The authors would like to thank the MSKCC Tissue Procurement Service Team (TPS), specifically, Maria Corazon Mariano, Priscilla McNeil, Anas Idelbi, Daniel Navarrete and Katrina Allen, in all of their efforts in the successful pursuit of this project and funding from the following sources: 5 R21 CA158609-02 and the Conquer Cancer Foundation and the Breast Cancer Research Foundation. In addition, the authors would like to thank Eric Cottington PhD, Vice President of the Office of Research and Project Administration, the Office of Technology Development, Research Outreach and Compliance and RTM Information Systems Support, in the support of the submission of this manuscript.

ملاحظة: وأذن المشتريات الأنسجة للمريض من خلال مجلس مراجعة المؤسسية (IRB) وافق عليها Biospecimen والبروتوكولات السريرية (أرقام بروتوكول 09-121 11-041 و، على التوالي) في مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان. 1. الأنسجة المشتريات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شراء المريض الورم الأساسي / ثانوي لورم خبيث ملاحظة: حتى الآن، وقد تم تنفيذ هذا البروتوكول على البنكرياس والمعدة وورم الثدي أنواع ازالتها جراحيا، وكذلك، الانبثاث سرطان الغدد الليمفاوية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه الفريق الجراحي لتقديم عينة عن طريق البريد أو نظام أنبوب هوائي لقسم علم الأمراض في مغلقة بإحكام ومعقمة كيس من البلاستيك عينة مانعة للتسرب داخل حاوية معقمة واقية من تسرب. توجيه الفريق الجراحي لنقل العينة في ولاية جديدة مع عدم وجود الفورمالين أو مثبت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه مساعد الطبيب الشرعي أو الطبيب الشرعي لجني العينة الطازجة باستخدام تقنية معقمة، والتي المؤتمر الوطني العراقيludes استخدام القفازات والأدوات المعقمة تحت غطاء تدفق الصفحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل وقت الحصاد للعينة المشتراة، التي يتم الاحتفاظ بدقة أقل من 30 دقيقة من الانتهاء من العملية الجراحية. مع الأخذ بعين الاعتبار تأثيرات نقص التروية الباردة، لا تأخذ عينات من العينات مقطوعة مع الوقت الدماغية البارد&gt; 30 دقيقة 18. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه موظفي وزارة علم الأمراض لإزالة عينة الورم الأولية حوالي 0.5 سم 3-1،0 سم 3 في غطاء تدفق الصفحي للحفاظ على بيئة معقمة. عندما يكون ذلك ممكنا، واختيار ورم الأنسجة من محيط الآفة مؤشر لتجنب نخر المركزي (موت الخلايا) صريح المحتملين. ملاحظة: قد تكون الأنسجة الميتة التعرف بشكل فاضح من قبل أي من المعايير التالية: فقدان اللون أو شحوب الأنسجة. فقدان القوة في النسيج الميت التي هي لينة وقابلة للتفتيت. ترسيم واضح بين الأنسجة الميتة وقابلة للحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه pathologiشارع أو مساعد الطبيب الشرعي لتوفير الأنسجة الطرفية التي هي في الزائد (تجاهل الجراحية) بعد أخذ العينات مباشرة من الورم لتقييم التشخيص. وضع العينة في 15 مل العقيمة أنبوب الطرد المركزي المخروطية التي تحتوي على حوالي 5 مل من الحد الأدنى الضروري وسائل الإعلام (MEM) التي تحتوي على 1٪ المضادات الحيوية (البنسلين والستربتومايسين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان متوفرا (على سبيل المثال، العقدة الليمفاوية الإبطية الذيل من عينة استئصال الثدي) وشراء الإيجابية بشكل صارخ عينة العقدة الليمفاوية المرتبطة من نفس الحجم (0.5 سم 3-1،0 سم 3) ومقارنة لاستجابة المخدرات من الورم الرئيسي. مثل عينة الورم الرئيسي، ضع المرتبطة العينة العقدة الليمفاوية في 15 مل العقيمة أنبوب الطرد المركزي المخروطية التي تحتوي على حوالي 5 مل من الحد الأدنى الضروري وسائل الإعلام (MEM) التي تحتوي على 1٪ المضادات الحيوية (البنسلين والستربتومايسين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان حجم العينة تصاريح الجراحية (على سبيل المثال، عينة استئصال الثدي)، وإزالة (بعيدة عن الورم الرئيسي) عينة من الأنسجة الطبيعية (أي،طبيعية كثيفة / حمة الثدي الليفي) ووضعت في 15 مل العقيمة أنبوب الطرد المركزي مخروطي يحتوي على حوالي 5 مل من وسائل الإعلام الأساسية الدنيا (MEM) التي تحتوي على 1٪ المضادات الحيوية لأغراض النقل فقط. وبعد نقلها إلى مرافق المختبرات، ونقل «طبيعية» عينة إلى cryovial، &#39;المفاجئة&#39; تجميد وتخزينها في الفريزر -80 درجة مئوية لالتحليلات الجزيئية المستقبلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جميع العينات على الجليد الرطب ونقل على الفور إلى مساحة المختبر لخارج الحي باجتزاء الأنسجة الطازجة. لا القسم العينة العادية ولكن بدلا تخزين في الفريزر -80 درجة