The authors would like to thank the many individuals who have worked on and perfected this technique and have been responsible for the generation of many manuscripts both in this lab and others. This work was supported by National Institutes of Health Grant EY12707 (PMS) and an unrestricted grant from Research to Prevent Blindness to Department of Ophthalmology.

ملاحظة: يتم التعامل مع جميع الحيوانات المستخدمة في هذا الإجراء وفقا للجمعية للبحوث في الرؤية وبيان العيون لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث الرؤية فضلا عن المبادئ التوجيهية التي وضعتها لجنة الرقابة الحيوان في جامعة سانت لويس. يتم تعقيم جميع الأدوات والحلول الجراحية قبل الجراحة للحد من العدوى الميكروبية للعين: ملاحظة. تجدر الإشارة إلى أنه في حين أن الحيوانات لا تواجه بعض الألم من هذا الإجراء، ونحن لا توظف المسكنات. السبب في ذلك هو لأن جميع المسكنات هي مضادة للالتهابات ومنذ زرع القرنية الردود تنطوي الالتهاب، فإن استخدام العقاقير المضادة للالتهابات بخرق قدرتنا على تحديد ما هي العوامل التي تشارك في فشل الكسب غير المشروع القرنية. 1. التخدير <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران المانحة والمتلقية تحت التخدير العام عن طريق الحقن IP من الكيتامين (86.98 ملغ / كلغ) وزيلازين (13.04 ملغم / كغم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس المتلقي تحت التخدير طوال الإجراء الذي يأخذ عادة 30 دقيقة إلى ساعة. بالتالي، ترصد باستمرار الماوس عن أي دلائل على استعادة وعيه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم للعين puralube أنه لن يخضع لعملية جراحية بعد تخدير الحيوان لمنع جفاف. </li></ol> 2. مسمار القرنية <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على زر المانحة القرنية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تخدير الحيوان بالكامل، وتحقيق توسع حدقة العين وافية من قبل إدارة بضع قطرات العين 1٪ و 2.5٪ تروبيكاميد فينيليفرين هيدروكلوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رأس الحيوان المانحة أفقيا على لوحة وضعت على دعم قوي المنقولة. إصلاح الرأس مع شريط من الشريط عبر العنق لضمان أن العين هي في وضع أفقي في جميع أنحاء العملية برمتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام 2 مم منقب، الذي كان مصبوغ باللون الأزرق الميثيل طرف، خارجيبطن الموقع القرنية الكسب غير المشروع المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع شفرة حادة، تخترق القرنية وحقن healon في الغرفة الأمامية لتعميق ذلك لتقليل فرصة حدوث ضرر لبطانة المانحة والعدسة الأساسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استئصال الكسب غير المشروع مع الجهات المانحة vannas مقص ووضعها في طبق يحتوي هانكس &quot;محلول ملحي متوازن حتى الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن كان الكسب غير المشروع المانحة على إزالتها، الموت ببطء الماوس المانحة عن طريق الاستنشاق CO 2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد السرير الكسب غير المشروع. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار نفس الخطوات كما هو موضح في 2.1.1 خلال 2.1.2 للمتلقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 1.5 مم منقب، الخطوط العريضة للموقع الكسب غير المشروع المستفيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع شفرة حادة، تخترق القرنية وحقن healon في الغرفة الأمامية لتعميق ذلك لتقليل فرصة من الأضرار التي لحقت العدسة الأساسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة زر القرنية المركزية المذكورة من المستلم باستخدام مقص vannas وتجاهل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطةتطعيم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القرنية المانحة على الكسب غير المشروع سرير في القرنية المستلم. مما لا شك فيه أن healon كافية تحت القرنية المانحة لحماية الخلايا البطانية المانحة من التلف عن طريق الاتصال المباشر مع العدسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام microforceps يميل السوبر غرامة، ومكان اللدغة الأولى من النايلون 11-0 خياطة إلى جانب الجهات المانحة، من خلال الجهات المانحة مع عمق 90٪ من سمك الكامل إلى جانب المستلم، ثم تعادل خارج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يرتكز القرنية في مكانه، نفذ خيوط متقطعة midcardinal بحيث القرنية ديها 8 إلى 10 مجموع الغرز واصطف القرنية المانحة بشكل آمن حتى مع وتعلق على المتلقي السرير الكسب غير المشروع القرنية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعميق الغرفة الأمامية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعميق الغرفة الأمامية عن طريق حقن HBSS أو فقاعة الهواء في الغرفة الأمامية وتحقق بلطف على سلامة القرنية الكسب غير المشروع للتسرب مع الاسفنج السليلوز. ملاحظة: إذا كان لا يمكن إصلاحه الغرفة الأمامية ثم هناك احتمال كبير لجataract الأمر الذي سيجعل التقييمات المستقبلية للقرنية المزروعة صعبة للغاية وسوف أيضا أن تؤدي إلى ضعف بطانة القرنية المانحة وبالتالي فشل الكسب غير المشروع. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التقييم النهائي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة العين لتحديد أن التلميذ هو جولة وعمق الغرفة الأمامية أمر طبيعي. ملاحظة: إذا كان التلميذ ليست جولة هذا يدل على أنه خلال خياطة القزحية تضررت وبالتالي يعتبر الكسب غير المشروع عطل فني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم مضاد حيوي للعين. اختياري: قم بإغلاق غطاء العين مع خياطة الحرير 7-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الفئران حتى تكون مستيقظا تماما وبشكل فردي ثم إيوائهم مدة لا تقل عن يومين بعد الجراحة. </li></ol></li></ol> 3. إزالة خياطة <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في تلك الحالات التي يستخدم فيها الغطاء خياطة، تخدير الفئران كما هو موضح أعلاه وإزالة خياطة غطاء في 48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران في يوم 7 بعد العمل الجراحي. إزالة suturوفاق تأمين الكسب غير المشروع القرنية. مرة واحدة يتم إزالة الغرز وأيقظت الحيوان تماما، إعادته إلى قفصه. </li></ol> 4. التقييم السريري <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص العين للمؤشرات لمضاعفات الإجرائية التي تشمل الساد (تغيم العدسة)، تحدمية (الدم في الغرفة الأمامية)، والغرفة الأمامية ليست على عمق مناسب، أو غموض كبير من القرنية. نظر في تلك التي تثبت هذه المضاعفات مثل &quot;خطر&quot; والموت ببطء لهم عن طريق الاستنشاق CO 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء كافة الفحوص التي أجريت على الفئران unanesthetized. عقد الماوس بيد واحدة وبالتالي تقييد الماوس بحيث يمكن من ناحية أخرى proptose العين لتمكين رؤية أفضل للعين. وبمجرد الانتهاء من الملاحظات، يعود الحيوان إلى قفصه. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد مراقب غير مألوف مع مجموعات العلاج وتقييم زرع القرنيات من 2 إلى 3 مرات في الأسبوع لعلامات الكسب غير المشروع القرنيةحلقة الرفض أو الفشل الكسب غير المشروع القرنية. استخدام إما المجهر الجراحي أو الأفقي biomicroscope شق مصباح لهذه الملاحظات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم كل القرنية لالتعتيم باستخدام مقياس من 0 إلى 5. يتم تعريف نطاق كما يلي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين على درجة من 0 إلى تلك القرنيات التي ليس لها علامات التعتيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين على درجة من 1 إلى تلك القرنيات التي تظهر أدنى غموض سطحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين النتيجة من 2 إلى القرنيات التي تعرض غموض خفيف وأعمق ولكن التلميذ وقزحية الكامنة لا تزال ملحوظ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين النتيجة من 3 إلى القرنية التي تعرض انسجة التعتيم حيث لا يمكن رؤيتها القزحية بالتفصيل باستثناء هامش التلميذ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين النتيجة من 4 إلى القرنية التي تعرض انسجة كثيفة التعتيم وإذا لم الهياكل يمكن عرضها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين على درجة من 5 إلى القرنية التي تعرض التعتيم الكامل وانسجة ذمة مكثفة، مع التلميذ وقزحية العين تحجب تماما. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"><html> تقييم أيضا كل القرنية لدرجة تسلل الأوعية الدموية (اتساع الأوعية الدموية) باستخدام مقياس تقييم من 1 إلى 8. ولتحقيق ذلك، عرض القرنية أنها تتكون من 4 الأرباع متساوية وتحديد مقدار الأوعية الدموية في كل من هذه الأرباع مع النتيجة التي سوف تتراوح من 0 (أي السفن) إلى 2 لواسعة من الأوعية الدموية التي رباعي. إضافة عشرات الفردية من كل رباعي لحساب النتيجة النهائية اتساع الأوعية الدموية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصنيف القرنيات رفضت تماما كما لو كان لديهم على 3 نقاط عن ملاحظتين متتالية للمرة يشير تصل إلى 5 أسابيع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصنيف الفئران التي كانت واضحة في 5 أسابيع ولكن القرنيات تطوير عتامة في بعض الأحيان&gt; 45 آخر أيام engraftment، برصيد 3 نقاط زمنية لمدة متتالية، وبعد أن خضع أواخر الأجل رفض المزروع القرنية. استخدام كابلان-ماير منحنيات البقاء على قيد الحياة لتحليل بقاء الكسب غير المشروع. </li></ol></li></ol> 5. التلاعب نموذج في اليسار: 40px؛ &quot;&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الخلايا واحد من الطحال. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحضير الخلايا واحدة، الموت ببطء أولا الماوس المانحة. ثم، وإزالة الطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الطحال في مصفاة الخلية وتعطيل ذلك مع المكبس من حقنة حقنة 3 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا وresuspend في 10 مل من محلول الملح المتوازن هانكس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة 10 ميكرولتر من تعليق خلية وإضافة إلى 10 ميكرولتر من 0.4٪ التريبان الأزرق والمزيج. إضافة إلى أن عدادة الكريات وعدد الخلايا في الشبكة المركزية. عدد الخلايا في الأنبوب هو عدد خلايا × 10 4 × 2 (عامل التخفيف باللون الأزرق التريبان) × 10 (وحدة التخزين في الأنبوب). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحقن في الغرفة الأمامية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران كما هو موضح سابقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء الحقن باستخدام مجهر تشريح. لكل حقن intracameral، استخدم 10 6 خلايا الطحال في حجم 0.005 مل وميكروليتر حقنة 0.25 مل مزودة إبرة 33 G. ملاحظة: التلاعب أخرىالنموذج يمكن أن يقوم بها معالجة الحيوانات مع الكواشف التي تعمل إما الخصوم أو منبهات لتحديد الدور الذي يمكن أن تلعبه عاملا خاصا التالية مثلي جراحة القرنية المزروع. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Farooq, A. V., Shukla, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+epithelial+and+stromal+keratitis:+an+epidemiologic+update.">Herpes simplex epithelial and stromal keratitis: an epidemiologic update.</a> Surv. Ophthalmol. , 448-462 (2012).</li><li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+and+diseases+of+the+ocular+surface+and.">Age-related changes and diseases of the ocular surface and.</a> Invest. Opthlamol. Vis. Sci. 54, 48-53 (2013).</li><li>Edwards, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indications+for+corneal+transplantation+in+New+Zealand:+1991-1999.">Indications for corneal transplantation in New Zealand: 1991-1999.</a> Cornea. 21, 152-155 (2002).</li><li>Thompson, R. W., Price, M. O., Bowers, P. J., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival+after+penetrating+keratoplasty.">Long-term survival after penetrating keratoplasty.</a> Ophthalmol. 110, 1396-1402 (2003).</li><li>Williams, K. A., Roder, D., Esterman, A., Muehlberg, S. M., Coster, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+predictive+of+corneal+graft+survival.+Report+form+the+Australian+Corneal+Graft+Registry.">Factors predictive of corneal graft survival. Report form the Australian Corneal Graft Registry.</a> Ophthalmology. 99, 403-414 (1992).</li><li>Larkin, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+allograft+rejection.">Corneal allograft rejection.</a> Br. J. Ophthalmol. 78, 649-652 (1994).</li><li>Boisjoly, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+of+corneal+graft+failure.">Risk factors of corneal graft failure.</a> Ophthalmol. 100, 1728-1735 (1993).</li><li>Sugar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recipient+Risk+Factors+for+Graft+Failure+in+the+Cornea+Donor+Study.">Recipient Risk Factors for Graft Failure in the Cornea Donor Study.</a> Ophthalmol. 116, 1023-1028 (2009).</li><li>Namba, K., Kitaichi, N., Nishida, T., Taylor, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+regulatory+T+cells+by+the+immunomodulating+cytokines+alpha-melanocyte-stimulating+hormone+and+transforming+growth+factor-beta2.">Induction of regulatory T cells by the immunomodulating cytokines alpha-melanocyte-stimulating hormone and transforming growth factor-beta2.</a> J. Leukoc. Biol. 72, 946-952 (2002).</li><li>Taylor, A. W., Yee, D. G., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+nitric+oxide+generated+by+inflammatory+macrophages+by+calcitonin+gene-related+peptide+in+aqueous+humor.">Suppression of nitric oxide generated by inflammatory macrophages by calcitonin gene-related peptide in aqueous humor.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1372-1378 (1998).</li><li>Wilbanks, G. A., Mammolenti, M., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+induction+of+anterior+chamber-associated+immune+deviation+(ACAID).+III.+Induction+of+ACAID+depends+upon+intraocular+transforming+growth+factor-beta.">Studies on the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID). III. Induction of ACAID depends upon intraocular transforming growth factor-beta.</a> Eur. J. Immunol. 22, 165-173 (1992).</li><li>Volpert, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducer-stimulated+Fas+targets+activated+endothelium+for+destruction+by+anti-angiogenic+thrombospondin-1+and+pigment+epithelium-derived+factor.">Inducer-stimulated Fas targets activated endothelium for destruction by anti-angiogenic thrombospondin-1 and pigment epithelium-derived factor.</a> Nat. Med. , 8-349 (2002).</li><li>Apte, R. S., Sinha, D., Mayhew, E., Wistow, G. J., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+role+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+in+inhibiting+NK+cell+activity+and+preserving+immune+privilege.">Cutting edge: role of macrophage migration inhibitory factor in inhibiting NK cell activity and preserving immune privilege.</a> J. Immunol. 160, 5693-5696 (1998).