يود المؤلفون أن أشكر لكم كيم ييتس، ايلين فرانكلين، وريبيكا Tjepkema (خدمات رعاية الحيوان والطب البيطري، جامعة أوتاوا) للحصول على المساعدة مع العمليات الجراحية للحيوانات. ويدعم لي هوا تاي من قبل فون دي سانتي بحوث زمالة كيبيك. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة التي تعمل من الابتكار منحة معهد بحوث جمعية السرطان الكندية، وزارة أونتاريو للجائزة البحوث والتنمية الباحث المبكر، والمؤسسة الكندية للإبداع - القائد الفرص منحة لريبيكا أوير.

1. الحفاظ على 4T1 الخلايا السرطانية في المختبر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة معدلة الخلايا السرطانية 4T1 في DMEM كاملة (DMEM، و 10٪ FBS، 1X البنسلين / الستربتوميسين) في 10 سم لوحات زراعة الأنسجة. احتضان في 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2 حاضنة زراعة الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقسام الثقافات 2-3 مرات / الأسبوع. للحفاظ ينبغي ألا يتجاوز بقاء خلايا الأمثل 80٪ التقاء. لا تستخدم لإنشاء خلايا في الجسم الحي الأورام الأولية إذا تم passaged الثقافات في المختبر ل&gt; 1 الشهر لأن هذا يقلل الأورام الخبيثة والمحتملة المتنقل من الخلايا passaged في وقت سابق. </li></ol> 2. حصاد 4T1 الخلايا السرطانية للحقن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح مستنبت من لوحة زراعة الأنسجة باستخدام ماصة باستور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 مل من برنامج تلفزيوني 1X العقيمة التي تحتوي على 2 مل EDTA. السماح للحل PBS احتضان في لوحة عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2 الأنسجة ثقافة حاضنة لمدة 5-7 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل الحصاد PBS من لوحة، صinsing لوحة 2-3X مع الحل، ونقل إلى أنبوب مخروطي 15 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 500 x ج، في 4 درجات مئوية، في جهاز للطرد المركزي المقعد العلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح طاف و resuspend بيليه خلية في المصل خالية DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد تركيز الخلية باستخدام عداد الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع الخلايا مع المصل خالية متوسطة إلى 1X10 6 cells/500 ميكرولتر (1X10 5 cells/50 ميكرولتر (حقن للخلايا ومكان على الجليد. </li></ol> 3. حقن الفئران مع 4T1 الخلايا السرطانية كانت جميع الدراسات على الحيوانات التي أجريت في فقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية على الخدمات البيطرية ورعاية الحيوان من جامعة أوتاوا من التوصيات لجميع الحيوانات تلقي الحقن مثلي أو يزرع الورم. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج الفئران تحت الجلد مع البوبرينورفين (0.05 ملغ / كلغ) 1 ساعة قبل الجراحة لإدارة الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحث والحفاظ على الماوس تحت التخدير باستخدام 2.5٪ isoflurane وخلال مدة injec<html> نشوئها. قرصة قاطع الطريق من الفأرة للكشف عن استجابة منعكس. إذا تم الكشف عن لا شيء، وصلت إلى مستويات التخدير فعالة. ثم يتم تطبيق العقيمة تشحيم العين لمنع جفاف القرنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل 30 G ½ حقنة في &quot;غاية في الدقة&quot; مع بالضبط 50 ميكرولتر من الخلايا التعليق. ضمان أن تتم إزالة جميع فقاعات الهواء من العمود حقنة عن طريق التنصت على جانب حقنة لطرد فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع مؤشر الفأرة (تحت التخدير) بطني حتى الجانب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف موقع الحقن باستخدام مسحة الكحول وإدخال الإبرة أفقيا ومباشرة في 4 الثديية سادة من الدهون، الاستغناء ببطء حجم الحقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مسحة القطن لتنظيف أي تسرب ممكن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح الفئران للتعافي من التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على البوبرينورفين (0.05 ملغ / كلغ) لإدارة الألم الشوري تدار كل 8 ساعات لمدة 2 ايام. </li></ol> 4. إدارة المحيطة بالجراحة علاج ورم في 4T1 وإذ تضع BALB / ج الفئران معشوقة = &quot;P1&quot;&gt; ونظام المعالجة والطريق لإدارة قاح الأنفلونزا مطابق للفيروس العلاج قبل الجراحة حال الورم. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 13 يوما حقن الخلايا السرطانية آخر، قياس الورم الرئيسي باستخدام الفرجار الخارجي. قياس قطرها أكبر طولية (طول) وأعظم القطر المستعرض (العرض) مع الفرجار. يتم استخدام صيغة بيضاوي تعديل لحساب حجم الورم (حجم الورم = 1/2 (طول Ã العرض 2) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 13 يوما حقن الخلايا السرطانية آخر، يجب أن الورم الرئيسي قياس ما يقرب من 1 سم 3. عندما يتحقق هذا القياس الورم، وإعداد العلاج المحيطة بالجراحة كاشف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفيروس حال الورم هو واحد العلاجية المبتكرة التي يمكن للمرء أن إدارة في الفترة المحيطة بالجراحة. إعداد الفيروس حال الورم (1X10 9 PFU / 1 مل) في برنامج تلفزيوني 1X العقيمة ومكان على الجليد قبل الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> آمن ومكان الماوسإلى كابح للحقن في الوريد الذيل الوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين بلطف ذيل الماوس في مياه الحنفية الدافئة لتصور الأوردة الذيل الأفقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل 27 G ½ في &quot;حقنة الأنسولين&quot; على وجه التحديد مع 100 ميكرولتر من العلاج الفيروس حال الورم. ضمان أن تتم إزالة جميع فقاعات الهواء من العمود حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الفأر مع 1X10 8 PFU/100 ميكرولتر / الماوس إلى أحد أوردة الذيل الأفقي. إذا تم إدخال الإبرة في الوريد بشكل مناسب الجانبية، ينبغي أن يشعر أي مقاومة عندما تضغط على الحقنة. </li></ol> 5. استئصال ورم كاملة من التعليم الابتدائي والبطن اليسار استئصال الكلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 14 يوما حقن الخلايا السرطانية آخر، بدء الرعاية المحيطة بالجراحة الروتينية التالية جامعة أوتاوا رعاية الحيوان والخدمات البيطرية وافقت البروتوكولات. علاج الفئران تحت الجلد مع البوبرينورفين (0.05 ملغ / كلغ) 1 ساعة قبل الجراحة لإدارة الألم. لحث والحفاظ على التخدير باستخدام 2.5٪ isoflurane وخلال الجراحة. Uالتانجو الظروف واستخدام الأدوات الجراحية المعقمة المعقمة، وحلق موقع الجراحية ونقيت. تدار الحيوانات السوائل تحت الجلد ومواد التشحيم العين قبل الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (1-2 سم في الطول) بلطف وبشكل كامل لإزالة الورم الرئيسي 4T1 من لوحة الدهون الثديية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق شق 2-3 مع 9 ملم من السلع الاساسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف البطن من خلال قطع في الجلد وطبقة تحت الجلد على طول خط الوسط بطني من الفأرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق في ألبا الخط (3-4 سم) للوصول الماوس البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فضح الجانب الداخلي الأيسر من البطن عن طريق تحريك الأمعاء المغطي إلى الجانب. تأكد من يتم الاحتفاظ الأمعاء رطبة مع المالحة غارقة شاش معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام زوج من ملقط جراحي حادة، فهم الكلية اليسرى بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام المغلفة مضفر خياطة الحرير 3-0 الشمع تعادل في حلقة، ligate نقير من الكلية اليسرى وآمنة مع 3 عقدة الجراحية. إزالة الكلية اليسرى مع SURGIمقص كال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد التعادل خياطة بعناية لضمان تحقيق الإرقاء كافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق طبقة تحت الجلد مع خياطة حلقة مستمرة باستخدام مضفر امتصاص 5-0، ثم طبقة الجلد الأساسية باستخدام مشابك 9 ملم. الخطوات 5،2-5،10 يجب أن تتطلب 10 دقيقة / الحيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على البوبرينورفين (0.05 ملغ / كلغ) لإدارة الألم الشوري تدار كل 8 ساعات لمدة 2 ايام. </li></ol> 6. القتل الرحيم والفئران المعالجة والكمي للورم الرئة عبء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 28 يوما آخر 4T1 حقن الورم، والموت ببطء الفئران وفقا لبروتوكول رعاية الحيوان والخدمات البيطرية في جامعة أوتاوا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رش أسفل الماوس مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق الأولي مع مقص أسفل القفص الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فضح القفص الصدري من خلال قطع في الجلد وطبقة تحت الجلد على طول خط الوسط بطني من تجويف الصدر من الفأرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شقوق الجانبي من خلال الجلد والأنسجة على كل جانب حتى شمال شرقالمسيخ من الفأرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح خارج الرئتين عن طريق استيعاب بلطف الرئة أثناء القص بعيدا النسيج الضام فوق وتحت الرئتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخراج Presoak الرئتين في برنامج تلفزيوني البارد لإزالة الدم المتبقية، ثم وضع في 10٪ مخزنة الفورمالين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصوير كل الرئة لتقييم الانبثاث ورم. وزن الرئتين لعبء الورم الكمي. </li></ol>