مئوية لالتحليلات الجزيئية المستقبلية. نقل جزء من الورم الرئيسي والانبثاث المرتبطة إلى cryovial، &#39;المفاجئة&#39; تجميد وتخزينها في الفريزر -80 درجة مئوية لالتحليلات الجزيئية المستقبلية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شراء أنسجة من الدراسات السريرية (مثل خزعات إبرة الأساسية اختياري (المصرف الوطني الكرواتي)) ملاحظة: نحصل على أنسجة الورم من المرضىالمسجلين على البروتوكولات السريرية الذين يعطون موافقتهم على الخضوع لCNB من الانبثاث ورم الوصول قبل بداية العلاج. CNBs، حتى الآن، وقد أجريت على المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي وسرطان الغدد الليمفاوية منطقة هامشية، عباءة خلية سرطان الغدد الليمفاوية، المستقتمات النقيلي، عنق الرحم (الخلايا الحرشفية) وسرطان المبيض. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لدينا الموظفين السريري من التداخلي أو الدائرة المختصة إجراء خزعة إبرة الأساسية قبل المعالجة ووضع العينة في 15 مل العقيمة المخروطية أنبوب الطرد المركزي التي تحتوي على حوالي 5 مل من الحد الأدنى الضروري وسائل الإعلام (MEM) التي تحتوي على 1٪ المضادات الحيوية (البنسلين والستربتومايسين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع عينة الخزعة على الجليد الرطب ونقل على الفور إلى مساحة المختبر لخارج الحي باجتزاء الأنسجة الطازجة. </li></ol></li></ol> 2. إعداد مواد لإعدادات باجتزاء وVibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مواد لباجتزاء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل حل الاغاروز 4٪ وذلك بإضافة 4 ز الآغاارتفع إلى 100 مل من برنامج تلفزيوني. الأوتوكلاف (إعدادات الدورة: السائل، 121 ° C، 30 دقيقة، 15 جنيه لكل بوصة مربعة) الحل قبل الاستخدام الأول. للاستخدامات اللاحقة، ضع الاغاروز 4٪ في الميكروويف لتسييل (حرارة عالية لمدة 30 فترات ثانية) قبل كل استخدام وتبريد مناسب ل~ 25 ° C (أي لمسة دافئة) تضع في اعتبارها أن الاغاروز يتصلب في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الاغاروز 4٪ والأنسجة تضمين وسائل الاعلام غير الدائمين. عندما يبرد الاغاروز 4٪ بما فيه الكفاية، وهو لا يزال في حالة سائلة، مع ملقط معقم تضع عينة الأنسجة في قالب التضمين وتصب في الاغاروز 4٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع عينة الأنسجة وثيقة (~ 2 مم بعد) ولكن ليس مباشرة على الحائط سطح القطع من العفن التضمين. ستبدأ الاغاروز 4٪ إلى ترسيخ بسرعة، لذا ضع على نحو ملائم عينة الأنسجة بسرعة. خلال باجتزاء، والحفاظ على الاغاروز 4٪ في 55 ° C حمام الماء للحفاظ في الحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الى 24 لوحة جيدا لتحليل القسم، إضافة 1 مل سو وسائل الإعلام كاملة (أي MEM + بقري جنيني 10٪ مصل + 1٪ المضادات الحيوية) إلى كل بئر. الحفاظ على 24 لوحة جيدا في RT (~ 25 درجة مئوية) طوال مدة باجتزاء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد إعدادات Vibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مشراح تهتز، ضبط السرعة التي نصل نهج العينة [0 (0.00 ملم / ثانية) إلى 10 (2.5 ملم / ثانية)] وتواتر شفرة [0 (0 هرتز) إلى 10 (100 هرتز) ]. ضبط الإعدادات وفقا لنسيج من أنسجة (أي الكثافة / الحزم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لورم الثدي الأولي من سرطان الأقنية الغازية، وضبط الإعدادات إلى 6 و 3 والسرعة والتردد على التوالي. لأقل كثافة / نسيج الورم ثابتة، وانخفاض سرعة وزيادة تواتر وفقا لذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين سمك الباب في حدود الصك (1-999 ميكرون). لهذه التحليلات، تعيين القسم سمك في 200 ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل العينة جزءا لا يتجزأ من الاغاروز باستخدام طبقة رقيقة من مادة لاصقة السائل على ثا القرص عينةور المغمورة في خزان وسائل الإعلام التي المغطى في الجليد الرطب. </li></ol></li></ol> 3. الأنسجة باجتزاء، معالجة وتحليل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المقاطع شرائح الدقة فور باجتزاء باستخدام ملقط معقم ووضعه في لوحة متعددة جيدا مع 1 مل من وسائل الإعلام كاملة. عندما يتم الحصول أقسام كافية للاستجابة والتحليلات المترابطة، ووضع لوحة متعددة جيدا لاستجابة العلاج في حاضنة زراعة الأنسجة وضعت في ظروف زراعة الأنسجة القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ أقسام تحكم متعددة غلاف أقسام المعالجة في محاولة لتأكيد استجابة تعتمد على الجرعة بدلا من القطع الأثرية مثقف. أداء الأنسجة باجتزاء بسرعة (~ 30 - 40 دقيقة)، وأيضا داخل أي آثار ضارة من الوقت الدماغية البارد (~ 2-4 ساعة) 18. أداء أقسام علاج إلا بعد فترة التأقلم 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد فترة التأقلم 1 ساعة، إضافة زيادة جرعات (ذات الصلة علاجيا. <em&gt; على سبيل المثال، 0 - 10 ميكرومتر تركيزات) من المخدرات إلى أقسام وبيت في ظل ظروف زراعة الأنسجة القياسية للفترة العلاج. لهذه الدراسة، استخدم 24 و / أو 48 ساعة فترات التقييم. ومع ذلك، فإن التحكم (السيارة فقط) أقسام الأنسجة تبقى قابلة للحياة، كما تم اختبارها في هذه الدراسة، لفترات تصل إلى وبما في ذلك فترات تقييم 96 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد العلاج، وإزالة جميع أقسام تحت ظروف معقمة والفورمالين الإصلاح من خلال وضع قسم الأنسجة في أنبوب يحتوي على إما 10٪ مخزنة الفورمالين ومكان في RT O / N أو في أنبوب يحتوي على 4٪ بارافورمالدهيد (تمييع بارافورمالدهيد 16٪ من قارورة مع برنامج تلفزيوني لتركيز النهائي من 4٪) ووضعت في RT لمدة 2 ساعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح أقسام الأنسجة أكبر (على سبيل المثال، ~ 6 مم × 4 ملم) 200 ميكرون سميكة في 10٪ من الفورمالين مخزنة O / N في RT. إصلاح أقسام أصغر (على سبيل المثال، 1 مم × 1 مم) 200 ميكرون سميكة في بارافورمالدهيد 4٪ لمدة 2 ساعة على RT. ملاحظة: لاختراق كفاءة تثبيتي حجم وixative يجب 20X حجم الأنسجة. وبالنظر إلى أن هذه النتائج البروتوكول في أحجام صغيرة للغاية الأنسجة (6 مم، مثلا الأنسجة 3 = 6 حجم ميكرولتر)، لضمان الاستخدام السليم تثبيت 1 مل من تثبيتي لجميع الأحجام الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التثبيت لديك عينات الأنسجة البارافين جزءا لا يتجزأ من قبل موظفي قسم أمراض. القسم عينة كتل البارافين على الشرائح المحملة على أن يكون الهيماتوكسيلين ويوزين الملون وتقييمها immunohistochemically (مثل موت الخلايا المبرمج). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture.">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li><li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+for+Determining+Malignancy+in+Tissue-Culture+Cell+Lines+in+the+Albino+Rat.">Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat.</a> New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).</li><li>Paul, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cancer+Cell+in+Vitro:+A+Review.">The Cancer Cell in Vitro: A Review.</a> Cancer Research. 22, 431-440 (1962).</li><li>Dean, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+response+to+CDK4/6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors.">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li><li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer.">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li><li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance.">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li><li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia.">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li><li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples.">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332 (2014).</li><li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells.">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li><li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90.">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li><li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+sialyl-Lewis(x/a)+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer.">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li><li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+paradox+of+E-cadherin:+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism.">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li><li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors.">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li><li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development.">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li><li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer:+current+status+and+future+directions.">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li><li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71.">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, 11076-11 (2013).</li><li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor,+progesterone+receptor,+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma.">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li></ol>

