وأيد هذه الدراسة من قبل وزارة الخارجية الامريكية لشؤون المحاربين القدامى (واشنطن دي سي)، ومنح 0852048، 0731201، 0854430 و من المؤسسة الوطنية للعلوم (أرلينغتون، فيرجينيا)، ومنح RO1 DK080897 من المعاهد الوطنية للصحة (بيثيسدا، MD) . تلقى السيد خانا الدعم من التبرع السخي من السيد إدوارد روس والدكتور مويا مونيكا من مؤسسة بيل وميليندا غيتس (سياتل، واشنطن).

بروتوكول هنا وصفا لإجراء ثلاث خطوات لتوليد microbeads الجينات متعددة الطبقات (الشكل 1). أولا، يتم تشكيلها microbeads الجينات (الشكل 2A). يتم وصف هذا الإجراء في القسم 1 أدناه. يمكن إضافة خلايا أو البروتينات إلى microbeads في هذه الخطوة من أجل بمثابة نظام التسليم. الخطوة التالية ينطوي على تشكيل طبقة permselective على microbeads، ويوصف في القسم 2. الخطوة النهائية ينطوي على تشكيل طبقة إضافية والجينات الموصوفة في القسم 3. ويمكن استخدام هذه الأشكال طبقة على السطح الخارجي للسطح من الخرز (الشكل 2B) لتغليف وتقديم الجزيئات العلاجية (الشكل 2C) لتوجيه استجابة الخليوي الى زرع النظام التالية. 1. الجينات Microbead التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد الجينات LVM 1.5٪ (W / V) حل عن طريق إذابة 15 جرام من الجينات LVM في 1 مل منالداخلية حل الجينات طبقة (25 العازلة HEPES مم، 118 مم كلوريد الصوديوم، 5.6 ملي بوكل، و2.5 ملم MgCl 2 في مياه DI، بعد تعديلها لدرجة الحموضة 7.4). خلط على Vortexer حتى قوة الجينات قد حلت تماما لتشكيل واضح، حل لزجة. ملاحظة: هذا البروتوكول يصف الظروف المثلى لتغليف جزيرة داخل كبسولات الجينات ويمكن تغيير (1) تركيز وتكوين المجهرية الجينات لضبط خصائص لتطبيقات أخرى (مثل تسليم المخدرات وهندسة الأنسجة، وغيرها). ملاحظة: لتغليف جزيرة الجزر ويمكن أن يضاف إلى الحل الجينات في هذه الخطوة قبل التحميل في microencapsulator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد حل يشابك (22 ملم CaCl 2 في المياه دي) عن طريق إذابة 100 ملي مول CaCl 2 و 10 ملم في HEPES العازلة للمياه DI وضبط درجة الحموضة إلى 7.4. ملاحظة: الكاتيونات ثنائية التكافؤ الأخرى مثل برازيلي 2 يمكن +، الأب، الخ + 2 يمكن استخدامها بدلا من الكالسيوم 2 +، وهذا يتوقف على طبيعة الجينات دبق دesired. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد سترة جويتين قناة microencapsulator الجينات من خلال إضافة إبرة عيار 25 إلى حقنة، وضبط صمامات على كل جانب للتأكد من أن الإبرة في وسط الغلاف الجوي. ويمكن استخدام الإبر قياس مختلفة لهذه الخطوة، وهذا يتوقف على حجم microbeads الجينات المستهدفة. ويمكن أيضا أن هذه الخطوة أن يؤديها مع حقنة يجب، وهو microencapsulator لا تكون متوفرة. إضافة إلى حل الجينات الحقنة، وحدد مقياس إبرة استنادا إلى حجم microbeads المطلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قارورة تحتوي على 10 مل من محلول يشابك مباشرة تحت إبرة. وضع بقضيب في الحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطرات حقن مباشرة في حل 2 CaCl من أجل تشعبي في الجينات لتشكيل microbeads. احتضان حبات في حل يشابك لعلاج ما لا يقل عن خمس عشرة دقيقة، مع التحريك المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حبات لأنبوب الطرد المركزي 15 مليلتر. إزالة حل المتبقية،وتؤدي ثلاث غسلات مع 2 CaCl 0.2٪ في محلول ملحي لمدة دقيقتين لكل منهما. </li></ol> 2. طلاء Microbeads مع بولي-L-الأورنيثين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 3 مل من محلول 0.1٪ (W / V)، وبولي-L-الأورنيثين (منظمة التحرير الفلسطينية) في ملحي عادي. وضع حل في دوامة حتى يذوب تماما، وتشكل حلا واضحا. ويمكن استخدام بولي-L-يسين (PLL) بدلا من منظمة التحرير الفلسطينية لهذه الخطوة، مما يؤدي الى مستويات مماثلة من permselectivity. