نحن نعترف الدعم من جانب العلوم الكيميائية، علوم الأرض والعلوم البيولوجية شعبة، مكتب العلوم الأساسية للطاقة، ومكتب للعلوم، وزارة الطاقة الأميركية (عدد جائزة DE-FG02-91ER20021) والمؤسسة الوطنية للعلوم (MCB 0948584) (اف ب). نحن شاكرون لكارين بيرد السيدة لتحرير المخطوطة.

1. EMS المعالجة وmutagenized بذور thaliana Arabidopsis باستخدام وكيل المغير سلفونات الميثان الإيثيلي (EMS) 3،4، والتي يدفع إلى التغييرات C-إلى-T الجينوم مما أدى إلى G / C إلى T / A الطفرات 5-7. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن البذور ز 0،8 Arabidopsis (~ 40000 البذور) التي تحمل علامة فلوري عضية (على وجه التحديد، في هذه الدراسة ssGFPHDEL (إشارة تسلسل GFP-HDEL رباعي البيبتيد) وقد استخدم بوصفه علامة ER). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل البذور في انبوب فالكون 50 مل، ثم يضاف 25 مل من الماء المقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.2٪ (V / V) إيثيل سلفونات الميثان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 16 ساعة على nutating الخلاط على سرعة منخفضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح السائل وتجاهل ذلك في قارورة تحتوي على 1.0 متر هيدروكسيد الصوديوم إلى تعطيل النظام النقدي الأوروبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 25 مل من الماء إلى أنبوب الصقر الذي يحتوي على البذور، وثيقة، وعكس 5 مرات لغسل البذور؛ الانتظار حتى كل بذور استقروا، ثم نضح الماء والتخلص من الصوديوم في 1،0 متر<html> OH قارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوة غسل تصل إلى 10 مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل النهائي، اعادة تعليق البذور في حد أدنى من المياه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشروع في تعقيم البذور إضافة 25 مل من المبيض بنسبة 10٪، هزة بقوة لمدة 30 ثانية. اسمحوا بذور تسوية إلى أسفل، ثم صب قبالة التبييض وشطف مع 25 مل من الماء المعقم. تخلصي من الماء المعقم وإضافة 25 مل من الإيثانول بنسبة 70٪. هزة الأنابيب لمدة 30 ق. اسمحوا بذور تسوية إلى أسفل. صب قبالة الإيثانول وشطف مع 25 مل من الماء المعقم. كرر مرتين يغسل مع الماء المعقم، ثم صب البذور على طبق بيتري من البلاستيك تحتوي على 3 ورقة مرشح MM واسمحوا الجافة تحت غطاء محرك السيارة. متجر في 4 درجة مئوية لمدة 2 ايام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة بذور في phytagel MS ½ (تركيز نصف متوسط ​​Murashige وسكوغ)، و 150 ملم طبق بيتري (~ 250-300 البذور لوحة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو بذور M1 على لوحة ل 2 أسابيع، ثم زرع في التربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع البذور من النباتات M1 M2 الفردية لإنشاء خطوط M2 (1000 خطوط مستقلة). </li></ol>ove_title &quot;(2)&gt;. فحص متحد البؤر من السكان M2 و M3 في هذا القسم ونحن تصف مراقبة الشتلات مع المجهر متحد البؤر مضان أو كما هو موضح سابقا 8. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتزرع بذور الستين من كل سطر M2 لمدة 7 إلى 10 أيام في أطباق بتري بلاستيكية، ½ MS phytagel، بل على لوحة نفس تزرع أيضا 5 شتلات EMS-غير المعالجة (السيطرة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هي التي شنت خمس إلى عشر النبتات مع الجانب مجافي المحور باتجاه العدسة (40X) على شريحة المجهر ومرفقا به ساترة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويلاحظ كل فلقة، من القشرية للمنطقة وسطي، في ظل تألق لتوزيع أي التحت خلوية المتغير للعلامة عضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزرع النباتات إيجابي في التربة ويتم جمع البذور وفحص مرة أخرى لتأكيد النمط الظاهري متحولة في الجيل M3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة تلوث الطفرات الخلفية من خلال backcrossing ثلاث مرات على الأقل لجينوم البرية من نوع شارك ربماntaining علامة عضية المطلوب فلوري. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من النبات الأم، وذلك باستخدام مقص غرامة أو ملقط إزالة siliques الناضجة، والزهور ومفتوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البراعم التي هي صغيرة جدا من النسيج الإنشائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج غيض من زوج واحد من ملقط بين بتلات وكأسية لفتح واحد برعم زهرة، وإزالة جميع anthers. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام زوج واحد من ملقط تأخذ زهرة مفتوحة ناضجة من المصنع والد وفرك anthers على وصمة العار من النبات العاجزة. </li></ol></li></ol> 3. رسم الخرائط يصف هذا القسم كيفية أساسا لتعيين الطفرات المتنحية باستخدام بروتوكول تعديل Borevitz من (9) الذي هو أسرع إذا ما قورنت طرق رسم الخرائط التقليدية 10،11. هذا النهج استخدام صفائف قليل النوكليوتيد عالية الكثافة، مع القدرة على كشف العديد من الأشكال المتعددة للميزة واحدة (برامج التغذية التكميلية) في تجربة واحدة 12. باستخدام GeneChip Affymetrix ATH1 مجموعة Arabidopsis من الممكنتحليل ما يقرب من 24000 الجينات. تتم مقارنة بركة من الأفراد 2 F تظهر الطفرة إلى مجموعة من النباتات البرية من نوع 2 F جمعت بين السكان عزل نفسه. ثم، سيتم تعيين الطفرة في المنطقة، حيث يتم تخصيب تجمع متحولة عن الأليلات الوراثي متحولة، وبالتالي في المنطقة نفسها تجمع من النوع البري سيؤدي إلى إثراء لالأليلات الأصل البرية من نوع 13. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم استخراج الحمض النووي الجيني (3 ميكروغرام) من كولومبيا متحولة متماثلة اللواقح (M3) استخدام نبات DNeasy QIAGEN البسيطة عدة ويقدم للمحلل البورشيد الثاني الجينوم (GA الثاني) 14 التسلسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعبرت متماثل متحولة كولومبيا (M3) مع عمودي لاندسبيرغ لتوليد سكان رسم الخرائط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تنفيذ التعيين على الأفراد ما يصل الى 100 70 F2 يظهر النمط الظاهري الشاذة ونفس العدد من النباتات F2 مع النمط الظاهري من النوع البري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع من كل ورقة نبات قرص (0.60 ملم) باستخدام لكمة ثقب. ووينبغي جمع القرص ورقة من أوراق من نفس الفئة العمرية للتأكد من الحصول على كميات مماثلة من الحمض النووي. يمكن معالجتها لاستخراج العينات الجينية على حدة أو في مجموعات. في هذه الحالة، فمن الممكن لجمع عينات من 5-10 لكل أنبوب إيبندورف بحيث في النهاية سيكون لديك عدد أقل من أنابيب إيبندورف من الحمض النووي الجيني الذي لابد من استخراجها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويستخدم الحمض النووي ورقة النبات MasterPure كيت تنقية (Epicentre) لاستخراج الحمض النووي الجيني. وكميا في الحمض النووي الجيني تم الحصول عليها من كل عينة مع nanodrop. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نفس الكمية من الحمض النووي الجيني من كل عينة ثم يتم وضع معا ما يصل الى ما مجموعه 300 نانوغرام (~ 30 ميكرولتر) من السلطات الوطنية المعينة النبات؛ إضافة 60 ميكرولتر 2.5x و حل البادئات العشوائية [125 ملم تريس، حمض الهيدروكلوريك (درجة الحموضة 6.8)، 12.5 ملم MgCl2، 25 مم 2-المركابتويثانول و 750 ميكروغرام / الاشعال oligodeoxyribonucleotide مل (octamers عشوائي)] (Bioprime عدة) و 42 ميكرولتر ماء (نهائي حجم 132 ميكرولتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السلطات الوطنية المعينة في تفسد&gt; 95 درجة مئوية لمدة 5 إلى 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بارد على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إلى كل denatuأحمر الحمض النووي اضافة 15 ميكرولتر مزيج dNTPs 10X مع dCTP بيوتين [1 ملم البيوتين-14-dCTP، 1 ملم dCTP، 2 مم dATP، 2 مم dGTP، 2 مم dTTP في تريس 10 ملم، حمض الهيدروكلوريك (7.5 درجة الحموضة)، 1 ملم Na2EDTA] (Bioprime عدة)، وأكمل مع 3 بوليميريز Klenow ميكرولتر (عدة Bioprime). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان بين عشية وضحاها في 25 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي، اضافة 15 ميكرولتر 3 M NaOAc و 400 ميكرولتر الباردة EtOH 100٪؛ المزيج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في احتضان -80 درجة مئوية لمدة 1 ساعة، ثم تدور في 20500 XG لمدة 15 دقيقة، وإزالة طاف، وتغسل مع 500 EtOH الباردة ميكرولتر 75٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور في 20500 XG لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكريات DNA الجافة في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة وresuspend المياه في 100 ميكروليتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدم 5 ميكرولتر للتحقق من المحصول وجودة في جل (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرسال 95 ميكرولتر من رد فعل وصفها لArabidopsis GeneChip البرية من نوع ومتحولة لATH1 التهجين صفيف الجينوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم فحص صفائف ويتم تحليل الملفات. CEL تم الحصول عليها باستخدام برنامج R ( <a href="http://www.r-project.org/">http://www.r-project.o</a>RG /). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> R تثبيت البرنامج، ثم فتح البرنامج ولصق السلسلة التالية: مصدر (&quot; <a href="http://bioconductor.org/biocLite.R">http://bioconductor.org/biocLite.R</a> &quot;) biocLite () ثم اضغط على مفتاح العودة، هذا وسوف تثبيت الحزم Bioconductor القياسية ( <a href="http://www.bioconductor.org">http://www.bioconductor.org</a> ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في مجلد جديد على سطح المكتب الخاص بك، وتحميل من الموقع التالي ( <a href="http://www.naturalvariation.org/methods">http://www.naturalvariation.org/methods</a> ) الملفات: readcel.R SFP.R Map.R ath1V5.RData ColLerCEL.zip وينبغي أن يكون مفتوح للColLerCEL.zip الملف والملفات الناتجة لصقها في مجلد جديد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تسمية البيانات التي تم الحصول عليها من تجربة GeneChip الخاص بك إلى wildtype.CEL وmutant.CEL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن نسخ البيانات GeneChip الخاص بك (وwildtype.CELmutant.CEL) في مجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مفتوحة R، أ) لنظام التشغيل Mac: انقر على &quot;متفرقات&quot;، ثم انقر فوق &quot;تغيير الدليل العمل&quot;. ب) لجهاز الكمبيوتر: انقر على &quot;ملف&quot; &quot;دليل التغيير&quot; ثم </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أ) لنظام التشغيل Mac: حدد المجلد الذي يحتوي على الملفات. انقر على زر &quot;مساحة عمل&quot;، &quot;تحميل ملف مساحة العمل&quot;، وath1V5.RData حدد ب) للكمبيوتر: اختر المجلد الذي يحتوي على ملفات أعلاه، انقر على زر &quot;ملف&quot;، ثم &quot;مساحة عمل تحميل&quot; وحدد ath1V5.RData. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> readCEL.R المفتوحة باستخدام المفكرة ونسخ النص كله إلى ر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> SFP.R المفتوحة باستخدام المفكرة ونسخ النص كله إلى ر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Map.R المفتوحة باستخدام المفكرة ونسخ النص كله إلى ر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في إطار وحدة التحكم سترى الرسالة التالية: X كروموسوم يحد ميغابايت YZ جينات بحث في الطير لصق في هذا الرابط 3 <a href="http://arabidopsis.org/servlets/sv?action=download&amp;chr=x&amp;start=y&amp;end=z">http://arabidopsis.org/servlets/sv؟action=download&amp;chr=x&amp;start=y</a>ونهاية = Z </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نسخ ولصق الارتباط في متصفح الانترنت الخاص بك. وسوف تظهر نافذة ونسأل لفتح أو حفظ الملف، يجب عليك تحديد حفظ. اختيار اسم الملف وإرفاق ملحق &quot;. XLS&quot;، ثم انقر فوق حفظ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الملف &quot;. XLS&quot;، حيث يمكنك العثور على تنسيق المشترك لمتحولة الخاص بك (ويمثل بيانيا النتيجة في الشكل 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضمن المنطقة المعينة في البورشيد تجميعها يقرأ من الجينوم متحولة تحديد معين التحولات EMS 4 من بين الأشكال المتعددة للتركيبات النووية المنفردة. تكمل النمط الظاهري متحولة من قبل التحول مع مورثة نوع البرية (ق) باستخدام إجراءات المعيار 15. </li></ol> 4. ممثل النتائج ويظهر الشكل 1 النهج المتبع لتحديد متحولة من المسار إفرازي باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر. يبين الشكل 2 إعداد نموذجي من الحمض النووي الجيني المسمى والتهجين لمجموعة. في الشكل (3)، نتيجة لذلك يتوقع نموذجي بعد تحليل وتقديم البيانات التي تم الحصول عليها من الصفيف Arabidopsis GeneChip الجينوم ATH1. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3809/3809fig1.jpg" /> تم الانتهاء من زراعة الشكل 1. النباتات المعدلة وراثيا Arabidopsis معربا عن ssGFPHDEL (ER علامة) (1) لانتاج البذور بما فيه الكفاية لمعالجة EMS (2). ثم زرعت البذور المعالجة مع نظم الإدارة البيئية لتوليد محطات M1 (3). كل مصنع M1 يمثل خط مختلفة وجمعت البذور بشكل منفصل عن كل واحد منهم. ومطلي البذور M2 على الركيزة MS ½ (4) وفرزهم ثم لعيوب في التشكل ER بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر (5). خلال الفحص وجدنا أن الحفاظ على النباتات مورفولوجيا ER البرية من نوع (6) والنباتات التي تظهر معيبة الظواهر ER (7). وقد نمت هذه النباتات للحصول على جيل M3 والتأكيد على النمط الظاهري (8). تم استخدام الحمض النووي الجيني من مصنع M3 لSolexa البورشيد التسلسل (أ). نفس النباتوتستخدم أيضا لالصلبان مع لير، وزن للحصول على سكان رسم الخرائط F2 (ب). <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3809/3809fig2.jpg" /> تم تحميل الشكل 2. Bioprime ردود الفعل العشوائية وضع العلامات (5 ميكرولتر من 100 ميكرولتر) على٪ 1 الاغاروز هلام. لين (أ) هو من بين مجموعة من النباتات البرية من نوع F2، والصف B هي من بين مجموعة من النباتات F2 متحولة. (ماركر هو 1 كيلو بايت DNA-N3232 سلم، من NEB). <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/3809/3809fig3.jpg" /> 3 الشكل، والرقم الذي يشكل مثالا لرسم الخرائط من الطفرة-0 العقيد باستخدام GeneChip Arabidopsis صفيف الجينوم ATH1 التهجين. يقع طفرة في هذا المثال على تخوم كروموسوم 1، بواسطة أشرطة عمودية. وقضبان أفقية تمثل عتبات للكشف.

