The authors have nothing to disclose.

وتمت الموافقة على جميع الإجراءات والاختبارات السلوكية للأبحاث الحيوان أخلاقيات مجلس الجامعة MacEwan بموجب البروتوكول رقم 06-11-12، الذي هو في الامتثال مع المجلس الكندي للرعاية الحيوان المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام حيوانات التجارب. 1. إعداد خزانات الجرعات، حلول، وإدارة الجدول الزمني <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد جدول زمني إدارة مثل تلك الحيوانات لا مداوي في نفس البيئة، وخلال نفس الوقت من اليوم لتجنب أي يفند من الوقت أو يتحامل للمؤثرات البصرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على أكبر عدد ممكن متطابقة، 1.5 L، واضحة خزانات البولي بروبلين وضع البيض كما الضرورية لعدد من الأحجام المجموعة. استخدام مجموعات من 8 الأسماك في الخزان، والذي يسمح لل2 مجموعات من الأسماك لفحصها يوميا في وقت لاحق في الإجراء (راجع الخطوة 3). استخدام واحد خزان وخزان واحد لكل مجموعة جرعات (2X عدد مجموعات). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 400 ميكرون إدراج وضع البيض في جميع الدبابات القابضة. Fسوء خزانات المياه مع الموائل أو المياه بالتناضح العكسي في درجة الحرارة الصحيحة (لالزرد، 25-28 ° C) يسكنون التي تنسجم مع الأسماك في درجة الحرارة عادة في. ملاحظة: يمكن أن يكون هناك تفاعلات كيميائية غير مرغوب فيها بين بعض العقاقير والمكونات الكيميائية للمياه البيئة مخزنة. في هذه الحالة، استخدام المياه التناضح العكسي مخزنة مع أملاح حوض السمك الحد الأدنى أو لا لإدارة المخدرات، وكذلك لمجموعات المراقبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن الدبابات في بيئة محايدة لتجنب الأسماك تكييف للمؤثرات البصرية الخارجية خلال الجرعات. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير محلول الدواء. تخلط كمية مناسبة من الدواء مع الماء الموائل في أحواض التبويض. تحضير محلول الإيثانول بنسبة 0.2٪ خلال الجمع بين 3 مل من الايثانول درجة عالية (95٪ من الإيثانول غير التشويه والتحريف) مع 1497 مل من الماء. تحضير محلول الإيثانول بنسبة 1.4٪ خلال الجمع بين 21 مل من الايثانول مع 1479 مل من الماء. </li></ol> 2. المعاوضة الأسماك وإتhanol إدارة الإجراءات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صافي بعناية الأسماك من الدبابات بيئتها ونقل إلى خزان المناسب الذي يحتوي على إدراج وضع البيض. من الناحية المثالية، بيت السمك في إدراج وضع البيض للقضاء على المعاوضة تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع كل الأسماك في خزانات كل منهما، ورفع بلطف وضع البيض تضاف من خزان ووضعه في خزان محلول الدواء المناسب (الشكل 1A). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل الوقت الجرعات على النحو المطلوب. استخدام 30 دقيقة في محلول الإيثانول لهذا الإجراء هو موضح هنا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا أمكن ذلك، لدينا مساعدين مساعدة في نقل جميع المجموعات التجريبية إلى حل المخدرات في وقت واحد لضمان دقة الوقت الجرعات. بدلا من ذلك، ونقل مجموعة واحدة في وقت وتتبع مجموعات الفردية الجرعات مرات (الشكل 1A). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية الفترة الجرعات المطلوبة، وإزالة الأسماك من حل الإيثانول عن طريق رفع بعناية إدراج وضع البيضمن محلول الدواء ووضع بلطف مرة أخرى إلى خزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شبكة بلطف السمك في خزانات ووضعها مرة أخرى إلى موائلها حتى وقت الجرعة القادمة المقررة، أو مكان وضع البيض تضاف مرة أخرى إلى خزان للقضاء على المعاوضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما ذكر سابقا، إن أمكن في إطار معايير المعدات الإسكان الحيوان، بيت الحيوانات في الدبابة نفسها وإدراج وضع البيض الذي يتم استخدام خزان. هذا سيقضي على المعاوضة تماما أثناء إجراء الإدارة. </li></ol> 3. اختبار السلوكي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على الضوء / الظلام الساحة 9.5 سم بنسبة 55 سم طويلة وعميقة 9.5 سم مع أرضية للماء الأبيض (الشكل 1B). يضعوا الأبيض والأسود للماء ورقة غير عاكسة على الجدران الداخلية للحلبة باستخدام فيلكرو، مع نصف الساحة مغطاة باللون الأبيض وغطت نصف باللون الأسود. ملء الساحة إلى عمق 5 سم بالماء الموائل في درجة حرارة 25-28 درجة مئوية. الصيانةعين درجة الحرارة هذه طوال الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Minimalize المحفزات البصرية الخارجية من خلال بناء سياج ثلاثة جوانب البيضاء للساحة أن يقع فيه. تأكد منطقة الاختبار قد نشر الإضاءة العلوية التي لا تسبب انعكاسات على سطح الماء، ولكن هو مشرق لتتبع حركة البرمجيات، أو آخر بما فيه الكفاية -hoc الكمي اليدوي من صور الفيديو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الساحة في العلبة ووضع تسجيل وتحليل حركة المعلمات من تتبع سلوك البرامج. تعيين المدة محاكمة ل5-15 دقائق، اعتمادا على سؤال البحث. ملاحظة: هنا، كنا 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل مجموعة من الأسماك لفحصها إلى منطقة الأبحاث في خزان الموائل ووضعها خارج العلبة الساحة. يتأقلم السمك لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صافي بلطف السمك من مجموعة ومكان المناسبة في مركز النور / الساحة المظلمة، ويجري التأكد من الافراج عن الأسماك عند وضعها بشكل مواز لمحور طويل من الساحة لآفومعرف يتحامل الأسماك إلى منطقة الضوء أو الظلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ السلوك التسجيل فورا بعد إصدارها الحيوان. مشاهدة اي مشاكل البرامج مع تتبع الأسماك أو القفز أو تجميد الأسماك. وتناوب على الساحة 180 درجة بعد أن تم اختبارها نصف من المواضيع لمنع أي يفند بسبب التحيزات الناجمة عن الموجه نهاية الساحة نحو نهاية مفتوحة من العلبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد المحاكمة قد انتهت، صافي بلطف وإزالة الأسماك من الساحة إلى خزان أو صهريج الموائل. </li></ol> 4. تحليل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دراسة الوقت المستغرق في ضوء مقابل المناطق المظلمة. لكل مجموعة ولكل الأسماك والحصول على الوقت النسبي الذي يقضيه في مناطق الضوء والظلام وتحليلها باستخدام عينة واحدة ر -test (أو وقعت اختبار Wilcoxon رتبة لبيانات اللامعلمية، الفرق من (نصف الوقت محاكمة الإجمالي) 150 ثانية) لتحديد ما إذا كانت مجموعات يفضلون بشكل كبير مجال واحد على الآخر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقارنة الأفضليات، حساب prefeمؤشر rence بطرح الوقت الذي يقضيه في المنطقة الخفيفة من الوقت الذي يقضيه في منطقة مظلمة ومقارنة الاختلافات بين المجموعات. تي الاختبارات يمكن استخدامها للمقارنة بين مجموعتين. مقارنة مجموعات متعددة مع تحليل التباين في اتجاه واحد باستخدام اختبار آخر HSD خاصة توكي حيث من الضروري (أو كروسكال-اليس اختبار مع المقارنة متعددة دان اللاحق لاختبار البيانات اللامعلمية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقارنة سرعة، عدد من التحولات منطقة، التعرجات، والجمود عبر مجموعات. استخدام تحليل التباين في اتجاه واحد باستخدام اختبار آخر HSD خاصة توكي حيث من الضروري (أو كروسكال-اليس اختبار مع المقارنة متعددة دان اللاحق لاختبار البيانات اللامعلمية). </li></ol>

