نشكر تكرم أعضاء إضافيين من مختبر ليفر الذين ساهموا في جمع البيانات (أندريس فيريرا، Danarae اليمان، الكسيس موك، كايتلين فلين، اليزابيث Bearce، وماتان كادوش) ومراجعة مخطوطة (أندريس فيريرا، ريبيكا شنايدر، وكيت روبنز). علينا أيضا أن نعترف رودريك Schlotzhauer وادوين Honse من MU الفيزياء متجر آلة لإدخال تصميمها وتصنيع الأنابيب الملاحظة القوارض المستخدمة في هذه الدراسة. ونحن نقدر وخاصة من Malea يناير كونكيل (الأشعة المشرف في الطب البيطري وقسم الجراحة في جامعة ميسوري - كلية الطب البيطري) ويان آيفي (مدير البحوث الحيوانية معمل قسطرة في جامعة ميسوري - كلية الطب) لإظهار الصبر المستمر والتحفيز أثناء تشغيل fluoroscopes الطاقة العالية كما قمنا بتطوير بروتوكول VFSS الفئران. مصادر التمويل لهذه الدراسة شملت NIH / NIDCD (TE يفر)، NIH / NINDS (GK Pavlath)، Otolaryngoبليد الحركة - جراحة الرأس والرقبة بدء الأموال (TE يفر)، وصندوق MU PRIME (TE يفر)، [ميزوو] ميزة (TE يفر)، ومركز MU للشيخوخة (TE يفر).

ويرعى الوصول المفتوح لهذا المقال من قبل غلينبروك، نيفادا.