<ol>
	<li>Marti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+missense+mutation+in+the+vacuolar+protein+GOLD36+causes+organizational+defects+in+the+ER+and+aberrant+protein+trafficking+in+the+plant+secretory+pathway.">A missense mutation in the vacuolar protein GOLD36 causes organizational defects in the ER and aberrant protein trafficking in the plant secretory pathway.</a> The Plant journal : for cell and molecular biology. 63, 901-913 (2010).</li><li>Stefano, G., Renna, L., Moss, T., McNew, J., Brandizzi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+the+spatial+and+dynamic+organization+of+the+endoplasmic+reticulum+and+Golgi+apparatus+is+influenced+by+the+integrity+of+the+c-terminal+domain+of+RHD3,+a+non-essential+GTPase.">Arabidopsis the spatial and dynamic organization of the endoplasmic reticulum and Golgi apparatus is influenced by the integrity of the c-terminal domain of RHD3, a non-essential GTPase.</a> The Plant Journal. , (2011).</li><li>Kim, Y., Schumaker, K. S., Zhu, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMS+mutagenesis+of+Arabidopsis.">EMS mutagenesis of Arabidopsis.</a> Methods in molecular biology. 323, 101-103 (2006).</li><li>Maple, J., Moller, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutagenesis+in+Arabidopsis.">Mutagenesis in Arabidopsis.</a> Methods in molecular biology. 362, 197-206 (2007).</li><li>Greene, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrum+of+chemically+induced+mutations+from+a+large-scale+reverse-genetic+screen+in+Arabidopsis.">Spectrum of chemically induced mutations from a large-scale reverse-genetic screen in Arabidopsis.</a> Genetics. 164, 731-740 (2003).</li><li>Krieg, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethyl+methanesulfonate-induced+reversion+of+bacteriophage+T4rII+mutants.">Ethyl methanesulfonate-induced reversion of bacteriophage T4rII mutants.</a> Genetics. 48, 561-580 (1963).</li><li>Kovalchuk, I., Kovalchuk, O., Hohn, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+variation+of+the+somatic+mutation+frequency+in+transgenic+plants.">Genome-wide variation of the somatic mutation frequency in transgenic plants.</a> The EMBO journal. 19, 4431-4438 (2000).</li><li>Boulaflous, A., Faso, C., Brandizzi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+the+Golgi+apparatus:+from+imaging+to+genes.">Deciphering the Golgi apparatus: from imaging to genes.</a> Traffic. 9, 1613-1617 (2008).</li><li>Borevitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotyping+and+mapping+with+high-density+oligonucleotide+arrays.">Genotyping and mapping with high-density oligonucleotide arrays.</a> Methods in molecular biology. 323, 137-145 (2006).</li><li>Konieczny, A., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+procedure+for+mapping+Arabidopsis+mutations+using+co-dominant+ecotype-specific+PCR-based+markers.">A procedure for mapping Arabidopsis mutations using co-dominant ecotype-specific PCR-based markers.</a> The Plant journal : for cell and molecular biology. 4, 403-410 (1993).</li><li>Bell, C. J., Ecker, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assignment+of+30+microsatellite+loci+to+the+linkage+map+of+Arabidopsis.">Assignment of 30 microsatellite loci to the linkage map of Arabidopsis.</a> Genomics. 19, 137-144 (1994).</li><li>Hazen, S. P., Kay, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+arrays+are+not+just+for+measuring+gene+expression.">Gene arrays are not just for measuring gene expression.</a> Trends in Plant Science. 8, 413-416 (2003).</li><li>Hazen, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+array+mapping+of+circadian+clock+and+developmental+mutations+in+Arabidopsis.">Rapid array mapping of circadian clock and developmental mutations in Arabidopsis.</a> Plant Physiology. 138, 990-997 (2005).</li><li>Bentley, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+whole+human+genome+sequencing+using+reversible+terminator+chemistry.">Accurate whole human genome sequencing using reversible terminator chemistry.</a> Nature. 456, 53-59 (2008).</li><li>Weigel, D., Glazebrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis.">Arabidopsis.</a> A Laboratory Manual. , (2002).</li><li>Voelkerding, K. V., Dames, S., Durtschi, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next+generation+sequencing+for+clinical+diagnostics-principles+and+application+to+targeted+resequencing+for+hypertrophic+cardiomyopathy:+a+paper+from+the+2009+William+Beaumont+Hospital+Symposium+on+Molecular+Pathology.">Next generation sequencing for clinical diagnostics-principles and application to targeted resequencing for hypertrophic cardiomyopathy: a paper from the 2009 William Beaumont Hospital Symposium on Molecular Pathology.</a> J. Mol. Diagn. 12, 539-551 (2010).</li></ol>

