وأيد هذا العمل من قبل تحالف فريدريك البحث رنح ومنحة رائدة من أرنولد العائلة المؤسسة ومركز الخلايا الجذعية وعلم الأحياء التنموي في مركز اندرسون للسرطان.

1. إنتاج فيروس وتنبيغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة فينيكس الخلايا التقابل في كثافة ~ 7-8X10 6 في لوحة 10 سم في 10 مل من المتوسط ​​DMEM (DMEM الجلوكوز المرتفعة، و 10٪ FBS حرارة المعطل، 2 مم L-الجلوتامين، أي المضادات الحيوية). مكان في الحاضنة والثقافة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي transfect الخلايا فينيكس باستخدام 12 ميكروغرام من ترميز متجه إما Oct3 / 4، Sox2، Klf4، ج myc، أو GFP الجين (Addgene البلازميدات 17217، 17218، 17219، 17220) و 35 Fugene ميكرولتر 6. إعداد مزيج ترنسفكأيشن في 500 ميكروليتر من وسط DMEM (DMEM الجلوكوز المرتفعة، 2 مم L-الجلوتامين، لا FBS والمضادات الحيوية). احتضان 20 دقيقة. ماصة بلطف المجمعات الحمض النووي في لوحات 10 سم تحتوي على 70-80٪ متكدسة الخلايا فينيكس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحل محل وسائل الاعلام 6-8 ساعة بعد ترنسفكأيشن مع متوسط ​​DMEM (DMEM الجلوكوز المرتفعة، و 10٪ FBS حرارة المعطل، 2 مم L-الجلوتامين) التي تحتوي على البنسلين والستربتومايسين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في وقت لاحق، وجمع من الفيروسات التي تحتوي على وسائل الاعلام 4 مرات في 12 ساعةفترات، والجمع بين جميع أجزاء وتصفيتها باستخدام ميكرومتر 0.45 فلتر لإزالة خلايا منفصلة والحطام (يمكن أن تظل وسائل الإعلام التي تحتوي على جزيئات فيروسية في الثلاجة لمدة 2 اسابيع دون ان تفقد نشاط المعدية، ولكن لا ينصح التجميد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للفيروسات الليفية تنبيغ لوحة، وبالغ الإنسان (مرور 10، Coriell مختبرات) من 24 ساعة المجمدة الأوراق المالية قبل اليوم الأخير من جمع وسائل الاعلام فيروسات. بذور الخلايا على 6 لوحات مغطاة بشكل جيد الجيلاتين في الخلايا كثافة 5 1x10 لكل بئر في جلوكوز DMEM عالية، و 10٪ FBS، 2 مم L-الجلوتامين، البنسلين، الستربتومايسين وغير الأساسية والأحماض الأمينية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البديل اليوم التالي DMEM وسائل الاعلام مع وسائل الإعلام التي تحتوي على الجسيمات الفيروسية التي تم الحصول عليها من خلايا فينيكس. إضافة وسائل الاعلام الفيروسية (1 مل من كل Oct4، Sox2، Klf4، و C-myc وسائل الاعلام، 4 مل الكل) تستكمل مع 6 ميكروغرام / مل من polybrene إلى كل بئر من لوحة 6 جيدا لثقافات الليفية وأجهزة الطرد المركزي في ل1600g 1H عند 20 درجة مئوية. ما يقرب من 12 ساعة بالعربيةثالثا في تنبيغ، تحل محل وسائل الاعلام الفيروسية مع الثقافة المتوسطة الليفية. أداء عدوى فيروسية والطرد المركزي 3 مرات في فترات 24 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الليفية ثقافة في وسائل الاعلام DMEM لمدة 48 ساعة بعد الإصابة الأخيرة. تحقق كفاءة العدوى عن طريق transductions بالتوازي مع وسائل الاعلام معربا عن فيروسات GFP. ويوضح الشكل 1 كفاءة الطرد المركزي التي تيسرها عدوى فيروس من الخلايا الليفية الإنسان. </li></ol> 2. إعادة برمجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعامل إعداد 6 لوحات بشكل جيد مع γ-المشع طبقات التغذية MEF بواسطة بذر خلايا MEF في مناطق ذات كثافة الخلايا 2x10 5 ~ لكل بئر من الجيلاتين 6 لوحة جيدا في المتوسط ​​نمو الخلايا الليفية. انقسام في اليوم التالي الليفية الإنسان بالعدوى باستخدام 0.05٪ التربسين / EDTA والبذور لهم في كثافة 1.2x10 ~ 4 في بئر في المتوسط ​​نمو الخلايا الليفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي يحل محل وسائل الاعلام مع وسائل الاعلام HES (DMEM/F12، المصل خروج المغلوب 20٪ بدل فاقد، غير الاساسيين من الأحماض الأمينية، العسائلن / الستربتومايسين، 2 مم L-الجلوتامين و 0.1 ملي β-المركابتويثانول، 20 نانوغرام / مل عامل نمو الخلايا الليفية القاعدية (bFGF)، على أن تستكمل مع 0.5 مم الزبدات الصوديوم لل7 ايام الأولي للبرمجة. تغيير وسائل الإعلام يوميا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد تغيرات شكلية في الخلايا transduced يوميا. والمستعمرات من الوركين تشبه الخلايا تبدأ في الظهور حوالي 5 - 10 أيام بعد نقل الخلايا الليفية transduced على الخلايا المغذية. المستعمرات hiPSC على استعداد لتكون معزولة حوالي 14 - 28 يوما بعد تصفيح لهم على الخلايا المغذية MEF. </li></ol> 3. العزلة من المستعمرات hiPSC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقبل يوم من اختيار المستعمرات hiPSC إعداد 24 جيد مع لوحات γ-المشع الخلايا المغذية MEF (~ 4x10 4 خلايا لكل بئر) في متوسط ​​نمو الخلايا الليفية. ويمكن في هذه المرحلة أيضا المستعمرات hiPSC يتم تحويلها الى ثقافة التغذية الحرة باستخدام Matrigel والمتوسطة mTeSR1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل عزل المستعمرات hiPSC إعداد لوحات MEF عن طريق إزالة الخلايا الليفية ميديو نموم والشطف MEFs مع برنامج تلفزيوني لإزالة آثار FBS. بعد ذلك إضافة 0.5 مل HES المتوسطة (أو mTeSR1 المتوسطة في حالة الآبار المغلفة Matrigel) مع 10 ميكرومتر المانع ROCK Y27632 إلى كل 7،8 جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لزم الأمر، وإزالة الخلايا الليفية المحيطة المستعمرات hiPSC مع إبرة قياس 21 تحت المجهر شنت في غطاء محرك السيارة تدفق رقائقي (الشكل 2A - C). شطف مع لوحات برنامج تلفزيوني وإضافة جديدة وسائل الإعلام التي تحتوي على الأجسام المضادة HES ترا، 1-81 StainAlive محددة (1:200، Stemgent). بعد 30 دقيقة.