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل microbeads الجينات في حل منظمة التحرير الفلسطينية. مكان في دوامة لمدة 30 دقيقة للسماح لمنظمة التحرير الفلسطينية ما يكفي من الوقت للتفاعل مع الجينات، وتشكيل مجمع polycation-polyanion. في نهاية 30 دقيقة، ويجب أن يكون هناك طلاء مرئية بوضوح الأبيض حول microbeads الجينات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة حل منظمة التحرير الفلسطينية، وأداء ثلاث غسلات مع 2 CaCl 0.2٪ في ملحي لمدة دقيقتين لكل منهما. </li></ol> 3. خلق الجيني الخارجي لايإيه <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل الجينات من التركيز المطلوب الذي سيتم استخدامه لإنشاء طبقة الخارجي. يتم تحضير محلول كما هو موضح في (1.1) أعلاه. ويتأثر حجم الطبقة الخارجية من قبل تكوين وتركيز من الجينات المستخدمة (الشكل 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الجينات إلى microbeads مصفاة الخلية. استخدام Kimwipe لامتصاص فائض حل من أجل تجفيف microbeads قدر الإمكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل microbeads على سطح Parafilm. يمكن أن تكون بديلا الأسطح الملساء الأخرى مثل الزجاج أو حتى طبق بيتري من البلاستيك لParafilm، اذا شئت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الجينات حل أعدت في (3.1) على microbeads الجينات. حجم حل الجينات ينبغي أن تغطي تماما microbeads الجينات. السماح للmicrobeads تبقى في حل الجينات لمدة 45 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدم ماصة لإزالة حل الجينات الزائدة ليست ملزمة للmicrobeads. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل microbeads فيفي التوصل إلى حل من CaCl 22mm و 2. هذا crosslinks الحل الجينات في جميع أنحاء microbeads، مما أدى إلى تشكيل طبقة متميزة الجينات الخارجي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء ثلاث غسلات مع 22 ملم CaCl 2 في ملحي لمدة دقيقتين لكل منهما. وينبغي عرض microbeads تحت المجهر تسمح لطبقة متميزة الجينات الخارجي أن ينظر إليها تشكلت حول microbead الأساسية. </li></ol> 4. ممثل النتائج <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. والتخطيطي لإجراء لخلق microbeads الجينات متعدد الطبقات. تتكرر بإذن من خانا وآخرون. J بيوميد ماطر الدقة A. نوفمبر، 95 (2)، 632-40 (2010). <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2: (أ) و (ب) عبارة عن صور المقابل مرحلة من microbeads الجينات. (أ) يظهر microbeadبعد الخطوة توليف (1.7)، بينما (B) يعرض طبقة متميزة الجينات الخارجي الحالي بعد الانتهاء من الخطوة (3.7). (ج) هو صورة FITC من بروتين BSA fluorescently المسمى مغلفة في الطبقة الخارجية. تتكرر بإذن من خانا وآخرون. J بيوميد ماطر الدقة A. نوفمبر، 95 (2)، 632-40 (2010). <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig3.jpg" alt="الشكل (3)" /> شخصية يمكن أن 3. أن تختلف حجم طبقة الجينات الخارجي على أساس تكوين وتركيز من الجينات المستخدمة. نتائجنا تظهر أنه، على حد سواء LVM والجينات LVG، وحجم الطبقة الخارجية الزيادات مع تركيز متزايد الجينات، والجينات التي تؤدي LVG الطبقات سمكا الخارجي من الجينات LVM بتركيزات على قدم المساواة. تتكرر بإذن من خانا وآخرون. J بيوميد ماطر الدقة A. نوفمبر، 95 (2)، 632-40 (2010). <img src="/files/ftp_upload/3388/3388fig4.jpg" alt="الشكل 4"/&gt; الشكل 4. الإصدار من جمعية جيل المستقبل-1، عامل نمو عائية بروتين، من طبقة الجينات الخارجي تختلف استنادا إلى تركيز LVM وLVG الجينات المستخدمة. (أ) و (ب) الإفراج في المئة المعرض، و (ج) و (D) للدلالة على الإفراج الجماعي المقابلة من جمعية جيل المستقبل-1 مقابل الوقت لمختلف الصيغ الطبقة الخارجية هناك إصدار انفجار عرضت لجميع الأوضاع داخل H 5 الأولي (A و C)، وجرعة منخفضة من إطلاق متواصل لمدة تصل إلى 30 يوما (B و D). تتكرر بإذن من خانا وآخرون. J بيوميد ماطر الدقة A. نوفمبر؛ 95 (2)، 632-40 (2010) <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3388/3388fig4large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> .