No conflicts of interest disclosed.

تواجه الأحياء السرطان تحديات كبيرة عند محاولة وضع استراتيجيات علاجية فعالة. يمكن اختبار المخدرات في التنمية على خطوط الخلايا السرطانية أنشئت لا تعكس بدقة ردا المجراة في التجارب المجراة على نماذج PDX هي عمالة كثيفة ومكلفة للغاية. نظرا لأعلاه، تطبيق فيفو ا?...

وقد ثبت تطوير علاجات فعالة لمرض السرطان تكون صعبة للغاية. خطوط الخلايا السرطانية والأورام إإكسبلنتس - وكذلك xenografts استخدمت في أبحاث السرطان لأكثر من نصف قرن 1،2،3. حتى الآن، فإن التحليل الجزيئي للحساسية المخدرات والمقاومة في كل من أنشأ خطوط الخلايا السرطانية وxenografts المستمدة من المريض (PDX) أمر لا غنى عنه. ومع ذلك، واختبار المركبات في خطوط الخلايا السرطانية أنشئت ليست في كثير من الأحيان التنبؤي من فعالية في الجسم الحي، وما يقابلها من الدراسات المجراة على الحيوانات، وخاصة في نماذج PDX، مكلفة للغاية وتستغرق وقتا طويلا. القيود المفروضة على هذه الأنظمة النموذجية، وهي عدم القدرة على الإبلاغ عن تأثير المكروية الأم في تطور الورم والاستجابة للاستراتيجيات العلاجية، أدى مجال البحوث لتطوير أساليب إضافية لتكمل هذه التحليلات. من الأخيرة، ويولى الاهتمام المتزايد نحو فيفو السابقين تحليل توم المريضأو إإكسبلنتس 4، 5 نتيجة لفهم أكبر أن سرطان الاستجابة العلاجية ليست حكرا على التركيبة الجزيئية الكامنة من الخلايا السرطانية بل وأثرت كثيرا المكروية الخلايا السرطانية 6 و 7 وهي الميزة التي لا يمكن تلخيصها بواسطة طرق زراعة التقليدية و / أو PDX. خارج الحي التحليل في سياق أعلاه (أي.، تأثير الخلايا السرطانية المجاورة المحيطة المكروية) يعني تقييم أقسام الورم / ورم خبيث الأولية قابلة للحياة، بدلا من فيفو السابقين تحليل العزلات الخلوية 8، 9. نحن التقرير هنا على تقنية فيفو السابقين (أي.، المقاطع شرائح الدقة جديدة الأنسجة) كل من الأورام الأولية المرضى والانبثاث المرتبطة (أي الغدد الليمفاوية) التي يبلغ بإخلاص على استجابة (IC50)، بعيدا عن الهدف الآثار ويسمح للالجزيئية تحليل آليات المقاومة وردود الفعل. بالإضافة إلى ذلك، تحليل مترابط من therapeحساسية utic / المقاومة مقابل العلامات البيولوجية والجينات الشخصية التعبير لا يمكن أن يؤديها في محاولة لتحديد المرضى أكثر عرضة للرد على المخدرات التجريبية من الفائدة (أي، استجابة عالية المخدرات مباريات مع المريض معين الشخصية البيولوجي). تطبيق هذه التقنية خارج الحي والتقييم بطريقة متعددة المعلمة هو التحرك نحو اختيار المريض والتحسن العام من النتائج السريرية. يمكن أن يصبح خارج الحي العلاج تحليل استجابة أداة موحدة في تطوير قبل السريرية والسريرية لعلاجات السرطان وتصور كخطوة نحو نهج الطب الشخصي في استراتيجيات التنمية العلاجية.