</li><li>Kennedy, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+production+of+interleukin-1+receptor+antagonist+peptides+in+normal+human+cornea.">Novel production of interleukin-1 receptor antagonist peptides in normal human cornea.</a> J. Clin. Invest. 95, 82-88 (1995).</li><li>Shimmura-Tomita, M., Wang, M., Taniguchi, H., Akiba, H., Yagita, H., Hori, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galectin-9-mediated+protection+from+allo-specific+T+cells+as+a+mechanism+of+immune+privilege+of+corneal+allografts.">Galectin-9-mediated protection from allo-specific T cells as a mechanism of immune privilege of corneal allografts.</a> PLoS One. 8, (2013).</li><li>Goldberg, M. F., Ferguson, T. A., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cellular+adhesion+molecules+in+inflamed+human+corneas.">Detection of cellular adhesion molecules in inflamed human corneas.</a> Ophthalmol. 101, 161-168 (1994).</li><li>Stuart, P. M., Griffith, T. S., Usui, N., Pepose, J. S., Yu, X., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD95+ligand+(FasL)-induced+apoptosis+is+necessary+for+corneal+allograft+survival.">CD95 ligand (FasL)-induced apoptosis is necessary for corneal allograft survival.</a> J Clin Invest. 99, 396-402 (1997).</li><li>Yamagami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fas-Fas+ligand+interactions+in+the+immunorejection+of+allogeneic+mouse+corneal+transplants.">Role of Fas-Fas ligand interactions in the immunorejection of allogeneic mouse corneal transplants.</a> Transplantation. 64, 1107-1111 (1997).</li><li>Stuart, P. M., Pan, F., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fas/Fas+ligand+interactions+regulate+neovascularization+in+the+cornea.">Fas/Fas ligand interactions regulate neovascularization in the cornea.</a> Invest. Ophthalmmol. Vis. Sci. 44, 93-98 (2003).</li><li>Stuart, P. M., Yin, X. T., Pan, F., Haskova, Z., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitors+of+matrix+metalloproteinases+activity+prolong+corneal+allograft+acceptance+by+increasing+FasL+expression.">Inhibitors of matrix metalloproteinases activity prolong corneal allograft acceptance by increasing FasL expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1169-1173 (2004).</li><li>Joo, C. -. K., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+mediated+responses+in+a+murine+model+of+orthotopic+corneal+transplantation.">T-cell mediated responses in a murine model of orthotopic corneal transplantation.</a> Invest.Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 1530-1540 (1995).</li><li>Sonoda, Y., Sano, Y., Ksander, B., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cell-mediated+immune+responses+elicited+by+orthotopic+corneal+allografts+in+mice.">Characterization of cell-mediated immune responses elicited by orthotopic corneal allografts in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 427-434 (1995).</li><li>Sano, Y., Osawa, H., Sotozono, C., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+expression+during+orthotopiccorneal+allograft+rejection+in+mice.">Cytokine expression during orthotopiccorneal allograft rejection in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1953-1957 (1998).</li><li>Haskova, Z., Usui, N., Ferguson, T. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4++T+cells+are+critical+in+corneal+but+not+skin+allograft+rejection.">CD4+ T cells are critical in corneal but not skin allograft rejection.</a> Transplantation. 69, 483-488 (2000).</li><li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+disruption+of+antiangiogenic+signals+by+recruited+allospecific+T+cells+leads+to+corneal+allograft+rejection.">Immunological disruption of antiangiogenic signals by recruited allospecific T cells leads to corneal allograft rejection.</a> J. Immunol. 188, 5962-5969 (2012).</li><li>Dana, M. R., Yamada, J., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+interleukin-1+receptor+antagonist+promotes+corneal+transplant+survival.">Topical interleukin-1 receptor antagonist promotes corneal transplant survival.</a> Transplantation. 63, 1501-1507 (1997).</li><li>Cunnusamy, K., Chen, P. W., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-17A-dependent+CD4+CD25++regulatory+T+cells+promote+immune+privilege+of+corneal+allografts.">IL-17A-dependent CD4+CD25+ regulatory T cells promote immune privilege of corneal allografts.</a> J. Immunol. 186, 6737-6745 (2011).</li><li>Fu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine+depletion+as+a+mechanism+for+the+immune+privilege+of+corneal+allografts.">Arginine depletion as a mechanism for the immune privilege of corneal allografts.</a> Eur. J. Immunol. 41, 2997-3005 (2011).</li><li>Medina, C. A., Rowe, A. M., Yun, H., Knickelbein, J. E., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Azithromycin+treatment+increases+survival+of+high-risk+corneal+allotransplants.Cornea.">Azithromycin treatment increases survival of high-risk corneal allotransplants.Cornea.</a> , 32-658 (2013).</li><li>Cho, Y. K., Zhang, X., Uehara, H., Young, J. R., Archer, B., Ambati, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor+1+morpholino+increases+graft+survival+in+a+murine+penetrating+keratoplasty.">Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 morpholino increases graft survival in a murine penetrating keratoplasty.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 8458-8471 (2012).</li><li>Kim, H. K., Choi, J. A., Uehara, H., Zhang, X., Ambati, B. K., Cho, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presurgical+corticosteroid+treatment+improves+corneal+transplant+survival+in+mice.">Presurgical corticosteroid treatment improves corneal transplant survival in mice.</a> Cornea. 32, 1591-1598 (2013).</li><li>Yamazoe, K., Yamazoe, K., Shimazaki-Den, S., Shimazaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+for+corneal+graft+recovery+after+severe+corneal+graft+rejection+following+penetrating+keratoplasty.">Prognostic factors for corneal graft recovery after severe corneal graft rejection following penetrating keratoplasty.</a> BMC Ophthalmol. 13, 5 (2013).</li><li>Panda, A., Vanathi, M., Kumar, A., Dash, Y., Priya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+graft+rejection.">Corneal graft rejection.</a> Surv. Ophthalmol. 52, 375-396 (2007).</li><li>Patel, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+survival+and+endothelial+outcomes+in+the+new+era+of+endothelial+keratoplasty.">Graft survival and endothelial outcomes in the new era of endothelial keratoplasty.</a> Exp. Eye Res. 95, 40-47 (2012).</li><li>Anshu, A., Price, M. O., Tan, D. T., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+keratoplasty:+a+revolution+in+evolution.">Endothelial keratoplasty: a revolution in evolution.</a> Surv. Ophthalmol. 57, 236-252 (2013).</li></ol>