، تحل محل وسائل الإعلام التي تحتوي على الأجسام المضادة مع وسائل الاعلام HES جديدة تستكمل مع 10 المانع ROCK ميكرومتر. فحص لوحات تحت المجهر الفلورسنت وعلامة ترا-1-81. المستعمرات إيجابي باستخدام علامة الهدف (الشكل 2D) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطعت هيئة تنظيم الاتصالات، 1-81 المستعمرات hiPSC إيجابية تحت المجهر في غطاء محرك السيارة الصفحي، الى قطع صغيرة عدة باستخدام إبرة عيار 21 كما هو مبين في الشكل 2E و F. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام التلقائي شظايا ماصة نقل (P200) من المستعمرات hiPSC إلى دائرة الهجرة والجنسيةividual الآبار من 24 لوحة بشكل جيد مع MEFs أو Matrigel. تجنب نقل غير الوركين الخلايا. وضع لوحات في 37 درجة مئوية، و 5٪ حاضنة CO 2 وتسمح للمستعمرات hiPSC لنعلق ل24-36 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التغيير HES أو mTeSR1 (للمستعمرات نمت على Matrigel) وسائل الاعلام يوميا. وسوف المستعمرات hiPSC مع مورفولوجيا HES تشبه الصحيح أن تكون واضحة بعد 48 ساعة نقل الأولي على طبق من ذهب 24-جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يدويا مرور المستعمرات hiPSC كل 6 - 8 أيام في الصعود إلى 12 بشكل جيد وبعد ذلك على طبق من 6 أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد توسع نسيلي وإنشاء خطوط hiPSC وتحليل التعبير عن علامات تعدد القدرات الهيئة-1-60، SSEA-4، Oct3 / 4، وSox2 Nanog باستخدام كيمياء سيتولوجية مناعية كما هو مبين في الشكل (3). تقييم سلامة الجينومية وإمكانية التفريق بين الخطوط التي تم الحصول عليها باستخدام النمط النووي والتحليلات تشكيل مسخي 6،9. </li></ol> 4. ممثل النتائج كفاءة تنبيغ مع الفيروس الارتجاعي التي تحتوي على-I وسائل الاعلامق حاسمة لإعادة برمجة ناجحة. فمن المستحسن لإجراء كامل ترنسفكأيشن / عدوى الإجراء باستخدام GFP معربا عن فيروس واحد في كل تجربة إعادة برمجة لمراقبة كفاءة كما هو موضح في الشكل رقم 1. وعيار من الفيروس GFP معربا عن العزم، كما هو موضح في 10، من خلال تنبيغ الخلايا الليفية الإنسان باستخدام غير مركزة وسائل الاعلام الفيروسية وكان عادة في نطاق من 0.5 - 5 × 10 7 الجسيمات الفيروسية لكل مل (نائب الرئيس / مل). الليفية تغيير التشكل في أقرب وقت 2 بعد أيام من إصابة آخر. وينبغي أن الخلايا الليفية الإنسان Trypsinized تحسب بعناية قبل البذر منهم على الخلايا المغذية MEF. فمن المستحسن أن خلايا البذور في 3 كثافات مختلفة (6x10 3، 1.2x10 4 و 2.5x10 4 في واحد جيد من لوحة 6 أيضا) لأن كل خط خلية يوضح مختلف الخصائص النمو وكثافة بذر أمر حاسم بالنسبة لكفاءة إعادة برمجة. الزبدات الصوديوم المستخدمة فيالأولي 7-14 أيام من إعادة برمجة يزيد من كفاءة تشكيل hiPSC ما يقرب من 5 أضعاف. في كثير من الأحيان، وخصوصا عندما كان المصنف الليفية المصاب في أعلى كثافة، يمكن أن الخلايا الليفية مثل كسا طبق ثقافة وتغطية المستعمرات hiPSC كما هو مبين في الشكل 2A. في هذه الحالة، يمكن للطبقة الليفية رفع بعناية وإزالة المستعمرات لكشف hiPSC (الشكل 2B). بعد ذلك، يجب أن تشطف المستعمرات hiPSC مع وسائل الاعلام HES وملطخة ترا، 1-81 الأجسام المضادة. اعتمادا على الخلايا الليفية، ما يقرب من 20 - 40٪ من المستعمرات يتظاهرون مع iPSC مثل التشكل لا صمة مع هيئة تنظيم الاتصالات 1-81 الأجسام المضادة. ويمكن نقل المستعمرات hiPSC المحددة من لوحة داخل ال 12 المقبلة - 24H. وحضانة لفترات طويلة يؤدي إلى التمايز السريع لhiPSCs. ويمكن المستعمرات passaged يدويا على أي من الخلايا المغذية MEF أو لوحات Matrigel المغلفة. وينبغي بعد توسع المنشأة يتم اختبار الحيوانات المستنسخة باستخدام hiPSC كيمياء سيتولوجية مناعية (ICC) للتعبير عن pluripotenقبرصي وضع العلامات كما هو موضح في الشكل (3). وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي أن يكون توصيف مفصل الجزيئية من خطوط المولدة الخلية الجذع وتشمل: تحليل التعبير الجيني تعدد القدرات باستخدام RT-PCR، دليل على نزع الميثيل الحمض النووي على المروجين للجينات تعدد القدرات وتحليلات لإسكات الجينات المحورة 9. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3416/3416fig1.jpg" /> الشكل 1. كفاءة تنبيغ الفيروسية التي تحدد استخدام الارتجاعي GFP التعبير. (A، B) الليفية الكبار الإنسان المستمدة من المريض رنح فريدريك (GM03665، Coriell مستودع) كانت تصور بعد إصابة شخصين على التوالي مع وسائل الاعلام GFP فيروسات. (C، D) كانوا مصابين الليفية الإنسان مع نفس دفعة من وسائل الإعلام GFP فيروسات تليها الطرد المركزي من الخلايا مباشرة على لوحات 6-جيدا ل1H في 1600g. تم القبض على الصور 48h بعد الإصابة. <img alt= &quot;الشكل 2&quot; SRC = &quot;/ files/ftp_upload/3416/3416fig2.jpg&quot; /&gt; الشكل 2. تحديد وعزل المستعمرات hiPSC. (أ) المرحلة صورة على النقيض من لوحة تحتوي على hiPSCs تحيط بها الخلايا الليفية. تم زراعة الخلايا لمدة 21 يوما على وسائل الإعلام HES. (B، C) ومستعمرة نفسه hiPSC بعد إزالة طبقة الخلايا الليفية المحيطة بها. قطع (D) ويتم تحديد المستعمرات hiPSC برمجتها بشكل صحيح عن طريق تلطيخ على الهواء مباشرة مع الجسم المضاد علامة ترا، 1-81 السطح، وذلك باستخدام إبرة معقمة (E، F) وتحويلها إلى آبار منفصلة من لوحة 24-جيدا. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/3416/3416fig3.jpg" /> تم تحديد الشكل (3). التعبير من علامات محددة على تعدد القدرات Oct3 / 4، نانوغ (NANOG) Sox2، SSEA4 وترا-1-60 في hiPSCs بواسطة كيمياء سيتولوجية مناعية.