<ol>
	<li>Darrabie, M. D., Kendall, W. F., Opara, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+Poly-L-+Ornithine-coated+alginate+microcapsules.">Characteristics of Poly-L- Ornithine-coated alginate microcapsules.</a> Biomaterials. 26, 6846-6852 (2005).</li><li>Yamagiwa, K., Kozawa, T., Ohkawa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alginate+composition+and+gelling+conditions+on+diffusional+and+mechanical+properties+of+calcium-alginate+gel+beads.">Effects of alginate composition and gelling conditions on diffusional and mechanical properties of calcium-alginate gel beads.</a> J. Chem. Eng. Jpn. 28, 462-467 (1995).</li><li>Amsden, B., Turner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion+characteristics+of+calcium+alginate+gels.">Diffusion characteristics of calcium alginate gels.</a> Biotechnol. Bioeng. 65, 605-610 (1999).</li><li>Uriel, S., Brey, E. M., Greisler, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+low+levels+of+fibroblast+growth+factor-1+promote+persistent+microvascular+network+formation.">Sustained low levels of fibroblast growth factor-1 promote persistent microvascular network formation.</a> Am. J. Surg. 192, 604-609 (2006).</li><li>Moya, M. L., Lucas, S., Francis-Sedlak, M., Liu, X., Garfinkel, M. R., Huang, J. J., Cheng, M. H., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+delivery+of+FGF-1+increases+vascular+density+in+comparison+to+bolus+administration.">Sustained delivery of FGF-1 increases vascular density in comparison to bolus administration.</a> Microvasc. Res. 78, 142-147 (2009).</li><li>Moya, M. L., Cheng, M. H., Huang, J. J., Francis-Sedlak, M. E., Kao, S. W., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+FGF-1+loaded+alginate+microbeads+on+neovascularization+and+adipogenesis+in+a+vascular+pedicle+model+of+adipose+tissue+engineering.">The effect of FGF-1 loaded alginate microbeads on neovascularization and adipogenesis in a vascular pedicle model of adipose tissue engineering.</a> Biomaterials. 31, 2816-2826 (2010).</li><li>Khanna, O., Moya, M. L., Greisler, H. P., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayered+Microcapsules+for+the+Sustained-Release+of+Angiogenic+Proteins+From+Encapsulated+Cells.">Multilayered Microcapsules for the Sustained-Release of Angiogenic Proteins From Encapsulated Cells.</a> Am. J. Surg. 200, 655-658 (2010).</li><li>Khanna, O., Moya, M. L., Opara, E. C., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+multilayered+alginate+microcapsules+for+the+sustained-release+of+fibroblast+growth+factor-1.">Synthesis of multilayered alginate microcapsules for the sustained-release of fibroblast growth factor-1.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 95, 632-640 (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الجينات هي الطبيعية، والسكاريد الحمضية المستخرج من الطحالب، وتتكون من وحدات من 1،4 &#39;-β-D-mannuronic حامض (M) و α-L-guluronic حامض (G) 2،3. دبق بسيط يحدث عندما الكاتيونات ثنائي التكافؤ، مثل الكالسيوم 2 +، 2 + الأب، أو با 2 + التفاعل مع G-مونومرات تشكيل الجسور الأيونية ب?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> Pronova الجينات النقاوة LVG </td><td> نوفا-مصفوفة </td><td> 4200006 </td><td> مجموعة متنوعة من المستحضرات الجينات المتاحة. اختيار الجينات يؤثر على خصائص نهاية microbeads، بما في ذلك حجم، الخواص الميكانيكية، والنقل. وينبغي أن يكون الأمثل لتكوين تستخدم لتطبيق معين. </td></tr><tr><td> Pronova الجينات النقاوة LVM </td><td> نوفا-مصفوفة </td><td> 4200206 </td><td> مجموعة متنوعة من المستحضرات الجينات المتاحة. اختيار الجينات يؤثر على خصائص نهاية microbeads، بما في ذلك حجم، الخواص الميكانيكية، والنقل. وينبغي أن يكون الأمثل لتكوين تستخدم لتطبيق معين. </td></tr><tr><td> بولي-L-الأورنيثين هيدروكلوريد </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P2533 </td><td></td></tr></tbody></table>