The authors have no competing financial interests.

نموذج الفئران من زرع القرنية هو موضح هنا تمكن الباحث لدراسة المزروع رفض القرنية البشرية في نموذج تنبؤي هو ما هي أفضل عوامل ترتبط مع كل من رفض 15،17،18،20، 26-30 و21-25 القبول من القرنية المغايرة. خلافا لزرع القرنية البشرية، حيث يتم إعطاء المرضى سواء الموضعية أو الجهازية العلاج الستيرويد إما لعلاج أو منع رفض 31، وعادة ما يستخدم هذا النموذج لتحديد تلك العوامل التي لها صلة المزروع الرفض في حالة عدم وجود مثل هذا العلاج. بالإضافة إلى نموذج للرفض الحاد المزروع القرنية، والذي يحدث عادة في غضون 30 إلى 40 يوما من زرع، ونحن أيضا تقديم نموذج أواخر الأجل لهذا الرفض الذي يحدث 45 يوما بعد engraftment في الفئران ويقلد العديد من الميزات في الآونة الأخيرة الاجل والرفض المزمن الذي 32،33 حتى الآن لم يتم غرار لدى الحيوانات. تيانه القوة هي النموذج الذي يمكن للمرء أن تشريح الآليات المختلفة التي تعتبر مسؤولة عن نسبة عالية نسبيا من القبول المزروع القرنية وكذلك تحديد الآليات التي هي الأكثر المسؤولة عن الفشل المزروع القرنية. يسمح هذا النموذج أيضا واحدة لاختبار الاستراتيجيات العلاجية المختلفة في الحيوانات التي تمتلك جهاز المناعة مشابه جدا لجهاز المناعة البشري. تحقيقا لهذه الغاية، فإن وجود العديد من المواد الكيميائية التي تتفاعل مع العوامل الفئران وكذلك الفئران المعدلة وراثيا والتي تستهدف الجينات، تسمح لتقييم العديد من أكثر العوامل من شأنه أن يكون عليه الحال مع الأنواع الأخرى. هذه القدرة على تقييم العديد من العوامل المختلفة التي تعتبر مهمة لكلا النجاح والفشل من المغايرة القرنية هي إيجابية كبيرة لصالح باستخدام هذا النموذج الفئران مقابل النماذج الحيوانية الأخرى التي هي أسهل عملية جراحية لأداء نظرا لزيادة حجم عيون هذه الأنواع. في حين أن هناك العديد من نقاط الضعف في هذا النموذج،نحن نعتقد أن القوة تفوق بكثير منهم. واحدة من أهم والتي ألمح إليها أعلاه، هو الخبرة الفنية المشاركة في أداء زرع القرنية في الفئران. نظرا لصغر حجم العين الفئران، وهذا يتطلب شخص بارع في المجهرية، سواء في أداء زرع وكذلك إزالة الغرز. وبالتالي، هناك حاجة الممارسة المتكررة لإتقان وإجادة في الحفاظ على هذه التقنية. الضعف الثاني هو أنه في حين أن الفئران هي مشابهة جدا للإنسان، وأنها ليست هي نفسها. هذه الحيوانات تعرض ميل أكبر نحو اتساع الأوعية الدموية، من القيام القرنيات البشرية. وعلاوة على ذلك، فإن هذا النموذج لا تحاكي العمليات الجراحية تهدف الى علاج ضعف الخلايا البطانية مثل ضمور Fuch ل2. كانوا يعملون قبل زرع سمك كامل العام الأخير في مثل تلك المستخدمة في بروتوكول صفها. في الوقت الحاضر، وقد استخدمت عمليات زرع البطانية التي تشمل فقط الجزء البطانية من القرنية <sتصل&gt; 34، 35. لم غرار تلك زرع حتى الآن في الفئران بسبب صعوبة إجراء هذه الجراحة في مثل هذه الحيوانات الصغيرة. لرفض الراحل الأجل (&gt; 45 يوما) عاملين فريدة من نوعها لهذا الإصدار من طراز تبرز. يجب الحفاظ على ضعف الأول مع هذا النموذج من النموذج هو أن الفئران مدة لا تقل عن شهرين إلى ثلاثة أشهر من أجل دراسة الرفض أواخر الأجل. وثانيا، يجب على القرنيات البقاء على قيد الحياة لأول مرة ردود فعل الرفض الحادة المحتملة. تحدث هذه الرفض الحاد في 50 إلى 70٪ من المتلقين 17، 20 -24. وبالتالي لدراسة الرفض أواخر الأجل واحد سوف تدبر الفئران التي سيتم رفض تماما زرع ولن البقاء على قيد الحياة حتى 45 يوما بعد engraftment. من أجل التخفيف من هذا وجدنا أن نسبة الرفض في الفئران الذكور أقل من تلك التي لوحظت على الفئران الإناث (مخطوط قيد الإعداد) وهكذا لدراسة الرفض أواخر المدى ينصح أن الفئران الذكور فقطاستخدامها. حاولنا أيضا إلى إطالة أمد بقاء المزروع القرنية مع العلاج الستيرويد، ولكن هذا لم يثبت أنه مفيد بشكل خاص (الملاحظات الشخصية)، وبالتالي لا ننصح أن العلاج الستيرويد يمكن استخدامها. على الرغم من هذه التعقيدات والتحذير من أن ما يقرب من المرجح أن نصف أو أكثر قليلا من تلك المغروسة مع القرنيات خيفي ستبقى واضحة إلا بعد 45 يوما، وهذا لا يزال نموذجا مفيدا جدا لدراسة تلك العوامل التي لها صلة رفض الراحل الأجل.

