We greatly acknowledge financial support by NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, grants from the Department of Neurosurgery at Cedars-Cedars Medical Center and Arrogene Technology Inc.

جميع التجارب الامتثال للوائح الرسمية الحيوانية بما في ذلك العمليات الجراحية وغير الجراحية التي أجريت في الجسم الحي وتتفق تماما مع بروتوكولات IACUC. 1. الإنتاج البيولوجي من حمض Polymalic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو ثقافة البذور من كريوات على أجار ونقل متصورات إلى 100 ​​مل مستنبت باستخدام 25 ° C الحرارية ذكر الحاضنة والثقافة القاعدية المتوسطة 8،9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنتاج كمية معبأة الجاذبية الصغرى 500 متصورات مل تحت استبعاد ضوء من أجل تجنب تبوغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 80 جم كربونات الكالسيوم 3 معلقة في 8 L القاعدية المتوسطة في 10 L سفينة مفاعل حيوي. نقل 500 مل متصورات الصغيرة معبأة في وعاء التفاعل والسماح شنت العمليات الحيوية لمدة 75 ساعة عند 25 درجة مئوية، 10 لتر / دقيقة تدفق الهواء تصفيتها و 150 دورة في الدقيقة التحريك من قبل النمام الجزء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنهاء عندما المرق الثقافة لديه درجة الحموضة 4.8 تشير إلى نهاية الإنتاج من PMLA وقياس محتوى PMLA التي كتبها tانه hydroxamate / الحديد (III) مقايسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبريد المرق إلى 17 درجة مئوية، وتسمح للخلايا لتسوية عن طريق الجاذبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بارد إلى 4 درجة مئوية، وضبط درجة الحموضة إلى 7.5، استخدام 2 M هيدروكسيد الصوديوم. ضخ طاف من خلال عمود مليئة 1.5 L من DEAE السليلوز في قاع الاتجاه إلى أعلى (الخشنة DEAE الحبوب، معايرتها مع 20 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك درجة الحموضة 7.5 عند 5 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع 3 أعمدة العازلة التي تحتوي على كلوريد الصوديوم 0.3 M بعد تغيير الاتجاه من الأعلى إلى الأسفل وأزل PMLA في وجود كلوريد الصوديوم 0.7 M. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط 0.1 M و CaCl 2 ويعجل PMLA الكالسيوم مع 80٪ الايثانول الجليد الباردة. يجزئ على Sephadex G25 في PMLA الكالسيوم من 80-300 كيلو دالتون، 50 - 80 كيلو دالتون، و10-50 كيلو دالتون، واستخدام الماء في غياب العازلة والملح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمرير كل جزء على مدى 120H Amberlite الأشعة تحت الحمراء + عمود، وتجميد فورا حمض polymalic التدفق من خلال في النيتروجين السائل لتجفيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تذوب في الأسيتون الجاف. بعد الترشيح، وإزالة المذيباتفي تيار الهواء الجاف، يجفد وتخزينها في ناقص 20 درجة مئوية. </li></ol> 2. التجميعي من مقرها حمض Polymalic نانو المخدرات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنشيط مجموعات الكربوكسيل من PMLA (P) عن طريق خلط 116 ملغ (1 مليمول حدات malyl) من PMLA-H في 1 مل من الأسيتون اللامائية و1 مليمول N-hydroxysuccinimide و1 مليمول dicyclohexyl carbodimide في 2 مل ثنائي ميثيل الفورماميد (DMF). إثارة عند 20 درجة مئوية لمدة 3 ساعة. إضافة 0.05 مليمول من MPEG-5000 NH 2 (0.05٪ من الوحدات مول malyl) في 1 مل DMF تليها 0.05 مليمول الترايثلامين (TEA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة قطرة من الحكمة المنحل في DMF 0.4 مليمول يسين اثيل استر (LOEt) (40٪ من وحدات مول malyl)، 0.1 ملمول 2-ثيول-1-إيثيلامين (2-MEA) (10٪ من وحدات مول malyl) و 0.5 ملمول TEA، الذائبة في جميع DMF. بعد كل إضافة، تسمح 1 ساعة وتحقق من وجود رد فعل من جانب الانتهاء السلبية النينهيدرين استجابة (طبقة رقيقة اللوني، TLC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا إزالة بقايا NHS استر من قبل التحلل المائي عفوية مع الفوسفات مخزنة المالحة (30 دقيقة، ودرجة الحموضة 6.8). Desalt على PD-10 العمود، يجب الحصول &quot;preconjugate&quot; على شكل مسحوق أبيض من قبل تجفيد. مخزن الجافة في ناقص 20 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 30 ملغ الأجسام المضادة (MAB، IgG2a-κ) في 4.5 مل من 100 ملي فوسفات الصوديوم، 150 ملي مول كلوريد الصوديوم، ودرجة الحموضة 5.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض السندات ثاني كبريتيد مع 5 ملي تريس (إيثيل 2-كربوكسي) هيدروكلوريد الفوسفين لمدة 30 دقيقة عند 20 درجة مئوية وتنقية أكثر PD-10 عمود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل مال PEG 3400 المال في 2 مل من المخزن نفسه وإضافة خفضت ماب في الحجم النهائي من 10 مل ويحرك بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. التركيز إلى 2.5 مل على Vivaspin 20، استبعاد 30 دينار كويتي، وتنقية أكثر Sephadex G75. التحقق من المنتج أكثر من ثانية-HPLC وقياس كمية بقياس الضوء عند 280 نانومتر الطول الموجي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق المال، PEG-MAB المال ل&quot;preconjugate&quot; ثيول الحصول على P / PEG 5000 (5٪) / LOEt (40٪) / ماب (0.2٪) / 2-MEA (10٪). القيام بذلك عن طريق خلط 5 مل من 200 نانومول ماب-PEG 3400-Mal الى 50 ملغ (P / MPEG 5000 / LOEt/2-MEA) في المنطقة العازلة درجة الحموضة أعلاه 5.5، وضبط تركيز sulfhydryl إلى 2 ملم واحتضان عند 20 درجة مئوية لمدة 3 ساعة (العائد 98٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان 3&#39;-H 2 N-AON في DMF / برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7.2) وتتفاعل مع N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio) بروبيونات (SPDP) في (01:01 ت / ت) DMF / الميثانول (النينهيدرين اختبار ) وتنقية AON-PDP