<ol>
	<li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+postoperative+metastatic+disease+by+inhibiting+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells.">Preventing postoperative metastatic disease by inhibiting surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Cancer Res. 73, 97-107 (2013).</li><li>Seth, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Stress+Promotes+the+Development+of+Cancer+Metastases+by+a+Coagulation-Dependent+Mechanism+Involving+Natural+Killer+Cells+in+a+Murine+Model.">Surgical Stress Promotes the Development of Cancer Metastases by a Coagulation-Dependent Mechanism Involving Natural Killer Cells in a Murine Model.</a> Ann. Surg. , (2012).</li><li>Shakhar, G., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+prophylactic+measures+against+postoperative+immunosuppression:+could+they+reduce+recurrence+rates+in+oncological+patients.">Potential prophylactic measures against postoperative immunosuppression: could they reduce recurrence rates in oncological patients.</a> Ann. Surg. Oncol. 10, 972-992 (2003).</li><li>Shiromizu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+laparotomy+and+laparoscopy+on+the+establishment+of+lung+metastasis+in+a+murine+model.">Effect of laparotomy and laparoscopy on the establishment of lung metastasis in a murine model.</a> Surgery. 128, 799-805 (2000).</li><li>Tsuchiya, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+surgical+stress+promotes+tumor+metastasis.">Increased surgical stress promotes tumor metastasis.</a> Surgery. 133, 547-555 (2003).</li><li>Lanier, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NK+cell+recognition.">NK cell recognition.</a> Annu. Rev. Immunol. 23, 225-274 (2005).</li><li>Espi, A., Arenas, J., Garcia-Granero, E., Marti, E., Lledo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+curative+surgery+on+natural+killer+cell+activity+in+colorectal+cancer.">Relationship of curative surgery on natural killer cell activity in colorectal cancer.</a> Dis. Colon Rectum. 39, 429-434 (1996).</li><li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+surgical+stress+impairment+of+human+perioperative+natural+killer+cell+cytotoxicity.">Mechanism of surgical stress impairment of human perioperative natural killer cell cytotoxicity.</a> Arch. Surg. 126, 338-342 (1991).</li><li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+stress+impairs+natural+killer+cell+programming+of+tumor+for+lysis+in+patients+with+sarcomas+and+other+solid+tumors.">Surgical stress impairs natural killer cell programming of tumor for lysis in patients with sarcomas and other solid tumors.</a> Cancer. 70, 2192-2202 (1992).</li><li>Ben-Eliyahu, S., Page, G. G., Yirmiya, R., Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+stress+and+surgical+interventions+promote+tumor+development+by+suppressing+natural+killer+cell+activity.">Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity.</a> Int. J. Cancer. 80, 880-888 (1999).</li><li>Page, G. G., Blakely, W. P., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+postoperative+pain+is+a+mediator+of+the+tumor-promoting+effects+of+surgery+in+rats.">Evidence that postoperative pain is a mediator of the tumor-promoting effects of surgery in rats.</a> Pain. 90, 191-199 (2001).</li><li>Glasner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+survival+rates+in+two+models+of+spontaneous+postoperative+metastasis+in+mice+by+combined+administration+of+a+beta-adrenergic+antagonist+and+a+cyclooxygenase-2+inhibitor.">Improving survival rates in two models of spontaneous postoperative metastasis in mice by combined administration of a beta-adrenergic antagonist and a cyclooxygenase-2 inhibitor.</a> J. Immunol. 184, 2449-2457 (2010).</li><li>Benish, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+use+of+beta-blockers+and+COX-2+inhibitors+may+improve+immune+competence+and+reduce+the+risk+of+tumor+metastasis.">Perioperative use of beta-blockers and COX-2 inhibitors may improve immune competence and reduce the risk of tumor metastasis.</a> Ann. Surg. Oncol. 15, 2042-2052 (2008).</li><li>Goldfarb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+postoperative+immune+status+and+resistance+to+cancer+metastasis:+a+combined+perioperative+approach+of+immunostimulation+and+prevention+of+excessive+surgical+stress+responses.">Improving postoperative immune status and resistance to cancer metastasis: a combined perioperative approach of immunostimulation and prevention of excessive surgical stress responses.</a> Ann. Surg. 253, 798-810 (2011).</li><li>Tartter, P. I., Steinberg, B., Barron, D. M., Martinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prognostic+significance+of+natural+killer+cytotoxicity+in+patients+with+colorectal+cancer.">The prognostic significance of natural killer cytotoxicity in patients with colorectal cancer.</a> Arch. Surg. 122, 1264-1268 (1987).</li><li>Fujisawa, T., Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+tumor+killing+activity+as+a+prognostic+factor+in+primary+resected+nonsmall+cell+carcinoma+of+the+lung.">Autologous tumor killing activity as a prognostic factor in primary resected nonsmall cell carcinoma of the lung.</a> Cancer. 79, 474-481 (1997).</li><li>Guillot, B., Bessis, D., Dereure, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucocutaneous+side+effects+of+antineoplastic+chemotherapy.">Mucocutaneous side effects of antineoplastic chemotherapy.</a> Expert Opin. Drug Saf. 3, 579-587 (2004).</li><li>Deehan, D. J., Heys, S. D., Ashby, J., Eremin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-2+(IL-2)+augments+host+cellular+immune+reactivity+in+the+perioperative+period+in+patients+with+malignant+disease.">Interleukin-2 (IL-2) augments host cellular immune reactivity in the perioperative period in patients with malignant disease.</a> Eur. J. Surg. Oncol. 21, 16-22 (1995).</li><li>Houvenaeghel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+feasibility+of+perioperative+treatment+with+interferon-alpha+2a+in+advanced+cancers.">Tolerance and feasibility of perioperative treatment with interferon-alpha 2a in advanced cancers.</a> Int. Surg. 82, 165-169 (1997).</li><li>Klatte, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+immunomodulation+with+interleukin-2+in+patients+with+renal+cell+carcinoma:+results+of+a+controlled+phase+II+trial.">Perioperative immunomodulation with interleukin-2 in patients with renal cell carcinoma: results of a controlled phase II trial.</a> Br. J. Cancer. 95, 1167-1173 (2006).</li><li>Oosterling, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+IFN-alpha+to+avoid+surgically+induced+immune+suppression+in+colorectal+cancer+patients.">Perioperative IFN-alpha to avoid surgically induced immune suppression in colorectal cancer patients.</a> Histol. Histopathol. 21, 753-760 (2006).</li><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+influenza+vaccination+reduces+post-operative+metastatic+disease+by+reversing+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells.">Perioperative influenza vaccination reduces post-operative metastatic disease by reversing surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Clin Cancer Res. , (2013).</li></ol>

الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

استئصال الجراحي هو الدعامة الأساسية لعلاج المرضى الذين يعانون من الأورام الخبيثة للصلب المترجمة. حتى مع استئصال كامل، العديد من المرضى يصابون تكرار النقيلي ويموت في نهاية المطاف من مرضهم. يوفر فترة ما بعد الجراحة على الفور بيئة مثالية لتشكيل الانبثاث السرطان، والتضمين، في جزء كبير منه، من خلال قمع الخلايا القاتلة الطبيعية بعد العملية الجراحية. على الرغم من هذا، فإنه لا تزال نافذة العلاجية التي يتم تجاهلها إلى حد كبير. لا يوجد حاليا أي علاجات المضادة للسرطان المحيطة بالجراحة القياسية التي تهدف إلى منع الانبثاث بعد العملية الجراحية. التحدي الحالي هو تحديد العلاجات الآمنة والواعدة التي من شأنها تنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية في الفترة المحيطة بالجراحة وبالتالي منع إقامة المرض micrometastatic. هذه العلاجات يجب أن تتسم بصرامة لسلامة وفعالية في النماذج الحيوانية قبل السريرية ومن ثم ترجمتها إلى التجارب السريرية المصممة بعناية. نسبة الابتدائيةnale من تطوير نموذج الفأر من الإجهاد الورم الجراحية هو استكشاف آليات قمع المناعة وانتشار النقيلي بعد الجراحة وتقييم المناعية مبتكرة مع إمكانية استخدامها في المستقبل في مرضى السرطان خضوعه لعملية جراحية لإزالة الورم الرئيسي. لتحقيق هذا الهدف، تم تطوير نموذج الفئران 4T1 سرطان الثدي إلى جانب الإجهاد الجراحية. في حين أن خط الخلية 4T1 هو الفئران &quot;سرطان الثدي&quot;، وسبب لاستخدام هذا الخط الخلية هي استنساخ الانبثاث عفوية تسمح لنا لتقييم آثار الإجهاد الجراحية في نموذج سرطان واقعية. في هذا السياق، فإن الأصل الفعلي للخباثة هو أقل أهمية من البيولوجيا المحتملة والورم النقيلي. العنصر الحاسم الثاني من نموذجنا هو وضع إجراء العمليات الجراحية لتشبه حيوان جراحة سرطان الإنسان. في هذا الحيوان نموذج الإجهاد الجراحية، يتم رفعه الابتدائي 4T1 ورم الثدي بعد أن تصل إلى 1 سم 3. لجراحات السرطان في المرضى من البشر تشمل قمع المناعة هامة، وهي استئصال الكلية البطن المفتوح في &quot;الإجهاد الجراحي&quot; مجموعات العلاج بالإضافة إلى القيام بها. كما يقارن مع أكثر استئصال الورم التقليدية في البشر، وطبيعة الغازية لاستئصال الكلية اليسرى الكامل مشابه جدا لأنواع عديدة من العلاجات الجراحية عن الأورام الخبيثة الصلبة، بما في ذلك جراحة لسرطان القولون والمستقيم، وسرطان المبيض وسرطان الكلى وسرطان البنكرياس والرئة والمريء السرطان. بالإضافة إلى ذلك، فإننا نقول إن التغيرات الفسيولوجية التي تحدث قبل العملية العميقة، وذلك بسبب البطن + استئصال الكلية، يستنسخ بشكل كاف التغيرات الفسيولوجية التي تحدث الساحقة بعد الجراحة الغازية لمعظم الأورام الخبيثة الصلبة. للسيطرة على العوامل المحيطة بالجراحة التي يمكن أن تؤدي إلى الإجهاد المفرط الجراحية والوفيات، ومدة التخدير والجراحة والحفاظ على درجة حرارة الجسم أثناء الجراحة ويعرف على وجه التحديد. يتم تنفيذ كل هذه المعايير بدقة ود المحدد في بروتوكول جراحة جهدنا لتعكس الرعاية المحيطة بالجراحة الروتينية في مرضى سرطان الإنسان. توقيت العلاج المحيطة بالجراحة هو عنصر حاسم إضافية إلى نموذج الانقاذ المحيطة بالجراحة. 4T1 ورم الفئران الحاملة قد تمت معالجتها سابقا مع 3 نظم لقاح الأنفلونزا: المواد الجديدة المساعدة (نظرا 5 أيام قبل الجراحة)، المحيطة بالجراحة (بالنظر في نفس يوم الجراحة) والمحيطة بالجراحة + متعدد الجرعات (بالنظر في يوم الجراحة، تليها 2 جرعات إضافية تعطى 5 أيام على حدة). بشكل ملحوظ، وجميع وسائط 3 من اللقاح العلاج انخفضت بشكل ملحوظ الانبثاث الرئة 22. ومع ذلك، لقاح الإنفلونزا قبل العملية تدار في جرعة واحدة خفض الانبثاث أكثر فعالية. بشكل جماعي، تسليط الضوء على هذه التجارب أهمية الفترة المحيطة بالجراحة الفورية ونافذة ضيقة العلاجية للتدخل في عملية النقيلي. استخدام المحيطة بالجراحة من المناعية مبتكرة مثل oncolyفيروس التشنج واللقاحات وحصرا اقتصرت على فريق بحثنا. أثبتنا للمرة الأولى أن إدارة المحيطة بالجراحة من ORF حال الورم الرواية واللقاحية الفيروسات يمكن عكس NK قمع الخلية التالية لعملية جراحية في النماذج الحيوانية 1. الأهم من ذلك، وهذا الإنقاذ من وظيفة المناعة يرتبط مع انخفاض في تشكيل ما بعد الجراحة الانبثاث. في الدراسات الإنسانية، وكان المرضى بعد الجراحة جراحة سرطان خفض NK السمسة الخلايا ويزيد بشكل ملحوظ المحيطة بالجراحة OV نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية في مرضى السرطان 1. باستخدام لقاحات وقائية المتاحة تجاريا، أثبتنا أن الإدارة قاح الأنفلونزا المحيطة بالجراحة انخفاض كبير الانبثاث ورم وتحسين السمية لخلايا NK في نماذج الورم قبل السريرية. في دراسات الإنسان، لقاح أنفلونزا تعزز إلى حد كبير نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية في الإنسان المانحين صحية ومرضى جراحة السرطان 22. وتستخدم الكثير من النهج للحد ملغاةتكرار إيه، بما في ذلك العلاج الكيميائي، والإشعاع، ولكن هذه العلاجات عادة تدار أسابيع إلى أشهر قبل (المواد الجديدة المساعدة) أو بعد (مساعد) لعملية جراحية. البحوث في هذا المجال يدل على أن فترة ما بعد الجراحة على الفور أمر حاسم في تحديد معدلات عودة الورم على المدى الطويل. لذا، والتدخلات السريرية في شكل المناعية خلال هذه الفترة الحرجة قد تكون لها فوائد كبيرة على المدى الطويل. نقدم لدراسات باستخدام نموذج الفأر من عفوية الانبثاث الرئة والإجهاد الجراحية فرصة فريدة لاستكشاف علاجات جديدة وتحديد قدرتها على منع كبت المناعة المحيطة بالجراحة في مرضى جراحة السرطان وبالتالي يقلل معدلات تكرار الإصابة بالسرطان.