<ol>
	<li>Takahashi, K., Tanabe, K., Ohnuki, M., Narita, M., Ichisaka, T., Tomoda, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li><li>Mali, P., Chou, B. K., Yen, J., Ye, Z., Zou, J., Dowey, S., Brodsky, R. A., Ohm, J. E., Yu, W., Baylin, S. B., Yusa, K., Bradley, A., Meyers, D. J., Mukherjee, C., Cole, P. A., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Butyrate+greatly+enhances+derivation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+by+promoting+epigenetic+remodeling+and+the+expression+of+pluripotency-associated+genes.">Butyrate greatly enhances derivation of human induced pluripotent stem cells by promoting epigenetic remodeling and the expression of pluripotency-associated genes.</a> Stem Cells. 28, 713-720 (2011).</li><li>Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B. E., Jaenisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+reprogramming+of+fibroblasts+into+a+pluripotent+ES-cell-like+state.">In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state.</a> Nature. 448, 318-324 (2007).</li><li>Lowry, W. E., Richter, L., Yachechko, R., Pyle, A. D., Tchieu, J., Sridharan, R., Clark, A. T., Plath, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+dermal+fibroblasts.">Generation of human induced pluripotent stem cells from dermal fibroblasts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 2883-2888 (2008).</li><li>Dick, E., Matsa, E., Bispham, J., Reza, M., Guglieri, M., Staniforth, A., Watson, S., Kumari, R., Lochmuller, H., Young, L., Darling, D., Denning, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+protocols+to+enhance+the+production+and+isolation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell+lines.">Two new protocols to enhance the production and isolation of human induced pluripotent stem cell lines.</a> Stem Cell Res. 6, 158-167 (2011).</li><li>Ku, S., Soragni, E., Campau, E., Thomas, E. A., Altun, G., Laurent, L. C., Loring, J. F., Napierala, M., Gottesfeld, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Friedreich's+ataxia+induced+pluripotent+stem+cells+model+intergenerational+GAATTC+triplet+repeat+instability.">Friedreich's ataxia induced pluripotent stem cells model intergenerational GAATTC triplet repeat instability.</a> Cell Stem Cell. 7, 631-637 (2010).</li><li>Emre, N., Vidal, J. G., Elia, J., O'Connor, E. D., Paramban, R. I., Hefferan, M. P., Navarro, R., Goldberg, D. S., Varki, N. M., Marsala, M., Carson, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ROCK+inhibitor+Y-27632+improves+recovery+of+human+embryonic+stem+cells+after+fluorescence-activated+cell+sorting+with+multiple+cell+surface+markers.">The ROCK inhibitor Y-27632 improves recovery of human embryonic stem cells after fluorescence-activated cell sorting with multiple cell surface markers.</a> PLoS One. 5, e12148-e12148 (2011).</li><li>Watanabe, K., Ueno, M., Kamiya, D., Nishiyama, A., Matsumura, M., Wataya, T., Takahashi, J. B., Nishikawa, S., Muguruma, K., Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells.">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 25, 681-686 (2007).</li><li>Maherali, N., Hochedlinger, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+and+techniques+for+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Guidelines and techniques for the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 595-605 (2008).</li><li>Yu, J., Thomson, J. A., Lanza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Pluripotent+Stem+Cell+Derivation.">Induced Pluripotent Stem Cell Derivation.</a> Essentials of Stem Cell Biology. , 331-337 (2009).</li><li>Yu, J., Hu, K., Smuga-Otto, K., Tian, S., Stewart, R., Slukvin, I. I., Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem+cells+free+of+vector+and+transgene+sequences.">Human induced pluripotent stem cells free of vector and transgene sequences.</a> Science. 324, 797-801 (2009).</li><li>Woltjen, K., Michael, I. P., Mohseni, P., Desai, R., Mileikovsky, M., Hamalainen, R., Cowling, R., Wang, W., Liu, P., Gertsenstein, M., Kaji, K., Sung, H. K., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=piggyBac+transposition+reprograms+fibroblasts+to+induced+pluripotent+stem+cells.">piggyBac transposition reprograms fibroblasts to induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 458, 766-770 (2009).</li><li>Zhou, W., Freed, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+gene+delivery+can+reprogram+human+fibroblasts+to+induced+pluripotent+stem+cells.">Adenoviral gene delivery can reprogram human fibroblasts to induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells. 27, 2667-2674 (2009).</li><li>Warren, L., Manos, P. D., Ahfeldt, T., Loh, Y. H., Li, H., Lau, F., Ebina, W., Mandal, P. K., Smith, Z. D., Meissner, A., Daley, G. Q., Brack, A. S., Collins, J. J., Cowan, C., Schlaeger, T. M., Rossi, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+reprogramming+to+pluripotency+and+directed+differentiation+of+human+cells+with+synthetic+modified+mRNA.">Highly efficient reprogramming to pluripotency and directed differentiation of human cells with synthetic modified mRNA.</a> Cell Stem Cell. 7, 618-630 (2010).</li><li>Kim, D., Kim, C. H., Moon, J. I., Chung, Y. G., Chang, M. Y., Han, B. S., Ko, S., Yang, E., Cha, K. Y., Lanza, R., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+by+direct+delivery+of+reprogramming+proteins.">Generation of human induced pluripotent stem cells by direct delivery of reprogramming proteins.</a> Cell Stem Cell. 4, 472-476 (2009).</li><li>Han, S. S., Williams, L. A., Eggan, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constructing+and+deconstructing+stem+cell+models+of+neurological+disease.">Constructing and deconstructing stem cell models of neurological disease.</a> Neuron. 70, 626-644 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

