وأيد هذا العمل عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة: ​​HL671795، HL048743، وHL108630.

1. إعداد SDF-1α غليكان النانوية ونظرا لغرض في الجسم الحي التسليم، وتعقيم جميع الحاويات، الماصات، ونصائح المستخدمة في إعداد. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول الأسهم التالية في عالى النقاء المياه: 1٪ كبريتات ديكستران. 1 M هيدروكسيد الصوديوم (العقيمة التي تمت تصفيتها مع غشاء PES)؛ 0.1٪ الشيتوزان في 0.2٪ حمض الخليك الجليدي (فلتر من خلال 0.8 و 0.22 ميكرون مرشحات على التوالي، وضبط درجة الحموضة إلى 5.5 مع هيدروكسيد الصوديوم بعد ذلك)؛ 0.1 M ZnSO 4؛ 15٪ مانيتول، و0.92 ملغ / مل SDF-1α (المخزنة في aliquots في 80 ° C، والاحتفاظ بها في 4 درجات مئوية إذابة مرة واحدة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم حلول الأوراق المالية من خلال 0.22 ميكرون أغشية الترشيح. تقييم مستويات الذيفان الداخلي في حل استعداد مع الليمول خلية أميبية الشكل المحللة (LAL) هلام تجلط الفحص. تأكد من أن مستويات هي &lt;0.06 EU / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.18 مل عالى النقاء المياه للكوب 1.5 مل قارورة تحتوي على شريط مغناطيسي. ضبط سرعة ضجة في 800 دورة في الدقيقة. إضافة 0.1 مل 1٪كبريتات ديكستران وتحرك المكونات لمدة 2 دقيقة. إضافة 0.08 ملغ SDF-1α (0.087 مل من 0.92 ملغ / مل SDF-1α الحل) ويقلب لمدة 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.33 مل 0.1٪ الشيتوزان قطرة قطرة ويقلب لمدة 5 دقائق. تغيير السرعة ضجة إلى أقصى حد وإضافة 0.1 مل 0.1 M ZnSO 4 ببطء مع حقنة 0.1 مل (أكثر من 1 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة سرعة ضجة إلى 800 دورة في الدقيقة ويقلب لمدة 30 دقيقة. إضافة 0.4 مل 15٪ مانيتول ويقلب لمدة 5 دقائق. نقل خليط التفاعل إلى أنبوب 1.5 مل microfuge. الطرد المركزي في 16،000 x ج في 4 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. ملاحظة: إن وجود مانيتول يسهل إعادة تعليق من الجسيمات بعد الطرد المركزي. اعتمادا على الاكتناز من بيليه، يمكن أن تختلف تركيز مانيتول من 0٪ إلى 5٪. إعادة تعليق كامل للجسيمات بعد كل الطرد المركزي أمر بالغ الأهمية لتجنب المجاميع في تعليق النهائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح طاف واستخدام ماصة لإزالة آخر قطرة من السائل ببطء. إضافة 0.2 مل 5٪ مانيتول. تعليق بيليه مع 0.5 مل، 29 G نيحقنة DLE. إضافة 1 مل 5٪ مانيتول. أجهزة الطرد المركزي في 16،000 x ج لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوة 1.6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح طاف. Resuspend وبيليه في 0.2 مل 5٪ مانيتول. تخزين تعليق الجسيمات في 4 درجات مئوية. ملاحظة: تعليق الجسيمات يمكن أيضا تخزينها في المجمد -80 ° C أو مجفف بالتجميد. بما في ذلك 5٪ مانيتول في تعليق ضروري لمنع تجميع الجسيمات بعد تجميد والذوبان أو بعد تجفيد والإماهة. يمكن إزالتها مانيتول بواسطة الطرد المركزي للتعليق بعد التخزين. </li></ol> 2. قياس حجم الجسيمات وزيتا المحتملة ويتم تحليل حجم الجسيمات وزيتا المحتملة من قبل ديناميكية تشتت الضوء وتشتت الضوء الكهربي، على التوالي، مع محلل الجسيمات هو مبين في قائمة المواد. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المعلمات التالية لقياس حجم الجسيمات: مرات تراكم: 70. كرر مرات: 4؛ درجة الحرارة: 25 ° C.مخفف: المياه؛ كثافة التعديل: السيارات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع عينة SDF-1α-DS-CS مع الماء (التخفيف 10 أضعاف). تحميل 100 ميكرولتر من العينة إلى كوفيت الأشعة فوق البنفسجية يمكن التخلص منها مثل كفيت إيبندورف. إدراج كفيت في حامل الخلية. انتظر لتعديل كثافة للوصول إلى &quot;الأمثل&quot; (~ 10،000 من القانون الجنائي). بدء الحصول على البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الانتهاء من القياس، تسجيل نتائج cumulants من قطر (نانومتر) ومؤشر التشتت المتعدد. متوسط ​​النتائج المتحصل عليها من كل من القراءات المتكررة 4 