<ol>
	<li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish,+Danio+rerio.">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).</li><li>Langheinrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+A+new+model+on+the+pharmaceutical+catwalk.">Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk.</a> BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).</li><li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hooked!+Modeling+human+disease+in+zebrafish.">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).</li><li>Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+nicotine+and+alcohol+on+zebrafish+(+Danio+rerio)+shoaling.">Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling.</a> Behavioural brain research. , (2012).</li><li>Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Buspirone,+chlordiazepoxide+and+diazepam+effects+in+a+zebrafish+model+of+anxiety.">Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).</li><li>Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversed+Scototaxis+during+Withdrawal+after+Daily-Moderate,+but+Not+Weekly-Binge+Administration+of+Ethanol+in+Zebrafish.">Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish.</a> PLoS ONE. 8 (5), (2013).</li><li>Mathur, P., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+of+acute+versus+chronic+ethanol+exposure+on+anxiety-like+behavioral+responses+in+zebrafish.">Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish.</a> Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).</li><li>Dlugos, C., Rabin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+effects+on+three+strains+of+zebrafish:+model+system+for+genetic+investigations.">Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).</li><li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scototaxis+as+anxiety-like+behavior+in+fish.">Scototaxis as anxiety-like behavior in fish.</a> Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).</li><li>Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acute+and+chronic+ethanol+exposure+on+the+behavior+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).</li><li>Egan, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+behavioral+and+physiological+phenotypes+of+stress+and+anxiety+in+zebrafish.">Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish.</a> Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).</li><li>Gebauer, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+anxiolytics+in+zebrafish:+Similarities+and+differences+between+benzodiazepines,+buspirone+and+ethanol.">Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).</li><li>Serra, M. C., Mattioli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+preference+of+zebrafish+(Danio+rerio)+for+a+dark+environment.">Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment.</a> Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).</li><li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+in+the+zebrafish+leopard+strain.">Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain.</a> Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).</li><li>Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiolytic+effects+of+nicotine+in+zebrafish.">Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish.</a> Physiology &amp; Behavior. 90 (1), 54-58 (2007).</li><li>Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+and+chronic+alcohol+dose:+population+differences+in+behavior+and+neurochemistry+of+zebrafish.">Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish.</a> Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).</li><li>Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preference+for+ethanol+in+zebrafish+following+a+single+exposure.">Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure.</a> Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).</li><li>Renninger, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+genetics+of+visual+processing,+function+and+behaviour+in+zebrafish.">Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish.</a> Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).</li><li>Crawshaw, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+withdrawal+in+goldfish+exposed+to+ethanol.">Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol.</a> Physiology &amp; Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).</li><li>Hamilton, T. J., Holcombe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tresguerres,+M.CO2-induced+ocean+acidification+increases+anxiety+in+rockfish+via+alteration+of+GABAA+receptor+functioning.">Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning.</a> Proceedings of the Royal Society B. , (2014).</li><li>Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+cortisol+response+of+zebrafish+to+acute+net+handling+stress.">Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress.</a> Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).</li><li>Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+bloom-like+concentrations+of+two+marine+Synechococcus+cyanobacteria+(strains+CC9311+and+CC9902)+differentially+alters+fish+behaviour.">Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour.</a> Conservation Physiology. 2 (1), (2014).</li></ol>