الجراحة هي عنصر حاسم في علاج السرطان العلاجية في الأورام الصلبة، ولكن على الرغم من بتر كاملة، وكثير من المرضى يصابون تكرار النقيلي ويموت في نهاية المطاف من مرضهم. على نحو متزايد، وفترة ما بعد الجراحة، وذلك نتيجة لاستجابة الإجهاد الفسيولوجية لعملية جراحية، بما في ذلك تخثر الدم، وإطلاق سراح من عوامل النمو، وقمع المناعي، ويتم التعرف على الوقت الحرج لتطوير الانبثاث. لدينا مجموعة و1،2 الآخرين 3-5 أظهرت أن فترة ما بعد الجراحة على الفور هو الوقت عرضة بشكل فريد لتشكيل النقائل. واحدة من الآليات الرئيسية المسؤولة عن الآثار prometastatic من الجراحة هو ضعف ما بعد الجراحة من القاتلة الطبيعية (NK) الخلايا 1-3. الخلايا القاتلة الطبيعية هي اللمفاويات السامة للخلايا من الجهاز المناعي الفطري تشارك في السيطرة على نمو الورم والانبثاث 6. وقد تم توثيق ضعف الخلايا القاتلة الطبيعية بعد الجراحة طن كل من المرضى من البشر 1،7-9 والنماذج الحيوانية 1،10،11. بعد العملية الجراحية NK قمع الخلايا يرتبط مع زيادة الانبثاث في النماذج الحيوانية من الانبثاث عفوية وزرع 1،11-14، بينما في الدراسات الإنسانية، ويرتبط النشاط NK منخفضة خلال الفترة المحيطة بالجراحة مع ارتفاع معدل تكرار الاصابة بالسرطان والوفيات 15،16. على الرغم من هذا، هناك حاليا أي علاجات السرطان تتناول على وجه التحديد التغييرات التي تحدث prometastatic مباشرة بعد جراحة سرطان. الفترة المحيطة بالجراحة يمثل نافذة من الفرص العلاجية التي للتدخل في عملية النقيلي. بينما علاجات السرطان التقليدية مثل العلاج الكيماوي السامة للخلايا، وتعتبر سامة جدا لأن تدار على المرضى يتعافى من عملية جراحية كبرى 17، العلاجات المناعية هي المرشحين المثالي لإدارة المحيطة بالجراحة. استخدام المحيطة بالجراحة المؤتلف IL-2 والإنترفيرون Î ³ تم استكشاف طن المرحلة المبكرة من التجارب السريرية تثبت قدرتها على منع ما بعد الجراحة قمع الخلايا القاتلة الطبيعية وتحسين البقاء على قيد الحياة خالية من التقدم 18-21. للأسف، وعرقل مزيد من التطوير من قبل التحمل هذا العلاج خلوى غير محددة جنبا إلى جنب مع 17 عملية جراحية كبرى. الفيروسات هي أيضا غير محددة تفعيل قوي من الخلايا القاتلة الطبيعية. وقد أثبتت أبحاثنا في وقت سابق ان الادارة قبل الجراحة تكرار الفيروسات، مثل الرواية المضادة للسرطان حال الورم الفيروسات (OV)، وnonreplicating اللقاحات الفيروسية، مثل لقاح الأنفلونزا، يمكن أن تمنع الناجم عن الجراحة NK ضعف الخلايا وتخفيف المرض المنتشر 1،22. نموذج جراحية وصفها في هذه الورقة سهلت فهمنا من الآليات التي تشارك في انتشار ونمو الخلايا السرطانية بعد الجراحة، وسمح لنا لاستكشاف رواية استهداف العلاجات التي يمكن أن تدار في الفترة المحيطة بالجراحة. لتحقيق هذا الهدف، حيواننموذج من الإجهاد الجراحية وعفوية الانبثاث واد المتقدمة. نموذج يجعل من استخدام أورام سرطان الثدي الماوس (BALB / ج - 4T1) التي تكون قادرة على تنتشر بشكل عفوي من الغدة الثديية الأولية إلى مواقع بعيدة متعددة ولا سيما الرئتين. في اليوم 0، يتم زرع خلايا سرطان الثدي في لوحة الماوس الدهون الثدي. في يوم 14 آخر الورم زرع، يتم إجراء استئصال كامل الورم الثديية الأولية في جميع الحيوانات. مجموعة فرعية من الحيوانات يتلقى الإجهاد جراحية إضافية في شكل استئصال الكلية في البطن. في يوم 28، العقيدات ورم الرئة جراحيا في شدد وليس السيطرة على الفئران الجراحة مقارنة معزولة وكميا. في هذا النموذج الحيواني من السرطان وجراحة، ويجري حاليا دراسة آثار عملية جراحية في الانبثاث السرطان ويتم اختبار فعالية إدارة المحيطة بالجراحة من المناعية مبتكرة، بما في ذلك تكرار وnonreplicating مقرها فيروسي المنشطات المناعية للمرة الأولى.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="647">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:111px;">Corning Cell-Gro</td>
			<td style="width:153px;">10-013-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Inactivated Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:111px;">HyClone</td>
			<td style="width:153px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1X sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:111px;">Corning cell gro</td>
			<td style="width:153px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:111px;">Chiron, Guelph</td>
			<td style="width:153px;">RXN309968</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isofluorane</td>
			<td style="width:111px;">Baxter Corp</td>
			<td>1001936040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1/2 ultra-fine syringe</td>
			<td style="width:111px;">Terumo</td>
			<td>30 Gauge, SS05M3009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9mm staples</td>
			<td style="width:111px;">Braintree</td>
			<td style="width:153px;">ACS BX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">5-0 braided absorbable suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">UL-202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">3-0 wax braided silk suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">S-194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:111px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">SF100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4T1 tumor cells</td>
			<td style="width:111px;">ATCC</td>
			<td style="width:153px;">CRL-2539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BALB/c</td>
			<td style="width:111px;">Charles Rivers Labs</td>
			<td style="width:153px;">Strain Code:028</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies

استئصال الجراحي هو العلاج الضروري بالنسبة لمعظم مرضى السرطان، ولكن الجراحة يدفع ضعف في جهاز المناعة، وهذا وقد تم ربط لتطوير المرض المنتشر في النماذج الحيوانية ومرضى السرطان. وقد أثبت العمل قبل السريرية من مجموعتنا وغيرهم من قمع عميق من الوظيفة المناعية الفطرية، وتحديدا الخلايا القاتلة الطبيعية في فترة ما بعد الجراحة وهذا يلعب دورا رئيسيا في تطوير تعزيز الانبثاث بعد الجراحة. وقد ركزت الدراسات على الحيوانات وعدد قليل نسبيا من التجارب السريرية على تميز وعكس الآثار الضارة للجراحة سرطان. باستخدام نموذج حيواني صارمة من الانتشار إلى عفويا الأورام الجراحية والإجهاد، وقد تجلى تعزيز جراحة سرطان على تطوير الانبثاث الرئة. في هذا النموذج، يتم زرع خلايا سرطان الثدي 4T1 في لوحة الماوس الدهون الثديية. في يوم آخر 14 ورم زرع، وهو استئصال كامل للورم الثدي الأساسي هو performeد في جميع الحيوانات. مجموعة فرعية من الحيوانات يتلقى الإجهاد جراحية إضافية في شكل استئصال الكلية في البطن. في اليوم 28، وكميا العقيدات ورم الرئة. عندما أعطيت العلاج المناعي على الفور قبل الجراحة، تم الكشف عن التنشيط العميق من الخلايا المناعية التي حالت دون تطوير الانبثاث بعد الجراحة. في حين أن نموذج جراحة ورم الثدي 4T1 يسمح لمحاكاة آثار الإجهاد جراحية في البطن على الانبثاث ورم وانطباقها على أنواع الأورام الأخرى يحتاج لفحصها. التحدي الحالي هو تحديد المناعية آمنة وواعدة في نماذج الماوس قبل السريرية وترجمتها إلى علاجات المحيطة بالجراحة قابلة للحياة إلى أن تعطى لمرضى جراحة السرطان لمنع تكرار المرض المنتشر.

وقد تم تطوير نموذج الفأر استنساخه من الإجهاد الجراحية التي ينتج عنها تعزيز درامية الانبثاث الرئوي. في آخر يوم 28 4T1 الورم التلقيح (و 14 يوما بعد استئصال الورم + / - استئصال الكلية في البطن)، وكان حصاد الرئتين وتصور لالانبثاث. جراحة يزيد بشكل واضح من كمية الانبثاث الرئوي مقارنة مع الفئران غير المعالجة كما يتضح من الصور، الرئة (الشكل 1A)، والعد العقيدات الرئة (الشكل 1B) والوزن الرئة (الشكل 1C). الإدارة قبل الجراحة تكرار الفيروس حال الورم وقاح الأنفلونزا المعطل ينقذ كثيرا من الآثار prometastatic من جراحة سرطان (أرقام 1A-C). لتحديد ما إذا كانت الخلايا القاتلة الطبيعية تلعب دور الوسيط في منع الانبثاث علاج آخر لقاح، وخلايا NK المنضب عقاقيري استخدام الألغام المضادة للasialo-GM-1 في نموذج الانبثاث ورم. في غياب NKالخلايا، لاحظنا على إلغاء التأثير العلاجي للالمناعية المحيطة بالجراحة (أرقام 2A و 2B). وتشير هذه البيانات إلى أن إزالة ورم الانبثاث في نموذجنا الإجهاد الجراحية يتم بوساطة أساسا عن طريق الفيروسات وتفعيل قاح الأنفلونزا حال الورم من الخلايا القاتلة الطبيعية NK واللاحقة بوساطة تحلل الورم. لمزيد من تميز وظيفة خلايا NK التالية إدارة المحيطة بالجراحة من الفيروس حال الورم وقاح الأنفلونزا، وجرى تقييم فيفو السابقين NK قتل الخلية. لفترة وجيزة، تجميع وفرزها DX5 + تم عزل خلايا NK من splenocytes من أكد جراحيا والسيطرة على الفئران. تم cocultured أنها لمدة 4 ساعة مع الكروم وصفت YAC-1 الخلايا المستهدفة، في المستجيب نسب مختلفة لاستهداف، تليها قياس طاف الإفراج الكروم مع عداد غاما. عملية جراحية الناجم عن خلل كبير في الخلية السمسة NK جنبا إلى جنب مع انتعاش كبير في قتل NK التالية إدارة المحيطة بالجراحة من الفيروس حال الورم وinflلقاح uenza مقارنة مع الجراحة وحدها لوحظ (أرقام 2C و 2D). أخذت معا، تثبت هذه النتائج أن قمع الخلايا القاتلة الطبيعية المحيطة بالجراحة يمكن علاجها بنجاح والحد من انتشار المرض المنتشر مع العلاج مناعة الرواية. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1.jpg" /> الشكل 1. المضادة للسرطان حال الورم الفيروسات والأنفلونزا لقاح رواية المحيطة بالجراحة كعلاج ضد تعزيز الناجم عن الجراحة الانبثاث الرئة. تقييم 4T1 الانبثاث ورم الرئة في يوم 28 من مجموعات العلاج المشار إليه من قبل (A) والصور من الرئتين ممثل، (B) تعداد ورم الرئة العقيدات و(C) الأوزان الرئة. البيانات هي ممثل من 3 تجارب مماثلة مع n = 5-10/group (*، ص = 0.01؛ **، ف &lt;0.0001؛<html> نانوثانية، وليس كبيرا). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2.jpg" /> الشكل 2. الإجهاد يزيد الجراحية الرئة الانبثاث الورم عن طريق إضعاف الخلايا القاتلة الطبيعية. (A، B) الكمي لالانبثاث ورم الرئة في الفئران التي عولجت جراحيا أكد مع العلاج المحيطة بالجراحة الرواية. (C، D) قدرة DX5 تنقيته + الخلايا القاتلة الطبيعية من جراحيا أكد وضوابط غير المعالجة لقتل الخلايا السرطانية. يتم عرض البيانات كما يعني في المئة (+ / - SD) الإفراج الكروم من الآبار ثلاث نسخ للE المشار إليه: نسب T. البيانات هي ممثل من 3 تجارب مماثلة حيث n = 4-5/group (*، ص = 0.01؛ **، ع &lt;0.005؛ نانوثانية، وليس كبيرا)./ www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg &quot;الهدف =&quot; _blank &quot;&gt; الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies at JoVE.c