وحساب الانحراف المعياري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل 500 ميكرولتر من 10 أضعاف المخفف عينة الجسيمات إلى خلية تدفق لقياس المحتملة زيتا. إعداد المعلمات التالية لقياس: مرات تراكم: 10؛ كرر مرات: 5؛ درجة الحرارة: 25 ° C. مخفف: المياه؛ كثافة التعديل: السيارات. تسجيل نتائج إمكانات زيتا (بالسيارات). متوسط ​​النتيجة التي حصل عليها من كل من قراءات متكررة 5، وحساب deviatio القياسيةن. </li></ol> 3. الكمي لقوات الدفاع الذاتى-1α في الجسيمات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع مجانا شكل قوات الدفاع الذاتى-1α لتركيزات من 0.01، 0.02، 0.03، 0.04، و 0.05 ملغ / مل في 1.3x Laemmli عينة العازلة. تمييع 6 ميكرولتر عينات SDF-1α-DS-CS مع 40 ميكرولتر 1.3x Laemmli عينة العازلة. (إعداد 4X Laemmli عازلة الأسهم التي تحتوي على 0.25 M تريس، حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 7.5، 8٪ SDS، الجلسرين 40٪، 0.05 ملغ / مل برموفينول الأزرق، و 8٪ 2-المركابتويثانول. يقسم الحل الأسهم إلى مأخوذة الصغيرة والحفاظ على -20 ° C للاستخدام مرة واحدة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين العينات عند 100 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. دوامة العينات مرتين (كل لمدة 10 ثانية في أقصى سرعة) خلال فترة التسخين 10 دقيقة من أجل فصل الجزيئات تماما. تهدئة عينات لRT لمدة 2 دقيقة. الطرد المركزي في 10،000 x ج لمدة 0.5-1 دقيقة لاسقاط المكثفات المياه. دوامة مرة أخرى إلى المزيج جيدا. ملاحظة: عند هذه النقطة، يجب أن يكون الحل عينة واضح مع أي راسب مرئية الحاضر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل 10 &amp;# 181؛ ل عينة / جيد إلى 4-20٪ هلام SDS. تشغيل الكهربائي في 200 V لمدة 20 دقيقة. وصمة عار الجل مع Coomassie الأزرق البروتين وصمة عار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص كثافة الفرقة البروتين من قوات الدفاع الذاتى-1α باستخدام الجزيئي تصوير وتحليل كثافة البرامج. حساب كمية من قوات الدفاع الذاتى-1α في الجسيمات ضد منحنى القياسية التي شيدت مع معايير SDF-1α الحرة. </li></ol> 4. في المختبر الإصدار الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط جزيئات غليكان SDF-1α مع الفوسفات مخزنة المالحة Dulbecco ودون الكالسيوم والمغنيسيوم (D-PBS) في نسبة 1: 1 (ت / ت). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم تعليق الجسيمات إلى 0.05 مل مأخوذة في 1.5 مل أنابيب. تحميل العينات إلى أسفل الأنابيب. تجنب إدخال فقاعات الهواء أو إزعاج سطح السائل. ختم الجزء العلوي من الأنابيب مع بارافيلم. ملاحظة: في القيام بذلك، سوف يظل السائل في أسفل أثناء الدوران من أعلى إلى أسفل لاحق على خلاط أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدوير أنابيب في 37 و# 176؛ C على الدوارة الصغيرة أنبوب خلاط. إزالة مأخوذة من الأنابيب في الأوقات المعينة وأجهزة الطرد المركزي على الفور العينات عند 16،000 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل supernatants والكريات، وإعادة تشكيل بيليه مع 0.05 مل D-PBS. تخزين العينات في -20 ° C. بعد أن يتم جمع كل العينات، دراسة supernatants والكريات على هلام SDS كما هو موضح أعلاه. </li></ol> 5. هجرة الفحص ويقيس هذا الاختبار النشاط الكيميائي لقوات الدفاع الذاتى-1α. تفاعل SDF-1α مع مستقبلات لها (CXCR4) على سطح الخلية يسبب هجرة الخلية نحو الانحدار SDF-1α. في هذا الاختبار، يتم تحميل الخلايا في بئر العلوي (مفصولة غشاء نصف نافذ من أقل أيضا) حل وSDF-1α إلى أقل أيضا. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع SDF-1α (مجانا أو شكل محدد الجسيمات) مع العازلة الهجرة (متوسطة RPMI-1640 تحتوي على 0.5٪ ألبومين المصل البقري) في 3-FOالتخفيف المتسلسل دينار لتركيزات النهائية من 100، 33، 11، 3.7، 1.2، 0.41، 0.14، و 0.05 نانوغرام / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.6 مل من محلول SDF-1α المخفف أو عازلة الهجرة فقط (المراقبة السلبية) إلى بئر في لوحة 24-جيدا. إضافة 0.57 مل عازلة الهجرة إلى بئر (سيطرة خلية الإدخال). احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. وضع نفاذية إدراج الثقافة الخلية مثل Transwell (حجم المسام 5 ميكرون، وقطرها 6.5 ملم) على أعلى من أقل أيضا. تحميل 0.1 مل خلايا Jurkat (5 × 10 5) في Transwell إدراج. تحميل 0.03 مل الخلايا مباشرة لسيطرة خلية إدخال جيدا. احتضان لوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة في 5٪ CO 2 الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة إدراج Transwell. نقل الخلايا التي هاجروا إلى انخفاض الآبار إلى أنبوب البوليسترين 4 مل. عد الخلايا هاجر مع عداد الكريات التدفق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب الهجرة كنسبة مئوية من عدد الخلايا الإدخال (عدد الخلايا في السيطرة خلية إدخال جيدا س 100/30) بعد الطرح من الأرقام في negatإيف الضوابط (خلايا هاجروا إلى الآبار التي تحتوي عازلة الهجرة الوحيد). </li></ol>

<ol>
	<li>Delair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colloidal+polyelectrolyte+complexes+of+chitosan+and+dextran+sulfate+towards+versatile+nanocarriers+of+bioactive+molecules.">Colloidal polyelectrolyte complexes of chitosan and dextran sulfate towards versatile nanocarriers of bioactive molecules.</a> Eur J Pharm Biopharm. 78 (1), 10-18 (2011).</li><li>Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+chemical+strategies+for+therapeutic+delivery+by+using+polymeric+nanoparticles.">Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles.</a> Pharmacol Rev. 64 (3), 505-519 (2012).</li><li>Yue, Z. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+charge+affects+cellular+uptake+and+intracellular+trafficking+of+chitosan-based+nanoparticles.">Surface charge affects cellular uptake and intracellular trafficking of chitosan-based nanoparticles.</a> Biomacromolecules. 12 (7), 2440-2446 (2011).</li><li>Ghadge, S. K., Muhlstedt, S., Ozcelik, C., Bader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SDF-1alpha+as+a+therapeutic+stem+cell+homing+factor+in+myocardial+infarction.">SDF-1alpha as a therapeutic stem cell homing factor in myocardial infarction.</a> Pharmacol Ther. 129 (1), 97-108 (2011).</li><li>Sharma, M., Afrin, F., Satija, N., Tripathi, R. P., Gangenahalli, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-derived+factor-1/CXCR4+signaling:+indispensable+role+in+homing+and+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells+in+bone+marrow.">Stromal-derived factor-1/CXCR4 signaling: indispensable role in homing and engraftment of hematopoietic stem cells in bone marrow.</a> Stem Cells Dev. 20 (6), 933-946 (2011).</li><li>Sadir, R., Baleux, F., Grosdidier, A., Imberty, A., Lortat-Jacob, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+stromal+cell-derived+factor-1alpha-heparin+complex.">Characterization of the stromal cell-derived factor-1alpha-heparin complex.</a> J Biol Chem. 276 (11), 8288-8296 (2001).</li><li>Amara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+cell-derived+factor-1alpha+associates+with+heparan+sulfates+through+the+first+beta-strand+of+the+chemokine.">Stromal cell-derived factor-1alpha associates with heparan sulfates through the first beta-strand of the chemokine.</a> J Biol Chem. 274 (34), 23916-23925 (1999).</li><li>Sadir, R., Imberty, A., Baleux, F., Lortat-Jacob, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heparan+sulfate/heparin+oligosaccharides+protect+stromal+cell-derived+factor-1+(SDF-1)/CXCL12+against+proteolysis+induced+by+CD26/dipeptidyl+peptidase+IV.">Heparan sulfate/heparin oligosaccharides protect stromal cell-derived factor-1 (SDF-1)/CXCL12 against proteolysis induced by CD26/dipeptidyl peptidase IV.