عسر البلع (ابتلاع ضعف) هو عرض من أعراض شائعة للعديد من الحالات المرضية التي تؤثر على الناس من جميع الأعمار. ومن الأمثلة على ذلك السكتة الدماغية، ومرض باركنسون ومرض الزهايمر، الشلل الدماغي، ضمور العضلات، والتصلب الوحشي الضموري (ALS)، مرض باتن، سرطان الرأس والعنق، والولادة المبكرة، والشيخوخة المتقدمة. ويرتبط عسر البلع للغاية مع وفيات، وعادة نتيجة لسوء التغذية الحاد أو الالتهاب الرئوي الذي يتطور عند يستنشق البكتيري لادن الغذاء / السائل / اللعاب إلى الرئتين 1-4. هذه الحالة الطبية المنهكة والتي تهدد الحياة وتؤثر أكثر من 15 مليون شخص سنويا في الولايات المتحدة وحدها 3. وعلى الرغم من ارتفاع معدل انتشار والنتائج السلبية المرتبطة بها، وخيارات العلاج الحالية لعسر البلع تقتصر على مسكن (بدلا من العلاجية) النهج، مثل تعديل النظام الغذائي (على سبيل المثال، وتجنب الاتساق محددة الغذاء / السائل)، والتغيرات الوضعي (على سبيل المثال، tuckiنانوغرام الذقن عند البلع)، والنهج المحرك (على سبيل المثال، يمارس تستهدف العضلات في تجويف الفم والبلعوم والحنجرة و)، والنهج الحسية (مثل نكهة تنفيذ، ودرجة الحرارة، و / أو التحفيز الميكانيكي)، وأنبوب تغذية (مثل التغذية وترطيب تدار عن طريق أنفي معدي (NG) أنبوب أو عن طريق الجلد المعدة بالمنظار (PEG) أنبوب). هذه العلاجات مجرد يخدم العلاج أعراض كما بدلا من استهداف الأسباب الكامنة وراء هذه المشكلة. في الواقع، يشكل عائقا رئيسيا لاكتشاف الرواية، علاجات فعالة لعسر البلع هو المعرفة العلمية محدودة من الآليات المرضية المسؤولة، والتي تختلف من المرجح لكل مرض. يتم تشخيص عسر البلع في الغالب باستخدام إجراء التصوير الشعاعي يسمى videofluoroscopic البلع الدراسة (VFSS)، المعروف أيضا باسم دراسة الباريوم ابتلاع المعدلة. على مدى السنوات ال 30 زائد الماضية، فقد اعتبر هذا الاختبار التشخيصي والذهب القياسية للEValuating ابتلاع ظيفة 5-7. هذا الاختبار تستلزم المريض الجلوس أو الوقوف في مسار شعاع الأشعة السينية آلة التنظير في حين تناول الطعام طوعا والاتساق السائلة مختلطة مع وكيل النقيض من ذلك عن طريق الفم، وعادة كبريتات الباريوم 8،9 أو iohexol 10. كما يبتلع المريض، ويمكن أن ينظر إلى الطعام والسوائل التي تحتوي على عامل تباين في الوقت الحقيقي من خلال شاشة الكمبيوتر أثناء السفر من الفم إلى المعدة. الهياكل الأنسجة اللينة مرئية أيضا ويمكن تقييم نسبة إلى هيكلة وظيفة. ويطلب من المرضى لأداء عدة يبتلع كل المواد الغذائية والاتساق السائل، وكلها الفيديو المسجل للعرض لاحقا والإطار حسب الإطار تحليل لتحديد وجود ودرجة عسر البلع. وعادة ما يتم تحليل العديد من المكونات الفسيولوجية للالبلع، مثل نقطة الزناد التشريحية للابتلاع البلعوم، البلعة الوقت العبور من خلال البلعوم والمريء ومدى ومدة larynارتفاع GEAL والموقع وكمية من مخلفات ما بعد ابتلاع، وقوع والسبب الفسيولوجية الانقاذ 7،11. تم تكييفها جوانب بروتوكول VFSS البشري مؤخرا لدراسة الفئران يتصرف بحرية؛ ومع ذلك، كانت النتائج محدودة بسبب الفئران لم يبقى في مجال videofluoroscopic نظر خلال اختبار 12. لم يسبق حاول VFSS مع الفئران. فإن التكيف الناجح لبروتوكول VFSS البشري للاستخدام مع الفئران والجرذان توفر طريقة البحث رواية للتحقيق في مئات من الفئران الموجودة حاليا (الماوس والفئران) نماذج من الأمراض التي يعرف عنها أنها تسبب عسر البلع لدى البشر. وبالتالي فإن هذا الأسلوب الجديد (المشار إليه فيما VFSS الفئران) يسرع تحديد والتحقق من نماذج الفئران من عسر البلع التي هي مناسبة للتحقيق في الآليات العصبية الكامنة داخل الأنسجة العضلات والأعصاب والدماغ التي هي مرضية، والمساهمة في عسر البلع طن البشر. وعلاوة على ذلك، فإن الفئران VFSS تسمح بتحديد مقاييس موضوعية (المؤشرات الحيوية) من ابتلاع وظيفة / الخلل التي يمكن مقارنة مباشرة مع البشر. يمكن لهذه الأنواع عبر المؤشرات الحيوية videofluoroscopic ثم يخدم مقاييس النتائج الجديدة لقياس فعالية العلاج في التجارب قبل السريرية مع الفئران والجرذان، والتي من شأنها أن تترجم إلى أفضل التجارب السريرية مع الناس. ولهذه الغاية، تم تأسيس بروتوكول VFSS الفئران باستخدام ~ 100 الفئران من كلا الجنسين. وكانت جميع الفئران إما C57 أو C57 سلالات هجين / SJL. لم يغير من الفئران C57 وراثيا، في حين كان C57 / SJL سلالة الخلفية لمستعمرة المعدلة وراثيا SOD1-G93A (أو SOD1) الفئران، ونموذج الحيوان الأكثر استخداما على نطاق واسع من ALS. كانت مستعمرة SOD1 على 50-50 مزيج التقريبي المعدلة وراثيا (أي المتضررين ALS) الفئران وnontransgenic (أي لم تتأثر) تتزاحم. يتكون بروتوكول VFSS الفئران من ثلاثة عناصر: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><lط&gt; غرف المراقبة المصممة حسب الطلب التي تسمح التغذية الطوعية والبلع بينما كان واقفا غير المقيد في مكان ضيق داخل جهاز التنظير، </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصفات التي تحجب مكره طعم / رائحة الفم عوامل التباين وإنتاج الإشعاعية كافية للسماح التصور الكافي من البلع، </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خطوة بخطوة اختبار البروتوكول الذي يزيد الامتثال الحيوان، ويقلل من إجمالي وقت الاختبار والتعرض للإشعاع، ويسمح الكمي من العديد من المعلمات ابتلاع لكل مرحلة من مراحل البلع (أي عن طريق الفم، البلعوم، والمريء). </li></ol> التأثير المشترك ينتج مريحة، والإجهاد المنخفض، ذاتية التغذية البيئة الفحص الذي يسمح تقييم التغذية النموذجية والسلوكيات البلع من الفئران.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" >
	<tbody>
		<tr >
			<td >Name of Material/ Equipment</td>
			<td >Company</td>
			<td >Catalog Number</td>
			<td >Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polycarbonate tubing for observation chambers</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >3161T41</td>
			<td>Body of observation tubes, 2&#34;X2&#34; diameter, 0.080&#34; thick wall</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polycarbonate sheet&#160; for observation chambers</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >9115K71</td>
			<td>End-caps for observation tubes, 2&#34;x12&#34;x3/4&#34;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polycarbonate sheet&#160; for observation chambers</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >8574K281</td>
			<td>Peg-bowls for observation tubes</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silicone O-rings&#160; for end-caps of observation chambers</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >9396K108</td>
