهائيا المنشأ. هذا سيسمح تطور المؤشرات الحيوية أكثر دقة ، النماذج الحيوانية مع التغيرات النسيجية الخاصة الجينات ، واستراتيجيات وقاية أفضل المستهدفة لهذا المرض. الحفاظ على الخلايا الطبيعية في الهلاميات المائية ألجينات يشجع على المدى القصير في الثقافة المختبر من الخلايا في سياق ثلاثي الأبعاد وعلى تراخيص إدخال الحمض النووي البلازميد ، سيرنا ، والجزيئات الصغيرة. من جانب أجهزة التثقيف في القطع التي يتم اشتقاق من التخفيضات الاستراتيجية باستخدام مشرط وثقافات عدة من جهاز واحد يمكن توليدها ، وزيادة عدد من التجارب من حيوان واحد. هذه التخفيضات الجوانب نموذج التبويض مما يؤدي إلى انتشار بيئة نظام التشغيل ، وهو أمر يرتبط مع تشكيل سرطان المبيض. يمكن تربيتها أنواع الخلايا مثل بيئة نظام التشغيل التي لا تنمو جيدا على السطوح البلاستيكية باستخدام هذا الأسلوب ، وتسهيل التحقيق في العمليات الخلوية العادية أو أقرب الأحداث في تشكيل السرطان 4. ويمكن استخدام الجينات الهلاميات المائية لدعم نمو العديد من أنواع الأنسجة 5. الجينات هي السكاريد خطية مؤلفة من تكرار وحدات من حامض - D - β وmannuronic α - L - حمض guluronic التي يمكن crosslinked مع أيونات الكالسيوم ، مما أدى إلى إجراء التبلور لطيف لا ضرر 6،7 الأنسجة. مثل غيرها من ثلاثية الابعاد المصفوفات ثقافة الخلية مثل Matrigel ، ألجينات يوفر الدعم الميكانيكية للأنسجة ، إلا أن البروتينات لا يتم التفاعل مع مصفوفة الجينات ، وبالتالي وظائف الجينات والمصفوفة خارج الخلية الاصطناعية التي لا تبدأ الخلية إشارة 5. وهيدروجيل ألجينات يعوم في مستوى الخلية مستنبت ويدعم بنية نمو الأنسجة في المختبر. ويقدم طريقة لإعداد ، والانفصال ، وتضمينها في المبيض وقطع الجهاز بوقي الهلاميات المائية في الجينات ، التي يمكن في ظلها في الثقافة لمدة تصل الى أسبوعين. يوصف ايضا باطلاق سراح الأنزيمية من الخلايا لتحليل عينات من البروتينات والحمض النووي الريبي من ثقافة الجهاز. أخيرا ، ونمو أنواع الخلايا الأولية غير ممكن من دون تخليد الجينية من الفئران ويسمح للمحققين لاستخدام الفئران المعدلة وراثيا وخروج المغلوب.

Watch this Scientific Journal Video about Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts at JoVE.com

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

ثقافة الخلايا الطبيعية في سياق ثلاثية الأبعاد من يمثل طريقة بديلة لدراسة الأحداث المبكرة اللازمة للتحول الخليوي وتكون الأورام. وتستخدم هذه الطريقة لزراعة المبيض الطبيعي والخلايا بوقي لدراسة الأحداث المبكرة في تكوين سرطان المبيض.

ألجينات الهلاميات المائية للثقافة الجهاز ثلاثي الأبعاد من المبيضين وناقلة البيضات

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

alginate-hydrogels-for-three-dimensional-organ-culture-ovaries

Research

JoVE Journal

Bioengineering

21.8K Views.  University of Illinois at Chicago. ثقافة الخلايا الطبيعية في سياق ثلاثية الأبعاد من يمثل طريقة بديلة لدراسة الأحداث المبكرة اللازمة للتحول الخليوي وتكون الأورام. وتستخدم هذه الطريقة لزراعة المبيض الطبيعي والخلايا بوقي لدراسة الأحداث المبكرة في تكوين سرطان المبيض.