ليس لدينا ما يكشف.

وصفها هنا لدينا متحد البؤر المجهري القائم على فحص لتحديد الطفرات endomembrane. ويمكن تمديد هذا النهج بسهولة إلى العضيات الأخرى في الخلية التي بعلامات محددة بروتين فلوري المتاحة. ويستند الشاشة على تحديد الطفرات التي تظهر توزيع الشاذة من علامة فلوري إما في العضية المستهدفة...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> Ethylmethane سلفونات </td><td> سيغما </td><td> M0880 </td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> JT بيكر </td><td> 3722-05 </td></tr><tr><td> Murashige سكوغ القاعدية المتوسطة ث gamborg الفيتامينات </td><td> النباتية التكنولوجيا laboratorie </td><td> M404 </td></tr><tr><td> Phytagel </td><td> سيغما </td><td> P8169-1Kg </td></tr><tr><td> RNeasy مصغرة عدة </td><td> QIAGEN </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> سيد ورقة نبات الحمض النووي محض تنقية عدة </td><td> Epicentre </td><td> MPP92100 </td></tr><tr><td> Bioprime نظام وضع العلامات الحمض النووي </td><td> إينفيتروجن </td><td> 18094-011 </td></tr><tr><td> الكحول 200 دليل </td><td> ديكان ابوراتوريز. </td><td> 2716 </td></tr><tr><td> NaOAc </td><td> JT بيكر </td><td></td></tr><tr><td> ATH1 الجينات رقاقة Arabidopsisالجينوم مجموعة </td><td> Affymetrix </td><td> 900385 </td></tr><tr><td> صقر أنابيب 50 مل </td><td> كورنينج </td><td> 430290 </td></tr><tr><td> إيبندورف أنابيب 1.5 مل </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مرشح ورقة 90mm </td><td> Whatman </td><td> 1001090 </td></tr><tr><td> ميزان تحليلي </td><td> Mettler توليدو AB54-S </td><td> NA </td></tr><tr><td> Nutating (موجة) شاكر </td><td> Heidolph polymax 1040 </td><td> NA </td></tr><tr><td> نبذ </td><td> إيبندورف 5417-R </td><td> NA </td></tr></tbody></table>