على Sephadex-LH20 في الميثانول، ثم في الماء ويجفد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان 800 نانومول AONs تفعيلها في المخزن المؤقت 5.5 درجة الحموضة مع إعداد أعلاه المال، PEG-3400-المال ماب-preconjugate بين عشية وضحاها حتى يتم إنهاء رد فعل الصرف ثاني كبريتيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دمج الفلورسنت اليكسا فلور 680 maleimide تشكيل أثير ثيولي مع البوليمر-2-MEA-SH. منع sulfhydryls الزائدة مع 3 pyridyldithio-بروبيونات (PDP) وتنقية أكثر Sephadex G75. تخزينها في 4 درجة مئوية أو المفاجئة المجمدة في -80 درجة مئوية حتى استخدامها مرة أخرى. </li></ol> 3. فحوصات وخصائص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء اختبارات للنقاء والاستقرار في برنامج تلفزيوني والمصل عند 4 درجة مئوية و 37 درجة مئوية عن طريق التحليل ثانية-HPLC. استخدام البوليسترين سلفونات كما molecمعايير الوزن جزيئية. قياس توزيع حجم نانو وزيتا إمكانات. استخدام النظم التجارية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة إلى 320 عينة ميكرولتر 160 ميكرولتر من 10٪ (ث / ت) كلوريد hydroxylammonium و160 ميكرولتر من 10٪ (ث / ت) هيدروكسيد الصوديوم. بعد 10-15 دقيقة، مع مزيج 160 ميكرولتر من 5٪ (ث / ت) الحديد (III) 3 الكلورين في 12٪ (V / V) حمض الهيدروكلوريك وقراءة و540 من hydroxamate / الحديد (III). حساب PMLA افتراض 1 ملغ / مل PMLA يتوافق مع 2.5 A 540. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتحلل الدواء نانو بين عشية وضحاها في 2 M حمض الهيدروكلوريك في 110 ° C وحمض الماليك فحص على عكس المرحلة اللوني مع الإشارة إلى عينات ارتفعت مع المعايير حمض الماليك. يلتصق المخدرات نانو مع 100 ملي dithiothreitol وقياس Morpholino-AON بواسطة الكمي عكس المرحلة HPLC ضد المعايير Morpholino AON. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ نانو المخدرات دون انشقاق وقياس الأجسام المضادة باستخدام عدة البروتين مقايسة. تحديد MPEG من خلال السماح التفاعل مع ferrothiocyanate الأمونيوم، ثم استخراج مع الكلوروفورم وقراءة الامتصاصية في 510 نانومتر الطول الموجي 10 </سوب&gt;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء ELISA مع 5 ميكرولتر من المخدرات نانو (1-10 ميكروغرام ماب) في اختبار جيد النشاط الضد وضمام. استخدام 0.5 ميكروغرام / ترانسفيرين كذلك مستقبلات HER2 و، على التوالي، كما المستضدات المغلفة لوحة والأجسام المضادة الثانوية إلى جانب البيروكسيداز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب٪ التي تحققت لAON، MPEG وماب فيما يتعلق حمض الماليك (100٪) ومقارنة مع٪ المقصود حسب التصميم (انظر أمثلة الجدول 1 والجدول 2). </li></ol> 4. في المختبر اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المخدرات نانو مع الخلايا السرطانية مثقف والتدبير قيد الحياة الخلايا مع مرور الوقت من خلال نشاطها للحد من كاشف الصفراء [3 - (4،5-dimethylthiazol-2-YL) -5 - (3-carboxymethoxyphenyl) -2 - (4-sulfophenyl ) 2H-نتروبلو والملح الداخلية] (MTS) لصبغة زرقاء وقراءة الامتصاصية النسبي مع مضواء. اتبع التعليمات من قبل المورد عدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مقتطفات خلية في المختبر أو فيفو السابقين لالنشاف الغربية. استخدام الثلج الباردة استخراج بuffer الذي يحتوي SDS ومثبط البروتياز الكوكتيل. البروتينات منفصلة عن طريق الحد من SDS-بولكرلميد هلام الكهربائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القيام النشاف الغربية للبروتينات ذات أهمية في العينة مقتطفات. استخدام الأجسام المضادة الثانوية مترافق إلى الفوسفاتيز القلوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام متحد البؤر المجهري لإثبات امتصاص الخلية وشارك في توطين نانو منصة البوليمر المخدرات، AON والإندوسومات باستخدام وضع العلامات مضان. نعلق اليكسا فلور 680 إلى منصة المكورات نانو وLissamine لAONs كعناوين مضان. استخدام المجهر الماسح الضوئي 5X الطيفية والخلايا السرطانية الحية لتصور توزيع الجزيئات المسمى </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأغشية جسيم داخلي وصمة عار مع Styryl الأحمر صبغة الفلورسنت وإظهار colocalization جسيم داخلي أو الافراج عنهم. </li></ol> 5. في الجسم الحي اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد إيجابية HER2 نموذج الفأر سرطان الثدي البشرية (عارية تاك الماوس: الكروم: (MCR) Foxnnm). إدراج 0.72 ملغ 17β استراديول الإفراج عن بيليه (نشرة 90 أيام) قubcutaneously في عنق كل فأر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم حقن 1 × 10 7 BT-474 الخلايا السرطانية تحت الجلد في الجهة اليمنى وترك الورم ينمو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء العلاج عندما الأورام هي 120 مم 3 في الحجم عن طريق حقن في الوريد الذيل 150 ميكرولتر المكورات نانو تحتوي على 2.5 ملغ / كغ AON و / أو 4.5 ملغ / كغ من كل الأجسام المضادة. لتلقي العلاج حقن مرتين في الأسبوع، تماما ست مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس حجم الورم مع الفرجار ضعف الضعيف وحساب الكميات باستخدام الصيغة (طول × عمق × العرض) × (π / 6). الموت ببطء الحيوانات بعد 2 أسابيع من الحقن النهائي وبعد التخدير بمحلول مكون من الكيتامين وDexmedetomidine تليها خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الأورام وأقسام وصمة عار مع H &amp; E لتقييم المورفولوجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقييم توزيع المخدرات على نطاق الحيوان، واستخدام نظام التصوير مضان. حقن اليكسا فلور 680 نانو المسمى المخدرات والصورة في 24 و 48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الحيوان وكشف فلوريescence في الأورام وأجهزة معزولة وperfused. </li></ol>