Video: Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

Planar and Three-Dimensional Printing of Conductive Inks

Printed electronics rely on low-cost, large-area fabrication routes to create flexible or multidimensional electronic, optoelectronic, and biomedical devices1-3. In this paper, we focus on one- (1D), two- (2D), and three-dimensional (3D) printing of conductive metallic inks in the form of flexible, stretchable, and spanning microelectrodes.
Direct-write assembly4,5 is a 1-to-3D printing technique that enables the fabrication of features ranging from simple lines to complex structures by the deposition of concentrated inks through fine nozzles (~0.1 - 250 &mu;m). This printing method consists of a computer-controlled 3-axis translation stage, an ink reservoir and nozzle, and 10x telescopic lens for visualization. Unlike inkjet printing, a droplet-based process, direct-write assembly involves the extrusion of ink filaments either in- or out-of-plane. The printed filaments typically conform to the nozzle size. Hence, microscale features (&lt; 1 &mu;m) can be patterned and assembled into larger arrays and multidimensional architectures.
In this paper, we first synthesize a highly concentrated silver nanoparticle ink for planar and 3D printing via direct-write assembly. Next, a standard protocol for printing microelectrodes in multidimensional motifs is demonstrated. Finally, applications of printed microelectrodes for electrically small antennas, solar cells, and light-emitting diodes are highlighted.

Planar and three-dimensional printing of conductive metallic inks is described. Our approach provides new avenues for fabricating printed electronic, optoelectronic, and biomedical devices in unusual layouts at the microscale.

مستو وثلاثي الابعاد من أحبار الطباعة موصل

Printed electronics rely on low-cost, large-area fabrication routes to create flexible or multidimensional electronic, optoelectronic, and biomedical ...

Preparation of Intact Bovine Tail Intervertebral Discs for Organ Culture

The intervertebral disc (IVD) is the joint of the spine connecting vertebra to vertebra. It functions to transmit loading of the spine and give flexibility to the spine. It composes of three compartments: the innermost nucleus pulposus (NP) encompassing by the annulus fibrosus (AF), and two cartilaginous endplates connecting the NP and AF to the vertebral body on both sides. Discogenic pain possibly caused by degenerative intervertebral disc disease (DDD) and disc herniations has been identified as a major problem in our modern society. To study possible mechanisms of IVD degeneration, in vitro organ culture systems with live disc cells are highly appealing. The in vitro culture of intact bovine coccygeal IVDs has advanced to a relevant model system, which allows the study of mechano-biological aspects in a well-controlled physiological and mechanical environment. Bovine tail IVDs can be obtained relatively easy in higher numbers and are very similar to the human lumbar IVDs with respect to cell density, cell population and dimensions. However, previous bovine caudal IVD harvesting techniques retaining cartilaginous endplates and bony endplates failed after 1-2 days of culture since the nutrition pathways were obviously blocked by clotted blood. IVDs are the biggest avascular organs, thus, the nutrients to the cells in the NP are solely dependent on diffusion via the capillary buds from the adjacent vertebral body. Presence of bone debris and clotted blood on the endplate surfaces can hinder nutrient diffusion into the center of the disc and compromise cell viability. Our group established a relatively quick protocol to "crack"-out the IVDs from the tail with a low risk for contamination. We are able to permeabilize the freshly-cut bony endplate surfaces by using a surgical jet lavage system, which removes the blood clots and cutting debris and very efficiently reopens the nutrition diffusion pathway to the center of the IVD. The presence of growth plates on both sides of the vertebral bone has to be avoided and to be removed prior to culture. In this video, we outline the crucial steps during preparation and demonstrate the key to a successful organ culture maintaining high cell viability for 14 days under free swelling culture. The culture time could be extended when appropriate mechanical environment can be maintained by using mechanical loading bioreactor. The technique demonstrated here can be extended to other animal species such as porcine, ovine and leporine caudal and lumbar IVD isolation.

This protocol illustrates a harvesting technique for coccygeal bovine intervertebral discs for organ culture for in vitro organ culture.

إعداد أقراص سليمة الذيل البقري الفقرية للثقافة الجهاز

The intervertebral disc (IVD) is the joint of the spine connecting  vertebra to vertebra. It functions to transmit loading of the spine and give  ...