المؤلفون تقر جوشوا غالوب للاستخدام معدات التصوير المستخدمة لله الشكل 1. وأيد هذا العمل من قبل العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث منحة (NSERC) كندا ديسكفري (لTJH).

وقد اعتمدت الدراسات السابقة التي تنطوي على إدارة المخدرات في الزرد ببساطة على المعاوضة الأسماك لنقلها من خزان منزلهم في حل المخدرات 12،16. المعاوضة ليست دائما متسقة وغالبا ما يستغرق وقتا أطول مما كان متوقعا نظرا للاستجابة الهروب من الزرد، والذي تقلب فردي كبير. ط...

الزرد (دانيو rerio) هو نوع مكتملة العظام الصغيرة الناشئة في الهند الذي هو كائن نموذجا مفيدا للالسلوكي (1) والبحوث الطبية 2،3. كما تستخدم عادة في الزرد اختبار المواد الدوائية المختلفة من أجل تميز تأثيرها على السلوك. وقد تم استخدام الجرعات وجداول إدارة المخدرات المختلفة للتحقيق في سلوك الزرد بعد إدارة المركبات مثل المنشطات 4، 5 مزيلات القلق والإيثانول 6-8. وقد حققت لدينا مختبر آثار اختلاف جداول إدارة الإيثانول على القلق الزرد وتنقل في التحقق جيدا الضوء / الظلام فحص 9، 20، كما يشار إلى الفحص scototaxic. وقد تم تطوير طريقة جديدة لإدارة الإيثانول لزيادة الكفاءة لالمتكررة، والإدارة اليومية على مدى فترة طويلة من الوقت (21 يوما) 6 </sتصل&gt;. كانت الأساليب المستخدمة من قبل العملية، ومع ذلك، سعينا إلى تطوير طريقة التي خفضت المعاوضة، مع تكاليف الوقت المرتبط به، وسمحت في وقت واحد، والإدارة توقيتها بالضبط من المخدرات من اهتمام أعداد كبيرة من الأسماك. في البحث باستخدام الايثانول التقليدي، واحرز الزرد ونقل من خزان لآخر تحتوي على خليط مناسب من الايثانول والماء 10-12. في حين أن هذا الأسلوب هو مقبول على نطاق واسع، المعاوضة الزرد قد يزيد من تقلب في الوقت اللازم لإدخال وإزالة الأسماك من محلول الدواء. وبالتالي فإن التعرض المحدد لمجمع الفائدة قد تختلف على مدار تجربة تنطوي على جرعات متكررة. وهناك طريقة تقلل مصادر الخطأ الناجمة عن التقلبات في أوقات النقل وبالتالي مرغوب فيه. مع أسلوبنا ونحن قادرون على نقل كافة الأسماك في وقت واحد، مما أدى إلى متطابقة الوقت الجرعات في كل الأسماك. بعد التعرض الإيثانول (الموصوفة هنا)، الزرد يمكن اختبارها في أي العدد. dR من المقايسات السلوكية، بما فيها تلك التي تقيم القلق. الجرعات مجموعات من الأسماك باستخدام طريقة جديدة لديها الاستخدامات العملية تتجاوز قدرة على تكرار بدقة وتوحيد الجرعات بين المواضيع وعبر مجموعات من الأسماك. ظهور البرمجيات الجديدة التي تسمح لتتبع الأسماك متعددة في وقت واحد قد يرى الباحثون الاستفادة من الأساليب لضمان تكرارها والدقة في تجاربهم. وبالنظر إلى الانتشار الواسع لاستخدام الزرد باعتباره النموذج الحي لعلم الأعصاب السلوكي، وهذه الطريقة تزيد من الكفاءة والتطبيق العملي في الدراسات الدوائية المستقبلية. في النموذج الحالي، كان يعمل جدول الجرعات المتكررة التي تعكس حوالي جداول الشرب الإنسان. تم تعيين الأسماك بشكل عشوائي إلى ثلاث مجموعات: السيطرة، يوميا المعتدلة، أو أسبوعي، بنهم. كان جدول الجرعات 21 يوما في المدة، واختياره لأنه تجاوز كثيرا مرات التعرض في الدراسات السابقة 7. تلقت الأسماك السيطرة الصفر جنة الموجودات والمطلوباتالحول، تلقت السمك يوميا معتدلة 0.2٪ كحول مرة واحدة في اليوم الواحد، وتلقى الأسماك أسبوعيا، حفلة 1.4٪ كحول مرة واحدة في الأسبوع. وقد استخدمت هذه المهمة الخفيفة / مظلمة لتقييم القلق 2 بعد أيام من الانسحاب. هذا اختبار بسيط نسبيا لإدارة والذي يستخدم ساحة مستطيلة فيها الجدران على جانب واحد هي بيضاء وعلى الجانب الآخر هي الداكنة 9. الزرد الكبار يفضلون بقوة الجانب المظلم من الساحة في ظل ظروف سيطرة 6،9،13. يتم تعريف تزايد القلق من الناحية العملية كما مزيدا من الوقت يقضيه في منطقة مظلمة، وانخفضت يمكن افتراض القلق عندما تنفق الأسماك أكثر نسبيا الوقت الذي يقضيه في المنطقة الخفيفة. مع برنامج حركة تتبع، والمتغيرات الإعلامية الأخرى ويمكن أيضا أن يكون كميا، بما في ذلك متوسط ​​السرعة، والجمود، التعرجات، ومنطقة التحولات 14. طريقة الجرعات تطويرها في المختبر لدينا يمكن أن تنطبق على أي البحثية التي تدار المركبات القابلة للذوبان في الماء لzebrafi واحد أو أكثرش. ويجري حاليا اختبار العديد من وكلاء الدوائية الأخرى التي قد تستفيد من هذه المنهجية في الزرد. وتشمل مركبات اخضعت للاختبار عادة النيكوتين، الكلورديازيبوكسيد، بوسبيرون، وسكوبولامين، والتي حلت بطريقة مماثلة لالايثانول. عن طريق خلط كمية مناسبة من المواد الكيميائية في المياه. وبالتالي فإن النطاق العام من هذا الإجراء هو أوسع من ذلك بكثير، وليس مقصورا على الايثانول. وعلاوة على ذلك، وبعد الجرعات مع المخدرات لأيام متعددة، فإن المهمة الخفيفة / السوداء هي واحدة فقط من العديد من الاختبارات السلوكية التي يمكن استخدامها. بعد تناوله المخدرات أو أثناء الانسحاب، المقايسات الشعبية الأخرى التي يمكن استخدامها تشمل الغوص اختبار خزان 15 رواية واختبارات السلوك الاجتماعي مثل shoaling 16. فإن الإجراء التالي الخطوط العريضة وسيلة فعالة لنقل مرارا مجموعات من الأسماك أو الأسماك الفردية في الحلول التي تحتوي على مركب دوائي من الفائدة. بالإضافة إلى ذلك، فإن عملية الاختبار القلق مع ضوء اختبار / الظلامفي مجموعات من الأسماك الذين هم في الانسحاب بعد تعرضهم لجداول طويلة من إدارة الكحول سيتم وصفها.