<ol>
	<li>Koboldt, D. C., Fulton, R. S., McLellan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumors.+Cancer+Genome+Atlas+Network.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumors. Cancer Genome Atlas Network.</a> Nature. 490, 61-70 (2012).</li><li>Kwong, L. N., Costello, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogenic+NRAS+signaling+differentially+regulates+survival+and+proliferation+in+melanoma.">Oncogenic NRAS signaling differentially regulates survival and proliferation in melanoma.</a> Nat. Med. 18, 1503-1510 (2012).</li><li>Gerlinger, M., Rowan, A. J., Gerlinger, M., Rowan, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratumor+heterogeneity+and+branched+evolution+revealed+by+multiregion+sequencing.">Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing.</a> N. Engl. J. Med. 366, 883-892 (2012).</li><li>Yap, T. A., Workman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+cancer+genome:+strategies+for+the+discovery+and+clinical+development+of+targeted+molecular+therapies.">Exploiting the cancer genome: strategies for the discovery and clinical development of targeted molecular therapies.</a> Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 52, 549-573 (2012).</li><li>Chatterjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Biomarkers:+Knowing+the+Present+and+Predicting+the+Future.">Cancer Biomarkers: Knowing the Present and Predicting the Future.</a> Future Oncol. 1, 37-50 (2005).</li><li>Suh, K. S., Sarojini, S., Youssif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Banking,+Bioinformatics,+and+Electronic+Medical+Records:+The+Front-End+Requirements+for+Personalized+Medicine.">Tissue Banking, Bioinformatics, and Electronic Medical Records: The Front-End Requirements for Personalized Medicine.</a> J. Oncology. , (2013).</li><li>Ljubimova, J. Y., Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatible+nanopolymers:+the+next+generation+of+breast+cancer+treatment.">Biocompatible nanopolymers: the next generation of breast cancer treatment.</a> Future Medicine, Nanomedicine. 7, 1-4 (2012).</li><li>Lee, B. -. S., Vert, M., Holler, E., Steinb&#252;chel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Water-soluble aiphatic polyesters: poly(malic acid)s. Biopolymers 3a. , 75-103 (2002).</li><li>Lee, B. -. S., Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycefin,+a+new+prototype+of+multifunctional+nanoconjugate+based+on+poly(beta-L-malic+acid)+for+drug+delivery.">Polycefin, a new prototype of multifunctional nanoconjugate based on poly(beta-L-malic acid) for drug delivery.</a> Bioconjugate Chem. 17, 317-326 (2006).</li><li>Nag, A., Mitra, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+colorimetric+assay+for+estimation+of+polyethylene+glycol+and+polyethylene+glycolated+protein+using+ammonium+ferrothiocyanate.">A colorimetric assay for estimation of polyethylene glycol and polyethylene glycolated protein using ammonium ferrothiocyanate.</a> Analytical Biochem. 237, 224-231 (1996).</li><li>Ding, H., Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+brain+tumor+growth+by+intravenous+poly(beta-L-malic)+acid+nanobioconjugate+with+pH-dependent+drug+release.">Inhibition of brain tumor growth by intravenous poly(beta-L-malic) acid nanobioconjugate with pH-dependent drug release.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107, 18143-18148 (2010).</li><li>Inoue, S., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobioconjugate+inhibition+of+HER2/neu+signaling+and+synthesis+provides+efficient+mouse+breast+cancer+treatment.">Nanobioconjugate inhibition of HER2/neu signaling and synthesis provides efficient mouse breast cancer treatment.</a> Cancer Research. 71, 1454-1464 (2011).</li><li>Maeda, H., Sawa, T., Konno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+tumor-targeted+delivery+of+macromolecular+drugs,+including+the+EPR+effect+in+solid+tumor+and+clinical+overview+of+the+prototype+polymeric+drug+SMANS.">Mechanism of tumor-targeted delivery of macromolecular drugs, including the EPR effect in solid tumor and clinical overview of the prototype polymeric drug SMANS.</a> J. Control. Release. 74, 47-61 (2001).</li><li>Ljubimova, J. Y., Fujita, M., Ljubimov, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(malic+acid)+nanoconjugates+containing+various+antibodies+and+oligonucleotides+for+multitargeting+drug+delivery.">Poly(malic acid) nanoconjugates containing various antibodies and oligonucleotides for multitargeting drug delivery.</a> Nanomed. 3, 247-265 (2008).</li><li>Inoue, S., Patil, R., Portilla-Arias, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+nanobioconjugate+inhibiting+EGFR+expression+in+triple+negative+breast+cancer.">Novel nanobioconjugate inhibiting EGFR expression in triple negative breast cancer.</a> PLoS One. 7, 1-9 (2012).</li><li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Delivery+of+Doxorubicin+via+pH-Controlled+Hydrazone+Linkage+Using+Multifunctional+Nano+Vehicle+Based+on+Poly(&#946;-L-malic+Acid).">Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(&#946;-L-malic Acid).</a> Int. J. Mol. Sci. 13, 11681-11693 (2012).</li><li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temozolomide+delivery+to+tumor+cells+by+a+multifunctional+nano+vehicle+based+on+poly(&#946;-L-malic+acid).">Temozolomide delivery to tumor cells by a multifunctional nano vehicle based on poly(&#946;-L-malic acid).</a> Pharm. Res. 27, 2317-2329 (2010).</li><li>Ljubimova, J. Y., Portilla-Arias, J., Patil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+and+efficacy+evaluation+of+multiple+targeted+polymalic+acid+conjugates+for+triple-negative+breast+cancer+treatment.">Toxicity and efficacy evaluation of multiple targeted polymalic acid conjugates for triple-negative breast cancer treatment.</a> J. Drug Target. 21, 956-967 (2013).</li></ol>