Three-dimensional Cell Culture Model for Measuring the Effects of Interstitial Fluid Flow on Tumor Cell Invasion

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling in the tumor microenvironment 1. Previously, research on the tumor microenvironment has focused primarily on tumor-stromal interactions 1-2. However, the tumor microenvironment also includes a variety of biophysical forces, whose effects remain poorly understood. These forces are biomechanical consequences of tumor growth that lead to changes in gene expression, cell division, differentiation and invasion3. Matrix density 4, stiffness 5-6, and structure 6-7, interstitial fluid pressure 8, and interstitial fluid flow 8 are all altered during cancer progression.
Interstitial fluid flow in particular is higher in tumors compared to normal tissues 8-10. The estimated interstitial fluid flow velocities were measured and found to be in the range of 0.1-3 &mu;m s-1, depending on tumor size and differentiation 9, 11. This is due to elevated interstitial fluid pressure caused by tumor-induced angiogenesis and increased vascular permeability 12. Interstitial fluid flow has been shown to increase invasion of cancer cells 13-14, vascular fibroblasts and smooth muscle cells 15. This invasion may be due to autologous chemotactic gradients created around cells in 3-D 16 or increased matrix metalloproteinase (MMP) expression 15, chemokine secretion and cell adhesion molecule expression 17. However, the mechanism by which cells sense fluid flow is not well understood. In addition to altering tumor cell behavior, interstitial fluid flow modulates the activity of other cells in the tumor microenvironment. It is associated with (a) driving differentiation of fibroblasts into tumor-promoting myofibroblasts 18, (b) transporting of antigens and other soluble factors to lymph nodes 19, and (c) modulating lymphatic endothelial cell morphogenesis 20.
The technique presented here imposes interstitial fluid flow on cells in vitro and quantifies its effects on invasion (Figure 1). This method has been published in multiple studies to measure the effects of fluid flow on stromal and cancer cell invasion 13-15, 17. By changing the matrix composition, cell type, and cell concentration, this method can be applied to other diseases and physiological systems to study the effects of interstitial flow on cellular processes such as invasion, differentiation, proliferation, and gene expression.

Interstitial fluid flow is elevated in solid tumors and can modulate tumor cell invasion. Here we describe a technique to apply interstitial fluid flow to cells embedded in a matrix and then measure its effects on cell invasion. This technique can be easily adapted to study other systems.

نموذج ثلاثي الأبعاد للخلية ثقافة قياس آثار تدفق السائل الخلالي على غزو الخلايا السرطانية

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic development, wound healing, and immune responses. However, cell migration is also a key mechanism in cancer enabling these cancer cells to detach from the primary tumor to start metastatic spreading. Within the past years various cell migration assays have been developed to analyze the migratory behavior of different cell types. Because the locomotory behavior of cells markedly differs between a two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) environment it can be assumed that the analysis of the migration of cells that are embedded within a 3D environment would yield in more significant cell migration data. The advantage of the described 3D collagen matrix migration assay is that cells are embedded within a physiological 3D network of collagen fibers representing the major component of the extracellular matrix. Due to time-lapse video microscopy real cell migration is measured allowing the determination of several migration parameters as well as their alterations in response to pro-migratory factors or inhibitors. Various cell types could be analyzed using this technique, including lymphocytes/leukocytes, stem cells, and tumor cells. Likewise, also cell clusters or spheroids could be embedded within the collagen matrix concomitant with analysis of the emigration of single cells from the cell cluster/ spheroid into the collagen lattice. We conclude that the 3D collagen matrix migration assay is a versatile method to analyze the migration of cells within a physiological-like 3D environment.

Cell migration is a biological phenomenon that is involved in a plethora of physiological, such as wound healing and immune responses, and pathophysiological processes, like cancer. The 3D-collagen matrix migration assay is a versatile tool to analyze the migratory properties of different cell types within in a 3D physiological-like environment.

تحليل الهجرة خلية داخل الكولاجين مصفوفة ثلاثية الأبعاد

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models reflect the human wound situation better than animal models. Although two-dimensional models are widely used to investigate processes such as cellular migration and proliferation, models that are more complex are required to gain a deeper knowledge about wound healing. Besides a suitable model system, the generation of precise and reproducible wounds is crucial to ensure comparable results between different test runs. In this study, the generation of a three-dimensional full thickness skin equivalent to study wound healing is shown. The dermal part of the models is comprised of human dermal fibroblast embedded in a rat-tail collagen type I hydrogel. Following the inoculation with human epidermal keratinocytes and consequent culture at the air-liquid interface, a multilayered epidermis is formed on top of the models. To study the wound healing process, we additionally developed an automated wounding device, which generates standardized wounds in a sterile atmosphere.

The goal of this protocol is to build up a three-dimensional full thickness skin equivalent, which resembles natural skin. With a specifically constructed automated wounding device, precise and reproducible wounds can be generated under maintenance of sterility.

