نحن ممتنون لمختبر الدكتور روبرت Kerbel (جامعة تورونتو، معهد بحوث سونيبروك، تورنتو، كندا) للمساعدة التقنية والخبرات في تطوير هذا الإجراء. نود أيضا أن نشكر الدكتور سكستون ساندرا وروزويل بارك للسرطان معهد إدارة مختبر الثروة الحيوانية. وأيد هذا العمل من قبل على جائزة من مؤسسة روزويل بارك التحالف (لJMLE).

1. مثلي ورم الكلى زرع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثقافة الخلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل زرع مثلي، وتنمو خلايا فأر رينكا لوك كما أحادي الطبقة إلى 75٪ confluency. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التالية trypsinization وإعادة تعليق في 5٪ FBS تحتوي على وسائل الإعلام، والخلايا الطرد المركزي في 1000 دورة في الدقيقة، 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، وتكرار 3 مرات لغسل في برنامج تلفزيوني. ثم resuspend الخلايا في وسائل الإعلام خالية من المصل إلى تركيز 5 × 10 4 رينكا لوك / 5 ميكرولتر المصل خالية سائل الإعلام. ملاحظة: اعتمادا على متغير أو خط الخلية المستخدمة، وخلايا يمكن معلق في نسبة 1:1 من matrigel وسائل الإعلام الحرة المصل لإبطاء نمو الخلايا شديدة العدوانية الماوس ونشرها بعد الزرع. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جراحة زرع الخلايا و ملاحظة: جميع الدراسات على الحيوانات المذكورة فيها، بما في ذلك الصيانة وتحديد نقاط النهاية التجريبية، وأجريت وفقا للجنة رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية (IACUC) عrotocol التي وافق عليها معهد روزويل بارك للسرطان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير واحد الماوس BALB / C باستخدام isoflurane و(2-3٪). قرصة القدم والتحقق من وجود منعكس لضمان تخدير كافية. تطبيق مرهم البيطرية للعيون لمنع جفاف. وضع الماوس في الاستلقاء الجانبي الأيمن والجانب الأيسر يحلق بين الصدارة والقائمة الخلفية. تطبيق الكحول واليود على طول المنطقة القطنية الظهرية لإعداد جو معقم و مطهر لمنطقة شق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص جراحي لبدء 1 سم شق الجلد في الاتجاه الطولي بين الضلع الماضي ومفصل الورك. ترخي النسيج الضام تحت الجلد باستخدام مقص تشريح حادة. استخدام مقص جراحي لإجراء شق 0.5 سم في الاتجاه الطولي في جدار البطن. استخدام ملقط منحنية لدفع برفق حول جرح مفتوح - وهذا سوف الداخل للظاهر الكلى والسماح لتجميد لطيف من الجهاز قبل الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل حقنة هاميلتون مع 5 ميكرولتر من خليط الخلية المعدة. لimplan الفرعية المحفظةطفرات، طريقتين زرع يمكن استخدامها: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سطحية: تشغيل بالتوازي مع الموجه طوليا الكلى وإبر إدراج تحت كبسولة الكلى (ولكن فوق حمة) مع مشطوف حافة فوق. مرة واحدة الإبرة في المكان، وضخ كافة الخلايا حتى أشكال فقاعة صغيرة بيضاء. إزالة الإبرة ببطء من كبسولة وصمة عار على الفور على حقن مع القطن يميل قضيب العقيمة لاستيعاب أي تسرب ومنع نشر الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الداخلية: مع مشطوف الحافة وتصل بدءا من الجانب المعاكس من الكلى إلى موقع غرس النهائي، إدراج الإبرة من خلال الداخلية من الكلى حتى إبرة مرئيا (ولكن ليس ثقب) مساحة شبه المحفظة. حقن كافة الخلايا حتى أشكال فقاعة بيضاء وموقع الحقن مسحة لمنع أي تسرب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة برفق الكلى إلى تجويف الجسم. إغلاق جدار البطن باستخدام امتصاص الجسم 5-0 VICRYL خياطة. مرة واحدة كاملة، وسحب طبقة الجلد معا ووضع 2-3 ثس اوند مقاطع. ضمان مقاطع هي شركة وبالتساوي متباعدة لضمان عدم التعرض الجرح. قبل الانتعاش إدارة 500 ميكرولتر من 0.9٪ كلوريد الصوديوم و 100 ميكرولتر من البوبرينورفين (0.01 ملغ / مل) تحت الجلد باستخدام إبرة G 25. بشكل روتيني رصد مقطع التنسيب والاستقرار، وإزالة بعد 10 يوما. </li></ol></li></ol> 2. استئصال الكلية / إزالة ورم الابتدائية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع بروتوكول متطابقة لتخدير الماوس، الشلل، شق، وتعرض الكلى كما هو موضح في الأقسام 1.2.1 و 1.2.2 (أعلاه). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الزوج الثاني من ملقط لعزل الكلى عن طريق إزالة بلطف الأنسجة الدهنية الاتصال من نهاية الذيلية والغدة الكظرية من نهاية الجمجمة في الكلى. بينما يمسك بلطف الكلى، استخدم امتصاص 5-0 VICRYL خياطة لجعل عقدة مزدوجة حول الحالب، الشريان الكلوي، والوريد. آمنة ببطء ثم قطع فوق عقدة لإزالة الكلى. إذا أي علامة على الفور فقدان الدم، أو كان هناك خطر من الانتظار كافيةمن الدرز على الحالب، الشريان، والوريد، ثم استخدم cauterizer بدلا من المقص لقطع عقدة أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة تتم إزالة الكلى، والتحقق بعناية لأي نزيف من الشريان تعادل واستخدام cauterizer إذا لزم الأمر. إغلاق جدار الجسم البطن باستخدام 5-0 VICRYL. سحب طبقة الجلد معا ووضع 2-3 مقاطع الجرح نفس الاحتياطات التالية كما هو موضح في 1.2.4. عن كثب رصد حيوان يوميا بعد الجراحة للعلامات الضائقة، والنزيف، أو محدودية الحركة. اتباع المبادئ التوجيهية المؤسسية للحيوان بأمان. </li></ol> 3. رصد التقدم النقيلي والتعريب في نقطة النهاية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكمي المرض المنتشر: رصد للإضاءة الحيوية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رؤية منهجية الموصوفة سابقا في JOVE لرصد الانبثاث باستخدام الخلايا transfected مع luciferase المراسل وكميا باستخدام Xenogen IVIS نظام التصوير 11،12. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دليل التشريح البصرية لتقييم مقارن للموزع النقيلينشوئها <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضحية الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية باستخدام نقاط النهاية بما في ذلك علامات الضائقة، صعوبة في التنفس، وفقدان الوزن، الخ ملاحظة: الرصد الدقيق للحيوانات أمر بالغ الأهمية كما تقدم النقيلي عفوية يمكن أن تكون متغيرة بصورة كبيرة وسريعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص جراحي الشروع في شق مجرى البول أعلاه أن ما يصل يستمر التجويف الصدري إلى انخفاض الفك السفلي. استخدام مقص حادة العضوية لفصل الجلد من العضلات في جدار البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء شقوق على طول الذراعين والساقين. قشر الجلد بعيدا. دراسة عن كثب لفافة الجلد وجدار البطن لعقيدات، ثم الغدد الليمفاوية السطحية: الأربية، العضدية، الإبطية والعنقية سطحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق في جدار البطن وقطع على طول الجانبين الجانبي الأيمن والأيسر حتى الحجاب الحاجز. مع قطع أفقي واحد إزالة الجزء الأمامي من جدار البطن إلى عارية الأحشاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دراسة مظهر من دون عائق و الأحشاءأو بشكل صارخ الأورام ملحوظا. نلاحظ أيضا محتويات المعدة والأمعاء؛ إذا كانت فارغة، والماوس قد لا يكون قادرا على تناول الطعام. إذا كانت محتويات مظلمة، وهذا قد يشير إلى أدلة من العلوية / السفلية نزيف الجهاز الهضمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بصريا يسجل كل جهاز لوجود ورم أو الغياب، تعيين الدرجة الكلية لكل مجموعة ماوس (4 الحيوانات لكل مجموعة ويستخدم كمثال في الشكل 1D-I). ملاحظات: 1) تضخم الغدد الليمفاوية لا يعني بالضرورة أنه هو نمو الورم؛ إذا كان الحجم كبيرا وحازما جدا، ولون بيضاء، فمن المرجح العقيدات المتنقل. 2) الإفراط أو السائل اللبني غائم في البطن يشير الاستسقاء. ويمكن أن تشمل استسقاء التراكمات الصلبة على أعضاء البطن، وخاصة بين فصوص الكبد والمعدة. 3) لأجهزة مثل الرئتين، ويمكن العقيدات متعددة تكون موجودة وعدها لإجراء مقارنات بين الحيوانات الفردية (انظر على سبيل المثال 13). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الأورام أو تشوهات جسيمة من أعضاء البطن الفردية: الكبد والطحال والكلى والبنكرياس عن طريق إزالة بعناية والغسيل مع برنامج تلفزيوني من زجاجة بخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إزالة أعضاء البطن، وفحص الغدد الليمفاوية في البطن، بما في ذلك الفقرات القطنية، العجزية، الكلوي، والمساريقي العقدة الليمفاوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم الحجاب الحاجز عن أدلة على انتشار النقيلي. ملاحظة: انتشار واسعة النطاق على الحجاب الحاجز يمكن أن يؤدي إلى فقدان انقباض لها، مما يؤدي إلى صعوبة في التنفس أو فقدان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحجاب الحاجز وجعل اثنين من الشقوق الجانبية في التجويف الصدري، وإزالة الجزء الجبهي لفضح الرئتين والقلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الرئتين والقلب عن طريق استيعاب بلطف ورفع المريء والقصبة الهوائية وقطع فوق القلب. تقييم الأنسجة للالعقيدات. ضغط القلب. عدم الاتساق يقظ قد تشير إلى ورم الحاضر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص جراحي لخفض خطيا من خلال الجمجمة. بلطف إزالة قطع صغيرة من الجمجمة حتى رما يتعرض له الدماغ كله. ننظر في جميع أنحاء الدماغ لعقيدات مرئية أو تشوهات تغيير الألوان. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics.">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li><li>Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endostatin+neoadjuvant+gene+therapy+extends+survival+in+an+orthotopic+metastatic+mouse+model+of+renal+cell+carcinoma.">Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma.</a> Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).</li><li>Amagai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+of+interleukin-2+and+sorafenib+improves+survival+benefits+and+prevents+spontaneous+pulmonary+metastasis+in+murine+renal+cell+carcinoma+models.">Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models.</a> Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).</li><li>Steeg, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Drug+Development+Must+Consider+the+Impact+on+Metastasis.">Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).</li><li>Guerin, E., Man, S., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+postsurgical+advanced+metastatic+breast+cancer+more+accurately+replicates+the+clinical+efficacy+of+antiangiogenic+drugs.">A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs.</a> Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).</li><li>Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+therapeutic+response+of+residual+metastatic+disease+is+distinct+from+its+primary+tumor+of+origin.">Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin.</a> Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).</li><li>Ebos, J. M., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenic+therapy:+impact+on+invasion,+disease+progression,+and+metastasis.">Antiangiogenic therapy: impact on invasion, disease progression, and metastasis.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 210-221 (2011).</li><li>Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+selection+of+human+renal+cell+carcinoma+cells+with+high+metastatic+potential+in+nude+mice.">In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice.</a> Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).</li><li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+in+essential+for+the+selection,+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice.">Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).</li><li>Saiki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+invasive+and+metastatic+phenotype+in+human+renal+cell+carcinoma.">Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).</li><li>Mohanty, S., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+assay.">Experimental metastasis assay.</a> J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).</li><li>Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+serous+ovarian+cancer+in+immunocompetent+mice+for+in+vivo+tumor+imaging+and+monitoring+of+tumor+immune+responses.">An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li><li>Ebos, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+metastasis+after+short-term+treatment+with+a+potent+inhibitor+of+tumor+angiogenesis.">Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis.</a> Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).</li><li>Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+cell+carcinoma:+translational+aspects+of+metabolism+and+therapeutic+consequences.">Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences.</a> Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).</li></ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

