وأيد هذا البحث من قبل قوى الأمن الداخلي، NSF، وERC. نود أن نعترف مساعدة فنية مع المرحلة درجات الحرارة من ميلفورد راندي، كورين مايكل شيفر دوغ، وجيريمي دينيسون. وقدمت المساعدة مع تطوير البرمجيات من قبل تشن أو شو دي، Sannareddy راجيش، وBhattachary سوميت. نود أن نشكر لدينا المتعاونين البروفيسور بيتر ديفيس والدكتور L. لوري غراهام A. للبروتين IBP النائب والمناقشات مفيدة. نشكر أيضا أعضاء المختبر الدكتورة مايا بار دوليف، Yangzhong تشين الدكتور سيليك Yeliz الدكتور Pertaya ناتاليا، Mizrahy Ortal، وغاي شلوميت لردود الفعل المستخدم الخاصة بهم.

0. الإجراءات الأولية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الزجاج الشعرية للحقن الحل. باستخدام مجتذب الشعرية (Narishige، طوكيو، اليابان)، وإعداد ماصة حاد مع افتتاح غرامة من أنبوب زجاجي الدقيقة الشعرية (الاسم التجاري GMBH، فيرتهايم، ألمانيا). وينبغي التحقق من حجم الفتحة عن طريق تمرير الهواء من خلال الشعيرات الدموية للحصول على السطح الجميلة في المياه النظيفة. إذا تم إغلاق الشعرية، ثم يمكن للمرء أن فتحه عن طريق كسر حافتها. ويمكن تحقيق هذا عن طريق الضغط عليه برفق أو الخدش ضد الماء تحتوي على جدران الأنبوب. إعداد مثل هذه الشعرية التي يتم حظرها تقريبا افتتاح لكن فتح بما يكفي للسماح بتشكيل الفرعي ملليمتر الفقاعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> النحاس تنظيف القرص. يصوتن الأقراص النحاس لمدة 10 دقيقة في 0.1٪ مايكرو-90 الصابون (كول-Parmer، فيرنون هيلز، إلينوي، الولايات المتحدة الأمريكية)، ثم تغسل بالماء المقطر مزدوجة. إدخال أقراص إلى حل (التقنية) الأيزوبروبانول ويصوتن مرة أخرى لمدة 10 دقيقة. زعنفةحليف، تجف الأقراص باستخدام الهواء التي تمت تصفيتها. هذه المرحلة الحرجة التنظيف لتجنب تلوث IBP بين التجارب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد أعدت الجمعية مزدوج الطبقة ساترة. A الجمعية ساترة للسماح للمراقبة دون تكاثف الرطوبة عينة على غلاف سطح الزجاج. وقد تحقق ذلك من خلال وضع (WA هاموند Drierite، زينيا، أوهايو، الولايات المتحدة الأمريكية) Drierite الجسيمات (2 مليمتر في القطر) بين اثنين من coverslips التي تم لصقها ثم بمسدس الصمغ الحار. منع هذا التكوين التي يمكن أن تكثف منع الرأي عندما تم تبريد العينة إلى درجات حرارة منخفضة وإزالة الحاجة إلى ضربة الهواء الجاف على النافذة المراقبة. </li></ol> 1. مجموعة التبريد مرحلة المتابعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط مدخل ومخرج تدفق المياه من مرحلة التبريد إلى 4 مم القطر الداخلي Tygon أنابيب (سان جوبان، باريس، فرنسا)، وتوصيل أنبوب تدفق المياه مدخل إلى مضخة المياه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل 4 مم قطر داخلى Tygon أنبوب إلى مدخل للمرحلة التبريد رس تقديم الهواء الجاف. تم تجفيفها في الهواء باستخدام عمود Drierite في الخط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل مضخات الهواء والماء. علما أنه لا ينبغي أن عناصر التبريد تشغيل بدون بالوعة الحرارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل وحدة تحكم في درجة الحرارة، الكاميرا، والروتين ابفيف. </li></ol> 2. تحضير العينة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع قطرة 3-4 ميكرولتر من الغمر النفط B (Cargille المختبرات، بستان الارز، ولاية نيو جيرسي، الولايات المتحدة الأمريكية) على الجانب الخلفي من القرص القطر النحاس 7 مم وجود ثقوب 500 ميكرون من خلال حفر القرص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القرص النحاس على المسرح التبريد مع الجانب الغمر النفط إلى الأسفل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل أنبوب شعري (حافة حادة) إلى 0.7 مم قطر الأنبوب الداخلي Tygon متصلة في الطرف الآخر لحقنة 2 مل الزجاج (Poulten-غراف، فيرتهايم، ألمانيا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل استخدام الأنبوب الشعري، والتحقق من فتحة صغيرة من شعري لضمان أن فتح هو الحجم المناسب (انظر الإجراءات الأولية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج ببطء غلاSS الشعرية في أنبوب المعدة IBP عينة البروتين (2.4 ميكرومتر النائب IBP-GFP في 20 ملي CaCl 2 و 25 مم تريس حمض الهيدروكلوريك درجة الحموضة في-8، انظر المرجع 10 لتفاصيل الإعداد) وسحب الحقنة الزجاج حتى الزجاج الشعرية يحتوي على 0،1 ميكرولتر من محلول البروتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تسجيل الفيديو عن طريق برنامج ابفيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج حافة حادة من الزجاج الشعرية (التي تحتوي على البروتين الحل) في واحدة من الثقوب في القرص النحاس على المسرح التبريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع مراعاة من خلال المجهر (أوليمبوس، طوكيو، اليابان، الهدف 10X)، اختراق طبقة الزيت بعناية الغمر مع طرف زجاج الشعرية، ثم اضغط على حقنة زجاجية (بدقة جدا) لتقديم كمية صغيرة (~ 10 NL) من البروتين الحل هو إنشاء قطيرة ميكرومتر 200. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية فتحة في مرحلة التبريد مع الجمعية طبقة ساترة مزدوجة (راجع إجراءات أولية). </li></ol> 3. TH نشاط القياس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبلSS على زر التبريد وضبط درجة الحرارة إلى -40 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في البداية، سوف يكون واضحا حل الحبرية. في درجات حرارة منخفضة، وعادة في نطاق -30 ° C إلى -35 درجة مئوية، ويتغير لون الحبرية، تشير إلى أنه تم تجميد الحل. مباشرة بعد العينة جمدت، وزيادة درجة الحرارة ببطء حتى الجليد معظم يبدأ في الذوبان. وهناك زيادة تدريجية في درجة الحرارة اللازمة لتجنب المبالغة في درجة الحرارة يمكن أن يؤدي إلى ذوبان كامل للعينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل إلى الهدف 50X والبدء في إذابة الجليد عن طريق ضبط درجة الحرارة. هذا التعديل هو التفاعلية، وعادة ما يتم تنفيذ الخطوات النهائية باستخدام خطوات صغيرة في درجة الحرارة من درجة مئوية 0،002 تواصل تذوب حتى الكريستال واحد لا يزال قائما. ينبغي أن الحجم النهائي من الكريستال يكون حوالي 10 ميكرون. يتم تحديد أعلى درجة الحرارة التي تنصهر وتوقفت عن أن تكون نقطة ذوبان ويتم تحديد بدقة في المرحلة الفيديو تحليلها لاحقا. </li> &lt;تعيين لى&gt; درجة الحرارة إلى واحد بالمائة من عدد قليل درجة مئوية تحت درجة انصهار البلورة ويبدأ منحدر درجة الحرارة مع تأخير 10 دقيقة. ضبط معدل التعلية على النحو المرغوب فيه. خلال هذا الوقت، سوف يكون عرضة البلورة إلى IBPs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعند الانتهاء من وقت التعرض دقيقة 10، وسوف تنخفض درجة الحرارة تلقائيا تحت سيطرة الروتين ابفيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة على شكل الكريستال مع تناقص درجات الحرارة. في مرحلة ما، قد يكون لاحظ موجة مفاجئة من الكريستال الجليد. ويلاحظ درجة الحرارة التي يحدث هذا لأن البلورة درجة حرارة الانفجار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام تحليل الفيديو لتحديد درجة انصهار دقيقة ودرجة حرارة الانفجار. أولا، عن طريق استخدام تحليل الفيديو، والعثور على نقطة انصهار دقيقة. نذكر بأن يتم تحديد أعلى درجة الحرارة التي تنصهر وتوقفت عن أن تكون درجة انصهار. توثيق هذه المرحلة ذوبان في برنامج جدول بيانات. ثم، تحديد انفجار الكريستال دقيقة درجة الحرارة، وتوثيق هذه القيمةكذلك. الفرق بين درجة انصهار ودرجة التجمد، أو الكريستال درجة حرارة الاندفاع، هو النشاط التباطؤ الحراري من الحل IBP. </li></ol> 4. قياس نشاط TH المعتمدة على الزمن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع بروتوكول الموصوفة في أقسام لإعداد 3،1-3،3 الكريستال واحد من الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تشكيل الكريستال، وضبط الوقت تأخير المنحدر كما هو مطلوب، وبدوره على منحدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سوف تنخفض درجة الحرارة بمعدل ثابت (وفقا لمتطلبات المشغلين) تلقائيا بمجرد وقت التأخير قد مرت منحدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توثيق درجة الحرارة التي يحدث انفجار الكريستال. حساب زمن التعرض (الوقت بين تشكيل الكريستال والبلور انفجار). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار التجربة لمرات تأخير المختلفة ورسم النشاط TH بوصفها وظيفة من الوقت لتقييم التعرض الوقت في الاعتماد على النشاط TH. </li></ol>