fluorescence-microscopy screening and next-generation sequencing: useful tools for the identification of genes involved in organelle integrity

هذا البروتوكول يصف مضان المجهر القائم على فحص الشتلات Arabidopsis ويصف كيفية تعيين الطفرات المتنحية التي تغير توزيع التحت خلوية من علامة محددة فلوري المفتاحية في مسار إفرازية. Arabidopsis هو نموذج قوي البيولوجية للدراسات الجينية بسبب حجم الجينوم، الوقت جيل، والمحافظة على الآليات الجزيئية بين الممالك. الصفيف التنميط الجيني كنهج لرسم خريطة للطفرة في بديل للطريقة التقليدية القائمة على المؤشرات الجزيئية هو مفيد لأنه هو أسرع نسبيا، ويمكن السماح لرسم الخرائط من المسوخ عدة في فترة زمنية قصيرة حقا. وتسمح هذه الطريقة في تحديد البروتينات التي يمكن أن تؤثر على سلامة أي عضية في النباتات. هنا، على سبيل المثال، فإننا نقترح على شاشة لخريطة الجينات مهمة لسلامة الشبكة الإندوبلازمية (أوروبا). نهجنا، ومع ذلك، يمكن أن تمتد بسهولة إلى غيرها من عضيات الخلية النباتية(انظر على سبيل المثال 1،2)، وهكذا يمثل خطوة هامة نحو فهم الأسس الجزيئية التي تنظم الهياكل التحت خلوية أخرى.

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence-microscopy Screening and Next-generation Sequencing: Useful Tools for the Identification of Genes Involved in Organelle Integrity at JoVE.com

Fluorescence-microscopy Screening and Next-generation Sequencing: Useful Tools for the Identification of Genes Involved in Organelle Integrity

والسعي أساسية في بيولوجيا الخلية هو تحديد الآليات التي تكمن وراء هوية العضيات التي تجعل الخلايا حقيقية النواة. هنا نقترح طريقة لتحديد الجينات المسؤولة عن سلامة المورفولوجية والوظيفية من العضيات النباتية باستخدام المجهر مضان والأدوات التسلسل من الجيل التالي.

مضان-المجهري الفحص والجيل القادم التسلسل الجيني: أدوات مفيدة لتحديد الجينات المسؤولة عن النزاهة العضيم

This protocol describes a fluorescence microscope-based screening of Arabidopsis seedlings and describes how to map recessive mutations that alter the ...

fluorescence-microscopy-screening-next-generation-sequencing-useful

Research

JoVE Journal

Biology

12.2K Views.  Michigan State University. والسعي أساسية في بيولوجيا الخلية هو تحديد الآليات التي تكمن وراء هوية العضيات التي تجعل الخلايا حقيقية النواة. هنا نقترح طريقة لتحديد الجينات المسؤولة عن سلامة المورفولوجية والوظيفية من العضيات النباتية باستخدام المجهر مضان والأدوات التسلسل من الجيل التالي.

Video: Fluorescence-microscopy Screening and Next-generation Sequencing: Useful Tools for the Identification of Genes Involved in Organelle Integrity

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and cellular content. Hallmark events of mitosis, such as chromosome movement, can be readily tracked on an individual cell basis using time-lapse fluorescence microscopy of mammalian cell lines expressing specific GFP-tagged proteins. In combination with RNAi-based depletion, this can be a powerful method for pinpointing the stage(s) of mitosis where defects occur after levels of a particular protein have been lowered. In this protocol, we present a basic method for assessing the effect of depleting a potential mitotic regulatory protein on the timing of mitosis. Cells are transfected with siRNA, placed in a stage-top incubation chamber, and imaged using an automated fluorescence microscope. We describe how to use software to set up a time-lapse experiment, how to process the image sequences to make either still-image montages or movies, and how to quantify and analyze the timing of mitotic stages using a cell-line expressing mCherry-tagged histone H2B. Finally, we discuss important considerations for designing a time-lapse experiment. This strategy is complementary to other approaches and offers the advantages of 1) sensitivity to changes in kinetics that might not be observed when looking at cells as a population and 2) analysis of mitosis without the need to synchronize the cell cycle using drug treatments. The visual information from such imaging experiments not only allows the sub-stages of mitosis to be assessed, but can also provide unexpected insight that would not be apparent from cell cycle analysis by FACS.

Here we describe a basic protocol to image and quantify the mitotic timing of live mammalian tissue culture cells after siRNA transfection.