<table><tbody><tr><td>Three shelf benchtop housing system</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1.5 L Spawning tank w/400 &amp;mu;m baffle</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pure Grain Ethanol</td><td><a href="http://www.luxco.com/brands/vodka-neutral-spirits-neutral-spirits-everclear" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Luxco, INC</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT Motion tracking software</td><td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Noldus Information Technology</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette</td><td><a href="http://eshop.eppendorf.ca/categories/1" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Eppendorf Canada</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Light/Dark Arena</td><td>Custom</td><td></td><td>Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long.</td></tr></tbody></table>

a novel method of drug administration to multiple zebrafish (danio rerio) and the quantification of withdrawal

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely netted and transported between home aquaria and dosing tanks. In order to enhance the ease of compound administration, a novel method for transferring fish between tanks for drug administration was developed. Inserts that are designed for spawning were used to transfer groups of fish into the drug solution, allowing accurate dosing of all fish in the group. This increases the precision and efficiency of dosing, which becomes very important in long schedules of repeated drug administration. We implemented this procedure for use in a study examining the behavior of zebrafish in the light/dark test after administering ethanol with differing 21 day schedules. In fish exposed to daily-moderate amounts of alcohol there was a significant difference in location preference after 2 days of withdrawal when compared to the control group. However, a significant difference in location preference in a group exposed to weekly-binge administration was not observed. 
This protocol can be generalized for use with all types of compounds that are water-soluble and may be used in any situation when the behavior of fish during or after long schedules of drug administration is being examined. The light/dark test is also a valuable method of assessing withdrawal-induced changes in anxiety.

للحفاظ على الدقة والتحكم في الدراسات الدوائية مع الزرد من المهم أن الوقت مدة من إدارة الإيثانول باستمرار وبدقة على النحو المبين أعلاه. لدينا إجراءات يمكن أن تزيد من سهولة وسرعة إجراء الجرعات. أسفرت الإدارة من الايثانول إما على-حفلة أسبوعية أو يومية، الجدول الزمني ال...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal at JoVE.com

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

طريقة مبتكرة من الدواء إلى عدة الزرد (<em&gt; دانيو rerio</em&gt;) والكمي لسحب

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

a-novel-method-drug-administration-to-multiple-zebrafish-danio-rerio

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

12.1K Views.  MacEwan University. A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