A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

ويستخدم نموذج الورم الماوس من الإجهاد الجراحية لاستكشاف كيفية قمع المناعة بعد العملية الجراحية تعزز المرض المنتشر وتقييم العلاجات المحيطة بالجراحة مناعة.

نموذج الفأر ورم من الإجهاد الجراحية لاستكشاف آليات ما بعد الجراحة المناعة وتقييم رواية المحيطة بالجراحة المناعية

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

a-mouse-tumor-model-surgical-stress-to-explore-mechanisms

Research

JoVE Journal

Medicine

29.8K Views.  Ottawa Hospital Research Institute.  ويستخدم نموذج الورم الماوس من الإجهاد الجراحية لاستكشاف كيفية قمع المناعة بعد العملية الجراحية تعزز المرض المنتشر وتقييم العلاجات المحيطة بالجراحة مناعة. 

Video: A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined by current drug efficacy tests and the efficacy on patients. Thus, novel and reliable methods for evaluating drug efficacy are warranted in pre-clinical phase. In vitro culture of tumor tissues, including cell lines, has substantial phenotypic, genetic, and epigenetic alterations of cancer cells caused by artificial environment of cell culture, which may not reflect the biology of original tumors in situ. Xenograft models with the immunodeficient mice also have limitations, i.e., the lack of immune system and interspecies genetic and epigenetic discrepancies in microenvironment. Here, we demonstrate a novel method using the surgical specimens of malignant glioma as undissociated tumor blocks to evaluate treatment effects. To validate this method, data with the current first-line chemotherapeutic agent, temozolomide (TMZ), are described.


We used the freshly-removed surgical specimen of malignant glioma for our experiments. We performed intratumoral injection of TMZ or other drug candidates, followed by incubation and analysis on surgical specimens. Here, we sought to establish a tumor tissue explant method as a platform to determine the efficacy of novel anti-cancer therapies so that we may be able to overcome, at least, some of the current limitations and fill the existing gap between the current experimental data and the efficacy on an actual patient's tumor. This method may have the potential to accelerate identifying novel chemotherapeutic agents for solid cancer treatment.

Here, we established a method for drug efficacy testing with surgical specimens of brain tumors, termed &#x201C;tumor explant method&#x201D;. With this method, we can evaluate drug efficacy without breaking the microenvironment of solid tumors. To validate reliability of this method, we describe representative data with our glioma specimen treated with the current first-line chemotherapeutic agent, temozolomide.

أسلوب الرواية تطوير أدوية لمكافحة السرطان باستخدام Explants ورم العينات الجراحية


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

توقف القلب والإنعاش القلبي Normothermic : نموذج الفأر من نقص التروية ، إعادة إشباع الخلايا الإصابات

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our understanding of the mechanisms underlying parkinsonian symptoms, since it recapitulates the changes in basal ganglia circuitry and pharmacology observed in parkinsonian patients1-4. However, the precise cellular and molecular changes occurring at cortico-striatal synapses of the output pathways within the striatum, which is the major input region of the basal ganglia remain elusive, and this is believed to be site where pathological abnormalities underlying parkinsonian symptoms arise3,5.
In PD, understanding the mechanisms underlying changes in basal ganglia circuitry following degeneration of the nigro-striatal pathway has been greatly advanced by the development of bacterial artificial chromosome (BAC) mice over-expressing green fluorescent proteins driven by promoters specific for the two striatal output pathways (direct pathway: eGFP-D1; indirect pathway: eGFP-D2 and eGFP-A2a)8, allowing them to be studied in isolation. For example, recent studies have suggested that there are pathological changes in synaptic plasticity in parkinsonian mice9,10. However, these studies utilised juvenile mice and acute models of parkinsonism. It is unclear whether the changes described in adult rats with stable 6-OHDA lesions also occur in these models. Other groups have attempted to generate a stable unilaterally-lesioned 6-OHDA adult mouse model of PD by lesioning the medial forebrain bundle (MFB), unfortunately, the mortality rate in this study was extremely high, with only 14% surviving the surgery for 21 days or longer11. More recent studies have generated intra-nigral lesions with both a low mortality rate &gt;80% loss of dopaminergic neurons, however expression of L-DOPA induced dyskinesia11,12,13,14 was variable in these studies. Another well established mouse model of PD is the MPTP-lesioned mouse15. Whilst this model has proven useful in the assessment of potential neuroprotective agents16, it is less suitable for understanding mechanisms underlying symptoms of PD, as this model often fails to induce motor deficits, and shows a wide variability in the extent of lesion17, 18.
Here we have developed a stable unilateral 6-OHDA-lesioned mouse model of PD by direct administration of 6-OHDA into the MFB, which consistently causes &gt;95% loss of striatal dopamine (as measured by HPLC), as well as producing the behavioural imbalances observed in the well characterised unilateral 6-OHDA-lesioned rat model of PD. This newly developed mouse model of PD will prove a valuable tool in understanding the mechanisms underlying generation of parkinsonian symptoms.