الوقت الفاصل بين التصوير من الانقسام الميتوزي بعد ترنسفكأيشن سيرنا

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems including plants, invertebrates and vertebrates. There are various methods to achieve RNAi in vivo4,5. For example, the target gene may be transformed into an RNAi vector, and then either permanently or transiently transformed into cell lines or primary cells to achieve gene knockdown effects; alternatively synthesized double-strand oligonucleotides from specific target genes (RNAi oligos) may be transiently transformed into cell lines or primary cells to silence target genes; or synthesized double-strand RNA molecules may be microinjected into an organism. Since the nematode C. elegans uses bacteria as a food source, feeding the animals with bacteria expressing double-strand RNA against target genes provides a viable strategy6. Here we present an RNAi feeding method to score body size phenotype. Body size in C. elegans is regulated primarily by the TGF- &beta; - like ligand DBL-1, so this assay is appropriate for identification of TGF-&beta; signaling components7. We used different strains including two RNAi hypersensitive strains to repeat the RNAi feeding experiments. Our results showed that rrf-3 strain gave us the best expected RNAi phenotype. The method is easy to perform, reproducible, and easily quantified. Furthermore, our protocol minimizes the use of specialized equipment, so it is suitable for smaller laboratories or those at predominantly undergraduate institutions.

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

We demonstrate how to use the RNAi feeding technique to knock down target genes and score body size phenotype in C. elegans. This method could be used for a large scale screen to identify potential genetic components of interest, such as those involved in body size regulation by DBL-1/TGF-&beta; signaling.

باستخدام الحمض النووي الريبي التي تتوسط استراتيجية التغذية التدخل للكشف عن الجينات المسؤولة عن تنظيم حجم الجسم في نيماتودا<em&gt; C. ايليجانس</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...

Next-generation Sequencing of 16S Ribosomal RNA Gene Amplicons

One of the major questions in microbial ecology is &#8220;who is there?&#8221; This question can be answered using various tools, but one of the long-lasting gold standards is to sequence 16S ribosomal RNA (rRNA) gene amplicons generated by domain-level PCR reactions amplifying from genomic DNA. Traditionally, this was performed by cloning and Sanger (capillary electrophoresis) sequencing of PCR amplicons. The advent of next-generation sequencing has tremendously simplified and increased the sequencing depth for 16S rRNA gene sequencing. The introduction of benchtop sequencers now allows small labs to perform their 16S rRNA sequencing in-house in a matter of days. Here, an approach for 16S rRNA gene amplicon sequencing using a benchtop next-generation sequencer is detailed. The environmental DNA is first amplified by PCR using primers that contain sequencing adapters and barcodes. They are then coupled to spherical particles via emulsion PCR. The particles are loaded on a disposable chip and the chip is inserted in the sequencing machine after which the sequencing is performed. The sequences are retrieved in fastq format, filtered and the barcodes are used to establish the sample membership of the reads. The filtered and binned reads are then further analyzed using publically available tools. An example analysis where the reads were classified with a taxonomy-finding algorithm within the software package Mothur is given. The method outlined here is simple, inexpensive and straightforward and should help smaller labs to take advantage from the ongoing genomic revolution.

Characterizing microbial community has been a longstanding goal in environmental microbiology. Next-generation sequencing methods now allow for the characterization of microbial communities at an unprecedented depth with minimal cost and labor. We detail here our approach to sequence bacterial 16S ribosomal RNA genes using a benchtop sequencer.

الجيل المقبل من تسلسل خاص بالريبوسوم 16S RNA جين Amplicons

One of the major questions in microbial ecology is &#8220;who is there?&#8221; This question can be answered using various tools, but one of the ...

Targeted DNA Methylation Analysis by Next-generation Sequencing

The role of epigenetic processes in the control of gene expression has been known for a number of years. DNA methylation at cytosine residues is of particular interest for epigenetic studies as it has been demonstrated to be both a long lasting and a dynamic regulator of gene expression. Efforts to examine epigenetic changes in health and disease have been hindered by the lack of high-throughput, quantitatively accurate methods. With the advent and popularization of next-generation sequencing (NGS) technologies, these tools are now being applied to epigenomics in addition to existing genomic and transcriptomic methodologies. For epigenetic investigations of cytosine methylation where regions of interest, such as specific gene promoters or CpG islands, have been identified and there is a need to examine significant numbers of samples with high quantitative accuracy, we have developed a method called Bisulfite Amplicon Sequencing (BSAS). This method combines bisulfite conversion with targeted amplification of regions of interest, transposome-mediated library construction and benchtop NGS. BSAS offers a rapid and efficient method for analysis of up to 10 kb of targeted regions in up to 96 samples at a time that can be performed by most research groups with basic molecular biology skills. The results provide absolute quantitation of cytosine methylation with base specificity. BSAS can be applied to any genomic region from any DNA source. This method is useful for hypothesis testing studies of target regions of interest as well as confirmation of regions identified in genome-wide methylation analyses such as whole genome bisulfite sequencing, reduced representation bisulfite sequencing, and methylated DNA immunoprecipitation sequencing.

Bisulfite amplicon sequencing (BSAS) is a method for quantifying cytosine methylation in targeted genomic regions of interest. This method uses bisulfite conversion paired with PCR amplification of target regions prior to next-generation sequencing to produce absolute quantitation of DNA methylation at a base-specific level.