Video: A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the standard in the field, but zebrafish have emerged as an alternative model with several advantages, including the ability for high-throughput and low-cost drug screening. Zebrafish also allow for in vivo drug screening with large replicate numbers that were previously only obtainable with in vitro systems. The ability to rapidly perform large scale drug screens may open up the possibility for personalized medicine with rapid translation of results back to clinic. Zebrafish xenograft models could also be used to rapidly screen for actionable mutations based on tumor response to targeted therapies or to identify new anti-cancer compounds from large libraries. The current major limitation in the field has been quantifying and automating the process so that drug screens can be done on a larger scale and be less labor-intensive. We have developed a workflow for xenografting primary patient samples into zebrafish larvae and performing large scale drug screens using a fluorescence microscope equipped imaging unit and automated sampler unit. This method allows for standardization and quantification of engrafted tumor area and response to drug treatment across large numbers of zebrafish larvae. Overall, this method is advantageous over traditional cell culture drug screening as it allows for growth of tumor cells in an in vivo environment throughout drug treatment, and is more practical and cost-effective than mice for large scale in vivo drug screens.

Zebrafish xenograft models allow for high-throughput drug screening and fluorescent imaging of human cancer cells in an in vivo microenvironment. We developed a workflow for large scale, automated drug screening on patient-derived leukemia samples in zebrafish using an automated fluorescence microscope equipped imaging unit.

فحص المخدرات للمريض الأولي المشتقة الورم Xenografts في حمار وحشي

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Cancer Research

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of stress-related diseases and psychiatric disorders, yet further studies into the genetic and neuronal regulation of stress are still required to develop better therapeutics. The zebrafish provides a powerful genetic model to investigate the neural underpinnings of stress, as there exists a large collection of mutant and transgenic lines. Moreover, pharmacology can easily be applied to zebrafish, as most drugs can be added directly to water. We describe here the use of the 'novel tank test' as a method to study innate stress responses in zebrafish, and demonstrate how potential anxiolytic drugs can be validated using the assay. The method can easily be coupled with zebrafish lines harboring genetic mutations, or those in which transgenic approaches for manipulating precise neural circuits are used. The assay can also be used in other fish models. Together, the described protocol should facilitate the adoption of this simple assay to other laboratories.

This manuscript describes a simple method to measure stress behaviorally in adult zebrafish. The approach takes advantage of the innate tendency that zebrafish prefer the bottom half of a tank when in a stressful state. We also describe methods for coupling the assay with pharmacology.

النهج السلوكية لدراسة الإجهاد الفطري في Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

Behavior

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system measures spontaneous behaviors and the response to an aversive stimulus, which is shown to the larvae via a PowerPoint presentation. The recorded images are analyzed with an ImageJ macro, which automatically splits the color channels, subtracts the background, and applies a threshold to identify individual larvae placement in the lanes. We can then import the coordinates into an Excel sheet to quantify swim speed, preference for edge or side of the lane, resting behavior, thigmotaxis, distance between larvae, and avoidance behavior. Subtle changes in behavior are easily detected using our system, making it useful for behavioral analyses after exposure to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Our laboratory developed a novel high-throughput automated imaging system that is useful for the detection of several different behaviors in 7-day-old zebrafish larvae. The system can be used for detecting subtle changes in behavior after the larvae have been exposed to environmental toxicants or pharmaceuticals.