generation of alginate microspheres for biomedical applications

وقد تلقى الجينات القائم على المواد اهتماما كبيرا للتطبيقات الطبية الحيوية نظرا لطبيعتها المائية، توافق مع الحياة، والهندسة المعمارية المادية. وتشمل التطبيقات التغليف الخلية، تسليم المخدرات، زراعة الخلايا الجذعية، والسقالات هندسة الأنسجة. في الواقع، ويجري حاليا تجارب سريرية التي يجري تنفيذها في الجزر التي يتم تغليف في منظمة التحرير الفلسطينية microbeads الجينات المغلفة كعلاج لمرض السكري النوع الأول. ومع ذلك، يتعين على أعداد كبيرة من الجزر لفعالية بسبب سوء بقاء زرع التالية. قد القدرة على تحفيز الاوعية الدموية الدقيقة محليا تشكيل شبكة حول الخلايا مغلفة زيادة قدرتها على الاستمرار من خلال تحسين نقل الأوكسجين والجلوكوز والمواد المغذية الحيوية الأخرى. عامل نمو الخلايا الليفية-1 (جمعية جيل المستقبل-1) هو عامل نمو طبيعيا أن يكون قادرا على تحفيز الدم تشكيل السفينة وتحسين مستويات الأوكسجين في الأنسجة الدماغية. ومما يعزز من فعالية FGF-1 عندما يتم تسليمها في sustained أزياء بدلا من إدارة واسعة بلعة واحدة. ويمكن المحلية على المدى الطويل الإفراج عن عوامل النمو من أنظمة التغليف جزيرة تحفيز نمو الأوعية الدموية مباشرة نحو الخلايا المزروعة، وتحسين نتائج محتملة الكسب غير المشروع وظيفي. في هذه المقالة، نحن يحدد الإجراءات اللازمة لإعداد المجهرية الجينات لاستخدامها في التطبيقات الطبية الحيوية. وبالإضافة إلى ذلك، ونحن تصف طريقة التي قمنا بتطويرها لتوليد microbeads الجينات متعدد الطبقات. ويمكن تغليف الخلايا في الجينات الأساسية الداخلية، والبروتينات عائية في طبقة الجينات الخارجي. والافراج عن البروتينات من هذه الطبقة الخارجية حفز تشكيل شبكات الاوعية الدموية الدقيقة المحلية مباشرة نحو الجزر المزروع.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications at JoVE.com

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

في المقاطع التالية، ونحن الخطوط العريضة إجراءات لإعداد المجهرية الجينات لاستخدامها في التطبيقات الطبية الحيوية. نحن على وجه التحديد توضيح أسلوب متعدد الطبقات لخلق المجهرية الجينات لغرض مزدوج من خلية والتغليف البروتين كعلاج محتمل لمرض السكري من النوع 1.