دراسة الأمراض التي تصيب الإنسان، والجهاز العصبي وخاصة الاعصاب، وقد تم الطعن على نحو خاص بسبب عدم إمكانية الوصول إلى نماذج كافية الخلوية الإنسان. افتتح والقدرة على إعادة برمجة الخلايا الجسدية التي يمكن الحصول عليها بسهولة في الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها وإمك...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11965 </td></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11330 </td></tr><tr><td> KSR </td><td> إينفيتروجن </td><td> 10828 </td></tr><tr><td> غير الضرورية aminoacids </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11140 </td></tr><tr><td> الصوديوم الزبدات </td><td> سيغما </td><td> B5887 </td></tr><tr><td> Y27632 </td><td> Stemgent </td><td> 04-0012 </td></tr><tr><td> bFGF </td><td> Stemgent </td><td> 03-0002 </td></tr><tr><td> هيئة تنظيم الاتصالات، 1-81 الأضداد </td><td> Stemgent </td><td> 09-0069 </td></tr><tr><td> Oct3 / 4 الأضداد </td><td> سانتا كروز </td><td> SC-8628 </td></tr><tr><td> Nanog الأضداد </td><td> تقنية خلية اشارة </td><td> 4903S &lt;/ TD&gt; </tr><tr><td> هيئة تنظيم الاتصالات، 1-60 الأضداد </td><td> ميليبور </td><td> MAB4360 </td></tr><tr><td> Sox2 الأضداد </td><td> تقنية خلية اشارة </td><td> 3579S </td></tr><tr><td> SSEA4 </td><td> ميليبور </td><td> MAB4304 </td></tr><tr><td> CF1 MEFs </td><td> Globalstem </td><td> GSC-6201G </td></tr><tr><td> هدف علامة </td><td> نيكون </td><td> MBW10010 </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 354277 </td></tr><tr><td> mTeSR1 </td><td> StemCell تقنيات </td><td> 05850 </td></tr><tr><td> β-المركابتويثانول </td><td> سيغما </td><td> M7522 </td></tr><tr><td> Fugene 6 </td><td> روش </td><td> 11814443001 </td></tr><tr><td> polybrene </td><td> سيغما </td><td> H9268 </td></tr><tr><td> الكائن علامة </td><td> نيكون </td><td> MBW10010 </td></tr></tbody></table>