المؤلفين جوليا Y. Ljubimova، كيث الأسود، والصرخة هي Eggehard مساهمي Arrogene شركة تكنولوجيا

ويرد الطريق التجريبية لإعداد الأدوية نانو من البوليمر الطبيعية القابلة للتحلل والتي يمكن استخدامها في تركيب الأدوية شخصية. وصف يبدأ الإنتاج للرقابة وتنقية حمض polymalic، والتي هي عبارة عن منصة تنوعا لتخليق المخدرات نانو. باستخدام تقنيات استنساخه، يتم الحصول على البوليمر مع ارتفاع الوزن الجزيئي والنقاء الشديد مناسبة لالتوليفات الدوائية. يوصف التوليف لعقار نانو الذي يظهر لعلاج سرطان الثدي HER2 الإيجابي-بكفاءة. يمكن ترجمتها إلى وصف التوليفات من معظم الأدوية الأخرى نانو لعلاج السرطان. ينطوي استهداف الأجسام المضادة مثل هيرسيبتين التي تربط مستضد ورم محددة مثل البروتين HER2 أو أي علامة الورم الأخرى التي يتم المنضوية بكفاءة. المخدرات نانو يسلم مجموعة مختارة من أليغنوكليوتيد] العقاقير ومبحث المعالجة الكيميائية التي من شأنها أن تمنع بكفاءة نمو السرطان تحت عطرatment. في المثال، هيرسيبتين ملزمة لHER2 ومحددة الصلب العقاقير قليل النوكليوتيد مع نجم مرنا في عرقلة مستمرة من HER2-الإشارات وانخفاض حاد من سرطان الثدي HER2 الإيجابي-الترميز HER2. استنادا إلى المبدأ الكامن وراء استهداف الورم وتثبيط التعبير الجيني عن طريق أليغنوكليوتيد] العقاقير قمنا إلى تاريخ تصنيعه العديد من الأدوية الأخرى، ويحول دون نانو بنجاح ورم أرومي دبقي الإنسان قبل السريرية والثلاثي السلبية سرطان الثدي 11،14-18. يبدأ العمل الاصطناعية مع إعداد عالي النقاء منصة نانو المخدرات، وهو حمض polymalic من طاف ثقافة Physarum polycephalum (أ الأنواع من &quot;الوحل العفن&quot; الأسرة). إعداد يؤكد أوزان جزيئية عالية من البوليمر، من حيث المبدأ السماح الحجز على العديد من الأجسام المضادة، الببتيدات، أليغنوكليوتيد] والجزيئات الأخرى تعمل في تسليم المخدرات النشطة وورم تثبيط نمو. Followiنانوغرام زراعة للرقابة وتنقية، وقد تم إنتاج نوعية استنساخه من البوليمر في عوائد يمكن التنبؤ بها. يتم تخزين البوليمر في ظل ظروف مريحة للأي وقت. ويتم تجميع PMLA تقارن نانو بدءا من تفعيل الكيميائي للcarboxylates البوليمر قلادة في بضع خطوات الاصطناعية. بين الخطوات، والتوليف يمكن وضعها اختياريا على عقد السماح إعداد كميات التعسفي وسيطة، وبالتالي يمكن استخدامها في ما يصل التحجيم. ويتبع التقدم من تجميعي من TLC وثوانى-HPLC، ويتم التحكم كل من تكوين ونشاط المخدرات التي كتبها نانو المقايسات مجموعة محددة الكيميائي والكمي، ELISA، ومجموعة متنوعة من القياسات الفيزيائية. تجربتنا هو أن هذه التوليفات تم تقدما سلسا وبتكاثر مع عوائد ممتازة والنقاء. عن طريق اختيار النوعية من الأجسام المضادة والعقاقير [أليغنوكليوتيد أي متغير من نانو المخدرات يتم تصنيعه بشكل ايجابي حسب الحاجة في المؤسسة العامةrsonalized الطب. طرائق العلاج الناجح لسرطان الثدي HER2 الإيجابي، الإنسان ممثلين صالحة لإعداد نماذج سرطان الفأر، وتطبيق الأدوية نانو، والتصوير، وتحليل نمو الورم. نتائج الاختبارات في المختبر جدوى مفيدة في اختيار خط الخلية والمخدرات مما يؤدي إلى استخدامها في التجربة الحيوانية. في الجسم الحي التصوير Xenogen يؤكد أن المخدرات نانو يتم تسليم الواقع داخل الورم. نتائج النشاف الغربية يكشف ما إذا كان مستوى بروتينات معينة وردت في الأزياء وتوقع أثناء علاج السرطان. قياس حجم الورم يبلغ عن نجاح العلاج، أي حوالي تثبيط، والركود أو التراجع. يعكس المثال وصف تجربتنا مع غيرها من polymalic القائم على حمض نانو المخدرات مما يدل على درجة عالية من القدرة على التنبؤ، واستنساخ غياب سمية ملحوظة. النتائج الأخيرة على سمية وفعالية متعددة رargeted تقارن حمض polymalic لعلاج سرطان الثدي الثلاثي السلبية هي في الدعم القوي لهذا المفهوم 18. ومن السمات الرئيسية هي أن المخدرات نانو لدينا هي قادرة على اختراق الحواجز الحيوي: حاجز البطانية التي كتبها التسرب إلى الورم الخلالي، وغشاء الخلية السرطانية عن طريق امتصاص جسيم داخلي، واضطراب الغشاء جسيم داخلي عن طريق عمل ethylester يسين أو trileucine المجموعات. التسرب وامتصاص جسيم داخلي يتم إنجاز موثوق بها أجسام مضادة محددة تعلق على المخدرات نانو. مكافحة فأر ترانسفيرين مستقبلات الأجسام المضادة تتوسط تدفق كفاءة داخل الورم بواسطة transcytosis، ربما لأن هى overexpressed مستقبلات على معظم الأوعية الدموية السرطانية. A الأجسام المضادة مختلفة تعلق على نفس وظائف نانو جزيء المكورات في توجيه تحديدا المخدرات نانو في الخلية السرطانية المتلقي. وجود الأجسام المضادة على حد سواء، واحد لtranscytosis والآخر لامتصاص جسيم داخلي، أمر ضروري لأداء الأمثل. التحليل الكمي للمينصح بشدة حمض ALIC والأجسام المضادة من أجل السيطرة على تكوين الأمثل للدواء نانو. أخيرا تجدر الإشارة إلى أن التساهمية نانو المخدرات الكل في واحد يسلم المخدرات في الاستمارة المرفقة كيميائيا في طريقها من خلال الأوعية الدموية المضيف في الخلايا السرطانية المتلقي. مرفق الكيميائية يجعل معظم الأدوية غير نشط (prodrugs) حتى يتم تشكيلها على أنها أدوية مجانا من الانقسام من منصة نانو المكورات في الموقع المستهدف. هذا أمر مهم لأن طريقة تنشيط يوفر درجة عالية من الأمان أثناء الولادة وفرصة ضئيلة لاستحضار آثار جانبية ضارة. براعة ونجاعة وسلامة هي سمات لا غنى عنها للطب شخصية جيدة.