جيل من المجهرية الجيني للتطبيقات الطبية الحيوية

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and ...

generation-of-alginate-microspheres-for-biomedical-applications

Research

JoVE Journal

Medicine

20.5K Views.  Illinois Institute of Technology. في المقاطع التالية، ونحن الخطوط العريضة إجراءات لإعداد المجهرية الجينات لاستخدامها في التطبيقات الطبية الحيوية. نحن على وجه التحديد توضيح أسلوب متعدد الطبقات لخلق المجهرية الجينات لغرض مزدوج من خلية والتغليف البروتين كعلاج محتمل لمرض السكري من النوع 1.

Video: Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

جيل من قاعدة بيانات شاملة للأورام الصدر -- أداة للبحوث بالحركة

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the presence of circulating tumor cells (CTCs). These rare cells have been demonstrated to be of clinical significance in metastatic breast, prostate, and colorectal cancers. The current gold standard in clinical CTC detection and enumeration is the FDA-cleared CellSearch system (CSS). This manuscript outlines the standard protocol utilized by this platform as well as two&#160;additional adapted protocols that describe the detailed process of user-defined marker optimization for protein characterization of patient CTCs and a comparable protocol for CTC capture in very low volumes of blood, using standard CSS reagents, for studying in vivo preclinical mouse models of metastasis. In addition, differences in CTC quality between healthy donor blood spiked with cells from tissue culture versus patient blood samples are highlighted. Finally, several commonly discrepant items that can lead to CTC misclassification errors are outlined. Taken together, these protocols will provide a useful resource for users of this platform interested in preclinical and clinical research pertaining to metastasis and CTCs.

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Circulating tumor cells (CTCs) are prognostic in several metastatic cancers. This manuscript describes the gold standard CellSearch system (CSS) CTC enumeration platform and highlights common misclassification errors. In addition, two&#160;adapted protocols are described for user-defined marker characterization of CTCs and CTC enumeration in preclinical mouse models of metastasis using this technology.

التكيف من Semiautomated اعارة ورم الخلية (CTC) فحوصات للتطبيقات السريرية وقبل السريرية البحوث

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a potential source of cells for regenerative medicine. The reason for this interest is evidence that these cells have highly multipotent differentiation ability, low immunogenicity, and anti-inflammatory functions. These properties have prompted researchers to investigate the potential of hAECs to be used to treat a variety of diseases and disorders in pre-clinical animal studies with much success.
hAECs have found widespread application for the treatment of a range of diseases and disorders. Potential clinical applications of hAECs include the treatment of stroke, multiple sclerosis, liver disease, diabetes and chronic and acute lung diseases. Progressing from pre-clinical animal studies into clinical trials requires a higher standard of quality control and safety for cell therapy products. For safety and quality control considerations, it is preferred that cell isolation protocols use animal product-free reagents. 
We have developed protocols to allow researchers to isolate, cryopreserve and culture hAECs using animal product-free reagents. The advantage of this method is that these cells can be isolated, characterized, cryopreserved and cultured without the risk of delivering potentially harmful animal pathogens to humans, while maintaining suitable cell yields, viabilities and growth potential. For researchers moving from pre-clinical animal studies to clinical trials, these methodologies will greatly accelerate regulatory approval, decrease risks and improve the quality of their therapeutic cell population.

We describe a protocol to isolate and culture human amnion epithelial cells (hAECs) using animal product-free reagents in accordance with current good manufacturing practices (cGMP) guidelines.