selecting and isolating colonies of human induced pluripotent stem cells reprogrammed from adult fibroblasts

هنا نطرح على بروتوكول إعادة برمجة الخلايا الليفية بالغ الإنسان في صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSC) باستخدام نواقل فيروس ترميز Oct3 / 4، Sox2، Klf4 و C-myc (OSKM) في وجود الزبدات الصوديوم 1-3. استخدمنا هذه الطريقة لإعادة برمجة مرور في وقت متأخر (&gt; P10) الليفية الكبار حقوق الإنسان مستمد من المريض رنح فريدريك (GM03665، Coriell مستودع). نهج إعادة برمجة وتشمل كفاءة عالية باستخدام بروتوكول تنبيغ الطرد المركزي المتكررة من الخلايا الليفية في حضور وسائل الإعلام التي تحتوي على الفيروس. وقد تم تحديد المستعمرات hiPSC برمجتها باستخدام المناعية الحية لترا-81-1، علامة سطح الخلايا المحفزة، وفصلها عن الخلايا الليفية غير برمجتها وpassaged 4،5 يدويا. ثم تم نقل هذه hiPSC لوحات Matrigel ونمت في ظروف التغذية، مجانا، مباشرة من لوحة إعادة برمجة. ابتداء من المقطع الاول، المستعمرات hiPSC شرح الخصائص HES-Lآيك التشكل. ويمكن استخدام هذا البروتوكول أن أكثر من 70٪ من المستعمرات المختارة بنجاح موسع، وأنشأ في خطوط الخلايا. عرض خطوط أنشئت hiPSC علامات تعدد القدرات المميزة بما في ذلك علامات سطح TRA-1-60 و SSEA-4، فضلا عن علامات النووية Oct3 / 4، وSox2 Nanog. تم تأسيس بروتوكول المقدمة هنا واختبار باستخدام الخلايا الليفية الكبار التي تم الحصول عليها من المرضى رنح فريدريك والأفراد سيطرة 6، الليفية الوليد الإنسان، فضلا عن الخلايا الكيراتينية البشرية.

Watch this Scientific Journal Video about Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts at JoVE.com

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

نقدم لبروتوكول لإعادة برمجة الخلايا الجسدية من كفاءة الإنسان في صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSC) باستخدام نواقل فيروس ترميز Oct3 / 4، Sox2، Klf4 و C-myc (OSKM) وتحديد hiPSC برمجتها بشكل صحيح عن طريق تلطيخ على الهواء مباشرة مع هيئة تنظيم الاتصالات 1-81 الأجسام المضادة.

اختيار وعزل المستعمرات من صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة برمجتها من الخلايا الليفية الكبار

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

selecting-isolating-colonies-human-induced-pluripotent-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

19.8K Views.  University of Texas M.D. Anderson Cancer Center. نقدم لبروتوكول لإعادة برمجة الخلايا الجسدية من كفاءة الإنسان في صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSC) باستخدام نواقل فيروس ترميز Oct3 / 4، Sox2، Klf4 و C-myc (OSKM) وتحديد hiPSC برمجتها بشكل صحيح عن طريق تلطيخ على الهواء مباشرة مع هيئة تنظيم الاتصالات 1-81 الأجسام المضادة.