جيل من سمك ثلاثي الأبعاد الجلد كامل أي ما يعادل واصابة الآلي

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Three-dimensional Biomimetic Technology: Novel Biorubber Creates Defined Micro- and Macro-scale Architectures in Collagen Hydrogels

Tissue scaffolds play a crucial role in the tissue regeneration process. The ideal scaffold must fulfill several requirements such as having proper composition, targeted modulus, and well-defined architectural features. Biomaterials that recapitulate the intrinsic architecture of in vivo tissue are vital for studying diseases as well as to facilitate the regeneration of lost and malformed soft tissue. A novel biofabrication technique was developed which combines state of the art imaging, three-dimensional (3D) printing, and selective enzymatic activity to create a new generation of biomaterials for research and clinical application. The developed material, Bovine Serum Albumin rubber, is reaction injected into a mold that upholds specific geometrical features. This sacrificial material allows the adequate transfer of architectural features to a natural scaffold material. The prototype consists of a 3D collagen scaffold with 4 and 3 mm channels that represent a branched architecture. This paper emphasizes the use of this biofabrication technique for the generation of natural constructs. This protocol utilizes a computer-aided software (CAD) to manufacture a solid mold which will be reaction injected with BSA rubber followed by the enzymatic digestion of the rubber, leaving its architectural features within the scaffold material.

An innovative biofabrication technique was developed to engineer three-dimensional constructs that resemble the architectural features, components, and mechanical properties of in vivo tissue. This technique features a newly developed sacrificial material, BSA rubber, which transfers detailed spatial features, reproducing the in vivo architectures of a wide variety of tissues.

ثلاثي الأبعاد تكنولوجيا المحاكاة البيولوجية: رواية Biorubber يخلق معرف الصغرى، وعلى نطاق والماكرو-البنى في الكولاجين الهلاميات المائية

Tissue scaffolds play a crucial role in the tissue regeneration process. The ideal scaffold must fulfill several requirements such as having proper ...

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Poly(ethylene glycol) Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

The ability to maintain hepatocyte function in vitro, for the purpose of testing xenobiotics&#39; cytotoxicity, studying virus infection and developing drugs targeted at the liver, requires a platform in which cells receive proper biochemical and mechanical cues. Recent liver tissue engineering systems have employed three-dimensional (3D) scaffolds composed of synthetic or natural hydrogels, given their high water retention and their ability to provide the mechanical stimuli needed by the cells. There has been growing interest in the inverted colloidal crystal (ICC) scaffold, a recent development, which allows high spatial organization, homotypic and heterotypic cell interaction, as well as cell-extracellular matrix (ECM) interaction. Herein, we describe a protocol to fabricate the ICC scaffold using poly (ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) and the particle leaching method. Briefly, a lattice is made from microsphere particles, after which a pre-polymer solution is added, properly polymerized, and the particles are then removed, or leached, using an organic solvent (e.g., tetrahydrofuran). The dissolution of the lattice results in a highly porous scaffold with controlled pore sizes and interconnectivities that allow media to reach cells more easily. This unique structure allows high surface area for the cells to adhere to as well as easy communication between pores, and the ability to coat the PEGDA ICC scaffold with proteins also shows a marked effect on cell performance. We analyze the morphology of the scaffold as well as the hepatocarcinoma cell (Huh-7.5) behavior in terms of viability and function to explore the effect of ICC structure and ECM coatings. Overall, this paper provides a detailed protocol of an emerging scaffold that has wide applications in tissue engineering, especially liver tissue engineering.

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Polyethylene glycol Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

This manuscript presents a detailed protocol for the fabrication of an emerging three-dimensional hepatocyte culture platform, the inverted colloidal crystal scaffold, and the concomitant techniques to assess hepatocyte behavior. The size-controllable pores, interconnectivity and ability to conjugate extracellular matrix proteins to the poly(ethylene glycol) (PEG) scaffold enhance Huh-7.5 cell performance.

تصنيع مقلوب الغروية كريستال بولي (جلايكول الإثيلين) سقالة: وثلاثي الأبعاد منصة الثقافة خلية للهندسة الأنسجة الكبد

The ability to maintain hepatocyte function in vitro, for the purpose of testing xenobiotics&#39; cytotoxicity, studying virus infection and developing ...