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present here a protocol for elevating intraocular pressure (IOP) in the rat, by injecting magnetic microspheres into the anterior chamber of the eye. The use of magnetic particles allows the user to manipulate the beads into the iridocorneal angle, thus providing a very effective blockade of fluid outflow from the trabecular meshwork. This leads to long-lasting IOP rises, and eventually neuronal death in the ganglion cell layer (GCL) as well as optic nerve pathology, as seen in patients with the disease. This method is simple to perform, as it does not require machinery, specialist surgical skills, or many hours of practice to perfect. Furthermore, the pressure elevations are very robust, and reinjection of the magnetic microspheres is not usually required unlike in some other models using plastic beads. Additionally, we believe this method is suitable for adaptation for the mouse eye.

We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

التجريبية الزرق المستحث بواسطة حقن العيني من المجهرية المغناطيسي

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from brown sea algae. Briefly, the tumor tissue is cut into small pieces and submitted to an enzymatic digestion with collagenase and trypsin. Next, a cell suspension is obtained. The tumor cell suspension is mixed with 1.2% sodium alginate and dropped into a CaCl2 solution, and the alginate/cell suspension is gelled on contact with the CaCl2 to form spherical beads. The cells embedded in the alginate beads are supplied with nutrients provided by the culture media enriched with 20% FBS. Three-dimensional culture in alginate beads maintains the viability of adenoma cells for long periods of time, up to four months. Moreover, the cells can be liberated from the alginate by washing the beads with sodium citrate and seeded on glass coverslips for further immunocytochemical analyses. The use of a cell culture model allows for the fixation and visualization of the actin cytoskeleton with minimal disorganization. In summary, alginate beads provide a reliable culture system for the maintenance of pituitary adenoma cells.

Three-dimensional culture in alginate beads, due to its simplicity and reproducibility, was chosen to maintain the pituitary adenoma cells. The procedures included an initial enzymatic digestion and mechanical dissociation of the tumor tissue, and the subsequent cell suspension was encapsulated in alginate beads.

ثلاثي الأبعاد الثقافة الجيني حبة من خلايا الإنسان ورم الغدة النخامية

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are time consuming, expensive, and labor intensive. To overcome these obstacles, many research groups have turned to spheroid cultures of cancer cells. While useful, tumor spheroids or aggregates do not replicate cell-matrix interactions as found in vivo. As such, three-dimensional (3D) culture approaches utilizing an extracellular matrix scaffold provide a more realistic model system for investigation. Starting from subcutaneous or intracranial xenografts, tumor tissue is dissociated into a single cell suspension akin to cancer stem cell neurospheres. These cells are then embedded into a human-derived extracellular matrix, 3D human biogel, to generate a large number of microtumors. Interestingly, microtumors can be cultured for about a month with high viability and can be used for drug response testing using standard cytotoxicity assays such as 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and live cell imaging using Calcein-AM. Moreover, they can be analyzed via immunohistochemistry or harvested for molecular profiling, such as array-based high-throughput kinomic profiling, which is detailed here as well. 3D microtumors, thus, represent a versatile high-throughput model system that can more closely replicate in vivo tumor biology than traditional approaches.

Patient-derived xenografts of glioblastoma multiforme can be miniaturized into living microtumors using 3D human biogel culture system. This in vivo-like 3D tumor assay is suitable for drug response testing and molecular profiling, including kinomic analysis.

جيل من Microtumors عن طريق نظام الثقافة 3D Biogel الإنسان وخلايا ورم أرومي دبقي المستمدة من المريض لKinomic التنميط والدواء استجابة اختبار

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Generation of Organ-conditioned Media and Applications for Studying Organ-specific Influences on Breast Cancer Metastatic Behavior