Video: Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing the pluripotent state in mouse fibroblasts.1 The same group also reported the successful reprogramming of human somatic cells into induced pluripotent stem (iPS) cells using human versions of the same transcription factors delivered by retroviral vectors.2 Additionally, James Thomson et al. reported that the lentivirus-mediated co-expression of another set of factors (Oct4, Sox2, Nanog and Lin28) was capable of reprogramming human somatic cells into iPS cells.3
iPS cells are similar to ES cells in morphology, proliferation and the ability to differentiate into all tissue types of the body. Human iPS cells have a distinct advantage over ES cells as they exhibit key properties of ES cells without the ethical dilemma of embryo destruction. The generation of patient-specific iPS cells circumvents an important roadblock to personalized regenerative medicine therapies by eliminating the potential for immune rejection of non-autologous transplanted cells.
Here we demonstrate the protocol for reprogramming human fibroblast cells using the Stemgent Human TF Lentivirus Set. We also show that cells reprogrammed with this set begin to show iPS morphology four days post-transduction. Using the Stemolecule Y27632, we selected for iPS cells and observed correct morphology after three sequential rounds of colony picking and passaging. We also demonstrate that after reprogramming cells displayed the pluripotency marker AP, surface markers TRA-1-81, TRA-1-60, SSEA-4, and SSEA-3, and nuclear markers Oct4, Sox2 and Nanog.

We demonstrate the protocol for the generation of induced pluripotent stem cells from human somatic cells using lentivirus-mediated delivery of the human factors Oct4, Sox2, Nanog, and Lin28. Pluripotency was confirmed by morphology and the presence of embryonic stem (ES) cell-specific markers.

تعيين جيل من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة عن طريق إعادة برمجة الخلايا الليفية الإنسان مع الإنسان الفيروسة البطيئة TF Stemgent

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate daughter cells that retain the stem cell phenotype and transit-amplifying cells (TA cells) that migrate from the stem cell niche, undergo rapid proliferation and terminally differentiate to repopulate the tissue.
Epithelial stem cells have been identified in the epidermis, hair follicle, and intestine as cells with a high in vitro proliferative potential and as slow-cycling label-retaining cells in vivo 1-3. Adult, tissue-specific stem cells are responsible for the regeneration of the tissues in which they reside during normal physiologic turnover as well as during times of stress 4-5. Moreover, stem cells are generally considered to be multi-potent, possessing the capacity to give rise to multiple cell types within the tissue 6. For example, rodent hair follicle stem cells can generate epidermis, sebaceous glands, and hair follicles 7-9. We have shown that stem cells from the human hair follicle bulge region exhibit multi-potentiality 10.
Stem cells have become a valuable tool in biomedical research, due to their utility as an in vitro system for studying developmental biology, differentiation, tumorigenesis and for their possible therapeutic utility. It is likely that adult epithelial stem cells will be useful in the treatment of diseases such as ectodermal dysplasias, monilethrix, Netherton syndrome, Menkes disease, hereditary epidermolysis bullosa and alopecias 11-13. Additionally, other skin problems such as burn wounds, chronic wounds and ulcers will benefit from stem cell related therapies 14,15. Given the potential for reprogramming of adult cells into a pluripotent state (iPS cells)16,17, the readily accessible and expandable adult stem cells in human skin may provide a valuable source of cells for induction and downstream therapy for a wide range of disease including diabetes and Parkinson's disease.

A rapid, robust way of isolating viable adult epithelial stem cells from human skin is described. The method utilizes enzymatic digestion of skin collagen matrix , followed by plucking of hair follicles and isolation of single cell suspensions or tissue fragments for cell culture.

العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية الظهارية من الجلد البشري

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human embryonic stem cells (HESCs)1. While improvements in several gene delivery methods have been described2-9, transfection remains a capricious process for HESCs, and has not yet been reported in human induced pluripotent stem cells (iPSCs). In this video, we demonstrate how our lab routinely transfects and nucleofects human iPSCs using plasmid with an enhanced green fluorescence protein (eGFP) reporter. Human iPSCs are adapted and maintained as feeder-free cultures to eliminate the possibility of feeder cell transfection and to allow efficient selection of stable transgenic iPSC clones following transfection. For nucleofection, human iPSCs are pre-treated with ROCK inhibitor11, trypsinized into small clumps of cells, nucleofected and replated on feeders in feeder cell-conditioned medium to enhance cell recovery. Transgene-expressing human iPSCs can be obtained after 6 hours. Antibiotic selection is applied after 24 hours and stable transgenic lines appear within 1 week. Our protocol is robust and reproducible for human iPSC lines without altering pluripotency of these cells.

Despite recent advancements in genetic modification, transfection of human embryonic stem cells (HESCs) remains a capricious process. To our knowledge, systematic and efficient methods to transfect human induced pluripotent stem cells (iPSCs) have not been reported. Here, we describe robust protocols to efficiently transfect and nucleofect human iPSCs.