الآلي التحليلات السلوكية عالية الإنتاجية في يرقات اسماك الزرد

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in mammalian research models. However, its application in adult zebrafish for drug delivery, stem cell transplantation, and regenerative and cancer studies has been limited due to the challenges posed by their small body size and intricate blood vessels. To overcome these limitations, alternative injection techniques such as intracardiac and retro-orbital (RO) injection have been explored in the past for stem cell transplantation in adult zebrafish. However, these techniques have their drawbacks, including the need for meticulous injection techniques or increased risk of mortality.
In this study, we have developed a refined and optimized IV injection procedure specifically tailored to adult zebrafish, addressing the challenges associated with their unique anatomy. To demonstrate the effectiveness of this technique, we performed successful IV injections of whole kidney marrow cells from Tg(mpo: EGFP) fish and FITC-dextran dye into adult Casper fish. The subsequent visualization of injected cells and dyes using a fluorescence microscope confirmed their successful delivery and engraftment within the zebrafish. Furthermore, we demonstrated that compared with the intracardiac and RO injections, the IV injection resulted in improved survival rates and engraftment efficiency in treated zebrafish. This approach enables precise delivery and localization of substances and holds great potential for large-scale drug and chemical screening using adult zebrafish. Additionally, the ability to visually track the injected cells and dyes provides invaluable insights into their engraftment, migration, and interactions with host tissues, enabling a more comprehensive evaluation of therapeutic effects and biological processes in zebrafish models.

Here, we present an optimized and effective protocol for the intravenous injection of cells or pharmacological agents into adult zebrafish, resulting in enhanced cell engraftment and increased survival rates of the treated zebrafish.

الحقن الأمثل في الوريد في أسماك الزرد البالغة

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

Oral Intubation of Adult Zebrafish: A Model for Evaluating Intestinal Uptake of Bioactive Compounds

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water environment. Developing effective methods for oral delivery of immunostimulants or vaccines, which activate the immune system against infectious diseases, is highly desirable. In devising prophylactic tools, good experimental models are needed to test their performance. Here, we show a method for oral intubation of adult zebrafish and a set of procedures to dissect and prepare the intestine for cytometry, confocal microscopy and quantitative polymerase chain reaction (qPCR) analysis. With this protocol, we can precisely administer volumes up to 50 &#181;L to fish weighing approximately 1 g simply and quickly, without harming the animals. This method allows us to explore the direct in vivo uptake of fluorescently labelled compounds by the intestinal mucosa and the immunomodulatory capacity of such biologics at the local site after intubation. By combining downstream methods such as flow cytometry, histology, qPCR and confocal microscopy of the intestinal tissue, we can understand how immunostimulants or vaccines are able to cross the intestinal mucosal barriers, pass through the lamina propria, and reach the muscle, exerting an effect on the intestinal mucosal immune system. The model could be used to test candidate oral prophylactics and delivery systems or the local effect of any orally administered bioactive compound.

The protocol describes intubating adult zebrafish with a biologic; then dissecting and preparing the intestine for cytometry, confocal microscopy and qPCR. This method allows administration of bioactive compounds to monitor intestinal uptake and the local immune stimulus evoked. It&#160;is relevant for testing the intestinal dynamics of oral prophylactics.

تنبيب الشفوي من الزرد الكبار: نموذج لتقييم امتصاص الأمعاء للمركبات النشطة بيولوجيا

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water ...

Immunology and Infection

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

Gavaging اسماك الزرد الكبار

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Biology

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has transparent embryos and rapid external development. Zebrafish embryos can, therefore, also be used for the rapid evaluation of toxicity of the drugs that are precious and available in small quantities. In the present article, a method for the efficient screening of the toxicity of chemical compounds using 1-5-day post fertilization embryos is described. The embryos are monitored by stereomicroscope to investigate the phenotypic defects caused by the exposure to different concentrations of compounds. Half-maximal lethal concentrations (LC50) of the compounds are also determined. The present study required 3-6 mg of an inhibitor compound, and the whole experiment takes about 8-10 h to be completed by an individual in a laboratory having basic facilities. The current protocol is suitable for testing any compound to identify intolerable toxic or off-target effects of the compound in the early phase of drug discovery and to detect subtle toxic effects that may be missed in the cell culture or other animal models. The method reduces procedural delays and costs of drug development.

Zebrafish embryos are used for evaluating the toxicity of chemical compounds. They develop externally and are sensitive to chemicals, allowing detection of subtle phenotypic changes. The experiment only requires a small amount of compound, which is directly added to the plate containing embryos, making the testing system efficient and cost-effective.