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson&#039;s Disease

A protocol for performing unilateral 6-OHDA lesions of the medial forebrain bundle in mice is described. This method has a low mortality rate (13.3 %) with 89% of the surviving animals showing &#62;95% loss of striatal dopamine and 90.63&#177;-4.02 % ipsiversive rotational bias towards the side of the lesion.

تطوير نموذج من جانب واحد lesioned الفأر 6 OHDA من مرض باركنسون

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

استخدام نموذج حيواني للتسمم لتقييم العلاجات العشبية رواية

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and acquired diseases. Apart from congenital or inherited abnormalities with the requirement for long-term expression of the delivered gene, several non-inherited perinatal conditions, where short-term gene expression or pharmacological intervention is sufficient to achieve therapeutic effects, are considered as potential future indications for this kind of approach. Candidate diseases for the application of short-term prenatal therapy could be the transient neonatal deficiency of surfactant protein B causing neonatal respiratory distress syndrome1,2 or hyperoxic injuries of the neonatal lung3. Candidate diseases for permanent therapeutic correction are Cystic Fibrosis (CF)4, genetic variants of surfactant deficiencies5 and &alpha;1-antitrypsin deficiency6.
Generally, an important advantage of prenatal gene therapy is the ability to start therapeutic intervention early in development, at or even prior to clinical manifestations in the patient, thus preventing irreparable damage to the individual. In addition, fetal organs have an increased cell proliferation rate as compared to adult organs, which could allow a more efficient gene or stem cell transfer into the fetus. Furthermore, in utero gene delivery is performed when the individual's immune system is not completely mature. Therefore, transplantation of heterologous cells or supplementation of a non-functional or absent protein with a correct version should not cause immune sensitization to the cell, vector or transgene product, which has recently been proven to be the case with both cellular and genetic therapies7.
In the present study, we investigated the potential to directly target the fetal trachea in a mouse model. This procedure is in use in larger animal models such as rabbits and sheep8, and even in a clinical setting9, but has to date not been performed before in a mouse model. When studying the potential of fetal gene therapy for genetic diseases such as CF, the mouse model is very useful as a first proof-of-concept because of the wide availability of different transgenic mouse strains, the well documented embryogenesis and fetal development, less stringent ethical regulations, short gestation and the large litter size.
Different access routes have been described to target the fetal rodent lung, including intra-amniotic injection10-12, (ultrasound-guided) intrapulmonary injection13,14 and intravenous administration into the yolk sac vessels15,16 or umbilical vein17. Our novel surgical procedure enables researchers to inject the agent of choice directly into the fetal mouse trachea which allows for a more efficient delivery to the airways than existing techniques18.

We developed a novel surgical approach for intratracheal administration of bioactive agents into the mouse fetus. The delivery route is more efficient in targeting the fetal mouse lungs than the commonly used intra-amniotic injection. This procedure has to date not been described in a mouse model.

وسيلة جديدة لإدارة الجراحية داخل الرغامى وكلاء الحيويه في نموذج الفأر الجنينية

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

رواية عالية الدقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنية التصوير لدراسة الاستجابة الديناميكية للمنشآت داخل القحف لنمو الورم والتداوي

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

بدء النقيلي سرطان الثدي عن طريق استهداف ظهارة الأقنية مع اتش، لجنة المساواة العرقية: رواية المعدلة وراثيا نموذج الفأر من سرطان الثدي

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer metastasis. Indeed, the number of CTCs correlates with tumor size. Here, a detailed description is provided of a methodology for isolation and propagation of CTCs from a syngeneic mouse model of hepatocellular carcinoma (HCC) which allows for downstream analysis of potentially important molecular mechanisms of solid organ tumor metastasis. This method is efficient and reproducible. It is a non-invasive technique and, therefore, has potential to replace the invasive biopsy of tissues from humans which may be associated with complications. Therefore, the method discussed here allows for the isolation and propagation of CTCs from whole blood samples such that they can be examined and characterized. This has potential for future adaptation for clinical applications such as diagnosis, and personalized targeted therapy.

Circulating tumor cells (CTCs) have been shown to play an important role in tumor metastasis. Here, a method for the isolation and propagation of CTCs from the whole blood of a syngeneic mouse tumor model of hepatocellular carcinoma (HCC) metastasis is described.

العزلة ونشر تعميم الخلايا السرطانية من ماوس السرطان نموذج

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

رواية فأري موديل الفشل شرياني الناسور: العملية الجراحية في التفاصيل

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an otherwise dynamic system, and successive phases are easily overlooked or misinterpreted. Live-cell imaging and time-lapse microscopy, in which living cells can be followed for hours or even days in a more or less continuous fashion, are therefore very informative. The protocol described here allows for the investigation of the fate of chemotherapeutic nanoparticles after the delivery of doxorubicin (dox) in living cells. Dox is an intercalating agent that must be released from its nanocarrier to become biologically active. In spite of its clinical registration for more than two decades, its uptake, breakdown, and drug release are still not fully understood. This article explores the hypothesis that lipid-based nanoparticles are taken up by the tumor cells and are slowly degraded. Released dox is then translocated to the nucleus. To prevent fixation artifacts, live-cell imaging and time-lapse microscopy, described in this experimental procedure, can be applied.

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Live-cell imaging is a powerful tool to visualize dynamic processes. The examination of fixed cells provides only static pictures, which can lead to misinterpretation and confusion about the process. This work presents a method to study uptake, drug release, and intracellular localization of liposomal nanoparticles in living cells.

استخدام في المختبر خلية يعيش التصوير لاستكشاف تشريعات تسليمها بالقاعدة الدهنية جسيمات نانوية

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...