Breast cancer preferentially metastasizes to the lymph node, bone, lung, brain and liver in breast cancer patients. Previous research efforts have focused on identifying factors inherent to breast cancer cells that are responsible for this observed metastatic pattern (termed organ tropism), however much less is known about factors present within specific organs that contribute to this process. This is in part because of a lack of in vitro model systems that accurately recapitulate the organ microenvironment. To address this, an ex vivo model system has been established that allows for the study of soluble factors present within different organ microenvironments. This model consists of generating conditioned media from organs (lymph node, bone, lung, and brain) isolated from normal athymic nude mice. The model system has been validated by demonstrating that different breast cancer cell lines display cell-line specific and organ-specific malignant behavior in response to organ-conditioned media that corresponds to their in vivo metastatic potential. This model system can be used to identify and evaluate specific organ-derived soluble factors that may play a role in the metastatic behavior of breast and other types of cancer cells, including influences on growth, migration, stem-like behavior, and gene expression, as well as the identification of potential new therapeutic targets for cancer. This is the first ex vivo model system that can be used to study organ-specific metastatic behavior in detail and evaluate the role of specific organ-derived soluble factors in driving the process of cancer metastasis.

This manuscript describes an ex vivo model system comprised of organ-conditioned media derived from the lymph node, bone, lung, and brain of mice. This model system can be used to identify and study organ-derived soluble factors and their effects on the organ tropism and metastatic behavior of cancer cells.

جيل من وسائل الإعلام وتطبيقات مكيفة الجهاز لدراسة التأثيرات-الجهاز بشكل خاص على سرطان الثدي النقيلي السلوك

Breast cancer preferentially metastasizes to the lymph node, bone, lung, brain and liver in breast cancer patients. Previous research efforts have focused ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The goal of computational methods for drug repurposing is to enable solutions for safer, cheaper and faster drug discovery. Towards this end, we developed a novel method that integrates genetic and clinical phenotype data from large-scale GWAS and PheWAS studies with detailed drug information on the concept of transitive Drug-Gene-Disease triads. We created "RE:fine Drugs," a freely available, interactive dashboard that automates gene, disease and drug-based searches to identify drug repurposing candidates. This web-based tool supports a user-friendly interface that includes an array of advanced search and export options. Results can be prioritized in a variety of ways, including but not limited to, biomedical literature support, strength and statistical significance of GWAS and/or PheWAS associations, disease indications and molecular drug targets. Here we provide a protocol that illustrates the functionalities available in the "RE:fine Drugs" system and explores the different advanced options through a case study.

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the &quot;RE:fine Drugs&quot; System

Here we describe a protocol using the web-based drug repurposing hypothesis generation tool: "RE:fine Drugs." This protocol can be modified to a user's preferences at the level of the query type (gene, drug or disease) and/or the range of available advanced options.

المخدرات تطويعها لأغراض أخرى فرضية الجيل باستخدام &quot;RE: المخدرات بخير&quot; النظام

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

استراتيجيات أخذ العينات وتجهيزها لعينات الأنسجة المصرف البيولوجي من النماذج الطبية الخنزير

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

A Metadata Extraction Approach for Clinical Case Reports to Enable Advanced Understanding of Biomedical Concepts

Clinical case reports (CCRs) are a valuable means of sharing observations and insights in medicine. The form of these documents varies, and their content includes descriptions of numerous, novel disease presentations and treatments. Thus far, the text data within CCRs is largely unstructured, requiring significant human and computational effort to render these data useful for in-depth analysis. In this protocol, we describe methods for identifying metadata corresponding to specific biomedical concepts frequently observed within CCRs. We provide a metadata template as a guide for document annotation, recognizing that imposing structure on CCRs may be pursued by combinations of manual and automated effort. The approach presented here is appropriate for organization of concept-related text from a large literature corpus (e.g., thousands of CCRs) but may be easily adapted to facilitate more focused tasks or small sets of reports. The resulting structured text data includes sufficient semantic context to support a variety of subsequent text analysis workflows: meta-analyses to determine how to maximize CCR detail, epidemiological studies of rare diseases, and the development of models of medical language may all be made more realizable and manageable through the use of structured text data.

We present a protocol and associated metadata template for the extraction of text describing biomedical concepts in clinical case reports. The structured text values produced through this protocol can support deep analysis of thousands of clinical narratives.

نهج استخراج بيانات تعريف لتقارير الحالات السريرية لتمكين المتقدم فهم المفاهيم الطبية الحيوية

Clinical case reports (CCRs) are a valuable means of sharing observations and insights in medicine. The form of these documents varies, and their content ...