زرع القرنية هو أحد الأنواع الأكثر نجاحا وشيوعا لزرع أجريت في البشر. الأسباب يتم تنفيذ هذه الجراحة هي نتيجة الإصابات والأمراض المعدية 1، أو أشكال أخرى من أمراض القرنية غير المعدية 2. شخصيات من جمعية بنك العيون الأمريكية تشير إلى أن أكثر من 46،000 أجريت في عام 2011 (انظر موقع على شبكة الإنترنت على العنوان التالي: restoresight.org/eye_banks/eye_banks.html). مؤشرا على نجاحها هو أن معدلات الفشل سنة واحدة لترقيع القرنية خيفي تتراوح 10-15٪ وعلى 5 سنوات من النجاح هو ما يزيد على 70٪ 3-8. كما أظهرت العديد من الدراسات أن نجاح المغايرة القرنية يرتبط مباشرة إلى حقيقة أن العين هي موقع متميز مناعيا. العوامل المسؤولة عن وضع القرنيات كموقع امتياز المناعة تشمل عدم وجود كل من الأوعية الدموية والليمفاوية في القرنية، والغياب النسبي للمستضد تقديم الخلايا، والعوامل التي تنتجها القرنية التي قامعليالي funtions المستجيب المناعة 9-15 والتعبير انخفاض MHC المستضدات 16، والتعبير عن FASL 17-20. ومع ذلك، وعلى الرغم من هذه العوامل المهيئة هذه الطعوم للنجاح، وأنها لا تخضع لرفض 3-7. وبالتالي، فهم تلك الآليات التي تتوسط هذا الرفض وكذلك اختبار مختلف العلاجات لمنع الرفض هي ذات أهمية حاسمة. تحقيقا لهذه الغاية، وصفنا هنا نموذج الفئران من زرع القرنية التي تم استخدامها لأكثر من 20 عاما لدراسة زرع القرنية في بيئة تسيطر التجريبية. منذ ردود زرع تشمل العديد من العوامل المختلفة العاملة في الحفل الذي سيكون في نهاية المطاف تحديد ما إذا فشلت أو نجحت الأنسجة المزروعة، فمن غير الممكن أن نفهم أهمية هذه العوامل في أي نموذج في المختبر. وبالتالي، هناك حاجة لدراسات باستخدام حيوانات سليمة لتحديد ما هي عوامل مهمة إما نجاح أو failuإعادة الأنسجة المزروعة. بينما الأنواع الأخرى من الحيوانات التي استخدمت لدراسة زرع القرنية، ونموذج الفئران ديها العديد من المزايا بالمقارنة مع استخدام الأنواع الأخرى. الأول هو وجود العديد من سلالات الفئران التي تعبر عن بعض الجينات المحورة أو تم استهداف الجينات تفتقر إلى التعبير عن عوامل مناعية معينة وظيفتها في زرع يمكن دراستها بشكل أفضل. وبالإضافة إلى ذلك، هناك العديد من الكواشف (عوامل المؤتلف والأجسام المضادة التي تحييد العوامل) التي هي محددة للفئران والتي لا وجود لها بالنسبة لكثير من الأنواع الأخرى من الحيوانات. بسبب وجود هذه العوامل، وقد استخدم هذا النموذج على نطاق واسع لتحديد العوامل ذات الصلة المشاركة في الردود المزروع القرنية الحادة 15، 17،18،20 -29. وعلاوة على ذلك، ومن المعروف أن العديد من العوامل التي تدخل في زرع القرنية أيضا لتكون وظيفية في زرع الأنسجة الأخرى.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:71px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Zeiss Surgical Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">Rebuilt</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vannus Scissors</td>
			<td style="width:71px;">Stortz</td>
			<td style="width:119px;">E-3387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">11-0 Sutures</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td style="width:119px;">717939M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trephine 2.0mm</td>
			<td style="width:71px;">Katena</td>
			<td style="width:119px;">K 2-7520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trephine 1.5 mm</td>
			<td style="width:71px;">Katena</td>
			<td style="width:119px;">K 2-7510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Tricaine Hydrochloride 0.5%</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0065-0741-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Healon</td>
			<td style="width:71px;">Abbott</td>
			<td style="width:119px;">Healon OVD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">7-0 Sutures</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">8065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">2.5% Phenylephrine HCl</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td style="width:119px;">NDC 61314-342-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">1% Tropicamide</td>
			<td style="width:71px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td style="width:119px;">NDC-24208-585-59</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hamilton Syringe</td>
			<td style="width:71px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7654-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">33 gauge needle</td>
			<td style="width:71px;">Hamilton</td>
			<td align="right" style="width:119px;">90033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Cell Strainer (100 &#956;m nylon)</td>
			<td style="width:71px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:71px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:119px;">B3175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine corneal transplantation: a model to study the most common form of solid organ transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