<table><tbody><tr><td>Vibratome Leica VT1000s</td><td>Leica</td><td>14047235613</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500500</td><td>Prepare 4% and 6% before use</td></tr><tr><td>Injector blade</td><td>Ted Pella</td><td>121-4</td><td></td></tr><tr><td>MEM with Penicillin&amp;nbsp; + Streptomycin</td><td>Media Core Facilities (MSKCC)</td><td></td><td>The media is prepared at Memorial Sloan Kettering Cancer Center&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Scalpel no. 10</td><td>Thermo Scientific</td><td>31-200-32</td><td></td></tr><tr><td>Disposable forceps</td><td>Cole-Parmer</td><td>84011182</td><td></td></tr><tr><td>Embedding mold</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>70181</td><td></td></tr><tr><td>FBS (heat inactivated)</td><td>Gemini</td><td>100106</td><td></td></tr><tr><td>24 well plates</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>Formalin (10%)</td><td>Sigma Diagnostics</td><td>SDHT501128&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>16% Formaldehyde solution</td><td>Thermo Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>Embedding microsettes</td><td>Simport</td><td>M503-2</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (70%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A405P-4</td><td></td></tr><tr><td>Waterbath</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-2SQ</td><td></td></tr><tr><td>Microwave</td><td>General Electric</td><td>ModelJES2051DNBB</td><td></td></tr><tr><td>Adhesive (Ethyl Cyanoacrylate)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1505-5G</td><td></td></tr><tr><td>10 mm dishes</td><td>BD Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>15 ml tubes</td><td>BD Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr></tbody></table>

ex vivo treatment response of primary tumors and/or associated metastases for preclinical and clinical development of therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both direct and rapid analysis of therapeutic sensitivity and resistance. However, recent evidence suggests that therapeutic response is not exclusive to the inherent molecular composition of cancer cells but rather is greatly influenced by the tumor cell microenvironment, a feature that cannot be recapitulated by traditional culturing methods. Even implementation of tumor xenografts, though providing a wealth of information on drug delivery/efficacy, cannot capture the tumor cell/microenvironment crosstalk (i.e., soluble factors) that occurs within human tumors and greatly impacts tumor response. To this extent, we have developed an ex vivo (fresh tissue sectioning) technique which allows for the direct assessment of treatment response for preclinical and clinical therapeutics development. This technique maintains tissue integrity and cellular architecture within the tumor cell/microenvironment context throughout treatment response providing a more precise means to assess drug efficacy.

لهذه الدراسة، تم استخدام هذه التقنية المجراة سابقا في تحليل مترابط من حساسية العلاجية / مقاومة بروتين الصدمة الحرارية 90 المانع (Hsp90i). في التقييم قبل السريرية لهذا Hsp90i، الورم الرئيسي سرطان الثدي، وهو ER + الغازية سرطان الأقنية (IDC)، وما يرتبط بها من الانبثاث العقدة ?...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics at JoVE.com

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

كانت خطوط الخلايا السرطانية وإنشاء xenografts الدعامة الأساسية لأبحاث السرطان على مدى العقود العديدة الماضية. ومع ذلك، تشير الأدلة مؤخرا أن الاستجابة العلاجية وتتأثر الى حد كبير المكروية الخلايا السرطانية. لذلك، قمنا بتطوير تحليل العينات خارج الحي الورم الرئيسي لأغراض تطوير الأدوية.

الاستجابة للعلاج خارج الحي من الأورام الابتدائية و / أو أسوشيتد الانبثاث لما قبل السريرية والسريرية التنمية من التداوي

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

ex-vivo-treatment-response-primary-tumors-andor-associated-metastases

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

14.7K Views.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center.  كانت خطوط الخلايا السرطانية وإنشاء xenografts الدعامة الأساسية لأبحاث السرطان على مدى العقود العديدة الماضية. ومع ذلك، تشير الأدلة مؤخرا أن الاستجابة العلاجية وتتأثر الى حد كبير المكروية الخلايا السرطانية. لذلك، قمنا بتطوير تحليل العينات خ...

Video: Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional co-culture systems are frequently used to explicate tumor-stroma interactions, including their role in drug responses. However, many of the interactions that occur in vivo in the intact microenvironment cannot be completely replicated in these in vitro settings. Thus, direct visualization of these processes in real-time has become an important tool in understanding tumor responses to therapies and identifying the interactions between cancer cells and the stroma that can influence these responses. Here we provide a method for using spinning disk confocal microscopy of live, anesthetized mice to directly observe drug distribution, cancer cell responses and changes in tumor-stroma interactions following administration of systemic therapy in breast cancer models. We describe procedures for labeling different tumor components, treatment of animals for observing therapeutic responses, and the surgical procedure for exposing tumor tissues for imaging up to 40 hours. The results obtained from this protocol are time-lapse movies, in which such processes as drug infiltration, cancer cell death and stromal cell migration can be evaluated using image analysis software.

We describe a method for imaging response to anti-cancer treatment in vivo and at single cell resolution.