الغرض من هذا البروتوكول هو لتقييم المرض المنتشر عفوية ذات الصلة سريريا باستخدام نموذج الفأر مسانج ورم لوصف تقنيات زرع / بتر. حاليا، فإن غالبية الدراسات قبل السريرية تقييم العلاجات التجريبية الرواية لا تتضمن دراسة المرض المنتشر وعدد قليل فقط ألخص مراحل النمو الأولية...

السبب الرئيسي للوفيات في المرضى الذين يعانون من سرطان الخلايا الكلوية (مجلس قيادة الثورة) هو المرض المنتشر النظامية التي تحدث عادة بعد الاستئصال الجراحي للورم الأولية نموا في الكلى. ومع ذلك، عدد قليل جدا من النماذج الورم قبل السريرية تقييم العلاجات التجريبية في الفئران وتشمل المرض المنتشر، وأقل ما زال ألخص بأمانة المراحل السريرية لنمو المترجمة، والجراحة، وعفوية بدء الصغرى النقيلي والتقدم 1-3. أصبحت هذه الفجوة في اختبار متزايد الأهمية في تقييم علاجات جديدة وأحيانا ضرب تأثيرات مضادة للورم ينظر في النماذج الحيوانية لم تترجم دائما إلى العلاج الناجح بالمثل من المرضى 4. هذه الاختلافات في النتائج قد تنبع من كفاءات المخدرات الفرق بين النماذج المترجمة الورم الرئيسي خارج الرحم أو مثلي ووقت متأخر من مرحلة المرض المنتشر 5-7. في حالة قيادة الثورة، فقد استخدمت سوى عدد قليل من الدراسات أنشأتنيمال البروتوكولات التي تشمل المرض المتكررة العفوي الذي يحاكي المرضى الذين لديهم عادة الكلى الحاملة للورم كليا أو جزئيا إزالة 2،3. تختلف أسباب هذا النقص في اختبار نموذج الفأر. أولا، هناك تكلفة عالية الحيوانية والتنوع الكامن الورم تحديد الخلية والمحتملة النقيلي. على سبيل المثال، خطوط الخلايا البشرية تميل إلى الكلى نادرا ما تنتشر، ويجب تحديد مدى جولات متعددة من زرع مثلي الأولية واختيار النقيلي لاشتقاق المتغيرات التي تنشر باستمرار وتشكل الآفات البعيدة (انظر وصف هذا خط الخلية اشتقاق الإنسان 8-10) . على العكس، خلايا فأر في نماذج مناعيا تميل إلى التصرف بعدوانية، ويجب أن يتم حقنه أعداد الخلايا منخفضة مع matrigel للحد من انتشار النظامية فورا 3. الثانية، والصعوبات التقنية في أداء زرع السليم، استئصال الجراحي (استئصال الكلية)، وتتبع (وقياس) metastati عفويةج النمو يمكن أن يكون تحديا والعديد من المتغيرات الحرجة في حاجة الاعتبار عند توظيف هذه التقنية (انظر مناقشة للتفاصيل). الغرض من هذا البروتوكول هو لوصف الخطوات الأساسية (فضلا عن المزالق المحتملة) من زرع مثلي، استئصال (استئصال الكلية)، ورصد عفوية المرض المنتشر ومجلس قيادة الثورة لتقديم التوجيهي لموحدة (وأكثر انتشارا) استخدام بين المختبرات العلمية أن تقييم فعالية العلاجات التجريبية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="830">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">10-013-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">FBS</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">0.25% Trypsin EDTA</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">25-053-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">1x DPBS without Calcium &#38; Magnesium</td>
			<td style="width:147px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Matrigel</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354234</td>
			<td>must be kept on ice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Artifical tears-lubricant opthalmic ointment</td>
			<td style="width:147px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">17478-162-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Pocket pro pet trimmer</td>
			<td style="width:147px;">Braintree scientific</td>
			<td style="width:119px;">CLP9931B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:397px;">Alcohol swab</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Betadine solution swab</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">67618-152-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MICRO DISSECTING sissors straight,blunt - 25mm blades - 4.5&#34;&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Southpointe surgical</td>
			<td style="width:119px;">RS-5982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Iris Forceps, serrated, curved, 10cm long</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS15915</td>
			<td>need two of these</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">10&#181;l Hamilton syringe</td>
			<td style="width:147px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7635-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">30G, 45 degree, RN needle</td>
			<td style="width:147px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7803-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:397px;">Sterile cotton tipped appicator</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10805-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">High temperature cautery kit</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">J834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Reflex clip applier for 7mm clips</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Reflex clips, 7mm, non-sterile</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Removing forceps, 12cm lone</td>
			<td style="width:147px;">Kent scientific</td>
			<td style="width:119px;">INS500347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">0.9% Sodium Chloride</td>
			<td style="width:147px;">Baxter Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">2B1322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">Buprenorphine 0.01mg/mL</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">25G 5/8&#34; needle</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">1mL syringe w/out needle</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:397px;">D-Luciferin</td>
			<td style="width:147px;">Gold Bio technology</td>
			<td style="width:119px;">LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling spontaneous metastatic renal cell carcinoma (mrcc) in mice following nephrectomy