في عصر ما بعد الجينوم عندما تم كشف جينوم السرطان (المركز الوطني للتكنولوجيا الحيوية والسرطان والجينوم أطلس)، والعلاج من السرطان في المستقبل سوف تمثل التنوع الجيني للأورام في كثير من الأحيان ضمن نفس الورم 1-4. المعلوماتية الحيوية وسريعة وغير مكلفة تسلسل الحمض النووي يسمح اقتناء الجينات الخبيثة / الطفرات على المستوى الشخصي 2،4،5. مرة واحدة وقد تم التعرف على الجينات، وسوف يعامل المرضى الذين يعانون من الطب الشخصي لتعديل أو إسكات التعبير عنها الجينات الخبيثة 6. الحاجة لاستهداف الخلايا السرطانية وتسليم المخدرات إلى هذه الخلايا يدعو لأنظمة تسليم polyfunctional. من الواضح، أن المخدرات نانو تلبية هذا المطلب 7. في موجة متصاعدة من الاكتشافات أثبتت النانوية مناسبة لتحقيق حمولات من أدوية العلاج الكيميائي، والبروتينات و / أو المادة الفعالة وراثيا إلى خلايا السرطان. ومع ذلك، لا تزال الآثار السلبية لتكون الإعلانيرتدي. قد يتسبب واحد منهم المتصلة غياب التحلل البيولوجي ترسب المواد في الأنسجة والأعضاء السليمة مع احتمال لاستفزاز الأمراض. لتقليل الترسيب، قدمنا ​​غير سامة وغير المناعية حمض polymalic، والذي هو من أصل الميكروبية والقابلة للتحلل إلى H 2 O وCO 2 8. نستخدم البوليمر لتجميع نوع التساهمية في كل واحدة من نانو المخدرات. أنه يحتوي على مبحث المعالجة الكيميائية المرفقة كيميائيا مثل Temozolomide، دوكسوروبيسين، أو أليغنوكليوتيد] العقاقير والمجموعات الوظيفية التي تخدم التسرب، استهداف الأنسجة، والتسليم endosomolytic. والمشقوق الأدوية جوهريا من منصة نانو عندما وصلوا في استهداف الخلايا السرطانية، وبالتالي تجديد النشاط الصيدلانية الكاملة. نحن تصف طريقة الإنتاج الميكروبية من منصة البوليمر نانو، وتنقية لها، والتركيب الكيميائي للدواء نانو الذي يحتوي تراستوزوماب (هيرسيبتين) للسرطاناستهداف وقليل النوكليوتيد العقاقير لتثبيط الإفراط HER2. في تطبيق المخدرات نانو لأعضاء غير بشرية الإنسان HER2 إيجابية سرطان الثدي في الفئران عارية، علينا أن نظهر فعالية عالية في علاج السرطان. مبادئ استهداف الورم وإسكات الجينات أدخلت هنا لpolymalic المخدرات حمض نانو يمكن تطبيقها في علاج حالات أخرى من السرطان.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="935">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:187px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:79px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Mercapto-1-ethylamine (Cysteamine (2MEA)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">30078-25G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td colspan="2">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">90-Day release 17&#946;-estradiol pellet&#160;</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 680 C2 maleimide</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">A20344</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amberlite IR 120H</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">6428</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td style="width:263px;">Sigam-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">A5758</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-laminin-411 chain mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-59980</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-pAkt mAb</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">9271S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-PARB mAb</td>
			<td style="width:263px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">556494</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-von Willebrand Factor antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td style="width:187px;">AB6994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bacto Yeast Extract</td>
			<td style="width:263px;">Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td>
			<td style="width:187px;">212720</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beta-actin</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">3700</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BT-474&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-20</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Calcium Carbonate</td>
			<td style="width:263px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:187px;">36337</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Proliferation Assay kit</td>
			<td>Promega, Madison, WI, USA</td>
			<td>PR-G3580</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centriplus 100&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:187px;">4414</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dicyclohexylcarbodimide</td>
			<td style="width:263px;">Fluka</td>
			<td style="width:187px;">36650</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">D5796</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-4</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Galardin (MMP-inhibitors)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling&#160;</td>
			<td style="width:187px;">2118</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxilin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-3</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Hemin from porcine</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">51280</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin</td>
			<td style="width:263px;">Genentech</td>
			<td style="width:187px;">15534</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin (Western blotting)</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">2165S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">IgG2a-kappa murine malignoma</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">M77695X5m</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-Star AP Substrate Pack</td>
			<td style="width:263px;">Biorad</td>
			<td style="width:187px;">170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-StarTM AP Substrate Pack&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">LAL Reagent water&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Lonza, MD</td>
			<td style="width:187px;">W50-1000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin-411 mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leucine ethyl ester (LOEt)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">61850-10G-F</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT-5000 tests</td>
			<td style="width:263px;">Cambrex BioScience</td>
			<td style="width:187px;">N384</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Lissamin-Morpholino AON</td>
			<td style="width:263px;">Gene Tools</td>
			<td style="width:187px;">Custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-malic acid&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M6413</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Malate dehydrogenase&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M2634</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mal-PEG-Mal</td>
			<td style="width:263px;">Laysan</td>
			<td style="width:187px;">mal-PEG-mal-3400</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">354248</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Milk, nonfat powdered&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Proteomics</td>
			<td>M203-10G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Morpholino oligonucleotides&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GeneTools</td>
			<td style="width:187px;">custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">mPEG5000</td>
			<td style="width:263px;">Lysan</td>
			<td style="width:187px;">mPEG-NH2-5000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-hydroxysuccinimde (NHS)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ACROS Organics</td>
			<td style="width:187px;">15727100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Ninhydrin</td>
			<td style="width:263px;">Merck</td>
			<td style="width:187px;">1.06762.0100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich, 0.45 &#181;m&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Novex &#174; Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC3675</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nude Mice [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&#160;</td>
			<td>Taconic</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 10x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">10010-49</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 1x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">70013</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PD-10 desalting columns</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0851</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physarum polycephalum M3CVII</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>204388</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce BCA protein assay&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:187px;">23225</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:263px;">Roche</td>
			<td style="width:187px;">1.18362E+11</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protein Detector ELISA Kit</td>
			<td style="width:263px;">KPL</td>
			<td style="width:187px;">54-62-18</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-25 superfine</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0031</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-75&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0050</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex-LH20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0090</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SKBR-3&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-30</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPDP</td>
			<td style="width:263px;">Proteochem&#160;</td>
			<td style="width:187px;">C1116</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streamline-DEAE</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Styryl Red FM 1-43&#160;</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:187px;">T-3163</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TBS 10x</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-6435</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCEP</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">C4706-2G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TLC, silica coated aluminia sheets</td>
			<td style="width:263px;">Merck, Darmstadt, DE</td>
			<td style="width:187px;">60F254</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trileucine (LLL)</td>
			<td style="width:263px;">Bachem</td>
			<td style="width:187px;">H-3915</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-114&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">X114</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween&#174;20&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vivaspin 20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">VWR</td>
			<td style="width:187px;">14005-302</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:407px;">DAPI</td>
			<td style="width:263px;">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexmedetomidine</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Atipamezole</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carprofen</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine</td>
			<td style="width:263px;">Foster and Smith, Wisconsin</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polymalic acid-based nano biopolymers for targeting of multiple tumor markers: an opportunity for personalized medicine?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this diversity, personalized medicine is developed for silencing malignancy associated genes. Nano drugs fit these needs by targeting tumor and delivering antisense oligonucleotides for silencing of genes. As drugs for the treatment are often administered repeatedly, absence of toxicity and negligible immune response are desirable. In the example presented here, a nano medicine is synthesized from the biodegradable, non-toxic and non-immunogenic platform polymalic acid by controlled chemical ligation of antisense oligonucleotides and tumor targeting molecules. The synthesis and treatment is exemplified for human Her2-positive breast cancer using an experimental mouse model. The case can be translated towards synthesis and treatment of other tumors.