تم استخدام نموذج الفئران من زرع القرنية لأكثر من 20 عاما لتوصيف آليات كل من رفض المزروع 19-23 القرنية والقرنية قبول المزروع 13، 15،16،18، 24-27 بنجاح. وقد استخدم هذا النموذج لتحديد أهمية FASL التعبير في قبول المزروع القرنية، في أن الحيوانات التي تفتقر FASL لم تكن قادرة على قبول المغايرة القرنية 15. كما تم استخدامه لإثبات أن عامل نمو بطانة 1 مستقبلات العلاج morpholino الوعائية يزيد بشكل كبير القرنية بقاء الكسب غير المشروع 28. في تقرير حديث جدا تم استخدام هذا النموذج لاختبار ما إذا كانت المعالجة من الفئران قبل engraftment القرنية مع الستيرويدات القشرية عقد أي فوائد علاجية (29). أظهرت الباحثون أن هذه المعالجة لم تحسين معدل البقاء على قيد الحياة من 29 المغايرة القرنية. تثبت هذه التقارير بوضوح إلى أن الميزة الأساسية لهذا النموذج هي أنيمكن للمرء أن يدرس في الحيوانات الحية تلك الأشياء التي يعتقد أنها مهمة لنجاح عمليات زراعة القرنية في البشر. وأفادت دراسات سابقة من هذا المختبر أن أحد رؤساء الآليات المسؤولة عن الرفض المزروع القرنية هو إقامة النظامية تأخر من نوع فرط الحساسية (DTH) لalloantigens محددة أعربت عنها المزروع القرنية 19، 20. وقد استخدمنا منذ هذا النموذج لاختبار ما إذا كان إنشاء مستضد خيفي النظامية التسامح DTH لalloantigens التي أعرب عنها المزروع القرنية المانحة يحسن البقاء على قيد الحياة من هذه الطعوم. كما هو مبين في الشكل 1، tolerized الفئران BALB / ج لC57BL / 10 (B10) alloantigens لم يحسن قبول المزروع القرنية مقاسا الوقت يعني بقاء لهذه المغايرة القرنية. وبالتالي فإن بقاء الوقت نفسه عن رفض القرنيات نفسها سواء كانت الفئران tolerized أم لا. نحن أيضا دراسات مماثلة أجريت باستخدام الردود الكسب غير المشروع الجلد كوسيلةاختبار فعالية النظامية DTH tolerization. وأظهرت هذه الدراسات أنه عندما تأسست التسامح DTH في BALB / ج الفئران نحو B10 alloantigens، ترقيع الجلد تحمل بعض (B10.D2 وC.B10-H-2 ب) أو كل B10 alloantigens لم يظهر أي زيادة الوقت يعني بقاء ( الشكل 2). استنتجنا من هذه الدراسات أن BALB / ج الفئران التي أنشأت الردود DTH مستضد معين لا تستمد أي فائدة من مثل هذا التسامح يمكن قياسها إما المغايرة القرنية أو الجلد. وتشير هذه البيانات أيضا أن المعلومات التي سوف تدرس نموذج الفئران من زرع القرنية، في بعض الأحيان، تكون قابلة للتطبيق مباشرة إلى أشكال أخرى من زراعة الأنسجة الصلبة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/51830/51830fig1highres.jpg" /> تم حقن الرقم 1. BALB / ج الفئران في الغرفة الأمامية مع 10 6 خلايا الطحال من C57BL / 10 (B10) الفئران. </strأونج&gt; سمك B10 كامل ترقيع القرنية وبعد ذلك توضع على BALB / ج الفئران حقن B10 (ن = 10) أو وهمية حقن الفئران BALB / ج (ن = 11). وقد لوحظت الفئران لمدة 50 يوما وتقييمها لرفض الكسب غير المشروع القرنية. وذكرت بيانات متوسط ​​البقاء على قيد الحياة وقتها لتلك الطعوم التي تم رفضها للفئران &quot;tolerized&quot; (B10 حقن، 6 الفئران) أو لا tolerized (حقن وهمية، 6 الفئران). لم هذه المنحنيات لم يظهر دلالة إحصائية (ع&gt; 0.05). <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/51830/51830fig2highres.jpg" /> الشكل 2. حقن خلايا الطحال في الغرفة الأمامية لا يؤثر بقاء ترقيع الجلد خيفي. تم حقن الفئران BALB / ج في الغرفة الأمامية مع 10 6 خلايا الطحال من C57BL / 10 الفئران. بعد أسبوع واحد هذه الفئران تم المغروسة بشكل منفصل مع الجلد من C57BL / 10، ن = 10، B10.D2، ن = 7، C.B10-H-2 ب، ن = 7 الفئران ومقارنةالفئران التي لم تحقن والمغروسة مع C57BL / 10 الجلد، ن = 10. يتم التعبير عن النتائج على الوقت يعني بقاء + SEM.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation at JoVE.com