واحدة من التحديات الرئيسية لتحسين اختبار علاجات تجريبية جديدة في سرطان الخلايا الكلوية (مجلس قيادة الثورة) هو تطوير النماذج التي ألخص بأمانة المبكر وأواخر مرحلة تطور المرض المنتشر. نماذج ورم زرع نموذجية الاستفادة خارج الرحم أو مثلي زرع الورم الرئيسي، ولكن قلة تشمل النظامية المرض المنتشر العفوي الذي يحاكي إعداد سريرية. يصف هذا البروتوكول الخطوات الرئيسية لتطوير مجلس قيادة الثورة مراحل تطور المرض مشابهة للمرضى. الأولى، فإنه يستخدم الماوس الورم النقيلي خط خلية غاية في نموذج مسانج لإظهار مثلي زرع الخلايا السرطانية. وتشمل أساليب غرس السطحية والداخلية في الفضاء دون المحفظة مع الخلايا جنبا إلى جنب مع matrigel لمنع تسرب وانتشار في وقت مبكر. المقبل فهو يصف إجراءات استئصال الورم الحاملة الكلى (استئصال الكلية)، مع الرعاية الماوس قبل وبعد العمليات الجراحية الحرجة. أخيرا، فإنه يحدد الخطوات اللازمة لرصد وتقييمالجزئي والكلي تطور المرض المنتشر، بما في ذلك التصوير للإضاءة الحيوية وكذلك يوفر دليل التشريح بصرية مفصلة ليسجل التوزيع أمراض جهازية. والهدف من هذا البروتوكول هو وصف لتسهيل الاستخدام واسع النطاق من نماذج RCC النقيلي ذات الصلة سريريا لتحسين القيمة التنبؤية لاختبار العلاجية في المستقبل.

ويبين الشكل 1A تخطيطي يبين الإجراءات المفصلة في هذا الملخص البروتوكول. يجب النظر في عدة عوامل هامة لكل خطوة. على سبيل المثال، في الخطوة 1 فإنه يدل على طريقتين لشبه المحفظة زرع الخلايا السرطانية في الكلى. الخلايا السرطانية يمكن زرعها في الفضاء دون المحفظة مع ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy at JoVE.com

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

نماذج من عفوية النقيلي سرطان الخلايا الكلوية (RCC) تطور المرض يمكن استخدامها لتقييم العلاجات في أجواء ذات الصلة سريريا. هذا البروتوكول يوضح إجراءات مختلفة لمثلي زرع الخلايا السرطانية في الكلى، استئصال الكلية السليمة، وتحدد في نهاية المطاف دليل التشريح للالتهديف البصرية وإضاءة الحيوية من العبء المنتشر والتعريب.

النمذجة العفوي النقيلي سرطان الخلايا الكلوية (مركز تنسيق الانقاذ البحري) في الفئران بعد استئصال الكلية

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

modeling-spontaneous-metastatic-renal-cell-carcinoma-mrcc-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

16.4K Views.  Roswell Park Cancer Institute.  نماذج من عفوية النقيلي سرطان الخلايا الكلوية (RCC) تطور المرض يمكن استخدامها لتقييم العلاجات في أجواء ذات الصلة سريريا. هذا البروتوكول يوضح إجراءات مختلفة لمثلي زرع الخلايا السرطانية في الكلى، استئصال الكلية السليمة، وتحدد في نهاية المطاف ...