استهدفت DNA تحليل مثلأيشن من قبل الجيل المقبل من التسلسل

The role of epigenetic processes in the control of gene expression has been known for a number of years. DNA methylation at cytosine residues is of ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays focus on transcriptional regulation, being essentially aimed at the identification of promoter-targeting molecules. As a result, post-transcriptional mechanisms are largely uncovered by gene expression targeted drug development. Here we describe a cell-based assay aimed at investigating the role of the 3&#39; untranslated region (3&#8217; UTR) in the modulation of the fate of its mRNA, and at identifying compounds able to modify it. The assay is based on the use of a luciferase reporter construct containing the 3&#8217; UTR of a gene of interest stably integrated into a disease-relevant cell line. The protocol is divided into two parts, with the initial focus on the primary screening aimed at the identification of molecules affecting luciferase activity after 24 hr of treatment. The second part of the protocol describes the counter-screening necessary to discriminate compounds modulating luciferase activity specifically through the 3&#8217; UTR. In addition to the detailed protocol and representative results, we provide important considerations about the assay development and the validation of the hit(s) on the endogenous target. The described cell-based reporter gene assay will allow scientists to identify molecules modulating protein levels via post-transcriptional mechanisms dependent on a 3&#8217; UTR.

Here we describe a cell-based reporter gene assay as a valuable tool to screen chemical libraries for compounds modulating post-transcriptional control mechanisms exerted through 3&#8217; UTR.

الإنتاجية العالية للكشف عن المغيرون الكيميائية من الجينات المشاركة ما بعد transcriptionally الخاضعة للرقابة

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...

Amplification, Next-generation Sequencing, and Genomic DNA Mapping of Retroviral Integration Sites

Retroviruses exhibit signature integration preferences on both the local and global scales. Here, we present a detailed protocol for (1) generation of diverse libraries of retroviral integration sites using ligation-mediated PCR (LM-PCR) amplification and next-generation sequencing (NGS), (2) mapping the genomic location of each virus-host junction using BEDTools, and (3) analyzing the data for statistical relevance. Genomic DNA extracted from infected cells is fragmented by digestion with restriction enzymes or by sonication. After suitable DNA end-repair, double-stranded linkers are ligated onto the DNA ends, and semi-nested PCR is conducted using primers complementary to both the long terminal repeat (LTR) end of the virus and the ligated linker DNA. The PCR primers carry sequences required for DNA clustering during NGS, negating the requirement for separate adapter ligation. Quality control (QC) is conducted to assess DNA fragment size distribution and adapter DNA incorporation prior to NGS. Sequence output files are filtered for LTR-containing reads, and the sequences defining the LTR and the linker are cropped away. Trimmed host cell sequences are mapped to a reference genome using BLAT and are filtered for minimally 97% identity to a unique point in the reference genome. Unique integration sites are scrutinized for adjacent nucleotide (nt) sequence and distribution relative to various genomic features. Using this protocol, integration site libraries of high complexity can be constructed from genomic DNA in three days. The entire protocol that encompasses exogenous viral infection of susceptible tissue culture cells to integration site analysis can therefore be conducted in approximately one to two weeks. Recent applications of this technology pertain to longitudinal analysis of integration sites from HIV-infected patients.

We describe a protocol for amplifying retroviral integration sites from the genomic DNA of infected cells, sequencing the amplified virus-host junctions, and then mapping these sequences to a reference genome. We also describe techniques to quantify the distribution of integration sites relative to various genomic annotations using BEDTools.

التضخيم، الجيل التالي من التسلسل، والحمض النووي الجينوم رسم خرائط مواقع التكامل فيروسات الرجعية

Retroviruses exhibit signature integration preferences on both the local and global scales. Here, we present a detailed protocol for (1) generation of ...

Interactome-Seq: A Protocol for Domainome Library Construction, Validation and Selection by Phage Display and Next Generation Sequencing

Folding reporters are proteins with easily identifiable phenotypes, such as antibiotic resistance, whose folding and function is compromised when fused to poorly folding proteins or random open reading frames. We have developed a strategy where, by using TEM-1 &#946;-lactamase (the enzyme conferring ampicillin resistance) on a genomic scale, we can select collections of correctly folded protein domains from the coding portion of the DNA of any intronless genome. The protein fragments obtained by this approach, the so called &#34;domainome&#34;, will be well expressed and soluble, making them suitable for structural/functional studies.
By cloning and displaying the &#34;domainome&#34; directly in a phage display system, we have showed that it is possible to select specific protein domains with the desired binding properties (e.g., to other proteins or to antibodies), thus providing essential experimental information for gene annotation or antigen identification.
The identification of the most enriched clones in a selected polyclonal population can be achieved by using novel next-generation sequencing technologies (NGS). For these reasons, we introduce deep sequencing analysis of the library itself and the selection outputs to provide complete information on diversity, abundance and precise mapping of each of the selected fragment. The protocols presented here show the key steps for library construction, characterization, and validation.

The protocols described allow the construction, characterization and selection (against the target of choice) of a &#34;domainome&#34; library made from any DNA source. This is achieved by a research pipeline that combines different technologies: phage display, a folding reporter and next generation sequencing with a web tool for data analysis.

إينتيراكتومي--Seq: بروتوكول لبناء مكتبة دومينومي والتحقق منها واختيار عرض بالعاثية وتسلسل الجيل القادم

Folding reporters are proteins with easily identifiable phenotypes, such as antibiotic resistance, whose folding and function is compromised when fused to ...

