The authors would like to thank the many individuals who have worked on and perfected this technique and have been responsible for the generation of many manuscripts both in this lab and others. This work was supported by National Institutes of Health Grant EY12707 (PMS) and an unrestricted grant from Research to Prevent Blindness to Department of Ophthalmology.

הערה: מטופלים כל בעלי החיים המשמשים בהליך זה בהתאם לאגודה לחקר חזון הצהרת עיניים לשימוש בבעלי החיים ברפואת עיניים ומחקר חזון, כמו גם את ההנחיות שנקבעו על ידי הוועדה לפיקוח על בעלי החיים באוניברסיטת סנט לואיס. הערה: כל המכשירים ופתרונות כירורגיים הם מעוקרים לפני ניתוח, כדי לצמצם את זיהום חיידקים של העין. יש לציין, כי בעוד שבעלי החיים עושים לחוות קצת כאב מהליך זה, אנחנו לא מעסיקים משככי כאבים. הסיבה לכך היא כי כל משככי הכאבים אנטי דלקתיים ומאז תגובות השתלה הקרנית כרוכות דלקת, השימוש בתרופות אנטי-דלקתיות יפגע ביכולת שלנו כדי לקבוע אילו גורמים מעורבים בכישלון שתל קרני. 1. הרדמה <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עכברי תורם למקבל בהרדמה כללית על ידי זריקות IP של קטמין (86.98 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (13.04 מ&quot;ג / קילוגרם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את עכבר הנמען בהרדמה לאורך כל ההליך אשר בדרך כלל לוקח 30 דקות לשעה. כתוצאה מכך, כל הזמן לפקח על העכבר עבור כל סימנים של חזרה להכרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל המשחה puralube לעין עד שלא תעבור ניתוח אחרי בעל החיים הוא מורדם כדי למנוע יובש. </li></ol> 2. הארכת קרנית <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבלתן של קרנית התורם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שבעלי החיים הוא בהרדמה מלאה, להשיג mydriasis ההולם מצד ממשל של כמה טיפות עיניים של tropicamide 1% ו -2.5% hydrochloride phenylephrine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את הראש של החיה התורמת בצורה אופקית על לוח מונח על תמיכת מטלטלין חסון. תקן את הראש עם רצועה של סרט על פני הצוואר, כדי להבטיח כי העין היא במצב אופקי לאורך כל הפעולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במקדחה בקוטר 2 מ&quot;מ, שקצה שלו היה צבוע עם מתיל הכחול, החוצהמרפד את האתר שתל קרנית המרכזית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסכין חד, לחדור הקרנית ולהזריק healon ללשכה הקדמית להעמיק אותו כדי להפחית את הסיכוי לניזק לאנדותל התורם והעדשה בסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלו שתל התורם במספריים Vannas ומקום לצלחת המכילה תמיסת מלח מאוזנת &quot;הנקס ועד שימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שתל התורם כבר הוסר, להרדים את העכבר התורם באמצעות CO 2 שאיפה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת מיטת השוחד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על אותם השלבים כפי שמתואר ב2.1.1 דרך 2.1.2 לנמען. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במקדחה בקוטר 1.5 מ&quot;מ, מתאר את אתר שתל נמען. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסכין חד, לחדור הקרנית ולהזריק healon ללשכה הקדמית להעמיק אותו כדי להפחית את הסיכוי לניזק לעדשה הבסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכפתור קרני המרכזי שהותווה מהנמען באמצעות מספריים Vannas וזורקים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפירתשתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את קרנית התורם מעל שתל המיטה בקרנית של הנמען. הקפד שhealon נאות הוא תחת קרנית התורם להגנה על תאי האנדותל תורם מנזק על ידי מגע ישיר עם עדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות microforceps היטה Super Fine, למקם את הנגיסה הראשונה של 11-0 תפר ניילון לצד התורם, דרך התורם עם עומק 90% מעובי מלא לצד של הנמען, ואז לקשור את. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהקרנית מעוגנת במקום, לבצע תפרי midcardinal קטע כזה שיש לו את הקרנית 8 עד 10 תפרים כולל וקרנית התורם היא בשורה בצורה מאובטחת עם ומחוברת למיטת השתל הקרנית הנמען. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העמקת הלשכה הקדמית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעמיק את הלשכה הקדמית על ידי הזרקת HBSS או בועת אוויר ללשכה הקדמית ובעדינות לבדוק את התקינות של השתל קרני לדליפה עם ספוג. הערה: אם לא ניתן רפורמה הלשכה הקדמית אז יש הסתברות גבוהה של גataract אשר יהפוך את ההערכות עתידיות של הקרנית המושתלת קשות מאוד וגם להוביל לבעיות בתפקוד תורם קרנית האנדותל וכישלון ובכך שתל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכה סופית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעין לקבוע כי התלמיד הוא עגול ועומק הלשכה הקדמית הוא נורמלי. הערה: אם התלמיד אינו עגול זה עולה כי בתפירת איריס נפגעה וכך השתל נחשב לכישלון טכני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה אנטיביוטית לעין. אופציונאלי: סגור את המכסה עין עם תפר 7-0 משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב עכברים עד שהם התעוררו לגמרי ולאחר מכן בנפרד לשכן אותם למינימום של שני ימים שלאחר ניתוח. </li></ol></li></ol> הסרת 3. תפר <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרים בם תפר מכסה משמש, להרדים עכברים כפי שתואר לעיל ולהסיר את תפר המכסה ב 48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים ביום 7 לאחר הניתוח. הסר את sutures אבטחת השתל קרני. ברגע שהתפרים יוסרו ובעלי החיים התעוררו באופן מלא, להחזיר אותו לכלוב שלה. </li></ol> 4. הערכה קלינית <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את העין לאינדיקציות של סיבוכים פרוצדורליים הכוללים, קטרקט (ערפול של העדשות), hyphema (דם בלשכה הקדמית), לשכה קדמית שאינה של העומק הנכון, או אטימות משמעותיות של הקרנית. שקול אלה המדגימים סיבוכים אלה כ&quot; התפשר &quot;ולהרדים אותם משאיפת CO 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את כל הבדיקות על עכברי unanesthetized. החזק את העכבר ביד אחת ובכך מרסן את העכבר, כך ששני יכול proptose עין כדי לאפשר תצפית טובה יותר של העין. ברגע שהתצפיות הושלמו, להחזיר את בעל החיים לכלוב שלה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האם צופה שאינו מכיר את קבוצות הטיפול העריך את השווי מושתל קרניות 2 עד 3 פעמים בשבוע לסימנים של שתל קרניפרקי דחייה או כישלון שתל קרני. להשתמש במיקרוסקופ הניתוחי או biomicroscope מנורת סדק אופקי לתצפיות אלה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך כל קרנית לאטימות באמצעות סולם של 0 עד 5. קנה המידה מוגדרת באופן הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 0 עד אלה קרניות שאין להם סימנים של אטימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 1 לאלה קרניות שמראות אטימות שטחיות מינימליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 2 עד קרניות המציגות אטימות קלות ועמוקות יותר, אבל התלמיד ואיריס שהבסיס עדיין ניתן להבחין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 3 עד קרנית המציגות אטימות סטרומה בי לא ניתן לראות את איריס בפירוט למעט השוליים התלמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 4 לקרנית, המציגות אטימות סטרומה צפופות ואם ניתן לראות אין מבנים שבבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 5 עד קרנית המציגות אטימות מלאים ובצקת סטרומה אינטנסיבית, עם תלמיד ואיריס טשטש לחלוטין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"><html> גם להעריך כל קרנית למידת חדירה של כלי דם (ניאו-וסקולריזציה) משתמש בסולם דירוג של 1 עד 8. לשם כך, להציג את הקרנית כמורכבת של 4 רביעים שווים ולקבוע את הסכום של כלי דם בכל אחד מרביעים עם ציון שטווח הרצון בין 0 (ללא כלי) 2 לכלי דם נרחבים של הרבע הזה. הוסף את הציונים הבודדים מכל רבע כדי לחשב את הציון הסופי ניאו-וסקולריזציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסווג קרניות בחריפות כזאת בדחו אם יש להם ציון של 3 לשתי תצפיות רצופות במשך זמן מצביע עד 5 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסווג עכברים שהקרניות היו ברורים בשעה 5 שבועות, אבל לפתח עננות בזמנים&gt; 45 ימי הודעה קליטתם, עם ציון של 3 לשתי נקודות זמן ברציפות, כבעל דחיית שתל קרני לטווח מאוחר עבר. השתמש בעקומות הישרדות קפלן-מאייר לנתח הישרדות שתל. </li></ol></li></ol> 5. מניפולציה של הדגם בשמאל: 40px; &quot;&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה של תאים בודדים מהטחול. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין תאים בודדים, להרדים את עכבר התורם ראשון. לאחר מכן, להסיר את הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הטחול במסננת תא ולשבש אותה עם בוכנת מזרק ממזרק 3 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף תאים וגלולים ב 10 מיליליטר של תמיסת מלח מאוזנת הנקס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר 10 μl של השעיה תא ולהוסיף עד 10 μl של trypan 0.4% כחולים ולערבב. תוסיף את זה לhemocytometer ולספור את התאים ברשת המרכזית. מספר התאים בצינור הוא ספירת התאים 10 4 x 2 (גורם לדילול בtrypan הכחול) X X 10 (נפח בצינור). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקה ללשכה הקדמית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים כפי שתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע זריקות באמצעות מיקרוסקופ לנתח. לכל הזרקה intracameral, להשתמש 6 10 תאי טחול ב0.005 מיליליטר נפח ומצויד במחט 33 G מזרק microliter 0.25 מיליליטר. הערה: מניפולציות אחרותשל המודל יכול להתבצע על ידי טיפול בבעלי חיים עם חומרים כימיים הפועלים כשני יריבים או אגוניסטים כדי לקבוע את התפקיד שגורם מסוים עשוי לשחק לאחר ניתוח שתל קרני orthotopic. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Farooq, A. V., Shukla, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+epithelial+and+stromal+keratitis:+an+epidemiologic+update.">Herpes simplex epithelial and stromal keratitis: an epidemiologic update.</a> Surv. Ophthalmol. , 448-462 (2012).</li><li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+and+diseases+of+the+ocular+surface+and.">Age-related changes and diseases of the ocular surface and.</a> Invest. Opthlamol. Vis. Sci. 54, 48-53 (2013).</li><li>Edwards, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indications+for+corneal+transplantation+in+New+Zealand:+1991-1999.">Indications for corneal transplantation in New Zealand: 1991-1999.</a> Cornea. 21, 152-155 (2002).</li><li>Thompson, R. W., Price, M. O., Bowers, P. J., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival+after+penetrating+keratoplasty.">Long-term survival after penetrating keratoplasty.</a> Ophthalmol. 110, 1396-1402 (2003).