			<td>S1138 AS568-029, pack of 25 
			http://www.mcmaster.com/#o-rings/=t0wt5r&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silicone stoppers for observation chambers</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >2903K22</td>
			<td>Package of 10 stoppers to plug the oval opening in the top of the observation chamber when using a peg-bowl 
			http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3803/=t0y5at</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Centrifuge tubes for sipper tube bottles</td>
			<td >Evergreen Scientific</td>
			<td >222-3530-G80</td>
			<td>30 ml freestanding centrifuge tubes, with caps, sterile 
			https://www.evergreensci.com/labware-catalog/tubes-and-vials/30-and-50-ml-centrifuge-tubes/&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silcone stoppers for sipper tube bottles</td>
			<td >Saint-Gobain Performance Plastics</td>
			<td >DX263031-10&#160;</td>
			<td>Number 31D, size: 26 mm bottom, 32 mm top, 30 mm high; 10 pack;&#160; 
			http://www.labpure.com/en/Products.asp?ID=179&#38;PageBrand=STOPPERS</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stopper borers for sipper tube bottles</td>
			<td >Thomas Scientific</td>
			<td >3276G40</td>
			<td>Cork Borer Set that ranges from 3/16-15/16 inch&#160; 
			http://www.thomassci.com/Supplies/Corks/_/CORK-BORER-SET-316-1516-IN?q=Humboldt</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Drinking tubes for sipper tube bottles</td>
			<td >Ancare</td>
			<td >TD-100&#160;</td>
			<td>2 1/2&#8221; long drinking tubes with 5/16&#8221; opening, straight ball-spout 
			http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Iohexol for making oral contrast agent solution</td>
			<td >GE Healthcare</td>
			<td ></td>
			<td>350 mg iodine per ml 
			http://www3.gehealthcare.com/en/products/categories/contrast_media/omnipaque&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chocolate syrup for flavoring oral contrast agent</td>
			<td >Herseys</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 ml syringe for syringe delivery system</td>
			<td >Becton, Dickinson and Company</td>
			<td >309604</td>
			<td>Luer lock tip syringe without needle, 100 per box 
			http://www.bd.com/hypodermic/products/syringeswithoutneedles.asp</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Catheter tubing for syringe delivery system</td>
			<td >Becton, Dickinson and Company</td>
			<td >427451</td>
			<td>Polyethylene Tubing (Non-Sterile) (PE 240) 100&#39; 
			http://www.bd.com/ds/productCenter/427451.asp&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle for syringe delivery system</td>
			<td >Becton, Dickinson and Company</td>
			<td >427560</td>
			<td>15-gauge needle, fits into PE 240 catheter tubing 
			http://www.bd.com/ds/productCenter/427560.asp&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Delrin acetal resin rod for syringe delivery system</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >8576K15</td>
			<td>1/2 inch diameter, black 
			http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3609/=t0wvaf&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Acrylic sheeting for scissor lift</td>
			<td >Ponoko</td>
			<td ></td>
			<td>Laser cut 
			http://www.ponoko.com&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D printed ABS frame</td>
			<td >Engineering Rapid Prototyping Facility, University of Missouri</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brass rods for scissor lift</td>
			<td >Amazon</td>
			<td >TTRB-03-12-03</td>
			<td>made into axles 
			http://www.amazon.com/Brass-Seamless-Round-Tubing-Length/dp/B000FN898M</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Drawer slide for scissor lift</td>
			<td >Richelieu</td>
			<td >10292G116</td>
			<td>Attaches to base of scissor lift 
			http://www.lowes.com/pd_380986-93052-T35072G16_0__?productId=50041754</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >28BYJ-48 stepper motor for scissor lift</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td>2 each</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ULN2003 Darlington transistor array for scissor lift</td>
			<td >Toshiba</td>
			<td >ULN2003APG</td>
			<td>Used as stepper drivers (2 each)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ATTINY85 microcontroller for scissor lift</td>
			<td >Atmel</td>
			<td >ATTINY85-20PU</td>
			<td>2 each 
			http://www.taydaelectronics.com/attiny85-attiny85-20pu-8-bit-20mhz-microcontroller-ic.html</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Nylon spur gear</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >57655K34</td>
			<td>2 each 
			http://www.mcmaster.com/#57655k34/=t0yaqz</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Nylon spur gear rack</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >57655K62</td>
			<td>2 each 
			http://www.mcmaster.com/#57655k62/=t0ybh9</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4-40 nylon machine screws</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >95133A315</td>
			<td>Lift assembly 
			http://www.mcmaster.com/#95133a315/=t0yd8q</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4-40 nylon hex nuts</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >94812A200</td>
			<td>Lift assembly 
			http://www.mcmaster.com/#94812a200/=t0ye29</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Buna-N O-Ring AS568A Dash No. 104</td>
			<td >McMaster-Carr</td>
			<td >9452K318</td>
			<td>Lift assembly 
			http://www.mcmaster.com/#9452k318/=t0yem7</td>
		</tr>
		<tr >
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adapting human videofluoroscopic swallow study methods to detect and characterize dysphagia in murine disease models