Video: Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Single Port Donor Nephrectomy

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology. Since that time, the use of single port surgery for nephrectomy has expanded to include donor nephrectomy. Over the next two years the technique was adopted for many others types of nephrectomies to include donor nephrectomy. We present our technique for single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in over 100 patients and add this experience to our experience of over 1000 laparoscopic nephrectomies. With the proper equipment and technique, single port donor nephrectomy can be performed safely and effectively in the majority of live donors. We have found that our operative times and most importantly our transplant outcomes have not changed significantly with the adoption of the single port donor nephrectomy. We believe that single port donor nephrectomy represents a step forward in the care of living donors.

Single port laparoscopic surgery is changing the standard of care in surgical care like nothing since the laparoscopic technique was introduced 20 years ago. We present out technique of single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in 100 patients.

استئصال الكلية ميناء واحد للمتبرعين

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology.  Since that time, the ...

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران -- الشرق انسداد الشريان الدماغي مع نموذج الشعيرة

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular through transplantation of stromal cells and epithelial cells in the mammary gland of mice. Current transplantation models often involve the use of immunocompromised mice due to the different genetic backgrounds of stromal cells and epithelial cells. Extracellular matrices are often used to embed the two different cell types for consistent cell-cell interactions, but involve the use of Matrigel or rat tail collagen, which are immunogenic substrates. The lack of functional T cells from immunocompromised mice prevents accurate assessment of stromal cells on mammary tumor progression in vivo, with important implications on drug development and efficacy. Moreover, immunocompromised mice are costly, hard to breed and require special care conditions. To overcome these obstacles, we have developed an approach to orthotopically transplant stromal cell and epithelial cells into mice from the same genetic background to induce consistent tumor formation. This system involves harvesting normal, carcinoma associated fibroblasts, PyVmT mammary carcinoma cells and collagen from donor C57BL/6J mice. The cells are then embedded in collagen and transplanted in the inguinal mammary glands of female C57BL/6J mice. Transplantation of PyVmT cells alone form palpable tumors 30-40 days post transplantation. Endpoint analysis at 60 days indicates that co-transplantation with fibroblasts enhances mammary tumor growth compared to PyVmT cells transplanted alone. While cells and matrix from C57BL/6J mice were used in these studies, the isolation of cells and matrix and transplantation approach may be applied towards mice from different genetic backgrounds demonstrating versatility. In summary, this system may be used to investigate molecular interactions between stromal cells and epithelial cells, and overcomes critical limitations in immunocompromised mouse models.

In this report, we demonstrate a system to isolate and culture donor cells from the mouse mammary gland, and orthotopically transplant these cells in recipient mice to analyze stromal: epithelial interactions during mammary tumor development.

الثدي زرع الخلايا اللحمية وسرطان الخلايا في الفئران C57BL/6J

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related hospitalizations and for which no effective treatments are available to date1,2. Because of the heterogeneity of ICH in humans, various preclinical models are needed to thoroughly explore prospective therapeutic strategies3. Experimental ICH is commonly induced in rodents by intraparenchymal injection of either autologous blood or bacterial collagenase4. The appropriate model is selected based on the pathophysiology of hemorrhage induction and injury progression. The blood injection model mimics a rapidly progressing hemorrhage. Alternatively, bacterial collagenase enzymatically disrupts the basal lamina of brain capillaries, causing an active bleed that generally evolves over several hours5. Resultant perihematomal edema and neurofunctional deficits can be quantified from both models. In this study, we described and evaluated a modified double injection model of autologous whole blood6 as well as an ICH injection model of bacterial collagenase7, both of which target the basal ganglia (corpus striatum) of male CD-1 mice. We assessed neurofunctional deficits and brain edema at 24 and 72 hr after ICH induction. Intrastriatal injection of autologous blood (30 &mu;l) or bacterial collagenase (0.075U) caused reproducible neurofunctional deficits in mice and significantly increased brain edema at 24 and 72 hr after surgery (p&lt;0.05). In conclusion, both models yield consistent hemorrhagic infarcts and represent basic methods for preclinical ICH research.