<ol>
	<li>DeVries, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoproteins+as+biological+antifreeze+agents+in+antarctic+fishes.">Glycoproteins as biological antifreeze agents in antarctic fishes.</a> Science. 172, 1152-1155 (1971).</li><li>Worrall, D., Elias, L., Ashford, D., Smallwood, M., Sidebottom, C., Lillford, P., Telford, J., Holt, C., Bowles, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+carrot+leucine-rich-repeat+protein+that+inhibits+ice+recrystallization.">A carrot leucine-rich-repeat protein that inhibits ice recrystallization.</a> Science. 282, 115-117 (1998).</li><li>Raymond, J. A., Knight, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice+binding,+recrystallization+inhibition,+and+cryoprotective+properties+of+ice-active+substances+associated+with+Antarctic+sea+ice+diatoms.">Ice binding, recrystallization inhibition, and cryoprotective properties of ice-active substances associated with Antarctic sea ice diatoms.</a> Cryobiology. 46, 174-181 (2003).</li><li>Tomchaney, A. P., Morris, J. P., Kang, S. H., Duman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification,+composition,+and+physical+properties+of+a+thermal+hysteresis+"antifreeze"+protein+from+larvae+of+the+beetle,+Tenebrio+molitor.">Purification, composition, and physical properties of a thermal hysteresis "antifreeze" protein from larvae of the beetle, Tenebrio molitor.</a> Biochemistry. 21, 716-721 (1982).</li><li>Kiko, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+freeze+protection+in+a+sea-ice+crustacean+through+horizontal+gene+transfer.">Acquisition of freeze protection in a sea-ice crustacean through horizontal gene transfer.</a> Polar Biology. 33, 543-556 (2010).</li><li>Robinson, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold+adaptation+in+Arctic+and+Antarctic+fungi.">Cold adaptation in Arctic and Antarctic fungi.</a> New Phytol. 151, 341-353 (2001).</li><li>Gilbert, J. A., Hill, P. J., Dodd, C. E., Laybourn-Parry, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+antifreeze+protein+activity+in+Antarctic+lake+bacteria.">Demonstration of antifreeze protein activity in Antarctic lake bacteria.</a> Microbiology. 150, 171-180 (2004).</li><li>Raymond, J. A., DeVries, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adsorption+inhibition+as+a+mechanism+of+freezing+resistance+in+polar+fishes.">Adsorption inhibition as a mechanism of freezing resistance in polar fishes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 74, 2589-2593 (1977).</li><li>Pertaya, N., Marshall, C. B., DiPrinzio, C. L., Wilen, L., Thomson, E. S., Wettlaufer, J. S., Davies, P. L., Braslavsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+microscopy+evidence+for+quasi-permanent+attachment+of+antifreeze+proteins+to+ice+surfaces.">Fluorescence microscopy evidence for quasi-permanent attachment of antifreeze proteins to ice surfaces.</a> Biophys. J. 92, 3663-3673 (2007).</li><li>Celik, Y., Graham, L. A., Mok, Y. F., Bar, M., Davies, P. L., Braslavsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superheating+of+ice+crystals+in+antifreeze+protein+solutions.">Superheating of ice crystals in antifreeze protein solutions.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 5423-5428 (2010).</li><li>Gilbard, J. P., Farris, R. L., Santamaria, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmolarity+of+tear+microvolumes+in+keratoconjunctivitis+sicca.">Osmolarity of tear microvolumes in keratoconjunctivitis sicca.</a> Arch. Ophthalmol. 96, 677-681 (1978).</li><li>Gilbert, J. A., Davies, P. L., Laybourn-Parry, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hyperactive,+Ca2+-dependent+antifreeze+protein+in+an+Antarctic+bacterium.">A hyperactive, Ca2+-dependent antifreeze protein in an Antarctic bacterium.</a> FEMS Microbiol. Lett. 245, 67-72 (2005).</li><li>Soriano, J., Braslavsky, I., Xu, D., Krichevsky, O., Stavans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universality+of+persistence+exponents+in+two-dimensional+ostwald+ripening.">Universality of persistence exponents in two-dimensional ostwald ripening.</a> Phys. Rev. Lett. 103, (2009).</li><li>Tomczak, M. M., Marshall, C. B., Gilbert, J. A., Davies, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+facile+method+for+determining+ice+recrystallization+inhibition+by+antifreeze+proteins.">A facile method for determining ice recrystallization inhibition by antifreeze proteins.</a> Biochem. Bioph. Res. Co. 311, 1041-1046 (2003).</li><li>Knight, C. A., Hallett, J., Devries, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solute+Effects+on+Ice+Recrystallization+-+an+Assessment+Technique.">Solute Effects on Ice Recrystallization - an Assessment Technique.</a> Cryobiology. 25, 55-60 (1988).</li><li>Celik, Y., Drori, R., Pertaya-Braun, N., Altan, A., Barton, T., Bar-Dolev, M., Groisman, A., Davies, P. L., Braslavsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+experiments+reveal+that+antifreeze+proteins+bound+to+ice+crystals+suffice+to+prevent+their+growth.">Microfluidic experiments reveal that antifreeze proteins bound to ice crystals suffice to prevent their growth.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 1309-1314 (2013).</li><li>Middleton, A. J., Marshall, C. B., Faucher, F., Bar-Dolev, M., Braslavsky, I., Campbell, R. L., Walker, V. K., Davies, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifreeze+protein+from+freeze-tolerant+grass+has+a+beta-roll+fold+with+an+irregularly+structured+ice-binding+site.">Antifreeze protein from freeze-tolerant grass has a beta-roll fold with an irregularly structured ice-binding site.</a> J. Mol. Biol. 416, 713-724 (2012).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