</li><li>Williams, K. A., Roder, D., Esterman, A., Muehlberg, S. M., Coster, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+predictive+of+corneal+graft+survival.+Report+form+the+Australian+Corneal+Graft+Registry.">Factors predictive of corneal graft survival. Report form the Australian Corneal Graft Registry.</a> Ophthalmology. 99, 403-414 (1992).</li><li>Larkin, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+allograft+rejection.">Corneal allograft rejection.</a> Br. J. Ophthalmol. 78, 649-652 (1994).</li><li>Boisjoly, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+of+corneal+graft+failure.">Risk factors of corneal graft failure.</a> Ophthalmol. 100, 1728-1735 (1993).</li><li>Sugar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recipient+Risk+Factors+for+Graft+Failure+in+the+Cornea+Donor+Study.">Recipient Risk Factors for Graft Failure in the Cornea Donor Study.</a> Ophthalmol. 116, 1023-1028 (2009).</li><li>Namba, K., Kitaichi, N., Nishida, T., Taylor, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+regulatory+T+cells+by+the+immunomodulating+cytokines+alpha-melanocyte-stimulating+hormone+and+transforming+growth+factor-beta2.">Induction of regulatory T cells by the immunomodulating cytokines alpha-melanocyte-stimulating hormone and transforming growth factor-beta2.</a> J. Leukoc. Biol. 72, 946-952 (2002).</li><li>Taylor, A. W., Yee, D. G., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+nitric+oxide+generated+by+inflammatory+macrophages+by+calcitonin+gene-related+peptide+in+aqueous+humor.">Suppression of nitric oxide generated by inflammatory macrophages by calcitonin gene-related peptide in aqueous humor.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1372-1378 (1998).</li><li>Wilbanks, G. A., Mammolenti, M., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+induction+of+anterior+chamber-associated+immune+deviation+(ACAID).+III.+Induction+of+ACAID+depends+upon+intraocular+transforming+growth+factor-beta.">Studies on the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID). III. Induction of ACAID depends upon intraocular transforming growth factor-beta.</a> Eur. J. Immunol. 22, 165-173 (1992).</li><li>Volpert, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducer-stimulated+Fas+targets+activated+endothelium+for+destruction+by+anti-angiogenic+thrombospondin-1+and+pigment+epithelium-derived+factor.">Inducer-stimulated Fas targets activated endothelium for destruction by anti-angiogenic thrombospondin-1 and pigment epithelium-derived factor.</a> Nat. Med. , 8-349 (2002).</li><li>Apte, R. S., Sinha, D., Mayhew, E., Wistow, G. J., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+role+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+in+inhibiting+NK+cell+activity+and+preserving+immune+privilege.">Cutting edge: role of macrophage migration inhibitory factor in inhibiting NK cell activity and preserving immune privilege.</a> J. Immunol. 160, 5693-5696 (1998).</li><li>Kennedy, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+production+of+interleukin-1+receptor+antagonist+peptides+in+normal+human+cornea.">Novel production of interleukin-1 receptor antagonist peptides in normal human cornea.</a> J. Clin. Invest. 95, 82-88 (1995).</li><li>Shimmura-Tomita, M., Wang, M., Taniguchi, H., Akiba, H., Yagita, H., Hori, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galectin-9-mediated+protection+from+allo-specific+T+cells+as+a+mechanism+of+immune+privilege+of+corneal+allografts.">Galectin-9-mediated protection from allo-specific T cells as a mechanism of immune privilege of corneal allografts.</a> PLoS One. 8, (2013).</li><li>Goldberg, M. F., Ferguson, T. A., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cellular+adhesion+molecules+in+inflamed+human+corneas.">Detection of cellular adhesion molecules in inflamed human corneas.</a> Ophthalmol. 101, 161-168 (1994).</li><li>Stuart, P. M., Griffith, T. S., Usui, N., Pepose, J. S., Yu, X., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD95+ligand+(FasL)-induced+apoptosis+is+necessary+for+corneal+allograft+survival.">CD95 ligand (FasL)-induced apoptosis is necessary for corneal allograft survival.</a> J Clin Invest. 99, 396-402 (1997).</li><li>Yamagami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fas-Fas+ligand+interactions+in+the+immunorejection+of+allogeneic+mouse+corneal+transplants.">Role of Fas-Fas ligand interactions in the immunorejection of allogeneic mouse corneal transplants.</a> Transplantation. 64, 1107-1111 (1997).</li><li>Stuart, P. M., Pan, F., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fas/Fas+ligand+interactions+regulate+neovascularization+in+the+cornea.">Fas/Fas ligand interactions regulate neovascularization in the cornea.</a> Invest. Ophthalmmol. Vis. Sci. 44, 93-98 (2003).