وبنقل العدوى إلى الإنسان Nucleofecting الجذعية المحفزة المستحثة خلايا

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has been previously shown that human somatic cells can be reprogrammed to pluripotency by ectopic expression of four transcription factors (Oct4, Sox2, Klf4 and Myc) and become induced pluripotent stem cells (iPSCs)2-4 . Like hESCs, human iPSCs are pluripotent and a potential source for autologous cells. Here we describe the protocol to reprogram human fibroblast cells with the four reprogramming factors cloned into GFP-containing retroviral backbone4. Using the following protocol, we generate human iPSCs in 3-4 weeks under human ESC culture condition. Human iPSC colonies closely resemble hESCs in morphology and display the loss of GFP fluorescence as a result of retroviral transgene silencing. iPSC colonies isolated mechanically under a fluorescence microscope behave in a similar fashion as hESCs. In these cells, we detect the expression of multiple pluripotency genes and surface markers.

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

A method to generate human induced pluripotent stem cells (iPSCs) via retrovirus-mediated ectopic expression of OCT4, SOX2, KLF4 and MYC is described. A practical way to identify human iPSC colonies based on GFP expression is also discussed.

إعادة برمجة الخلايا الجسدية البشرية المستحثة إلى الخلايا الجذعية المحفزة (iPSCs) استخدام ناقلات فيروسات الرجعية مع GFP

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also produce a source of patient-matched cells for regenerative therapies. iPSCs may be generated using multiple protocols and derived from multiple cell sources. Once generated, iPSCs are tested using a variety of assays including immunostaining for pluripotency markers, generation of three germ layers in embryoid bodies and teratomas, comparisons of gene expression with embryonic stem cells (ESCs) and production of chimeric mice with or without germline contribution2. Importantly, iPSC lines that pass these tests still vary in their capacity to produce different differentiated cell types2. This has made it difficult to establish which iPSC derivation protocols, donor cell sources or selection methods are most useful for different applications.
The most stringent test of whether a stem cell line has sufficient developmental potential to generate all tissues required for survival of an organism (termed full pluripotency) is tetraploid embryo complementation (TEC)3-5. Technically, TEC involves electrofusion of two-cell embryos to generate tetraploid (4n) one-cell embryos that can be cultured in vitro to the blastocyst stage6. Diploid (2n) pluripotent stem cells (e.g. ESCs or iPSCs) are then injected into the blastocoel cavity of the tetraploid blastocyst and transferred to a recipient female for gestation (see Figure 1). The tetraploid component of the complemented embryo contributes almost exclusively to the extraembryonic tissues (placenta, yolk sac), whereas the diploid cells constitute the embryo proper, resulting in a fetus derived entirely from the injected stem cell line.
Recently, we reported the derivation of iPSC lines that reproducibly generate adult mice via TEC1. These iPSC lines give rise to viable pups with efficiencies of 5-13%, which is comparable to ESCs3,4,7 and higher than that reported for most other iPSC lines8-12. These reports show that direct reprogramming can produce fully pluripotent iPSCs that match ESCs in their developmental potential and efficiency of generating pups in TEC tests. At present, it is not clear what distinguishes between fully pluripotent iPSCs and less potent lines13-15. Nor is it clear which reprogramming methods will produce these lines with the highest efficiency. Here we describe one method that produces fully pluripotent iPSCs and "all- iPSC" mice, which may be helpful for investigators wishing to compare the pluripotency of iPSC lines or establish the equivalence of different reprogramming methods.

Generating induced pluripotent stem cell (iPSC) lines produces lines of differing developmental potential even when they pass standard tests for pluripotency. Here we describe a protocol to produce mice derived entirely from iPSCs, which defines the iPSC lines as possessing full pluripotency1.

جيل من الفئران المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Through the ectopic expression of four transcription factors, Oct4, Klf4, Sox2 and cMyc, human somatic cells can be converted to a pluripotent state, generating so-called induced pluripotent stem cells (iPSCs)1-4. Patient-specific iPSCs lack the ethical concerns that surround embryonic stem cells (ESCs) and would bypass possible immune rejection. Thus, iPSCs have attracted considerable attention for disease modeling studies, the screening of pharmacological compounds, and regenerative therapies5.
We have shown the generation of transgene-free human iPSCs from patients with different lung diseases using a single excisable polycistronic lentiviral Stem Cell Cassette (STEMCCA) encoding the Yamanaka factors6. These iPSC lines were generated from skin fibroblasts, the most common cell type used for reprogramming. Normally, obtaining fibroblasts requires a skin punch biopsy followed by expansion of the cells in culture for a few passages. Importantly, a number of groups have reported the reprogramming of human peripheral blood cells into iPSCs7-9. In one study, a Tet inducible version of the STEMCCA vector was employed9, which required the blood cells to be simultaneously infected with a constitutively active lentivirus encoding the reverse tetracycline transactivator. In contrast to fibroblasts, peripheral blood cells can be collected via minimally invasive procedures, greatly reducing the discomfort and distress of the patient. A simple and effective protocol for reprogramming blood cells using a constitutive single excisable vector may accelerate the application of iPSC technology by making it accessible to a broader research community. Furthermore, reprogramming of peripheral blood cells allows for the generation of iPSCs from individuals in which skin biopsies should be avoided (i.e. aberrant scarring) or due to pre-existing disease conditions preventing access to punch biopsies.
Here we demonstrate a protocol for the generation of human iPSCs from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) using a single floxed-excisable lentiviral vector constitutively expressing the 4 factors. Freshly collected or thawed PBMCs are expanded for 9 days as described10,11 in medium containing ascorbic acid, SCF, IGF-1, IL-3 and EPO before being transduced with the STEMCCA lentivirus. Cells are then plated onto MEFs and ESC-like colonies can be visualized two weeks after infection. Finally, selected clones are expanded and tested for the expression of the pluripotency markers SSEA-4, Tra-1-60 and Tra-1-81. This protocol is simple, robust and highly consistent, providing a reliable methodology for the generation of human iPSCs from readily accessible 4 ml of blood.