Layered Alginate Constructs: A Platform for Co-culture of Heterogeneous Cell Populations

Many load bearing tissues possess structurally and functionally distinct regions, typically accompanied by different cell phenotypes with differential mechanosensing characteristics. Engineering and analysis of these tissue types remain a challenge. Layered hydrogel constructs provide an opportunity for investigating the interactions among multiple cell populations within single constructs. Alginate hydrogels are both biocompatible and allow for easy isolation of cells after experimentation. Here, we describe a method for the development of small sized dual layered alginate hydrogel discs. This process maintains high cell viability of human mesenchymal stem cells during the formation process and these layered discs can withstand unconfined cyclic compression, commonly used for stimulation of hMSCs undergoing chondrogenesis. These layered constructs can potentially be scaled up to include additional levels, and also be used to segregate cell populations initially after layering. This dual layer alginate hydrogel culture platform can be used for many different applications including engineering and analysis of cells of load bearing tissues and co-cultures of other cell types.

Engineering and analysis of load bearing tissues with heterogeneous cell populations are still a challenge. Here, we describe a method for creating bi-layered alginate hydrogel discs as a platform for co-culture of diverse cell populations within one construct.

الطبقات الجيني التركيبات: منصة لالمشارك ثقافة بالسكان خلية غير المتجانسة

Many load bearing tissues possess structurally and functionally distinct regions, typically accompanied by different cell phenotypes with differential ...

Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In particular, light-mediated click reactions, such as photoinitiated thiol&#8722;ene and thiol&#8722;yne reactions, afford spatiotemporal control over material properties and allow the design of systems with a high degree of user-directed property control. Fabrication and modification of hydrogel-based biomaterials using the precision afforded by light and the versatility offered by these thiol&#8722;X photoclick chemistries are of growing interest, particularly for the culture of cells within well-defined, biomimetic microenvironments. Here, we describe methods for the photoencapsulation of cells and subsequent photopatterning of biochemical cues within hydrogel matrices using versatile and modular building blocks polymerized by a thiol&#8722;ene photoclick reaction. Specifically, an approach is presented for constructing hydrogels from allyloxycarbonyl (Alloc)-functionalized peptide crosslinks and pendant peptide moieties and thiol-functionalized poly(ethylene glycol) (PEG) that rapidly polymerize in the presence of lithium acylphosphinate photoinitiator and cytocompatible doses of long wavelength ultraviolet (UV) light. Facile techniques to visualize photopatterning and quantify the concentration of peptides added are described. Additionally, methods are established for encapsulating cells, specifically human mesenchymal stem cells, and determining their viability and activity. While the formation and initial patterning of thiol-alloc hydrogels are shown here, these techniques broadly may be applied to a number of other light and radical-initiated material systems (e.g., thiol-norbornene, thiol-acrylate) to generate patterned substrates.

We describe a sequential process for light-mediated formation and subsequent biochemical patterning of synthetic hydrogel matrices for three-dimensional cell culture applications. The construction and modification of hydrogels with cytocompatible photoclick chemistry is demonstrated. Additionally, facile techniques to quantify and observe patterns and determine cell viability within these hydrogels are presented.

تشكيل الضوء بوساطة والزخرفة من الهلاميات المائية للتطبيقات خلية ثقافة

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung tissue from porcine, rat, or mouse, the tissue is perfused and submerged in subsequent chemical detergents to remove the cellular debris. Histological comparison of the tissue before and after processing confirms removal of over 95% of double stranded DNA and alpha galactosidase staining suggests the majority of cellular debris is removed. After decellularization, the tissue is lyophilized and then cryomilled into a powder. The matrix powder is digested for 48 hr in an acidic pepsin digestion solution and then neutralized to form the pregel solution. Gelation of the pregel solution can be induced by incubation at 37 &#176;C and can be used immediately following neutralization or stored at 4 &#176;C for up to two weeks. Coatings can be formed using the pregel solution on a non-treated plate for cell attachment. Cells can be suspended in the pregel prior to self-assembly to achieve a 3D culture, plated on the surface of a formed gel from which the cells can migrate through the scaffold, or plated on the coatings. Alterations to the strategy presented can impact gelation temperature, strength, or protein fragment sizes. Beyond hydrogel formation, the hydrogel stiffness may be increased using genipin.

This is a method to create a 3-dimensional cell culture scaffold from pulmonary extracellular matrix. Intact lung is processed into hydrogels that can support the growth of cells in three-dimensions.

الانضباطي الهلاميات المائية من الرئوي خارج الخلية مصفوفة للثقافة خلية 3D

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...