</li><li>Stuart, P. M., Yin, X. T., Pan, F., Haskova, Z., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitors+of+matrix+metalloproteinases+activity+prolong+corneal+allograft+acceptance+by+increasing+FasL+expression.">Inhibitors of matrix metalloproteinases activity prolong corneal allograft acceptance by increasing FasL expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1169-1173 (2004).</li><li>Joo, C. -. K., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+mediated+responses+in+a+murine+model+of+orthotopic+corneal+transplantation.">T-cell mediated responses in a murine model of orthotopic corneal transplantation.</a> Invest.Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 1530-1540 (1995).</li><li>Sonoda, Y., Sano, Y., Ksander, B., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cell-mediated+immune+responses+elicited+by+orthotopic+corneal+allografts+in+mice.">Characterization of cell-mediated immune responses elicited by orthotopic corneal allografts in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 427-434 (1995).</li><li>Sano, Y., Osawa, H., Sotozono, C., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+expression+during+orthotopiccorneal+allograft+rejection+in+mice.">Cytokine expression during orthotopiccorneal allograft rejection in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1953-1957 (1998).</li><li>Haskova, Z., Usui, N., Ferguson, T. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4++T+cells+are+critical+in+corneal+but+not+skin+allograft+rejection.">CD4+ T cells are critical in corneal but not skin allograft rejection.</a> Transplantation. 69, 483-488 (2000).</li><li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+disruption+of+antiangiogenic+signals+by+recruited+allospecific+T+cells+leads+to+corneal+allograft+rejection.">Immunological disruption of antiangiogenic signals by recruited allospecific T cells leads to corneal allograft rejection.</a> J. Immunol. 188, 5962-5969 (2012).</li><li>Dana, M. R., Yamada, J., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+interleukin-1+receptor+antagonist+promotes+corneal+transplant+survival.">Topical interleukin-1 receptor antagonist promotes corneal transplant survival.</a> Transplantation. 63, 1501-1507 (1997).</li><li>Cunnusamy, K., Chen, P. W., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-17A-dependent+CD4+CD25++regulatory+T+cells+promote+immune+privilege+of+corneal+allografts.">IL-17A-dependent CD4+CD25+ regulatory T cells promote immune privilege of corneal allografts.</a> J. Immunol. 186, 6737-6745 (2011).</li><li>Fu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine+depletion+as+a+mechanism+for+the+immune+privilege+of+corneal+allografts.">Arginine depletion as a mechanism for the immune privilege of corneal allografts.</a> Eur. J. Immunol. 41, 2997-3005 (2011).</li><li>Medina, C. A., Rowe, A. M., Yun, H., Knickelbein, J. E., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Azithromycin+treatment+increases+survival+of+high-risk+corneal+allotransplants.Cornea.">Azithromycin treatment increases survival of high-risk corneal allotransplants.Cornea.</a> , 32-658 (2013).</li><li>Cho, Y. K., Zhang, X., Uehara, H., Young, J. R., Archer, B., Ambati, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor+1+morpholino+increases+graft+survival+in+a+murine+penetrating+keratoplasty.">Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 morpholino increases graft survival in a murine penetrating keratoplasty.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 8458-8471 (2012).</li><li>Kim, H. K., Choi, J. A., Uehara, H., Zhang, X., Ambati, B. K., Cho, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presurgical+corticosteroid+treatment+improves+corneal+transplant+survival+in+mice.">Presurgical corticosteroid treatment improves corneal transplant survival in mice.</a> Cornea. 32, 1591-1598 (2013).</li><li>Yamazoe, K., Yamazoe, K., Shimazaki-Den, S., Shimazaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+for+corneal+graft+recovery+after+severe+corneal+graft+rejection+following+penetrating+keratoplasty.">Prognostic factors for corneal graft recovery after severe corneal graft rejection following penetrating keratoplasty.</a> BMC Ophthalmol. 13, 5 (2013).</li><li>Panda, A., Vanathi, M., Kumar, A., Dash, Y., Priya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+graft+rejection.">Corneal graft rejection.</a> Surv. Ophthalmol. 52, 375-396 (2007).</li><li>Patel, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+survival+and+endothelial+outcomes+in+the+new+era+of+endothelial+keratoplasty.">Graft survival and endothelial outcomes in the new era of endothelial keratoplasty.</a> Exp. Eye Res. 95, 40-47 (2012).</li><li>Anshu, A., Price, M. O., Tan, D. T., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+keratoplasty:+a+revolution+in+evolution.">Endothelial keratoplasty: a revolution in evolution.</a> Surv. Ophthalmol. 57, 236-252 (2013).</li></ol>