Watch this Scientific Journal Video about Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine? at JoVE.com

Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

ويقدم مثالا على المخدرات نانو على أساس حمض polymalic نحو التصميم الرشيد للطب الشخصية التي تنطبق على مرض السرطان. فهو يصف تركيب دواء نانو لعلاج سرطان الثدي HER2 إيجابية الإنسان في ماوس عارية.

البوليمرات الحيوية نانو مقرها حمض Polymalic لاستهداف علامات ورم متعددة: فرصة للطب شخصية؟

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

polymalic-acid-based-nano-biopolymers-for-targeting-multiple-tumor

Research

JoVE Journal

Chemistry

16.5K Views.  Cedars-Sinai Medical Center.  ويقدم مثالا على المخدرات نانو على أساس حمض polymalic نحو التصميم الرشيد للطب الشخصية التي تنطبق على مرض السرطان. فهو يصف تركيب دواء نانو لعلاج سرطان الثدي HER2 إيجابية الإنسان في ماوس عارية. 

Video: Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

Glycan Node Analysis: A Bottom-up Approach to Glycomics

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and extracellular events. Many pathological conditions, notably cancer, affect gene expression, which can in turn deregulate the relative abundance and activity levels of glycoside hydrolase and glycosyltransferase enzymes. Unique aberrant whole glycans resulting from deregulated glycosyltransferase(s) are often present in trace quantities within complex biofluids, making their detection difficult and sometimes stochastic. However, with proper sample preparation, one of the oldest forms of mass spectrometry (gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS) can routinely detect the collection of branch-point and linkage-specific monosaccharides ("glycan nodes") present in complex biofluids. Complementary to traditional top-down glycomics techniques, the approach discussed herein involves the collection and condensation of each constituent glycan node in a sample into a single independent analytical signal, which provides detailed structural and quantitative information about changes to the glycome as a whole and reveals potentially deregulated glycosyltransferases. Improvements to the permethylation and subsequent liquid/liquid extraction stages provided herein enhance reproducibility and overall yield by facilitating minimal exposure of permethylated glycans to alkaline aqueous conditions. Modifications to the acetylation stage further increase the extent of reaction and overall yield. Despite their reproducibility, the overall yields of N-acetylhexosamine (HexNAc) partially permethylated alditol acetates (PMAAs) are shown to be inherently lower than their expected theoretical value relative to hexose PMAAs. Calculating the ratio of the area under the extracted ion chromatogram (XIC) for each individual hexose PMAA (or HexNAc PMAA) to the sum of such XIC areas for all hexoses (or HexNAcs) provides a new normalization method that facilitates relative quantification of individual glycan nodes in a sample. Although presently constrained in terms of its absolute limits of detection, this method expedites the analysis of clinical biofluids and shows considerable promise as a complementary approach to traditional top-down glycomics.