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

الفئران زرع القرنية: نموذج لدراسة الشكل الأكثر شيوعا من الصلبة زراعة الأعضاء

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

murine-corneal-transplantation-model-to-study-most-common-form-solid

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

9.6K Views.  Saint Louis University. Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Video: Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

زرع مثلي الأورطي : نموذج الفأر لدراسة تطوير المزمنة اعتلال وعائي

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and standardized not only for the study of allo-rejection but also between syngeneic strains for examining mechanisms of ischemia-reperfusion injury after lung transplantation. Although the application of the rat and other large animal model 2 contributed significantly to the elucidation of these studies, the scope of those investigations is limited by the scarcity of knockout and transgenic rats. Due to no effective therapies for obliterative bronchiolitis, the leading cause of death in lung transplant patients, there has been an intensive search for pre-clinical models that replicate obliterative bronchiolitis. The tracheal allograft model is the most widely used and may reproduce some of the histopathologic features of obliterative bronchiolitis 3. However, the lack of an intact vasculature with no connection to the recipient's conducting airways, and incomplete pathologic features of obliterative bronchiolitis limit the utility of this model 4. Unlike transplantation of other solid organs, vascularized mouse lung transplants have only recently been reported by Okazaki and colleagues for the first time in 2007 5. Applying the basic principles of the rat lung transplant, our lab initiated the obliterative bronchiolitis model using minor histoincompatible antigen murine orthotopic single-left lung transplants which allows the further study of obliterative bronchiolitis immunopathogenesis6.

Obliterative bronchiolitis is the key impediment to the long-term survival of lung transplant recipients and the lack of a robust preclinical model precludes examining obliterative bronchiolitis immunopathogenesis. Unlike other solid organ transplants, vascularized mouse lung transplantation has only recently been developed. Here we show our independently developed obliterative bronchiolitis model after murine orthotopic single-lung transplantation.