يعيش التصوير من الاستجابة للأدوية الأورام المكروية في في نماذج الماوس من سرطان الثدي

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The orthotopic murine model can be performed on large cohorts of immunocompetent mice simultaneously, is relatively inexpensive and preserves the cognate tissue microenvironment. The quantification of T cell infiltration and cytotoxic activity within orthotopic tumors provides a useful indicator of an antitumoral response.
This protocol describes the methodology for surgical generation of orthotopic pancreatic tumors by injection of a low number of syngeneic tumor cells resuspended in 5 &#181;L basement membrane directly into the pancreas. Mice bearing orthotopic tumors take approximately 30 days to reach endpoint, at which point tumors can be harvested and processed for characterization of tumor-infiltrating T cell activity. Rapid enzymatic digestion using collagenase and DNase allows a single-cell suspension to be extracted from tumors. The viability and cell surface markers of immune cells extracted from the tumor are preserved; therefore, it is appropriate for multiple downstream applications, including flow-assisted cell sorting of immune cells for culture or RNA extraction, flow cytometry analysis of immune cell populations. Here, we describe the ex vivo stimulation of T cell populations for intracellular cytokine quantification (IFN&#947; and TNF&#945;) and degranulation activity (CD107a) as a measure of overall cytotoxicity. Whole-tumor digests were stimulated with phorbol myristate acetate and ionomycin for 5 h, in the presence of anti-CD107a antibody in order to upregulate cytokine production and degranulation. The addition of brefeldin A and monensin for the final 4 h was performed to block extracellular transport and maximize cytokine detection. Extra- and intra-cellular staining of cells was then performed for flow cytometry analysis, where the proportion of IFN&#947;+, TNF&#945;+ and CD107a+ CD4+ and CD8+ T cells was quantified.
This method provides a starting base to perform comprehensive analysis of the tumor microenvironment.

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

This protocol describes the surgical generation of orthotopic pancreatic tumors and the rapid digestion of freshly isolated murine pancreatic tumors. Following digestion, viable immune cell populations can be used for further downstream analysis, including ex vivo stimulation of T cells for intracellular cytokine detection by flow cytometry.

توليد أورام البنكرياس التقويمية وتوصيف الجسم السابق للخلايا التي تتسلل إلى الخلايا T

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...

Cancer Research

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic target analyses and drug response monitoring using patient derived xenografts (PDX). This strategy was validated using ovarian tumors as an example. The mate-pair next generation sequencing (MPseq) protocol was used to identify structural alterations and followed by analysis of potentially targetable alterations. Human tumors grown in immunocompromised mice were treated with drugs selected based on the genomic analyses. Results demonstrated a good correlation between the predicted and the observed responses in the PDX model. The presented approach can be used to test the efficacy of combination treatments and aid personalized treatment for patients with recurrent cancer, specifically in cases when standard therapy fails and there is a need to use drugs off label.

Here we present a protocol to test the efficacy of targeted therapies selected based on the genomic makeup of a tumor. The protocol describes identification and validation of structural DNA rearrangements, engraftment of patients&#8217; tumors into mice and testing responses to corresponding drugs.

اختبار العلاجات المستهدفة في السرطان باستخدام تحليل تعديل الحمض النووي الهيكلي وXenografts المستمدة من المريض

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification and testing of novel therapeutic targets that will facilitate the development of better treatments for metastatic disease requires preclinical in vivo models. Demonstrated here is a syngeneic mouse model for assaying breast cancer metastatic colonization and subsequent growth. Metastatic cancer cells are stably transduced with viral vectors encoding firefly luciferase and ZsGreen proteins. Candidate genes are then stably manipulated in luciferase/ZsGreen-expressing cancer cells and then the cells are injected into mice via the lateral tail vein to assay metastatic colonization and growth. An in vivo imaging device is then used to measure the bioluminescence or fluorescence of the tumor cells in the living animals to quantify changes in metastatic burden over time. The expression of the fluorescent protein allows the number and size of metastases in the lungs to be quantified at the end of the experiment without the need for sectioning or histological staining. This approach offers a relatively quick and easy way to test the role of candidate genes in metastatic colonization and growth, and provides a great deal more information than traditional tail vein metastasis assays. Using this approach, we show that simultaneous knockdown of Yes associated protein (YAP) and transcriptional co-activator with a PDZ-binding motif (TAZ) in breast cancer cells leads to reduced metastatic burden in the lungs and that this reduced burden is the result of significantly impaired metastatic colonization and reduced growth of metastases.