The authors have no competing financial interests.

המודל העכברי של השתלת קרנית המתוארת כאן מאפשר לחוקר ללמוד דחיית שתל קרנית אדם במודל שהוא ניבוי של מה גורמים הקשורים הטובים ביותר עם ​​שתי הדחייה 15,17,18,20, 26-30 וקבלת 21-25 של קרנית allografts. בשונה השתלת קרנית אנושית, שבו מטופלים מקבלים גם טיפול בסטרואידים מקומי א?...

השתלת קרנית היא אחד מהסוגים המוצלחים והנפוצים ביותר של השתלה שבוצעו בבני אדם. הסיבות לכך שניתוח זה מבוצע הן תוצאה של פציעה, מחלה זיהומית 1, או צורות אחרות של מחלה בקרנית שאינה מדבקת 2. דמויות מעין הבנק האגודה של אמריקה עולות כי מעל 46,000 בוצעו בשנת 2011 (ראה באתר אינטרנט בכתובת: restoresight.org/eye_banks/eye_banks.html). אינדיקציה להצלחתו היא ששיעורי כישלון שנה אחת עבור שתלי קרנית אלוגנאית נעים 10-15% ולאחר 5 שנים של ההצלחה היא בעודף של 70% 3-8. מחקרים רבים הראו, ההצלחה של allografts קרנית קשורה באופן ישיר לעובדה כי העין היא אתר מועדף אימונולוגית. גורמים אחראים למצב הקרניות כאתר זכות חיסוני כוללים חוסר של שני כלי הדם והלימפה בקרנית, היעדר יחסי של תאי הצגת אנטיגן, גורמים המיוצר על ידי הקרנית שsuppresזה funtions מפעיל חיסוני 9-15, ביטוי נמוך של MHC אנטיגנים 16, ואת הביטוי של מקאל 17-20. עם זאת, למרות גורמים אלה, גורם שתלים אלה להצלחה, הם עוברים דחייה 3-7. כתוצאה מכך, הבנת מנגנונים אלה שמתווכים דחייה זו, כמו גם בדיקת טיפולים שונים למניעת דחייה היא בעל חשיבות קריטית. לצורך כך, אנו מתארים כאן מודל עכברי של השתלת קרנית שכבר בשימוש במשך 20 שנים כדי ללמוד השתלת קרנית בסביבה ניסויית מבוקרת. מאז תגובות השתלה כרוכות בגורמים רבים ושונים הפועלים בקונצרט שאולטימטיבי לקבוע אם הרקמה המושתלת נכשלת או מצליחה, שלא ניתן להבין את החשיבות של גורמים אלה בכל דגם במבחנה. כתוצאה מכך, מחקרים שנערך בבעלי חיים שלמים נדרשים כדי לקבוע מה גורמים חשובים להצלחה או או failuמחדש של רקמה מושתלת. בעוד מינים אחרים של בעלי חיים שימשו במחקר השתלה קרנית, יש במודל העכברי מספר יתרונות בהשוואה לשימוש במינים אחרים. הראשון הוא קיומה של זנים רבים של עכברים המבטאים את גנים מושתלים מסוימים או היו ממוקד-גן לחוסר ביטוי של גורמים חיסוניים ספציפיים שתפקידה בהשתלה ניתן ללמוד טוב יותר. בנוסף, יש חומרים כימיים רבים (שני גורמים רקומביננטי ונוגדנים המנטרלים את הגורמים) שהם ספציפיים לעכברים ושאינם קיימים למינים רבים אחרים של בעלי חיים. בגלל קיומם של גורמים אלה, מודל זה כבר נעשה שימוש נרחב כדי לזהות גורמים רלוונטיים מעורבים בתגובה החריפה של קרנית שתל 15, 17,18,20 -29. יתר על כן, רבים מן הגורמים המעורבים בהשתלת קרנית ידוע גם להיות פונקציונלי בהשתלה של רקמות אחרות.