Clinically relevant animal models of intracerebral hemorrhage (ICH) are needed to extend our knowledge of hemorrhagic stroke and to examine novel therapeutic strategies. In this study, we describe and evaluate two ICH models that implement unilateral injections of either autologous whole blood or bacterial collagenase into the basal ganglia (corpus striatum) of mice.

نزف الدماغي الداخلي النمذجة في الفئران: حقن الدم الذاتي أو البكتيرية كولاجيناز

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

جيل من تحت الجلد والخلايا الكبدية داخل الكبد سرطان Xenografts الإنسان في الفئران العوز المناعي

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy and/or cytotoxic chemotherapy. To induce bladder cancer, C57BL/6 mice (MUC1.Tg and wild type) were treated orally with the carcinogen N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine (OH-BBN) at 3.0 mg/day, 5 days/week for 12 weeks. To assess the effects of OH-BBN on serum cytokine profile during tumor development, whole blood was collected via submandibular bleeds prior to treatment and every four weeks. In addition, a MUC1-targeted peptide vaccine and placebo were administered to groups of mice weekly for eight weeks. Multiplex fluorometric microbead immunoanalyses of serum cytokines during tumor development and following vaccination were performed. At termination, interferon gamma (IFN-&#947;)/interleukin-4 (IL-4) ELISpot analysis for MUC1 specific T-cell immune response and histopathological evaluations of tumor type and grade were performed. The results showed that: (1) the incidence of bladder cancer in both MUC1.Tg and wild type mice was 67%; (2) transitional cell carcinomas (TCC) developed at a 2:1 ratio compared to squamous cell carcinomas (SCC); (3) inflammatory cytokines increased with time during tumor development; and (4) administration of the peptide vaccine induces a Th1-polarized serum cytokine profile and a MUC1 specific T-cell response. All tumors in MUC1.Tg mice were positive for MUC1 expression, and half of all tumors in MUC1.Tg and wild type mice were invasive. In conclusion, using a team approach through the coordination of the efforts of pharmacologists, immunologists, pathologists and molecular biologists, we have developed an immune intact transgenic mouse model of bladder cancer that expresses hMUC1.

An N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced bladder cancer model was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic mice for the purpose of testing MUC1-directed immunotherapy. After administering a MUC1-targeted peptide vaccine, a cytotoxic T lymphocyte response to MUC1 was confirmed by measuring serum cytokine levels and T-cell specific activity.

تحريض الغازية سرطان المثانة الانتقالية الخليوي في المناعة السليمة الإنسان MUC1 الفئران المعدلة وراثيا: نموذج للتنمية الخلايا الجذعية

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

بدء النقيلي سرطان الثدي عن طريق استهداف ظهارة الأقنية مع اتش، لجنة المساواة العرقية: رواية المعدلة وراثيا نموذج الفأر من سرطان الثدي

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران: التخثر الدائم من الشريان الدماغي الأوسط القاصي

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and progress in this site. The model presented in the current report utilizes human primary bone marrow stromal cells and osteoblasts as two representative cell types from the marrow niche that influence tumor cell phenotype. The in vitro co-culture conditions described for human leukemic cells with these primary niche components support the generation of a chemoresistant subpopulation of tumor cells that can be efficiently recovered from culture for analysis by diverse techniques. A strict feeding schedule to prevent nutrient fluxes followed by gel type 10 cross-linked dextran (G10) particles recovery of the population of tumor cells that have migrated beneath the adherent bone marrow stromal cells (BMSC) or osteoblasts (OB) generating a "phase dim" (PD) population of tumor cells, provides a consistent source of purified therapy resistant leukemic cells. This clinically relevant population of tumor cells can be evaluated by standard methods to investigate apoptotic, metabolic, and cell cycle regulatory pathways as well as providing a more rigorous target in which to test novel therapeutic strategies prior to pre-clinical investigations targeted at minimal residual disease.

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

The current report summarizes a protocol that can be utilized to model the influence of the bone marrow microenvironment niche on leukemic cells with emphasis placed on enrichment of the most chemoresistant subpopulation.