The described approach combines experimental tail vein metastasis assays with in vivo live animal imaging to allow real-time monitoring of breast cancer metastasis formation and growth in addition to the quantification of metastasis number and size in the lungs.

الجمع بين استخدام الذيل الوريد الانبثاث الاختبارات والوقت الحقيقي في التصوير فيفو لقياس سرطان الثدي الاستعمار المنتشر والعبء في الرئتين

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Measuring Real-time Drug Response in Organotypic Tumor Tissue Slices

Tumor tissues are composed of cancerous cells, infiltrated immune cells, endothelial cells, fibroblasts, and extracellular matrix. This complex milieu constitutes the tumor microenvironment (TME) and can modulate response to therapy in vivo or drug response ex vivo. Conventional cancer drug discovery screens are carried out on cells cultured in a monolayer, a system critically lacking the influence of TME. Thus, experimental systems that integrate sensitive and high-throughput assays with physiological TME will strengthen the preclinical drug discovery process. Here, we introduce ex vivo tumor tissue slice culture as a platform for medium-high-throughput drug screening. Organotypic tissue slice culture constitutes precisely-cut, thin tumor sections that are maintained with the support of a porous membrane in a liquid-air interface. In this protocol, we describe the preparation and maintenance of tissue slices prepared from mouse tumors and tumors from patient-derived xenograft (PDX) models. To assess changes in tissue viability in response to drug treatment, we leveraged a biocompatible luminescence-based viability assay that enables real-time, rapid, and sensitive measurement of viable cells in the tissue. Using this platform, we evaluated dose-dependent responses of tissue slices to the multi-kinase inhibitor, staurosporine, and cytotoxic agent, doxorubicin. Further, we demonstrate the application of tissue slices for ex vivo pharmacology by screening 17 clinical and preclinical drugs on tissue slices prepared from a single PDX tumor. Our physiologically-relevant, highly-sensitive, and robust ex vivo screening platform will greatly strengthen preclinical oncology drug discovery and treatment decision making.&#160;

We introduce a protocol for measuring real-time drug response in organotypic tumor tissue slices. The experimental strategy outlined here provides a platform to carry out medium-high throughput drug screens on tissue slices derived from clinical or mouse tumors in ex vivo conditions.

قياس الاستجابة للمخدرات في الوقت الحقيقي في شرائح أنسجة الورم Organotypic

Tumor tissues are composed of cancerous cells, infiltrated immune cells, endothelial cells, fibroblasts, and extracellular matrix. This complex milieu ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

زرع العظام لأورام الثدي كنماذج ما قبل السريرية لسرطان الثدي

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable preclinical models that can accurately predict patient responses. One of the disadvantages of existing preclinical models is the inability to contextually preserve the human tumor microenvironment (TME) and accurately represent intratumoral heterogeneity, thus limiting the clinical translation of data. By contrast, by representing the culture of live fragments of human tumors, the patient-derived explant (PDE) platform allows drug responses to be examined in a three-dimensional (3D) context that mirrors the pathological and architectural features of the original tumors as closely as possible. Previous reports with PDEs have documented the ability of the platform to distinguish chemosensitive from chemoresistant tumors, and it has been shown that this segregation is predictive of patient responses to the same chemotherapies. Simultaneously, PDEs allow the opportunity to interrogate molecular, genetic, and histological features of tumors that predict drug responses, thereby identifying biomarkers for patient stratification as well as novel interventional approaches to sensitize resistant tumors. This paper reports PDE methodology in detail, from collection of patient samples through to endpoint analysis. It provides a detailed description of explant derivation and culture methods, highlighting bespoke conditions for particular tumors, where appropriate. For endpoint analysis, there is a focus on multiplexed immunofluorescence and multispectral imaging for the spatial profiling of key biomarkers within both tumoral and stromal regions. By combining these methods, it is possible to generate quantitative and qualitative drug response data that can be related to various clinicopathological parameters and thus potentially be used for biomarker identification.

This paper describes methods for the generation, drug treatment, and analysis of patient-derived explants for assessing tumor drug responses in a live, patient-relevant, preclinical model system.