Here we show a simple and effective protocol for the generation of human iPSCs from 3-4 ml of peripheral blood using a single lentiviral reprogramming vector. Reprogramming of readily available blood cells promises to accelerate the utilization of iPSC technology by making it accessible to a broader research community.

جيل من صنع الإنسان من الخلايا الجذعية المحفزة الدموية المحيطية باستخدام Lentiviral STEMCCA المتجهات

Through the ectopic expression of four transcription factors, Oct4, Klf4, Sox2 and cMyc, human somatic cells can be converted to a pluripotent state, ...

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is essential first to generate functional human cardiomyocytes (CMs). The use of these cells in drug discovery and toxicology studies would also be highly beneficial, allowing new pharmacological molecules for the treatment of cardiac disorders to be validated pre-clinically on cells of human origin. Of the possible sources of CMs, induced pluripotent stem (iPS) cells are among the most promising, as they can be derived directly from readily accessible patient tissue and possess an intrinsic capacity to give rise to all cell types of the body 1. Several methods have been proposed for differentiating iPS cells into CMs, ranging from the classical embryoid bodies (EBs) aggregation approach to chemically defined protocols 2,3. In this article we propose an EBs-based protocol and show how this method can be employed to efficiently generate functional CM-like cells from feeder-free iPS cells.

Pluripotent stem cells, either embryonic or induced pluripotent stem (iPS) cells, constitute a valuable source of human differentiated cells, including cardiomyocytes. Here, we will focus on cardiac induction of iPS cells, showing how to use them to obtain functional human cardiomyocytes through an embryoid bodies-based protocol.

جيل من العضلية الإنسان: البروتوكول التمايز من خالية من الطاعم المستحثة الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs include modeling pathogenesis of human genetic diseases, autologous cell therapy after gene correction, and personalized drug screening by providing a source of patient-specific and symptom relevant cells. However, there are several hurdles to overcome, such as eliminating the remaining reprogramming factor transgene expression after human iPSCs production. More importantly, residual transgene expression in undifferentiated human iPSCs could hamper proper differentiations and misguide the interpretation of disease-relevant in vitro phenotypes. With this reason, integration-free and/or transgene-free human iPSCs have been developed using several methods, such as adenovirus, the piggyBac system, minicircle vector, episomal vectors, direct protein delivery and synthesized mRNA. However, efficiency of reprogramming using integration-free methods is quite low in most cases.
Here, we present a method to isolate human iPSCs by using Sendai-virus (RNA virus) based reprogramming system. This reprogramming method shows consistent results and high efficiency in cost-effective manner.

Here, we present our established method to reprogram human somatic cells into transgene-free human iPSCs with Sendai virus, which shows consistent outcome and enhanced efficiency.

كفاءة الجيل المستحثة الإنسان افرة القوة الخلايا الجذعية من الخلايا الجسدية البشرية مع سينداي الفيروسات

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

استخدام خزعات الجلد لتوليد خلايا بودوسيت مشتقة من المريض

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the glomerulus. Mutations in podocyte-specific genes can cause focal segmental glomerulosclerosis (FSGS), and podocytes are also affected in many other primary and secondary nephropathies. Due to their differentiated nature, primary cell culture models are limited for podocytes.&#160;Therefore, commonly conditionally immortalized cells are used. However, these conditionally immortalized podocytes (ciPodocytes) have several limitations: the cells can dedifferentiate in culture, especially when they reach confluency, and several podocyte-specific markers are either only slightly or not expressed at all. This brings the use of ciPodocytes and their applicability for physiological, pathophysiological, and clinical reach into question. Here, we describe a protocol for the generation of human podocytes-including patient-specific podocytes-from a skin punch biopsy by episomal reprogramming of dermal fibroblasts into hiPSCs and subsequent differentiation into podocytes. These podocytes resemble in vivo podocytes much better in terms of morphological characteristics, like the development of foot processes and the expression of the podocyte-specific marker. Finally, yet importantly, these cells maintain patients&#39; mutations, resulting in an improved ex vivo model to study podocyte diseases and potential therapeutic substances in an individualized approach.

تسليط الضوء على المؤلف: جيل من الخلايا القلبية المشتقة من المريض من خزعات الجلد  

This manuscript describes a two-step protocol to generate patient-specific podocytes from dermal fibroblasts via episomal reprogramming into human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) and subsequent differentiation into podocytes.

توليد الخلايا القرنية المشتقة من المريض من خزعات الجلد

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the ...