تتكيف هذه الدراسة videofluoroscopic الإنسان البلع الدراسة (VFSS) طرق للاستخدام مع نماذج المرض الفئران لغرض تسهيل البحث عسر البلع متعدية. نتائج ناجحة تعتمد على ثلاثة مكونات أساسية: غرف اختبار التي تسمح التغذية الذاتية بينما كان واقفا غير المقيد في مكان ضيق، وصفات التي تحجب مكره طعم / رائحة عوامل التباين عن طريق الفم تجاريا المتاحة، وبروتوكول الاختبار خطوة بخطوة التي يسمح الكمي لابتلاع علم وظائف الأعضاء. سوف القضاء على واحد أو أكثر من هذه المكونات أن يكون لها تأثير ضار على نتائج الدراسة. وعلاوة على ذلك، فإن القدرة على مستوى الطاقة للنظام التنظير تحديد أي ابتلاع المعلمات يمكن التحقيق فيها. معظم مراكز الأبحاث لها fluoroscopes الطاقة العالية المصممة للاستخدام مع الناس والحيوانات الكبيرة، مما يؤدي إلى ضعف استثنائي جودة الصورة عند اختبار الفئران والقوارض الصغيرة الأخرى. وعلى الرغم من هذا القيد، حددنا سبعة VFSالمعلمات S التي هي قابلة للقياس الكمي باستمرار في الفئران عند استخدام الفلوروسكوب الطاقة العالية في تركيبة مع بروتوكول VFSS الفئران الجديد. حصلنا عليها مؤخرا نظام التنظير الطاقة منخفضة مع قدرات عالية بشكل استثنائي القرار التصوير والتكبير التي تم تصميمها للاستخدام مع الفئران وغيرها من القوارض الصغيرة. الأعمال الأولية باستخدام هذا النظام الجديد، في تركيبة مع بروتوكول VFSS الفئران الجديد، حددت 13 المعلمات السنونو التي هي قابلة للقياس الكمي باستمرار في الفئران، وهو ما يقرب من ضعف العدد الذي تم الحصول عليها باستخدام التقليدية (أي الطاقة العالية) fluoroscopes. ومن المتوقع تحديد المعلمات ابتلاع إضافية ونحن تحسين قدرات هذا النظام الجديد. النتائج تثبت حتى الآن مدى جدوى استخدام نظام منخفض التنظير الطاقة لكشف وتحديد التغييرات الطفيفة في ابتلاع علم وظائف الأعضاء التي قد خلاف ذلك يمكن تجاهلها عند استخدام fluoroscopes الطاقة العالية للتحقيق في نماذج الفئران المرض.