<table><tbody><tr><td>Zeiss Surgical Microscope</td><td>Zeiss</td><td>Rebuilt</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>3 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Vannus Scissors</td><td>Stortz</td><td>E-3387</td><td></td></tr><tr><td>11-0 Sutures</td><td>Alcon</td><td>717939M</td><td></td></tr><tr><td>Trephine 2.0 mm</td><td>Katena</td><td>K 2-7520</td><td></td></tr><tr><td>Trephine 1.5 mm</td><td>Katena</td><td>K 2-7510</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine Hydrochloride 0.5%</td><td>Alcon</td><td>NDC 0065-0741-12</td><td></td></tr><tr><td>Healon</td><td>Abbott</td><td>Healon OVD</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Sutures</td><td>Alcon</td><td>8065</td><td></td></tr><tr><td>2.5% Phenylephrine HCl</td><td>Alcon</td><td>NDC 61314-342-02</td><td></td></tr><tr><td>1% Tropicamide</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>NDC-24208-585-59</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Syringe</td><td>Hamilton</td><td>7654-01</td><td></td></tr><tr><td>33 gauge needle</td><td>Hamilton</td><td>90033</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainer (100 &amp;mu;m nylon)</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Hemocytometer</td><td>Cardinal Health</td><td>B3175</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr></tbody></table>

murine corneal transplantation: a model to study the most common form of solid organ transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

המודל העכברי של השתלת קרנית היה בשימוש כבר למעלה מ -20 שנים לאפיין בהצלחה מנגנונים של שני דחיית קרנית שתל 19-23 וקבלת קרנית שתל 13, 15,16,18, 24-27. מודל זה שימש להקמת חשיבות ביטוי מקאל בקבלת שתל קרנית, שבבעלי חיים שאין לי מקאל לא היו מסוגל לקבל allografts קרני 15. כמו כ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation at JoVE.com