تطوير النزلات الشعبية مسد في نموذج الفئران من زرع الرئة Orthotopic

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

الفئران عنق الرحم القلب زرع نموذج باستخدام أزرار وتقنيات التعديل

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these strategies is to examine their effects on heart function. There are several techniques to measure in vivo cardiac mechanics (e.g., echocardiography, pressure/volume relations, etc.). Compared to echocardiography, real-time left ventricular (LV) pressure/volume analysis via catheterization is more precise and insightful in assessing LV function. Additionally, LV pressure/volume analysis provides the ability to instantaneously record changes during manipulations of contractility (e.g., &#946;-adrenergic stimulation) and pathological insults (e.g., ischemia/reperfusion injury). In addition to the maximum (+dP/dt) and minimum (-dP/dt) rate of pressure change in the LV, an accurate assessment of LV function via several load-independent indexes (e.g., end systolic pressure volume relationship and preload recruitable stroke work) can be attained. Heart rate has a significant effect on LV contractility such that an increase in the heart rate is the primary mechanism to increase cardiac output (i.e., Bowditch effect). Thus, when comparing hemodynamics between experimental groups, it is necessary to have similar heart rates. Furthermore, a hallmark of many cardiomyopathy models is a decrease in contractile reserve (i.e., decreased Bowditch effect). Consequently, vital information can be obtained by determining the effects of increasing heart rate on contractility. Our and others data has demonstrated that the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) knockout mouse has decreased contractility. Here we describe the procedure of measuring LV pressure/volume with increasing heart rates using the NOS1 knockout mouse model.

This article describes the measurement of murine left ventricular function via pressure/volume analysis at different heart rates.

قسطرة القلب في الفئران لقياس العلاقة حجم الضغط: دراسة تأثير بوديتش

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

نموذج زرع الشريان الاورطي لعنق الرحم من murine باستخدام تقنيه الكفة المعدلة غير الخياطة

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

نموذج ثقافة الجهاز البطانية القرنية الخنازير باستخدام أزرار القرنية الانقسام

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

تطوير نموذج تجريبي غير باضع بمساعدة الليزر لفقدان الخلايا الانهوفية القرنية

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

مضاعفات مخفضة بعد إعادة الاتصال الشرياني في نموذج الجرذ من زرع الكبد العظام

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for kidney transplantation (KT). Even though, the use of allografts from extended criteria donors (ECD) could partially ease the shortage of organ donors, ECD organs carry a potentially higher risk for inferior outcomes and postoperative complications. Dynamic organ preservation techniques, modulation of ischemia-reperfusion and preservation injury, and allograft therapies are in the spotlight of scientific interest in an effort to improve allograft utilization and patient outcomes in KT.
Preclinical animal experiments are playing an essential role in translational research, especially in the medical device and drug development. The major advantage of the porcine orthotopic auto-transplantation model over ex vivo or small animal studies lies within the surgical-anatomical and physiological similarities to the clinical setting. This allows the investigation of new therapeutic methods and techniques and ensures a facilitated clinical translation of the findings. This protocol provides a comprehensive and problem-oriented description of the porcine orthotopic kidney auto-transplantation model, using a preservation time of 24 hours and telemetry monitoring. The combination of sophisticated surgical techniques with highly standardized and state-of-the-art methods of anesthesia, animal housing, perioperative follow up, and monitoring ensure the reproducibility and success of this model.

Large animal models play an essential role in preclinical transplantation research. Due to its similarities to the clinical setup, the porcine model of orthotopic kidney auto-transplantation described in this article provides an excellent in vivo setting for the testing of organ preservation techniques and therapeutic interventions.

عملية زرع الكلى التلقائية في نموذج بورسين باستخدام 24 ساعة لحفظ الأعضاء والقياس المستمر عن بعد

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Intramyocardial Transplantation of MSC-Loading Injectable Hydrogels after Myocardial Infarction in a Murine Model

One of the major issues facing current cardiac stem cell therapies for preventing postinfarct heart failure is the low retention and survival rates of transplanted cells within the injured myocardium, limiting their therapeutic efficacy. Recently, the use of scaffolding biomaterials has gained attention for improving and maximizing stem cell therapy. The objective of this protocol is to introduce a simple and straightforward technique to transplant bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) using injectable hydroxyphenyl propionic acid (GH) hydrogels; the hydrogels are favorable as a cell delivery platform for cardiac tissue engineering applications due to their ability to be cross-linked in situ and high biocompatibility. We present a simple method to fabricate MSC-loading GH hydrogels (MSC/hydrogels) and evaluate their survival and proliferation in three-dimensional (3D) in vitro culture. In addition, we demonstrate a technique for intramyocardial transplantation of MSC/hydrogels in mice, describing a surgical procedure to induce myocardial infarction (MI) via left anterior descending (LAD) coronary artery ligation and subsequent MSC/hydrogels transplantation.

Stem cell-based therapy has emerged as an efficient strategy to repair injured cardiac tissues after myocardial infarction. We provide an optimal in vivo application for stem cell transplantation using gelatin hydrogels that are able to be enzymatically cross-linked.

زرع داخل القلب من هيدروجيلات هيدروجيل القابلة للحقن MSC التحميل بعد احتشاء عضلة القلب في نموذج مورين

One of the major issues facing current cardiac stem cell therapies for preventing postinfarct heart failure is the low retention and survival rates of ...