This article presents an enhanced form of a novel bottom-up glycomics technique designed to analyze the pooled compositional profile of glycans in unfractionated biofluids through the chemical breakdown of glycans into their constituent linkage-specific monosaccharides for detection by GC-MS. Potential applications include early detection of cancer and other glycan-affective disorders.

غليكان تحليل عقدة: نهج من أسفل إلى أعلى لGlycomics

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and ...

Highly Stable, Functional Hairy Nanoparticles and Biopolymers from Wood Fibers: Towards Sustainable Nanotechnology

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While metal-based nanoparticles are associated with synthetic and environmental hassles, cellulose introduces a green, sustainable alternative for nanoparticle synthesis. Here, we present the chemical synthesis and separation procedures to produce new classes of hairy nanoparticles (bearing both amorphous and crystalline regions) and biopolymers based on wood fibers. Through periodate oxidation of soft wood pulp, the glucose ring of cellulose is opened at the C2-C3 bond to form 2,3-dialdehyde groups. Further heating of the partially oxidized fibers (e.g., T = 80 &#176;C) results in three products, namely fibrous oxidized cellulose, sterically stabilized nanocrystalline cellulose (SNCC), and dissolved dialdehyde modified cellulose (DAMC), which are well separated by intermittent centrifugation and co-solvent addition. The partially oxidized fibers (without heating) were used as a highly reactive intermediate to react with chlorite for converting almost all aldehyde to carboxyl groups. Co-solvent precipitation and centrifugation resulted in electrosterically stabilized nanocrystalline cellulose (ENCC) and dicarboxylated cellulose (DCC). The aldehyde content of SNCC and consequently surface charge of ENCC (carboxyl content) were precisely controlled by controlling the periodate oxidation reaction time, resulting in highly stable nanoparticles bearing more than 7 mmol functional groups per gram of nanoparticles (e.g., as compared to conventional NCC bearing &#60;&#60; 1 mmol functional group/g). Atomic force microscopy (AFM), transmission electron microscopy (TEM), and scanning electron microscopy (SEM) attested to the rod-like morphology. Conductometric titration, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), nuclear magnetic resonance (NMR), dynamic light scattering (DLS), electrokinetic-sonic-amplitude (ESA) and acoustic attenuation spectroscopy shed light on the superior properties of these nanomaterials.

Synthesis schemes to prepare highly stable wood fiber-based hairy nanoparticles and functional cellulose-based biopolymers have been detailed.

مستقرة للغاية، وظيفية مشعر النانوية والبوليمرات الحيوية من ألياف الخشب: نحو تقنية النانو المستدام

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While ...

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the development of antibody drug conjugates (ADCs) and nanomedicine, fluorescent microscopy and systems chemistry. For many of these applications, specificity of the bioconjugation method used is of prime concern. The Michael addition of maleimides with cysteine(s) on the target proteins is highly selective and proceeds rapidly under mild conditions, making it one of the most popular methods for protein bioconjugation.
We demonstrate here the modification of the only surface-accessible cysteine residue on yeast cytochrome c with a ruthenium(II) bisterpyridine maleimide. The protein bioconjugation is verified by gel electrophoresis and purified by aqueous-based fast protein liquid chromatography in 27% yield of isolated protein material. Structural characterization with MALDI-TOF MS and UV-Vis is then used to verify that the bioconjugation is successful. The protocol shown here is easily applicable to other cysteine - maleimide coupling of proteins to other proteins, dyes, drugs or polymers.

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

This protocol details the important steps required for the bioconjugation of a cysteine containing protein to a maleimide, including reagent purification, reaction conditions, bioconjugate purification and bioconjugate characterization.

تخليق البروتين Bioconjugates<em&gt; عبر</em&gt; سيستين-maleimide الكيمياء

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the ...

Low-energy Cathodoluminescence for (Oxy)Nitride Phosphors

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and flexibility of their emission properties can be achieved by controlling their composition and dopants. However, a lot of work is still required to improve their properties and to reduce the production cost. A possible approach is to correlate the luminescence properties of the Sialon particles with their local structural and chemical environment in order to optimize their growth parameters and find novel phosphors. For such a purpose, the low-voltage cathodoluminescence (CL) microscopy is a powerful technique. The use of electron as an excitation source allows detecting most of the luminescence centers, revealing their luminescence distribution spatially and in depth, directly comparing CL results with the other electron-based techniques, and investigating the stability of their luminescence properties under stress. Such advantages for phosphors characterization will be highlighted through examples of investigation on several Sialon phosphors by low-energy CL.

Low-energy Cathodoluminescence for OxyNitride Phosphors

An excellent chemical and luminescence stabilities of (oxy)nitride phosphors present it as an promising alternative to currently used sulfide and oxide phosphors. In this paper, we present the way to investigate its local luminescence properties using low-energy cathodoluminescence (CL).

Cathodoluminescence منخفضة الطاقة ل(أوكسي) الليومينيوفورات نتريد

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and ...

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

إعداد وتقييم<sup&gt; 99m</sup&gt; ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق Bioorthogonal الكيمياء

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples of gadolinium-based contrast agents as a result of incomplete reactions between the ligand and the ion, or as a dissociation product. Since the ion is toxic, its detection is of critical importance. Herein, the design and usage of an aptamer-based sensor (Gd-sensor) for Gd3+ are described. The sensor produces a fluorescence change in response to increasing concentrations of the ion, and has a limit of detection in the nanomolar range (~100 nM with a signal-to-noise ratio of 3). The assay may be run in an aqueous buffer at ambient pH (~7 - 7.4) in a 384-well microplate. The sensor is relatively unreactive toward other physiologically relevant metal ions such as sodium, potassium, and calcium ions, although it is not specific for Gd3+ over other trivalent lanthanides such as europium(III) and terbium(III). Nevertheless, the lanthanides are not commonly found in contrast agents or the biological systems, and the sensor may therefore be used to selectively determine unchelated Gd3+ in aqueous conditions.