استئصال الورم المشتق من المريض كمنصة "حية" قبل السريرية للتنبؤ بمقاومة الأدوية لدى المرضى

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

Profiling Sensitivity to Targeted Therapies in EGFR-Mutant NSCLC Patient-Derived Organoids

Novel 3D cancer organoid cultures derived from clinical patient specimens represent an important model system to evaluate intratumor heterogeneity and treatment response to targeted inhibitors in cancer. Pioneering work in gastrointestinal and pancreatic cancers has highlighted the promise of patient-derived organoids (PDOs) as a patient-proximate culture system, with an increasing number of models emerging. Similarly, work in other cancer types has focused on establishing organoid models and optimizing culture protocols. Notably, 3D cancer organoid models maintain the genetic complexity of original tumor specimens and thus translate tumor-derived sequencing data into treatment with genetically informed targeted therapies in an experimental setting. Further, PDOs might foster the evaluation of rational combination treatments to overcome resistance-associated adaptation of tumors in the future. The latter focuses on intense research efforts in non-small-cell lung cancer (NSCLC), as resistance development ultimately limits the treatment success of targeted inhibitors. An early assessment of therapeutically targetable mechanisms using NSCLC PDOs could help inform rational combination treatments. This manuscript describes a standardized protocol for the cell culture plate-based assessment of drug sensitivities to targeted inhibitors in NSCLC-derived 3D PDOs, with potential adaptability to combinational treatments and other treatment modalities.

This protocol describes a standardized evaluation of drug sensitivities to targeted signaling inhibitors in NSCLC patient-derived organoid models.

حساسية التنميط للعلاجات المستهدفة في المواد العضوية المشتقة من المريض NSCLC المتحورة EGFR

Novel 3D cancer organoid cultures derived from clinical patient specimens represent an important model system to evaluate intratumor heterogeneity and ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex vivo drug screenings. However, current adenosine triphosphate (ATP)-based drug screening assays do not capture the complexity of a drug response (cytostatic or cytotoxic) and intratumor heterogeneity that has been shown to be retained in PDTOs due to a bulk readout. Live-cell imaging is a powerful tool to overcome this issue and visualize drug responses more in-depth. However, image analysis software is often not adapted to the three-dimensionality of PDTOs, requires fluorescent viability dyes, or is not compatible with a 384-well microplate format. This paper describes a semi-automated methodology to seed, treat, and image PDTOs in a high-throughput, 384-well format using conventional, widefield, live-cell imaging systems. In addition, we developed viability marker-free image analysis software to quantify growth rate-based drug response metrics that improve reproducibility and correct growth rate variations between different PDTO lines. Using the normalized drug response metric, which scores drug response based on the growth rate normalized to a positive and negative control condition, and a fluorescent cell death dye, cytotoxic and cytostatic drug responses can be easily distinguished, profoundly improving the classification of responders and non-responders. In addition, drug-response heterogeneity can by quantified from single-organoid drug response analysis to identify potential, resistant clones. Ultimately, this method aims to improve the prediction of clinical therapy response by capturing a multiparametric drug response signature, which includes kinetic growth arrest and cell death quantification.

This protocol describes a semi-automated method for medium- to high-throughput organoid drug screenings and microscope-agnostic, automated image analysis software to quantify and visualize multiparametric, single-organoid drug responses to capture intratumor heterogeneity.

فحص المخدرات العضوية متعددة المعلمات للورم باستخدام تصوير الخلايا الحية واسع المجال للتحليل السائب والعضوي الفردي

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same pathway, are likely to fail. Emphasis must be placed upon the inhibition of pathways that are responsible for intrinsic and/or adaptive resistance to therapy. An active field of investigation is the development and testing of DNA repair inhibitors that promote the action of, and prevent resistance to, commonly used chemotherapy and radiotherapy. We used a novel protocol to evaluate the effectiveness of BRCA2 inhibition as a means to sensitize tumor cells to the DNA damaging drug cisplatin. Tumor cell metabolism (acidification and respiration) was monitored in real-time for a period of 72 hr to delineate treatment effectiveness on a minute by minute basis. In combination, we performed an assessment of metastatic frequency using a chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM) model of extravasation and invasion. This protocol addresses some of the weaknesses of commonly used in vitro and in vivo methods to evaluate novel cancer therapy regimens. It can be used in addition to common methods such as cell proliferation assays, cell death assays, and in vivo murine xenograft studies, to more closely discriminate amongst candidate targets and agents, and select only the most promising candidates for further development.

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Here, real-time monitoring of tumor cell metabolism, combined with an in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane (CAM) model of metastasis, are used to evaluate novel anti-cancer targets/agents for their ability to sensitize tumor cells to DNA damaging chemotherapeutics.

تقييم فعالية سرطان المخدرات توعية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

الاستجابة للعلاج خارج الحي من الأورام الابتدائية و / أو أسوشيتد الانبثاث لما قبل السريرية والسريرية التنمية من التداوي

Summary

Explore More Videos

PLAYLIST