لقد قمنا بتصميم بنجاح رواية وتكرار بروتوكول VFSS الفئران محددة تتضمن غرف اختبار التي تسمح التغذية الذاتية، وصفات للتوابل عوامل التباين عن طريق الفم، وخطوة بخطوة اختبار البروتوكول الذي يسمح الكمي لابتلاع علم وظائف الأعضاء. القدرة مستوى الطاقة للنظام التنظير تحدد التي تبتلع يمكن التحقيق المعلمات في الفئران. كنا في البداية fluoroscopes الطاقة العالية المصممة للاستخدام مع الناس والحيوانات الكبيرة (على سبيل المثال، GE Advantx، ​​GE OEC 9600، وأوميغا القلب كاث CS-25، كل في 30 لقطة في الثانية الواحدة). ومع ذلك، كان لهذه النظم قدرات التكبير غير كافية بالنسبة للفئران الاختبار، والتي أسفرت عن ملء الحيوان سوى جزء صغير من مجال الرؤية (الشكل 9). ونتيجة لذلك، كانت جودة الصورة رديئة للغاية، مما يجعل من المستحيل تصور معظم الهياكل لآلية البلع. وعلى الرغم من هذا القيد، حددنا 7 موضوعي VFSS ابتلاع المعلمات التي كانت قابلة للقياس الكمي على الدوام بالنسبة للفئران عند استخدام التقليدي (أي الطاقة العالية) الفلوروسكوب في تركيبة مع بروتوكول VFSS الفئران الجديد (الجدول 3). وبالإضافة إلى ذلك، حددنا مساحة أخدودي كنقطة الزناد التشريحية للالبلع في الفئران البالغين الأصحاء (3-17 شهرا من العمر)، وكذلك الفئران مع ظروف سن متقدمة من العمر (&gt; 18 شهرا) وALS في نهاية المرحلة. <img alt="الرقم 9" src="/files/ftp_upload/52319/52319fig9highres.jpg" width="650" /> الرقم 9: السامي أنظمة الكشف الفلوري الطاقة اليسار: صورة التمثيلية للماوس تم الحصول عليها باستخدام الطاقة العالية (أي التقليدية) أنظمة التنظير. لاحظ أن الماوس يملأ سوى جزء صغير من مجال التنظير للعرض، مما يدل على قدرة التكبير كافية من fluoroscopes التقليدية للقوارض التصوير. الصحيح: نفس الصورة المكبرة بعد captuإعادة باستخدام برنامج برامج تحرير الفيديو. السهم الأسود: ابتلاع نقطة الزناد (valleculae). السهم الأبيض: بلعة في المريء البعيدة، مباشرة قبل المرور عبر تقاطع GE (النجمة البيضاء) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52319/52319fig9highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> PARAMETERS SWALLOW </td><td style="width:140px"> نظام الطاقة عالية </td><td style="width:140px"> منخفض نظام الطاقة </td></tr><tr><td> بين السنونو الفاصل الزمني (ISI) </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> الفك رحلة معدل (لعق يعادل سعر) </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> الفك رحلة القطر </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> نسبة لعق-ابتلاع </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> ابتلاع أسعار </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> Pharyngالخطوط الجوية الاثيوبية وقت العبور (PTT) </td><td></td><td> X </td></tr><tr><td> سرعة البلعة من خلال البلعوم </td><td></td><td> X </td></tr><tr><td> المريء عملية عبور وقت (الانبوبة) </td><td></td><td> X </td></tr><tr><td> سرعة البلعة من خلال المريء </td><td></td><td> X </td></tr><tr><td> البلعة سرعة من خلال البلعوم والمرئ </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> البلعة منطقة </td><td></td><td> X </td></tr><tr><td> البلعوم بقايا منطقة </td><td></td><td> X </td></tr><tr><td> حجم السائل المستهلكة </td><td> X </td><td> X </td></tr></tbody></table> الجدول 3: السنونو معلمات قابلة للقياس الكمي عن طريق المرتفع مقابل المنخفض للطاقة أنظمة الكشف الفلوري. حصلنا عليها مؤخرا يسمى نظام منخفض التنظير التكبير الطاقة وLabScope (غلينبروك، نيفادا تكنولوجيز، راندولف، NJ) التي تم تصميمها خصيصا لمختبرنا للاستخدام معالفئران وغيرها من القوارض الصغيرة (الشكل 10). ومع ذلك، أصدرت مستويات التكبير أكبر بشكل ملحوظ لهذا النظام من المستحيل لعرض آلية البلع كامل ماوس في حقل واحد من الرأي. بدلا من ذلك، يطلب من موقعين الاختبار، كما هو مبين في الشكل (11). الوظيفة 1 تصاريح التصور من الرأس كله ومنطقة الصدرية القريبة. هذا الموقف هو ضروري لتقييم المراحل عن طريق الفم والبلعوم من البلع. موقف 2 تصاريح التصور من وجهة ابتلاع الزناد (أي valleculae) إلى المعدي (GE) تقاطع. هذا الموقف هو ضروري لتقييم المرحلة المريء من البلع. الأعمال الأولية باستخدام LabScope في تركيبة مع بروتوكول VFSS الفئران الجديد حددت 13 المعلمات ابتلاع الموضوعية التي هي قابلة للقياس الكمي باستمرار في الفئران، وهو ما يقرب من ضعف العدد الذي تم الحصول عليها باستخدام الطاقة العالية fluoroscopes (أي التقليدية) (الجدول 3). هذا س<html> ويعزى utcome لقدرات التكبير متقدمة من LabScope، والذي يسمح لرؤية العديد من الهياكل التشريحية (الشكل 12) التي كانت غير مرئية بشكل أساسي عند استخدام النظم التقليدية: مثل العظم اللامي والقصبة الهوائية، والفقرات العنقية. ونتيجة لذلك، ونحن أيضا كانوا قادرين على تحليل أشرطة الفيديو عن أدلة على اختراق الحنجرة والطموح. وقد لوحظ لا اختراق ولا تطلع لأي الماوس في هذه الدراسة، بغض النظر عن الظروف الصحية أو المرض. <img alt="الرقم 10" src="/files/ftp_upload/52319/52319fig10highres.jpg" width="650" /> الرقم 10: وLabScope اليسار: LabScope ينفذ باعتباره الفلوروسكوب سطح المكتب للحيوانات الصغيرة. الحق: الصورة عن قرب نظرا لLabScope مع مكونات المسمى. الجدول رفع مقص وتحديد المواقع لغرفة المراقبة في مجال الفلوروسكوب نظر.<html> tp_upload / 52319 / 52319fig10highres.jpg &quot;الهدف =&quot; _ فارغة &quot;&gt; الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="الرقم 11" src="/files/ftp_upload/52319/52319fig11highres.jpg" width="650" /> الرقم 11: منخفضة الطاقة نظام الكشف الفلوري صور ماوس تم الحصول عليها باستخدام نظام التنظير الطاقة منخفضة. لاحظ أن قدرة التكبير العالية يمنع التصور لآلية ابتلاع كامل في مجال التنظير نظر. اليسار: الوظيفة 1 - يسمح التصور من الرأس كله ومنطقة الصدرية القريبة. نقطة ابتلاع الزناد (السهم الأسود) وتتركز أساسا داخل مجال الرؤية. الصحيح: الوظيفة 2 - تصاريح التصور من وجهة ابتلاع الزناد (السهم الأسود) إلى تقاطع GE (النجمة البيضاء). لاحظ البلعة تمر عبر المريء البعيدة (السهم الأبيض).<html> g11highres.jpg &quot;الهدف =&quot; _ فارغة &quot;&gt; الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="الرقم 12" src="/files/ftp_upload/52319/52319fig12highres.jpg" width="650" /> الرقم 12: الهياكل التشريحية مرئي باستخدام نظام الكشف الفلوري منخفضة الطاقة حتى في وضع أدنى التكبير (يسار)، والهياكل بوني الرأس والرقبة من الفأرة مرئية بسهولة باستخدام لدينا منخفضة نظام التنظير الطاقة (أي LabScope). وتظهر الهياكل التشريحية داخل مربع أسود (وصفت) في أعلى التكبير إلى اليمين. تحسين التصور من الهياكل بوني يسمح الكمي من العديد من المعلمات ابتلاع إضافية لم تكن ممكنة لتحليل باستخدام fluoroscopes الطاقة العالية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52319/52319fig12highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> ر &quot;&gt; السنونو معدل والفاصلة بين ابتلاع معلمات VFSS التمثيلية التي يمكن قياسها كميا باستخدام أنظمة التنظير الطاقة منخفضة أو عالية في تركيبة مع بروتوكول VFSS الفئران الجديد وكميا هذه المعلمات ابتلاع اثنين لمدة ثلاث مجموعات من الفئران: SOD1-G93A (SOD1) الفئران المعدلة وراثيا (أي نموذج من ALS) في نهاية مرحلة المرض بين 4-5 أشهر من العمر، والفئران C57 الذين تتراوح أعمارهم بين (18-24 شهرا من العمر)، ومجموعة السيطرة صحية الشباب (4-8 أشهر من العمر) الفئران C57 وتتزاحم nontransgenic من مستعمرة SOD1. وتتعلق جميع البيانات لصنبور مياه الشرب فقط، وذلك باستخدام إما نظام التنظير الطاقة منخفضة أو عالية. لم توجد فروق ذات دلالة إحصائية بين الشباب الفئران C57 والشباب nontransgenic (مراقبة) الفئران من SOD1 مستعمرة بالنسبة إلى هذه المعايير ابتلاع الثاني؛ وبالتالي، تم الجمع بين البيانات إلى مجموعة العامة &quot;السيطرة&quot; من ​​الشباب الفئران صحي للمقارنة مع الفئران C57 الذين تتراوح أعمارهم بين والفئران SOD1 في نهاية المرحلة معدل السنونو (أي،بلغ عدد يبتلع خلال 2 ثانية متتالية من الشرب دون انقطاع) أبطأ بكثير بالنسبة للفئران SOD1 بالمقارنة مع الفئران C57 الذين تتراوح أعمارهم بين والضوابط. (أي الوقت بين اثنين من يبتلع متتالية) كان الفاصل الزمني بين السنونو لا تختلف كثيرا بين المجموعات. هذه النتائج تدعم فكرة أن الشخصية عسر البلع من المرجح أن تكون مختلفة بشكل واضح لكل حالة المرض (الشكل 13). <img alt="الرقم 13" src="/files/ftp_upload/52319/52319fig13highres.jpg" width="650" /> الرقم 13: النتائج الأولية يبين هذا الرقم النتائج الأولية التمثيلية لمدة VFSS المعلمات ابتلاع كميا باستخدام بروتوكول VFSS الفئران: معدل (يسار) والفاصلة بين السنونو (يمين) ابتلاع. كان ابتلاع بمعدل أبطأ بشكل ملحوظ بالنسبة للفئران SOD1 بالمقارنة مع الفئران C57 الذين تتراوح أعمارهم بين والضوابط. وقد تم تحديد وجود فروق مجموعة كبيرة للأمور-ابتلاع بينفال. خطوط في الجزء العلوي من القضبان تشير إلى فروق ذات دلالة إحصائية (P &lt;0.05) بين المجموعات، التي تم تحديدها باستخدام مقارنات البشرى Bonferroni. أشرطة الخطأ تمثل ± 1 SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52319/52319fig13highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models at JoVE.com

Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models

تكيفت هذه الدراسة بنجاح الإنسان videofluoroscopic البلع الدراسة (VFSS) طرق للاستخدام مع نماذج المرض الفئران لغرض تسهيل البحث عسر البلع متعدية.

التكيف Videofluoroscopic طرق دراسة السنونو الإنسان لكشف وتوصيف عسر البلع في نماذج الفئران الأمراض

This study adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating ...

adapting-human-videofluoroscopic-swallow-study-methods-to-detect

Research

JoVE Journal

Medicine

21.0K Views.  University of Missouri.  تكيفت هذه الدراسة بنجاح الإنسان videofluoroscopic البلع الدراسة (VFSS) طرق للاستخدام مع نماذج المرض الفئران لغرض تسهيل البحث عسر البلع متعدية. 

Video: Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models

Methods to Quantify Pharmacologically Induced Alterations in Motor Function in Human Incomplete SCI

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating disorder, which produces profound deficits in volitional motor control. Following medical stabilization, recovery from SCI typically involves long term rehabilitation. While recovery of walking ability is a primary goal in many patients early after injury, those with a motor incomplete SCI, indicating partial preservation of volitional control, may have the sufficient residual descending pathways necessary to attain this goal. However, despite physical interventions, motor impairments including weakness, and the manifestation of abnormal involuntary reflex activity, called spasticity or spasms, are thought to contribute to reduced walking recovery. Doctrinaire thought suggests that remediation of this abnormal motor reflexes associated with SCI will produce functional benefits to the patient. For example, physicians and therapists will provide specific pharmacological or physical interventions directed towards reducing spasticity or spasms, although there continues to be little empirical data suggesting that these strategies improve walking ability.
In the past few decades, accumulating data has suggested that specific neuromodulatory agents, including agents which mimic or facilitate the actions of the monoamines, including serotonin (5HT) and norepinephrine (NE), can initiate or augment walking behaviors in animal models of SCI. Interestingly, many of these agents, particularly 5HTergic agonists, can markedly increase spinal excitability, which in turn also increases reflex activity in these animals. Counterintuitive to traditional theories of recovery following human SCI, the empirical evidence from basic science experiments suggest that this reflex hyper excitability and generation of locomotor behaviors are driven in parallel by neuromodulatory inputs (5HT) and may be necessary for functional recovery following SCI. 
The application of this novel concept derived from basic scientific studies to promote recovery following human SCI would appear to be seamless, although the direct translation of the findings can be extremely challenging. Specifically, in the animal models, an implanted catheter facilitates delivery of very specific 5HT agonist compounds directly onto the spinal circuitry. The translation of this technique to humans is hindered by the lack of specific surgical techniques or available pharmacological agents directed towards 5HT receptor subtypes that are safe and effective for human clinical trials. However, oral administration of commonly available 5HTergic agents, such as selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs), may be a viable option to increase central 5HT concentrations in order to facilitate walking recovery in humans. Systematic quantification of how these SSRIs modulate human motor behaviors following SCI, with a specific focus on strength, reflexes, and the recovery of walking ability, are missing.
This video demonstration is a progressive attempt to systematically and quantitatively assess the modulation of reflex activity, volitional strength and ambulation following the acute oral administration of an SSRI in human SCI. Agents are applied on single days to assess the immediate effects on motor function in this patient population, with long-term studies involving repeated drug administration combined with intensive physical interventions.

This video demonstrates modulation of reflex activity, volitional strength and ambulation through clinical and quantitative assessments in individuals with motor incomplete SCI as a result of acute oral administration of a serotonin reuptake inhibitor (SSRI).

أساليب لتحديد التعديلات المستحثة الفارماكولوجية في وظيفة الحركة في اصابات النخاع الشوكي الإنسان غير مكتمل

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating disorder, which produces profound deficits in volitional motor control. Following medical stabilization, ...

Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being analyzed 1, 2. This classical banding technique, however, is not reliable in identifying complex chromosomal aberrations such as those associated with cancer. To overcome the limitations of the banding technique, Spectral Karyotyping (SKY) is introduced to provide much reliable information on chromosome abnormalities.
SKY is a multicolor fluorescence in-situ hybridization (FISH) technique to detect metaphase chromosomes with spectral microscope 3, 4. SKY has been proven to be a valuable tool for the cytogenetic analysis of a broad range of chromosome abnormalities associated with a large number of genetic diseases and malignancies 5, 6. SKY involves the use of multicolor fluorescently-labelled DNA probes prepared from the degenerate oligonucleotide primers by PCR. Thus, every chromosome has a unique spectral color after in-situ hybridization with probes, which are differentially labelled with a mixture of fluorescent dyes (Rhodamine, Texas Red, Cy5, FITC and Cy5.5). The probes used for SKY consist of up to 55 chromosome specific probes 7-10.
The procedure for SKY involves several steps (Figure 1). SKY requires the availability of cells with high mitotic index from normal or diseased tissue or blood. The chromosomes of a single cell from either a freshly isolated primary cell or a cell line are spread on a glass slide. This chromosome spread is labeled with a different combination of fluorescent dyes specific for each chromosome. For probe detection and image acquisition,the spectral imaging system consists of sagnac interferometer and a CCD camera. This allows measurement of the visible light spectrum emitted from the sample and to acquire a spectral image from individual chromosomes. HiSKY, the software used to analyze the results of the captured images, provides an easy identification of chromosome anomalies. The end result is a metaphase and a karyotype classification image, in which each pair of chromosomes has a distinct color (Figure 2). This allows easy identification of chromosome identities and translocations. For more details, please visit Applied Spectral Imaging website (<a href="http://www.spectral-imaging.com/" target="_blank">http://www.spectral-imaging.com/</a>).
SKY was recently used for an identification of chromosome segregation defects and chromosome abnormalities in humans and mice with Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease (ADPKD), a genetic disease characterized by dysfunction in primary cilia 11-13. Using this technique, we demonstrated the presence of abnormal chromosome segregation and chromosomal defects in ADPKD patients and mouse models 14. Further analyses using SKY not only allowed us to identify chromosomal number and identity, but also to accurately detect very complex chromosomal aberrations such as chromosome deletions and translocations (Figure 2).