Tick Microbiome Characterization by Next-Generation 16S rRNA Amplicon Sequencing

In recent decades, vector-borne diseases have re-emerged and expanded at alarming rates, causing considerable morbidity and mortality worldwide. Effective and widely available vaccines are lacking for a majority of these diseases, necessitating the development of novel disease mitigation strategies. To this end, a promising avenue of disease control involves targeting the vector microbiome, the community of microbes inhabiting the vector. The vector microbiome plays a pivotal role in pathogen dynamics, and manipulations of the microbiome have led to reduced vector abundance or pathogen transmission for a handful of vector-borne diseases. However, translating these findings into disease control applications requires a thorough understanding of vector microbial ecology, historically limited by insufficient technology in this field. The advent of next-generation sequencing approaches has enabled rapid, highly parallel sequencing of diverse microbial communities. Targeting the highly-conserved 16S rRNA gene has facilitated characterizations of microbes present within vectors under varying ecological and experimental conditions. This technique involves amplification of the 16S rRNA gene, sample barcoding via PCR, loading samples onto a flow cell for sequencing, and bioinformatics approaches to match sequence data with phylogenetic information. Species or genus-level identification for a high number of replicates can typically be achieved through this approach, thus circumventing challenges of low detection, resolution, and output from traditional culturing, microscopy, or histological staining techniques. Therefore, this method is well-suited for characterizing vector microbes under diverse conditions but cannot currently provide information on microbial function, location within the vector, or response to antibiotic treatment. Overall, 16S next-generation sequencing is a powerful technique for better understanding the identity and role of vector microbes in disease dynamics.

Here we present a next-generation sequencing protocol for 16S rRNA sequencing which enables identification and characterization of microbial communities within vectors. This method involves DNA extraction, amplification and barcoding of samples through PCR, sequencing on a flow-cell, and bioinformatics to match sequence data to phylogenetic information.

توصيف ميكروبيومي التجزئة بالتسلسل Amplicon الرنا الريباسي 16S الجيل المقبل

In recent decades, vector-borne diseases have re-emerged and expanded at alarming rates, causing considerable morbidity and mortality worldwide. Effective ...

Microbiota Analysis Using Two-step PCR and Next-generation 16S rRNA Gene Sequencing

The human gut is colonized by trillions of bacteria that support physiologic functions such as food metabolism, energy harvesting, and regulation of the immune system. Perturbation of the healthy gut microbiome has been suggested to play a role in the development of inflammatory diseases, including multiple sclerosis (MS). Environmental and genetic factors can influence the composition of the microbiome; therefore, identification of microbial communities linked with a disease phenotype has become the first step towards defining the microbiome&#8217;s role in health and disease. Use of 16S rRNA metagenomic sequencing for profiling bacterial community has helped in advancing microbiome research. Despite its wide use, there is no uniform protocol for 16S rRNA-based taxonomic profiling analysis. Another limitation is the low resolution of taxonomic assignment due to technical difficulties such as smaller sequencing reads, as well as use of only forward (R1) reads in the final analysis due to low quality of reverse (R2) reads. There is need for a simplified method with high resolution to characterize bacterial diversity in a given biospecimen. Advancements in sequencing technology with the ability to sequence longer reads at high resolution have helped to overcome some of these challenges. Present sequencing technology combined with a publicly available metagenomic analysis pipeline such as R-based Divisive Amplicon Denoising Algorithm-2 (DADA2) has helped advance microbial profiling at high resolution, as DADA2 can assign sequence at the genus and species levels. Described here is a guide for performing bacterial profiling using two-step amplification of the V3-V4 region of the 16S rRNA gene, followed by analysis using freely available analysis tools (i.e., DADA2, Phyloseq, and METAGENassist). It is believed that this simple and complete workflow will serve as an excellent tool for researchers interested in performing microbiome profiling studies.

Described here is a simplified standard operating procedure for microbiome profiling using 16S rRNA metagenomic sequencing and analysis using freely available tools. This protocol will help researchers who are new to the microbiome field as well as those requiring updates on methods to achieve bacterial profiling at a higher resolution.

تحليل الكائنات المجهرية باستخدام ثنائي الخطوة PCR والجيل التالي من 16S rRNA التسلسل الجيني

The human gut is colonized by trillions of bacteria that support physiologic functions such as food metabolism, energy harvesting, and regulation of the ...

A Magnetic-Bead-Based Mosquito DNA Extraction Protocol for Next-Generation Sequencing

A recently published DNA extraction protocol using magnetic beads and an automated DNA extraction instrument suggested that it is possible to extract high quality and quantity DNA from a well-preserved individual mosquito sufficient for downstream whole genome sequencing. However, reliance on an expensive automated DNA extraction instrument can be prohibitive for many laboratories. Here, the study provides a budget-friendly magnetic-bead-based DNA extraction protocol, which is suitable for low to medium throughput. The protocol described here was successfully tested using individual Aedes aegypti mosquito samples. The reduced costs associated with high quality DNA extraction will increase the application of high throughput sequencing to resource limited labs and studies.

Described here is a DNA extraction protocol using magnetic beads to produce high quality DNA extractions from mosquitoes. These extractions are suitable for a downstream next-generation sequencing approach.

بروتوكول استخراج الحمض النووي للبعوض القائم على الخرز المغناطيسي لتسلسل الجيل التالي

A recently published DNA extraction protocol using magnetic beads and an automated DNA extraction instrument suggested that it is possible to extract high ...