هذا العمل يدل على تشغيل مقياس التناضح نانولتر الكمبيوتر التي تسيطر عليها تمكن قياسات دقيقة من النشاط TH مع التحكم في درجة الحرارة غير عادية. في أي نظام حساسة للحرارة، لا بد من تجنب التدرجات درجة الحرارة غير المرغوب فيها. لتجنب درجات الحرارة التدرجات في الجهاز المعروضة هنا، لا بد من وضع حل لقطيرة الاختبار في وسط حفرة في مرحلة التبريد النحاس القرص (الخطوة 2.7). بالإضافة إلى ذلك، ينبغي أن تكون واحدة الكريستال في وسط قطرات بدلا من قرب حواف (في معظم الحالات، وهذا لن يحدث تلقائيا). الاعتماد الوقت وصف يشير إلى أن معدل التبريد قد تؤثر على قراءات TH. وهكذا، فإننا نقترح بما في ذلك تقرير الزمنية التي تعرضت لها الكريستال في حل قبل التبريد، وكذلك معدل التبريد. انتظرنا عادة 10 دقيقة قبل التعلية بانخفاض درجة الحرارة عند 0.01 ° C الخطوات في كل ثانية 4. المشارك ابفيف التي تسيطر عليهاوقد تم تكييف المرحلة أولينغ للاستخدام مع مجهر مقلوب على الأجهزة التي يمكن التلاعب بها ميكروفلويديك حراريا. هذا النظام يسهل أداء التجارب التي تنطوي على تبادل حل بلورات الثلج وIBPs ذات الكلمات الدلالية مع EGFP 9 و 10 و 16. ويمكن تكييف نظام ابفيف التي تسيطر عليها إلى مرحلة كليفتون من خلال ربط تحكم في درجة الحرارة عن طريق الدائرة 3040 عين الكهربائية التكيف. ويتم تشغيل هذا النظام في المختبر ديفيز 17. البرنامج ابفيف والتكيف المعينة تصميم الدوائر الكهربائية للمرحلة كليفتون متاحة عند الطلب. وفي الختام، فإننا وصف مقياس التناضح نانولتر تسهل السيطرة الحساسة والتلاعب في درجة الحرارة ومعدل ارتفاع درجة الحرارة وانخفاض (مع حساسية 0،002 C °)، بتنسيق مع واجهة الفيديو من خلال روتين ابفيف في الوقت الحقيقي التحليل. يمكن هذا النظام أداء استنساخه معدل تسيطر التجارب التي مهمر عن التحقيق في حركية التفاعلات IBP مع الجليد. يمكن معالجة العديد من هذه التجارب الطويلة من الجدل القضايا المحيطة آلية عمل IBPs.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم </td><td> شركة </td><td> العدد الإجمالي / نموذج </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الغمر النفط نوع B </td><td> Cargille المختبرات </td><td> 16484 </td><td></td></tr><tr><td> Drierite </td><td> WA هاموند Drierite </td><td> 043063 2270g </td><td></td></tr><tr><td> الدقيقة 90 محلول التنظيف </td><td> كول-Parmer </td><td> <a href="http://www.coleparmer.com/Product/Cole_Parmer_small_sup_reg_sup_small_Micro_90_small_sup_reg_sup_small_cleaning_solution_case_of_four_4_Liter_bottles/EW-18100-11" target="_blank">EW-18100-11</a> </td><td></td></tr><tr><td> الشعرية مجتذب </td><td> Narishige </td><td> PB-7 </td><td></td></tr><tr><td> أنابيب زجاجية الشعرية </td><td> العلامة التجارية GNBH </td><td> 7493 21 </td><td> 75 مم طويلة، 1.15 قطر </td></tr><tr><td> درجة الحرارةمراقب </td><td> نيوبورت، إرفين، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> نموذج 3040 </td><td> نموذج 3040 </td></tr><tr><td> ضوء المجهر </td><td> OLYMPUS </td><td> نموذج BH2 </td><td></td></tr><tr><td> 10X الهدف </td><td> OLYMPUS </td><td></td><td> S خطة 10، 0.3، 160/0.17 </td></tr><tr><td> 50X الهدف </td><td> نيكون </td><td></td><td> CF الخطة، 50X/0.55 EPI ELWD </td></tr><tr><td> CCD كاميرا </td><td> Provideo </td><td> CVC-140 </td><td></td></tr><tr><td> أنابيب Tygon </td><td> سان جوبان، باريس، فرنسا </td><td></td><td> Tygon صياغة S-50-HL الأنابيب </td></tr><tr><td> الزجاج حقنة (2 مل) </td><td> Poulten-غراف، فيرتهايم، ألمانيا </td><td> 7 10227 </td><td></td></tr><tr><td> GPIB-PCI بطاقة </td><td> الصكوك الوطنية، أوستن، تكساس، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 778032-01 </td><td></td></tr><tr><td> فيديو الإطار جراbber IMAQ-PCI-1407 </td><td> الصكوك الوطنية، أوستن، تكساس، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 322156B-01 </td><td></td></tr><tr><td> ابفيف برمجيات تصميم نظام </td><td> الصكوك الوطنية، أوستن، تكساس، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> الإصدار 8 </td><td></td></tr><tr><td> الافلام الكاتب البرمجيات </td><td> الافلام LLC، سان دييغو، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