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

השתלת קרנית עכברית: דגם לחקר הצורה נפוצה ביותר של Solid השתלות איברים

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

murine-corneal-transplantation-model-to-study-most-common-form-solid

Research

JoVE Journal

Medicine

9.7K Views.  Saint Louis University. Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Video: Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

טכניקת השתלת כליה בעכברים

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited application to humans, skin transplantation in mice has been widely employed for transplantation research. The procedure is easy to learn and perform, and it does not require delicate microsurgical techniques nor extensive training. Moreover, graft rejection in this model occurs in a very reproducible immunological reaction and is easily monitored by direct inspection and palpation. In addition, secondary skin transplantation with donor-matched or third-party skin grafts can be performed on more complex transplant models as an alternative and uncomplicated method to assess donor-specific tolerance. The complications are low and are in general limited to anesthesia overdose or respiratory distress after the procedure. Graft failure, on the other hand, occurs commonly as a result of poor preparation of the graft, incorrect positioning in the graft bed, or inappropriate placement of the bandage. In this article, we present a protocol for full-thickness skin transplantation in mice and describe the important steps necessary for a successful procedure.

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established model to study rejection in an alloimmune setting. Here, we provide a tutorial of each step involved in performing a BALB/c--&#62;C57BL/6 full-thickness skin transplant.

השתלת עור בעובי מלא Murine

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Immunology and Infection

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression must be pursued. Employing vascularized bone marrow transplantation and co-transplantation of the thymus have shown promise in this regard in various animal models.1-11 Vascularized bone marrow transplantation allows for the uninterrupted transfer of donor bone marrow cells within the preserved donor microenvironment, and the incorporation of thymus tissue with vascularized bone marrow transplantation has shown to increase T-cell chimerism ultimately playing a supportive role in the induction of immune regulation. The combination of solid organ and vascularized composite allotransplantation can uniquely combine these strategies in the form of a novel transplant model. Murine models serve as an excellent paradigm to explore the mechanisms of acute and chronic rejection, chimerism, and tolerance induction, thus providing the foundation to propagate superior allograft survival strategies for larger animal models and future clinical application. Herein, we developed a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique. The experience in syngeneic and allogeneic transplant settings is described for future broader immunological investigations via an instructional manuscript and video supplement.

To study combined solid organ and vascularized composite allotransplantation, we describe a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications have been reported since the first description in 1964. After 30 years of performing heterotopic heart transplantation in rats, we have developed a simplified surgical approach, which can be easily taught and performed without further surgical training or background.
After dissection of the ascending aorta and the pulmonary artery and ligation of superior and inferior caval and pulmonary veins, the donor heart is harvested and subsequently perfused with ice-cold saline solution supplemented with heparin. After clamping and incising the recipient abdominal vessels, the donor ascending aorta and pulmonary artery are anastomosed to the recipient abdominal aorta and inferior vena cava, respectively, using continuous running sutures.
Depending on different donor-recipient combinations, this model allows analyses of either acute or chronic rejection of allografts. The immunological significance of this model is further enhanced by a novel approach of in-ear injection of vital cardiac muscle cells and subsequent analysis of draining cervical lymphatic tissue.

We describe a model of heterotopic abdominal heart transplantation in rats, implying modifications of current strategies, which lead to a simplified surgical approach. Additionally, we describe a novel rejection model by in-ear injection of vital cardiac muscle cells, allowing further transplant immunological analyses in rats.

מודל אימונוולוגי עבור הלב הטרוולפית ושריר הלב השתלת תא בחולדות

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ transplantation. While the heterotopic vascularized murine cardiac transplantation model was initially utilized in studies of graft rejection using combinations of mismatched inbred mouse strains, access to genetically modified strains and therapeutic modalities can provide powerful new preclinical insights. Fundamentally, the surgical methodology for this technique has not changed since its development, especially with respect to important factors such as aseptic technique, anesthesia, and analgesia, which make material impacts on postsurgical morbidity and mortality. Additionally, improvements in perioperative management are expected to provide improvements in both animal welfare and experimental outcomes. This paper reports upon a protocol developed in collaboration with a subject matter expert in veterinary anesthesia and describes the surgical technique with an emphasis on perioperative management. Additionally, we discuss the implications of these refinements and provide details on troubleshooting critical surgical steps for this procedure.

The present paper describes a modified technique for heterotopic vascularized cardiac transplantation with updated aseptic technique, analgesia, and anesthesia.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

מודל של הקרנית של הקרניות הפותל באמצעות לחצני הקרנית מפוצלת

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.