An Aptamer-based Sensor for Unchelated GadoliniumIII

The use of polydeoxynucleotide (44-mer aptamer) molecules for sensing unchelated gadolinium(III) ion in an aqueous solution is described. The presence of the ion is detected via an increase in the fluorescence emission of the sensor.

والاستشعار القائمة على أبتمر لUnchelated الجادولينيوم (III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

An Engineered Split-TET2 Enzyme for Chemical-inducible DNA Hydroxymethylation and Epigenetic Remodeling

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control cellular functions. The reversal of DNA methylation, or DNA demethylation, is mediated by the ten-eleven translocation (TET) protein family of dioxygenases. Although it has been widely reported that aberrant DNA methylation and demethylation are associated with developmental defects and cancer, how these epigenetic changes directly contribute to the subsequent alteration in gene expression or disease progression remains unclear, largely owing to the lack of reliable tools to accurately add or remove DNA modifications in the genome at defined temporal and spatial resolution. To overcome this hurdle, we designed a split-TET2 enzyme to enable temporal control of 5-methylcytosine (5mC) oxidation and subsequent remodeling of epigenetic states in mammalian cells by simply adding chemicals. Here, we describe methods for introducing a chemical-inducible epigenome remodeling tool (CiDER), based on an engineered split-TET2 enzyme, into mammalian cells and quantifying the chemical inducible production of 5-hydroxymethylcytosine (5hmC) with immunostaining, flow cytometry or a dot-blot assay. This chemical-inducible epigenome remodeling tool will find broad use in interrogating cellular systems without altering the genetic code, as well as in probing the epigenotype&#8722;phenotype relations in various biological systems.

Detailed protocols for introducing an engineered split-TET2 enzyme (CiDER) into mammalian cells for chemical inducible DNA hydroxymethylation and epigenetic remodeling are presented.

إنزيم TET2 انقسام هندسيا للحمض النووي الكيميائية إيندوسيبلي هيدروكسيميثيليشن ويعيد البناء جينية

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control ...

Co-expression of Multiple Chimeric Fluorescent Fusion Proteins in an Efficient Way in Plants

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent proteins and generation of fluorescent fusion proteins have been wildly used as an effective tool to directly visualize the protein localization and dynamics in cells. It is especially useful to compare them with well-known organelle markers after co-expression with the protein of interest. Nevertheless, classical approaches for protein co-expression in plants usually involve multiple independent expression plasmids, and therefore have drawbacks that include low co-expression efficiency, expression-level variation, and high time expenditure in genetic crossing and screening. In this study, we describe a robust and novel method for co-expression of multiple chimeric fluorescent proteins in plants. It overcomes the limitations of the conventional methods by using a single expression vector that is composed of multiple semi-independent expressing cassettes. Each protein expression cassette contains its own functional protein expression elements, and therefore it can be flexibly adjusted to meet diverse expression demand. Also, it is easy and convenient to perform the assembly and manipulation of DNA fragments in the expression plasmid by using an optimized one-step reaction without additional digestion and ligation steps. Furthermore, it is fully compatible with current fluorescent protein derived bio-imaging technologies and applications, such as FRET and BiFC. As a validation of the method, we employed this new system to co-express fluorescently fused vacuolar sorting receptor and secretory carrier membrane proteins. The results show that their perspective subcellular localizations are the same as in previous studies by both transient expression and genetic transformation in plants.

We have developed a novel method for co-expressing multiple chimeric fluorescent fusion proteins in plants to overcome the difficulties of conventional methods. It takes advantage of using a single expression plasmid that contains multiple functionally independent protein expressing cassettes to achieve protein co-expression.

التعبير المشارك من البروتينات الانصهار الفلورسنت تشيميريك متعددة بطريقة فعالة في النباتات

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent ...

Iron Nanowire Fabrication by Nano-Porous Anodized Aluminum and its Characterization

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and data storage. We demonstrate a fabrication method for iron (Fe) nanowires&#160;via electrochemical deposition into anodic&#160;alumina oxide (AAO) templates. The templates are fabricated by anodization of aluminum (Al) discs, and the pore length and diameter are controlled by changing the anodizing conditions. Pores with an average diameter of around 120 nm are created using oxalic acid as the electrolyte. Using this method, cylindrical nanowires are synthesized, which are released by dissolving the alumina using a selective chemical etchant.

In this work, we describe a&#160;protocol to fabricate iron nanowires, including the formation of the porous alumina membrane that is used as the template, electrodeposition into templates using electrolyte solution, and the release of the nanowires into the solution.

الحديد نانوواير التصنيع بواسطة نانو المساميه ألومنيوم بأكسيد وتوصيفها

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and ...

Organic Structure-directing Agent-free Synthesis for *BEA-type Zeolite Membrane

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in petroleum and petrochemical fields because of their high thermal, chemical, and mechanical strength. A *BEA-type zeolite is an interesting membrane material because of its large pore size and wide Si/Al range. This manuscript presents a protocol for *BEA membrane preparation by a secondary growth method that does not use an organic structure-directing agent (OSDA). The preparation protocol consists of four steps: pretreatment of support, seed preparation, dip-coating, and membrane crystallization. First, the *BEA seed crystal is prepared by conventional hydrothermal synthesis using OSDA. The synthesized seed crystal is loaded on the outer surface of a 3 cm long tubular &#945;-Al2O3 support by a dip-coating method. The loaded seed layer is prepared with the secondary growth method using a hydrothermal treatment at 393 K for 7 days without using OSDA. A *BEA membrane having very few defects is successfully obtained. The seed preparation and dip-coating steps strongly affect the membrane quality.

A *BEA seed crystal was loaded on a porous &#945;-Al2O3 support by the dip-coating method, and hydrothermally grown without using an organic structure-directing agent. A *BEA-type zeolite membrane having very few defects was successfully prepared by the secondary growth method.

الهيكل العضوي توجيه وكيل خالية من التوليف ل * BEA من نوع غشاء زيوليت

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in ...