labview-operated novel nanoliter osmometer for ice binding protein investigations

Ice-binding proteins (IBPs), including antifreeze proteins, ice structuring proteins, thermal hysteresis proteins, and ice recrystallization inhibition proteins, are found in cold-adapted organisms and protect them from freeze injuries by interacting with ice crystals. IBPs are found in a variety of organism, including fish1, plants2, 3, arthropods4, 5, fungi6, and bacteria7. IBPs adsorb to the surfaces of ice crystals and prevent water molecules from joining the ice lattice at the IBP adsorption location. Ice that grows on the crystal surface between the adsorbed IBPs develops a high curvature that lowers the temperature at which the ice crystals grow, a phenomenon referred to as the Gibbs-Thomson effect. This depression creates a gap (thermal hysteresis, TH) between the melting point and the nonequilibrium freezing point, within which ice growth is arrested8-10, see Figure 1. One of the main tools used in IBP research is the nanoliter osmometer, which facilitates measurements of the TH activities of IBP solutions. Nanoliter osmometers, such as the Clifton instrument (Clifton Technical Physics, Hartford, NY,) and Otago instrument (Otago Osmometers, Dunedin, New Zealand), were designed to measure the osmolarity of a solution by measuring the melting point depression of droplets with nanoliter volumes. These devices were used to measure the osmolarities of biological samples, such as tears11, and were found to be useful in IBP research. Manual control over these nanoliter osmometers limited the experimental possibilities. Temperature rate changes could not be controlled reliably, the temperature range of the Clifton instrument was limited to 4,000 mOsmol (about -7.5 &deg;C), and temperature recordings as a function of time were not an available option for these instruments.
We designed a custom-made computer-controlled nanoliter osmometer system using a LabVIEW platform (National Instruments). The cold stage, described previously9, 10, contains a metal block through which water circulates, thereby functioning as a heat sink, see Figure 2. Attached to this block are thermoelectric coolers that may be driven using a commercial temperature controller that can be controlled via LabVIEW modules, see Figure 3. Further details are provided below. The major advantage of this system is its sensitive temperature control, see Figure 4. Automated temperature control permits the coordination of a fixed temperature ramp with a video microscopy output containing additional experimental details.
To study the time dependence of the TH activity, we tested a 58 kDa hyperactive IBP from the Antarctic bacterium Marinomonas primoryensis (MpIBP)12. This protein was tagged with enhanced green fluorescence proteins (eGFP) in a construct developed by Peter Davies' group (Queens University)10. We showed that the temperature change profile affected the TH activity. Excellent control over the temperature profile in these experiments significantly improved the TH measurements. The nanoliter osmometer additionally allowed us to test the recrystallization inhibition of IBPs5, 13. In general, recrystallization is a phenomenon in which large crystals grow larger at the expense of small crystals. IBPs efficiently inhibit recrystallization, even at low concentrations14, 15. We used our LabVIEW-controlled osmometer to quantitatively follow the recrystallization of ice and to enforce a constant ice fraction using simultaneous real-time video analysis of the images and temperature feedback from the sample chamber13. The real-time calculations offer additional control options during an experimental procedure. A stage for an inverted microscope was developed to accommodate temperature-controlled microfluidic devices, which will be described elsewhere16.
The Cold Stage System
The cold stage assembly (Figure 2) consists of a set of thermoelectric coolers that cool a copper plate. Heat is removed from the stage by flowing cold water through a closed compartment under the thermoelectric coolers. A 4 mm diameter hole in the middle of the copper plate serves as a viewing window. A 1 mm diameter in-plane hole was drilled to fit the thermistor. A custom-made copper disc (7 mm in diameter) with several holes (500 &mu;m in diameter) was placed on the copper plate and aligned with the viewing window. Air was pumped at a flow rate of 35 ml/sec and dried using Drierite (W.A. Hammond). The dry air was used to ensure a dry environment at the cooling stage. The stage was connected via a 9 pin connection outlet to a temperature controller (Model 3040 or 3150, Newport Corporation, Irvine, California, US). The temperature controller was connected via a cable to a computer GPIB-PCI card (National instruments, Austin, Texas, USA).