التقييم السريع لسمية المركبات الكيميائية باستخدام أجنة سمك الحمار الوحشي

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

Medicine

High-throughput Measurement of Gut Transit Time Using Larval Zebrafish

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and pharmacological similarities to that of the mammals. GI intolerance during clinical testing of drug candidates is common and may pose a serious threat to human health. Testing for GI toxicity in preclinical mammalian models can be expensive in terms of time, test compound, and labor. The high-throughput method presented here may be used to predict GI safety issues. Compared to mammalian models, this method allows for more expedient assessment of test compound effects on GI transit while using low quantities of compound. In this method, larval zebrafish (7 days post fertilization) are fed food containing a fluorescent label. After feeding, each larval fish is placed into a well of a 96-conical-bottom-well plate and dosed with test compound (dissolved in water) or the vehicle. As gut transit occurs, fecal matter accumulates on the bottom of the wells, and the rate at which this happens is monitored by measuring fluorescence from the bottom of the well repeatedly over time using a plate spectrophotometer. The fluorescence from larvae in a given treatment group are averaged and these values are graphed along with standard error, for each measurement time, yielding a curve representing average transit of food over time. Effects on gut transit time are identified by comparing the area under the curve for each treatment group to that of the vehicle-treated group. This method detected changes in zebrafish GI transit time induced by drugs with known clinical GI effects; it can be employed to interrogate dozens of treatments for GI effects per day. As such, safer compounds can be quickly prioritized for mammalian testing, which expedites discovery and proffers 3Rs advancement.

The goal of this protocol is to measure the transit time of fluorescently labeled food through the gut of larval zebrafish in a high throughput fashion.

قياس وقت عبور الأمعاء استخدام اليرقات الزرد الفائق

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and ...

الحقن الأمثل داخل الصفاق للتسليم المركب في الزرد البالغ

An Intraperitoneal Injection Technique in Adult Zebrafish that Minimizes Body Damage and Associated Mortality

The adult zebrafish (Danio rerio), which is genetically accessible, is being employed as a valuable vertebrate model to study human disorders such as cardiomyopathy. Intraperitoneal (IP) injection is an important method that delivers compounds to the body for either testing therapeutic effects or generating disease models such as doxorubicin-induced cardiomyopathy (DIC). Currently, there are two methods of IP injection. Both&#160;methods have limitations when handling toxic compounds such as doxorubicin, which result in side effects manifesting as severe damage to the body shape and fish death. While these shortcomings could be overcome by extensive investigator training, a new IP injection method that has minimal side effects is desirable. Here, a unique IP injection method that is able to handle toxic compounds is reported. Consistently reduced cardiac function can result without incurring significant fish death. The technique can be easily mastered by researchers who have minimal experience with adult zebrafish.

تسليط الضوء على المؤلف: طريقة الحقن داخل الصفاق الجديدة لنماذج السمية القلبية لسمك الزرد

A new intraperitoneal (IP) injection method in adult zebrafish is described. When handling toxic compounds such as doxorubicin, this procedure is more effective than the two previously reported IP methods. The technique is designed to be easily adopted by researchers with limited experience in the zebrafish model.

تقنية الحقن داخل الصفاق في أسماك الزرد البالغة التي تقلل من تلف الجسم والوفيات المرتبطة به

The adult zebrafish (Danio rerio), which is genetically accessible, is being employed as a valuable vertebrate model to study human disorders such as ...

طريقة مبتكرة من الدواء إلى عدة الزرد (

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

فحص المخدرات للمريض الأولي المشتقة الورم Xenografts في حمار وحشي

النهج السلوكية لدراسة الإجهاد الفطري في Zebrafish

الآلي التحليلات السلوكية عالية الإنتاجية في يرقات اسماك الزرد

الحقن الأمثل في الوريد في أسماك الزرد البالغة

تنبيب الشفوي من الزرد الكبار: نموذج لتقييم امتصاص الأمعاء للمركبات النشطة بيولوجيا

Gavaging اسماك الزرد الكبار

التقييم السريع لسمية المركبات الكيميائية باستخدام أجنة سمك الحمار الوحشي

قياس وقت عبور الأمعاء استخدام اليرقات الزرد الفائق

تقنية الحقن داخل الصفاق في أسماك الزرد البالغة التي تقلل من تلف الجسم والوفيات المرتبطة به

تقنية الحقن داخل الصفاق في أسماك الزرد البالغة التي تقلل من تلف الجسم والوفيات المرتبطة به