Spectral Karyotyping (SKY) is an advanced cytogenetics technique to identify genomic and chromosomal aberrations. This technique takes advantage of chromosome painting probes, which allow classification of all chromosomes. SKY can also identify complex chromosome aberrations and segregation defects in mice and humans with various diseases, including polycystic kidney disease.

الطيفية Karyotyping إلى دراسة حالة شذوذ الكروموسومات في البشر والفئران مع مرض الكلى المتعدد الكيسات

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease (PD) pathogenesis are less understood. Gene-environment interaction models have utility in unmasking the impact of specific cellular pathways in toxicity that may not be observed using a solely genetic or toxicant disease model alone.&#160;To evaluate if distinct LOX isozymes selectively contribute to PD-related neurodegeneration, transgenic (i.e. 5-LOX and 12/15-LOX deficient) mice can be challenged with a toxin that mimics cell injury and death in the disorder.&#160;Here we describe the use of a neurotoxin, 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP), which produces a nigrostriatal lesion to elucidate the distinct contributions of LOX isozymes to neurodegeneration related to PD. The use of MPTP in mouse, and nonhuman primate, is well-established to recapitulate the nigrostriatal damage in PD.&#160;The extent of MPTP-induced lesioning is measured by HPLC analysis of dopamine and its metabolites and semi-quantitative Western blot analysis of striatum for tyrosine hydroxylase (TH), the rate-limiting enzyme for the synthesis of dopamine. To assess inflammatory markers, which may demonstrate LOX isozyme-selective sensitivity, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Iba-1 immunohistochemistry are performed on brain sections containing substantia nigra, and GFAP Western blot analysis is performed on striatal homogenates.&#160;This experimental approach can provide novel insights into gene-environment interactions underlying nigrostriatal degeneration and PD.

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson&#039;s Disease

Lipoxygenase (LOX) isozymes can generate products that may increase or decrease neuroinflammation and neurodegeneration.&#160;A gene-environment interaction study could identify LOX isozyme-specific effects. Using the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model of nigrostriatal damage in two LOX isozyme-deficient transgenic lines allows for comparison of the contribution of LOX isozymes on dopaminergic integrity and inflammation.

نماذج التفاعل بين الجينات والبيئة لكشف آليات الحساسية في مرض باركنسون

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of care consisting of surgical debulking and combination chemotherapy consisting of platinum and taxane compounds, almost 90% of patients recur within a few years. In these patients the development of chemoresistant disease limits the efficacy of currently available chemotherapy agents and therefore contributes to the high mortality. To discover novel therapy options that can target recurrent disease, appropriate animal models that closely mimic the clinical profile of patients with recurrent ovarian cancer are required. The challenge in monitoring intra-peritoneal (i.p.) disease limits the use of i.p. models and thus most xenografts are established subcutaneously. We have developed a sensitive optical imaging platform that allows the detection and anatomical location of i.p. tumor mass. The platform includes the use of optical reporters that extend from the visible light range to near infrared, which in combination with 2-dimensional X-ray co-registration can provide anatomical location of molecular signals. Detection is significantly improved by the use of a rotation system that drives the animal to multiple angular positions for 360 degree imaging, allowing the identification of tumors that are not visible in single orientation. This platform provides a unique model to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention or treatment of recurrent ovarian cancer.

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

نموذج الفئران التصوير غير الغازية لكشف ورصد سرطان المبيض تكرار

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.

Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.

عزل واستئصال الفئران الأبهر. تقنية متعددة الاستخدامات في دراسة أمراض القلب والأوعية الدموية

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Using Adeno-associated Virus as a Tool to Study Retinal Barriers in Disease

M&#252;ller cells are the principal glial cells of the retina. Their end-feet form the limits of the retina at the outer and inner limiting membranes (ILM), and in conjunction with astrocytes, pericytes and endothelial cells they establish the blood-retinal barrier (BRB). BRB limits material transport between the bloodstream and the retina while the ILM acts as a basement membrane that defines histologically the border between the retina and the vitreous cavity. Labeling M&#252;ller cells is particularly relevant to study the physical state of the retinal barriers, as these cells are an integral part of the BRB and ILM. Both BRB and ILM are frequently altered in retinal disease and are responsible for disease symptoms.
There are several well-established methods to study the integrity of the BRB, such as the Evans blue assay or fluorescein angiography. However these methods do not provide information on the extent of BRB permeability to larger molecules, in nanometer range. Furthermore, they do not provide information on the state of other retinal barriers such as the ILM. To study BRB permeability alongside retinal ILM, we used an AAV based method that provides information on permeability of BRB to larger molecules while indicating the state of the ILM and extracellular matrix proteins in disease states. Two AAV variants are useful for such study: AAV5 and ShH10. AAV5&#160;has a natural tropism for photoreceptors but it cannot get across to the outer retina when administered into the vitreous when the ILM is intact (i.e., in wild-type retinas). ShH10 has a strong tropism towards glial cells and will selectively label M&#252;ller glia in both healthy and diseased retinas. ShH10 provides more efficient gene delivery in retinas where ILM is compromised. These viral tools coupled with immunohistochemistry and blood-DNA analysis shed light onto the state of retinal barriers in disease.