قياس الوقت TH الاعتماد ومقياس التناضح نانولتر ابفيف تعمل على تسهيل أداء قياسات دقيقة النشاط TH. يسمح بتخفيض درجة حرارة ثابتة معدل قياس الوقت TH الاعتماد. كان التحكم في درجة الحرارة دقيقة مكنت من مقياس التناضح نانولتر حاسم لهذه التجارب. ويعرف الوقت من التعرض بلورة الثلج على IBPs في حل والفترة الزمنية من تشكيل الكريستال (نهاية عملية الذوبان) حتى النمو المفاجئ من الثلج في جميع أنحاء الكريستال (كريستال انفجار). وجدنا أن الوقت التعرض للبلورات الثلج على IBPs يؤثر بشكل حاسم على النشاط TH. أنتجت فترات قصيرة من التعرض IBP (بضع ثوان) نشاط TH منخفضة في حل IBP-GFP النائب (2.4 ميكرومتر) (الشكل 5). النشاط TH زيادة مع مرور الوقت تعرض IBP حتى وصلت إلى الهضبة في 4 دقائق IBP التعرض. بتركيزات أعلى IBP، لوحةوتم التوصل الاتحاد الافريقي في أقصر الأوقات. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4189/4189fig1.jpg" /> الشكل 1. رسم تخطيطي يوضح IBPs كثف إلى الجليد. اعتمد بإذن من 10. <img alt="الشكل 2" fo:src="/files/ftp_upload/4189/4189fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4189/4189fig2.jpg" /> الشكل 2. المرحلة التبريد. A) متصلة على أنابيب المجهر. B) بدون الرصاص العليا. C) رسم تخطيطي. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4189/4189fig2large.jpg" target="_blank"> </a><img alt="الشكل 3" src="/files/ftp_upload/4189/4189fig3.jpg" /> الشكل 3. لقطة من واجهة ابفيف. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4189/4189fig3large.jpg" target="_blank">الكلورين</a>إك هنا لمشاهدتها بشكل اكبر الرقم. <img alt="الشكل 4" fo:src="/files/ftp_upload/4189/4189fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4189/4189fig4.jpg" /> الشكل 4. درجة الحرارة الرسم البياني الاستقرار. تم تعيين تحكم في درجة الحرارة لخفض درجة حرارة 0.01 ° C كل ثانية 15. <img alt="الشكل 5" fo:src="/files/ftp_upload/4189/4189fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4189/4189fig5.jpg" /> الشكل 5. النائب النشاط TH IBP بوصفها وظيفة من الكريستال الجليد الوقت التعرض لIBPs. كل نقطة هو متوسط ​​الوقت من 3-6 التجارب.

Watch this Scientific Journal Video about LabVIEW-operated Novel Nanoliter Osmometer for Ice Binding Protein Investigations at JoVE.com

LabVIEW-operated Novel Nanoliter Osmometer for Ice Binding Protein Investigations

البروتينات ملزمة الجليد (IBPs)، المعروف أيضا باسم البروتينات التجمد، وتمنع نمو الجليد واعدة هي المضافة لاستخدامها في الحفظ بالتبريد من الأنسجة. الأداة الرئيسية المستخدمة لتحقيق IBPs هو مقياس التناضح نانولتر. وضعنا منزل التصميم مرحلة التبريد التي شنت على المجهر الضوئي والتحكم باستخدام روتين ابفيف مبنية خصيصا. وصف مقياس التناضح نانولتر هنا التلاعب درجة حرارة العينة بطريقة فائقة الحساسية.

ابفيف تعمل مقياس التناضح نانولتر رواية للتحقيقات الجليد بروتين ملزمة

Ice-binding proteins (IBPs), including antifreeze proteins, ice structuring proteins, thermal hysteresis proteins, and ice recrystallization inhibition ...

labview-operated-novel-nanoliter-osmometer-for-ice-binding-protein

Research

JoVE Journal

Chemistry

20.3K Views.  The Hebrew University of Jerusalem. البروتينات ملزمة الجليد (IBPs)، المعروف أيضا باسم البروتينات التجمد، وتمنع نمو الجليد واعدة هي المضافة لاستخدامها في الحفظ بالتبريد من الأنسجة. الأداة الرئيسية المستخدمة لتحقيق IBPs هو مقياس التناضح نانولتر. وضعنا منزل التصميم مرحلة التبريد التي شنت على المجهر ال?...

Video: LabVIEW-operated Novel Nanoliter Osmometer for Ice Binding Protein Investigations

Surface Passivation for Single-molecule Protein Studies

Single-molecule fluorescence spectroscopy has proven to be instrumental in understanding a wide range of biological phenomena at the nanoscale. Important examples of what this technique can yield to biological sciences are the mechanistic insights on protein-protein and protein-nucleic acid interactions. When interactions of proteins are probed at the single-molecule level, the proteins or their substrates are often immobilized on a glass surface, which allows for a long-term observation. This immobilization scheme may introduce unwanted surface artifacts. Therefore, it is essential to passivate the glass surface to make it inert. Surface coating using polyethylene glycol (PEG) stands out for its high performance in preventing proteins from non-specifically interacting with a glass surface. However, the polymer coating procedure is difficult, due to the complication arising from a series of surface treatments and the stringent requirement that a surface needs to be free of any fluorescent molecules at the end of the procedure. Here, we provide a robust protocol with step-by-step instructions. It covers surface cleaning including piranha etching, surface functionalization with amine groups, and finally PEG coating. To obtain a high density of a PEG layer, we introduce a new strategy of treating the surface with PEG molecules over two rounds, which remarkably improves the quality of passivation. We provide representative results as well as practical advice for each critical step so that anyone can achieve the high quality surface passivation.

We describe a method for passivating a glass surface using polyethylene glycol (PEG). This protocol covers surface cleaning, surface functionalization, and PEG coating. We introduce a new strategy for treating the surface with PEG molecules over two rounds, which yields superior quality of passivation compared to existing methods.

التخميل السطح للدراسات البروتين جزيء واحدة

Single-molecule fluorescence spectroscopy has proven to be instrumental in understanding a wide range of biological phenomena at the nanoscale. Important ...

Covalent Binding of BMP-2 on Surfaces Using a Self-assembled Monolayer Approach

Bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) is a growth factor embedded in the extracellular matrix of bone tissue. BMP-2 acts as trigger of mesenchymal cell differentiation into osteoblasts, thus stimulating healing and de novo bone formation. The clinical use of recombinant human BMP-2 (rhBMP-2) in conjunction with scaffolds has raised recent controversies, based on the mode of presentation and the amount to be delivered. The protocol presented here provides a simple and efficient way to deliver BMP-2 for in vitro studies on cells. We describe how to form a self-assembled monolayer consisting of a heterobifunctional linker, and show the subsequent binding step to obtain covalent immobilization of rhBMP-2. With this approach it is possible to achieve a sustained presentation of BMP-2 while maintaining the biological activity of the protein. In fact, the surface immobilization of BMP-2 allows targeted investigations by preventing unspecific adsorption, while reducing the amount of growth factor and, most notably, hindering uncontrolled release from the surface. Both short- and long-term signaling events triggered by BMP-2 are taking place when cells are exposed to surfaces presenting covalently immobilized rhBMP-2, making this approach suitable for in vitro studies on cell responses to BMP-2 stimulation.

We describe a method for accomplishing efficient immobilization of BMP-2 on surfaces. Our approach is based on the formation of a self-assembled monolayer to achieve the covalent binding of BMP-2 via its free amine residues. This method is a useful tool to study signaling at the cell membrane.

التساهمية تجليد BMP-2 على السطوح باستخدام نهج أحادي الطبقة تجميعها الذاتي

Bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) is a growth factor embedded in the extracellular matrix of bone tissue. BMP-2 acts as trigger of mesenchymal cell ...

Determining the Ice-binding Planes of Antifreeze Proteins by Fluorescence-based Ice Plane Affinity

Antifreeze proteins (AFPs) are expressed in a variety of cold-hardy organisms to prevent or slow internal ice growth. AFPs bind to specific planes of ice through their ice-binding surfaces. Fluorescence-based ice plane affinity (FIPA) analysis is a modified technique used to determine the ice planes to which the AFPs bind. FIPA is based on the original ice-etching method for determining AFP-bound ice-planes. It produces clearer images in a shortened experimental time. In FIPA analysis, AFPs are fluorescently labeled with a chimeric tag or a covalent dye then slowly incorporated into a macroscopic single ice crystal, which has been preformed into a hemisphere and oriented to determine the a- and c-axes. The AFP-bound ice hemisphere is imaged under UV light to visualize AFP-bound planes using filters to block out nonspecific light. Fluorescent labeling of the AFPs allows real-time monitoring of AFP adsorption into ice. The labels have been found not to influence the planes to which AFPs bind. FIPA analysis also introduces the option to bind more than one differently tagged AFP on the same single ice crystal to help differentiate their binding planes. These applications of FIPA are helping to advance our understanding of how AFPs bind to ice to halt its growth and why many AFP-producing organisms express multiple AFP isoforms.

Antifreeze proteins (AFPs) bind to specific planes of ice to prevent or slow ice growth. Fluorescence-based ice plane affinity (FIPA) analysis is a modification of the original ice-etching method for determination of AFP-bound ice planes. AFPs are fluorescently labeled, incorporated into macroscopic single ice crystals, and visualized under UV light.

تحديد الطائرات الملزمة للجليد من البروتينات المضادة للتجمد من قبل تقارب طائرة الجليد القائم على الفلورسينس

Antifreeze proteins (AFPs) are expressed in a variety of cold-hardy organisms to prevent or slow internal ice growth. AFPs bind to specific planes of ice ...