To investigate the blood-retinal barrier permeability and the inner limiting membrane integrity in animal models of retinal disease, we used several adeno-associated virus (AAV) variants as tools to label retinal neurons and glia. Virus mediated reporter gene expression is then used as an indicator of retinal barrier permeability.

باستخدام فيروس الغدة اسوشيتد كأداة لدراسة الحواجز الشبكية في مرض

M&#252;ller cells are the principal glial cells of the retina. Their end-feet form the limits of the retina at the outer and inner limiting membranes ...

Methods for Culturing Human Femur Tissue Explants to Study Breast Cancer Cell Colonization of the Metastatic Niche

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little is known about breast cancer cell properties and behaviors within the native microenvironment of human bone tissue.We have developed approaches to track, quantify and modulate human breast cancer cells within the microenvironment of cultured human bone tissue fragments isolated from discarded femoral heads following total hip replacement surgeries. Using breast cancer cells engineered for luciferase and enhanced green fluorescent protein (EGFP) expression, we are able to reproducibly quantitate migration and proliferation patterns using bioluminescence imaging (BLI), track cell interactions within the bone fragments using fluorescence microscopy, and evaluate breast cells after colonization with flow cytometry. The key advantages of this model include: 1) a native, architecturally intact tissue microenvironment that includes relevant human cell types, and 2) direct access to the microenvironment, which facilitates rapid quantitative and qualitative monitoring and perturbation of breast and bone cell properties, behaviors and interactions. A primary limitation, at present, is the finite viability of the tissue fragments, which confines the window of study to short-term culture. Applications of the model system include studying the basic biology of&#160;breast cancer and other bone-seeking malignancies within the metastatic niche, and developing therapeutic strategies to effectively target breast cancer cells in bone tissues.

Protocols are described for studying breast cancer cell migration, proliferation and colonization in a human bone tissue explant model system.

طرق التثقيف عظم الفخذ الإنسان إإكسبلنتس الأنسجة لدراسة سرطان الثدي الاستعمار خلية للالمتخصصة الإنتقالية

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

فيفو السابقين المعوية الحويصلات لتقييم الأغشية المخاطية النفاذية في نماذج من الأمراض المعوية

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably reproduce the human disease are necessary to develop new therapies for this disease. The mouse hindlimb ischemia model has been widely used for this purpose, but the standard practice of inducing acute limb ischemia by ligation of the femoral artery can result in substantial tissue necrosis, compromising investigators&#39; ability to study the vascular and skeletal muscle tissue responses to ischemia. An alternative approach to femoral artery ligation is the induction of gradual femoral artery occlusion through the use of ameroid constrictors. When placed around the femoral artery in the same or different locations as the sites of femoral artery ligation, these devices occlude the artery over 1 - 3 days, resulting in more gradual, subacute ischemia. This results in less substantial skeletal muscle tissue necrosis, which may more closely mimic the responses seen in human PAD. Because genetic background influences outcomes in both the acute and subacute ischemia models, consideration of the mouse strain being studied is important in choosing the best model. This paper describes the proper procedure and anatomical placement of ligatures or ameroid constrictors on the mouse femoral artery to induce subacute or acute hindlimb ischemia in the mouse.

Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion.

طرق الحادة وتحت الحادة الفئران Hindlimb نقص التروية

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have immunosuppressive potential and have been shown to suppress inflammation in mouse models of intestinal inflammation, even though the route of administration can limit their homing and effectiveness 1,3,4,5. Local application of MSCs to colonic injury models has shown greater efficacy at ameliorating inflammation in the colon. However, there is paucity of data on techniques to enhance the localization of human bone marrow-derived MSCs (hMSCs) to the small intestine, the site of inflammation in the SAMP-1/YitFc (SAMP) model of experimental Crohn&#39;s disease. This work describes a novel technique for the ultrasound-guided intracardiac injection of hMSCs in SAMP mice, a well-characterized spontaneous model of chronic intestinal inflammation. Sex- and age-matched, inflammation-free AKR/J (AKR) mice were used as controls. To analyze the biodistribution and the localization, hMSCs were transduced with a lentivirus containing a triple reporter. The triple reporter consisted of firefly luciferase (fl), for bioluminescent imaging; monomeric red fluorescent protein (mrfp), for cell sorting; and truncated herpes simplex virus thymidine kinase (ttk), for positron emission tomography (PET) imaging. The results of this study show that 24 h after the intracardiac administration, hMSCs localize in the small intestine of SAMP mice as opposed to inflammation-free AKR mice. This novel, ultrasound-guided injection of hMSCs in the left ventricle of SAMP mice ensures a high success rate of cell delivery, allowing for the rapid recovery of mice with minimal morbidity and mortality. This technique could be a useful method for the enhanced localization of MSCs in other models of small-intestinal inflammation, such as TNF&#916;RE6. Future studies will determine if the increased localization of hMSCs by intra-arterial delivery can lead to increased therapeutic efficacy.

Murine studies in models of colonic inflammation have demonstrated that a small percentage (1 - 5%) of mesenchymal stem cells (MSC) injected intravenously or intraperitoneally home to the inflamed colon1,2. This study shows that ultrasound-guided intracardiac injections of MSCs result in increased localization to the intestine.

حقن إينتراكاردياك الموجهة بالموجات فوق الصوتية البشرية الخلايا الجذعية الوسيطة لزيادة صاروخ موجه للاستخدام في نماذج مورين من أمراض التهاب الأمعاء التجريبية للامعاء

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...