Bio-layer Interferometry for Measuring Kinetics of Protein-protein Interactions and Allosteric Ligand Effects

We describe the use of Bio-layer Interferometry to study inhibitory interactions of subunit &#949;&#160;with the catalytic complex of Escherichia coli&#160;ATP synthase. Bacterial F-type ATP synthase is the target of a new, FDA-approved antibiotic to combat drug-resistant tuberculosis. Understanding bacteria-specific auto-inhibition of ATP synthase by the C-terminal domain of subunit &#949;&#160;could provide a new means to target the enzyme for discovery of antibacterial drugs. The C-terminal domain of &#949;&#160;undergoes a dramatic conformational change when the enzyme transitions between the active and inactive states, and catalytic-site ligands can influence which of &#949;&#39;s conformations is predominant. The assay measures kinetics of &#949;&#39;s binding/dissociation with the catalytic complex, and indirectly measures the shift of enzyme-bound &#949;&#160;to and from the apparently nondissociable inhibitory conformation. The Bio-layer Interferometry signal is not overly sensitive to solution composition, so it can also be used to monitor allosteric effects of catalytic-site ligands on &#949;&#39;s conformational changes.

The protocols here describe kinetic assays of protein-protein interactions with Bio-layer Interferometry. F-type ATP synthase, which is involved in cellular energy metabolism, can be inhibited by its &#949; subunit in bacteria. We have adapted Bio-layer Interferometry to study interactions of the catalytic complex with &#949;&#8217;s inhibitory C-terminal domain.

التداخل الحيوي طبقة لقياس حركية البروتين البروتين التفاعلات والآثار تفارغي يجند

We describe the use of Bio-layer Interferometry to study inhibitory interactions of subunit &#949;&#160;with the catalytic complex of Escherichia ...

Iridium(III) Luminescent Probe for Detection of the Malarial Protein Biomarker Histidine Rich Protein-II

This work outlines the synthesis of a non-emissive, cyclometalated Ir(III) complex, Ir(ppy)2(H2O)2+ (Ir1), which elicits a rapid, long-lived phosphorescent signal when coordinated to a histidine-containing protein immobilized on the surface of a magnetic particle. Synthesis of Ir1, in high yields,is complete O/N&#160;and involves splitting of the parent cyclometalated Ir(III) chloro-bridged dimer into two equivalents of the solvated complex. To confirm specificity, several amino acids were probed for coordination activity when added to the synthesized probe, and only histidine elicited a signal response. Using BNT-II, a branched peptide mimic of the malarial biomarker Histidine Rich Protein II (pfHRP-II), the iridium probe was validated as a tool for HRP-II detection. Quenching effects were noted in the BNT-II/Ir1 titration when compared to L-Histidine/Ir1, but these were attributed to steric hindrance and triplet state quenching. Biolayer interferometry was used to determine real-time kinetics of interaction of Ir1 with BNT-II. Once the system was optimized, the limit of detection of rcHRP-II using the probe was found to be 12.8 nM in solution. When this protein was immobilized on the surface of a 50 &#181;m magnetic agarose particle, the limit of detection was 14.5 nM. The robust signal response of this inorganic probe, as well as its flexibility of use in solution or immobilized on a surface, can lend itself toward a variety of applications, from diagnostic use to imaging.

IridiumIII Luminescent Probe for Detection of the Malarial Protein Biomarker Histidine Rich Protein-II

Robust detection reagents are of increasing necessity for developing new malaria diagnostic tools. An iridium(III) probe was designed that emits long-lasting luminescent signal in the presence of a histidine-rich malarial protein biomarker. Detection of the protein either in solution or immobilized on a magnetic particle affords flexibility in application.

الايريديوم (III) الفلورسنت التحقيق للكشف عن البروتين ملاريا العلامات البيولوجية الحامض الأميني ريتش بروتين-II

This work outlines the synthesis of a non-emissive, cyclometalated Ir(III) complex, Ir(ppy)2(H2O)2+ (Ir1), which elicits a rapid, long-lived ...

Water in Oil Emulsions: A New System for Assembling Water-soluble Chlorophyll-binding Proteins with Hydrophobic Pigments

Chlorophylls (Chls) and bacteriochlorophylls (BChls) are the primary cofactors that carry out photosynthetic light harvesting and electron transport. Their functionality critically depends on their specific organization within large and elaborate multisubunit transmembrane protein complexes. In order to understand at the molecular level how these complexes facilitate solar energy conversion, it is essential to understand protein-pigment, and pigment-pigment interactions, and their effect on excited dynamics. One way of gaining such understanding is by constructing and studying complexes of Chls with simple water-soluble recombinant proteins. However, incorporating the lipophilic Chls and BChls into water-soluble proteins is difficult. Moreover, there is no general method, which could be used for assembly of water-soluble proteins with hydrophobic pigments. Here, we demonstrate a simple and high throughput system based on water-in-oil emulsions, which enables assembly of water-soluble proteins with hydrophobic Chls. The new method was validated by assembling recombinant versions of the water-soluble chlorophyll binding protein of Brassicaceae plants (WSCP) with Chl a. We demonstrate the successful assembly of Chl a using crude lysates of WSCP expressing E. coli cell, which may be used for developing a genetic screen system for novel water-soluble Chl-binding proteins, and for studies of Chl-protein interactions and assembly processes.

This manuscript describes a simple and high-throughput method for assembling water-soluble proteins with hydrophobic pigments that is based on water-in-oil emulsions. We demonstrate the effectiveness of the method in the assembly of native chlorophylls with four variants of recombinant water-soluble-chlorophyll binding proteins (WSCPs) of Brassica plants expressed in E. coli.

الماء في مستحلب النفط: نظام جديد لتجميع البروتينات ملزم الكلوروفيل المياه القابلة للذوبان مع أصباغ مسعور

Chlorophylls (Chls) and bacteriochlorophylls (BChls) are the primary cofactors that carry out photosynthetic light harvesting and electron transport. ...

An ELISA Based Binding and Competition Method to Rapidly Determine Ligand-receptor Interactions

A comprehensive understanding of signaling pathways requires detailed knowledge regarding ligand-receptor interaction. This article describes two fast and reliable point-by-point protocols of enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the investigation of ligand-receptor interactions: the direct ligand-receptor interaction assay (LRA) and the competition LRA. As a case study, the ELISA based analysis of the interaction between different lambda interferons (IFNLs) and the alpha subunit of their receptor (IL28RA) is presented: the direct LRA is used for the determination of dissociation constants (KD values) between receptor and IFN ligands, and the competition LRA for the determination of the inhibitory capacity of an oligopeptide, which was designed to compete with the IFNLs at their receptor binding site. Analytical steps to estimate KD and half maximal inhibitory concentration (IC50) values are described. Finally, the discussion highlights advantages and disadvantages of the presented method and how the results enable a better molecular understanding of ligand-receptor interactions.

The presented protocols describe two enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based techniques for the rapid investigation of ligand-receptor interactions: The first assay allows the determination of dissociation constant between ligand and receptor. The second assay enables a rapid screening of blocking peptides for ligand-receptor interactions.

إليسا القائم وتجليد وأسلوب المنافسة لتحديد بسرعة التفاعلات يجند مستقبلات

A comprehensive understanding of signaling pathways requires detailed knowledge regarding ligand-receptor interaction. This article describes two fast and ...

CN-GELFrEE - Clear Native Gel-eluted Liquid Fraction Entrapment Electrophoresis

Protein complexes perform an array of crucial cellular functions. Elucidating their non-covalent interactions and dynamics is paramount for understanding the role of complexes in biological systems. While the direct characterization of biomolecular assemblies has become increasingly important in recent years, native fractionation techniques that are compatible with downstream analysis techniques, including mass spectrometry, are necessary to further expand these studies. Nevertheless, the field lacks a high-throughput, wide-range, high-recovery separation method for native protein assemblies. Here, we present clear native gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis (CN-GELFrEE), which is a novel separation modality for non-covalent protein assemblies. CN-GELFrEE separation performance was demonstrated by fractionating complexes extracted from mouse heart. Fractions were collected over 2 hr and displayed discrete bands ranging from ~30 to 500 kDa. A consistent pattern of increasing molecular weight bandwidths was observed, each ranging ~100 kDa. Further, subsequent reanalysis of native fractions via SDS-PAGE showed molecular-weight shifts consistent with the denaturation of protein complexes. Therefore, CN-GELFrEE was proved to offer the ability to perform high-resolution and high-recovery native separations on protein complexes from a large molecular weight range, providing fractions that are compatible with downstream protein analyses.

This protocol describes how to prepare and perform clear native gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis (CN-GELFrEE), a native separation technique for non-covalent biomolecular assemblies and proteins from heterogeneous samples that is compatible with various downstream protein analysis techniques.

CN-GELFrEE - واضح الأصلية جل مزال-جزء السائل الفخ الكهربائي

Protein complexes perform an array of crucial cellular functions. Elucidating their non-covalent interactions and dynamics is paramount for understanding ...

Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue

We demonstrate a method for the isolation of EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris(carboxymethyl)-4-(ethoxybenzyl)-undecanedioic acid) from its Gd(III) complex and protocols for the preparation of its novel non-radioactive, i.e., natural Ga(III) as well as radioactive 68Ga complex. The ligand as well as the Ga(III) complex were characterized by nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy, mass spectrometry and elemental analysis. 68Ga was obtained by a standard elution method from a 68Ge/68Ga generator. Experiments to evaluate the 68Ga-labeling efficiency of EOB-DTPA at pH 3.8&#8211;4.0 were performed. Established analysis techniques radio TLC (thin layer chromatography) and radio HPLC (high performance liquid chromatography) were used to determine the radiochemical purity of the tracer. As a first investigation of the 68Ga tracers&#39; lipophilicity the n-octanol/water distribution coefficient of 68Ga species present in a pH 7.4 solution was determined by an extraction method. In vitro stability measurements of the tracer in various media at physiological pH were performed, revealing different rates of decomposition.

Investigations on the GaIII Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue

A procedure for the isolation of EOB-DTPA and subsequent complexation with natural Ga(III) and 68Ga is presented herein, as well as a thorough analysis of all compounds and investigations on labeling efficiency, in vitro stability and the n-octanol/water distribution coefficient of the radiolabeled complex.

التحقيقات في جورجيا (III) مجمع EOB-DTPA وه<sup&gt; 68</sup&gt; جورجيا رديولبلد التناظرية

We demonstrate a method for the isolation of EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris(carboxymethyl)-4-(ethoxybenzyl)-undecanedioic acid) from its Gd(III) ...

Novel Techniques for Observing Structural Dynamics of Photoresponsive Liquid Crystals

We discuss in this article the experimental measurements of the molecules in liquid crystal (LC) phase using the time-resolved infrared (IR) vibrational spectroscopy and time-resolved electron diffraction. Liquid crystal phase is an important state of matter that exists between the solid and liquid phases and it is common in natural systems as well as in organic electronics. Liquid crystals are orientationally ordered but loosely packed, and therefore, the internal conformations and alignments of the molecular components of LCs can be modified by external stimuli. Although advanced time-resolved diffraction techniques have revealed picosecond-scale molecular dynamics of single crystals and polycrystals, direct observations of packing structures and ultrafast dynamics of soft materials have been hampered by blurry diffraction patterns. Here, we report time-resolved IR vibrational spectroscopy and electron diffractometry to acquire ultrafast snapshots of a columnar LC material bearing a photoactive core moiety. Differential-detection analyses of the combination of time-resolved IR vibrational spectroscopy and electron diffraction are powerful tools for characterizing structures and photoinduced dynamics of soft materials.

Here, we present the protocols of differential-detection analyses of time-resolved infrared vibrational spectroscopy and electron diffraction which enable observations of the deformations of local structures around photoexcited molecules in a columnar liquid crystal, giving an atomic perspective on the relationship between the structure and the dynamics of this photoactive material.

تقنيات الرواية لمراقبة ديناميات الهيكلية من بلورات سائلة فوتوريسبونسيفي

We discuss in this article the experimental measurements of the molecules in liquid crystal (LC) phase using the time-resolved infrared (IR) vibrational ...