</a> J Biol Chem. 279 (42), 43854-43860 (1074).</li><li>Yin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SDF-1alpha+in+glycan+nanoparticles+exhibits+full+activity+and+reduces+pulmonary+hypertension+in+rats.">SDF-1alpha in glycan nanoparticles exhibits full activity and reduces pulmonary hypertension in rats.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 4009-4020 (2013).</li><li>Huang, M., Vitharana, S. N., Peek, L. J., Coop, T., Berkland, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyelectrolyte+complexes+stabilize+and+controllably+release+vascular+endothelial+growth+factor.">Polyelectrolyte complexes stabilize and controllably release vascular endothelial growth factor.</a> Biomacromolecules. 8 (5), 1607-1614 (2007).</li><li>McCall, R. L., Sirianni, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PLGA+nanoparticles+formed+by+single-+or+double-emulsion+with+vitamin+E-TPGS.">PLGA nanoparticles formed by single- or double-emulsion with vitamin E-TPGS.</a> J Vis Exp. (82), 51015 (2013).</li><li>Carrillo-Conde, B. R., Roychoudhury, R., Chavez-Santoscoy, A. V., Narasimhan, B., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+synthesis+of+carbohydrates+and+functionalization+of+polyanhydride+nanoparticles.">High-throughput synthesis of carbohydrates and functionalization of polyanhydride nanoparticles.</a> J Vis Exp. (65), 3967 (2012).</li><li>Xu, J., Amiji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+gene+delivery+and+transfection+in+human+pancreatic+cancer+cells+using+epidermal+growth+factor+receptor-targeted+gelatin+nanoparticles.">Therapeutic gene delivery and transfection in human pancreatic cancer cells using epidermal growth factor receptor-targeted gelatin nanoparticles.</a> J Vis Exp. (59), e3612 (2012).</li><li>Lauten, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoglycan+complex+formulation+extends+VEGF+retention+time+in+the+lung.">Nanoglycan complex formulation extends VEGF retention time in the lung.</a> Biomacromolecules. 11 (7), 1863-1872 (2010).</li><li>Schatz, C., Domard, A., Viton, C., Pichot, C., Delair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+and+efficient+formation+of+colloids+of+biopolymer-based+polyelectrolyte+complexes.">Versatile and efficient formation of colloids of biopolymer-based polyelectrolyte complexes.</a> Biomacromolecules. 5 (5), 1882-1892 (2004).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

كما ذكر أعلاه، يتم تشكيل النانوية DS-CS من خلال تحييد تهمة بين polyanion (DS) وpolycation (CS) الجزيئات. منذ التفاعل تهمة يحدث بسهولة خلال الاصطدام الجزيئية، وتركيز الحلول البوليمر وسرعة التحريك أثناء الخلط هو أمر حاسم لحجم الجسيمات الناتجة. والاتجاه العام هو أن أكثر المخفف DS وCS حل?...

كبريتات ديكستران (DS) والشيتوزان (CS) هي السكريات مع عدة مجموعات استبداله سلفات سالبة الشحنة (في DS)، أو مجموعات أمين موجبة الشحنة (deacetylated CS). عندما مختلطة في محلول مائي، والسكريات اثنين تشكل المجمعات متضاعف الكتروليتي من خلال التفاعلات كهرباء. المجمعات الناتجة قد شكل المجاميع الكبيرة التي سيتم فصل-التخلص من محلول مائي (رواسب)، أو الجسيمات الصغيرة التي هي المياه التشتت (الغروية). الظروف الخاصة التي تساهم في هذه النتائج وقد تم دراسة على نطاق واسع، كما تم تلخيص وتوضيح بالتفصيل في استعراض حديث 1. ومن بين هذه الشروط، واثنين من المتطلبات الأساسية لإنتاج جزيئات الماء تبعثر هي يجب أن 1) لديهم البوليمرات اتهم معاكس مختلفة إلى حد كبير الكتلة المولية. و 2) أن تكون مختلطة في نسبة غير متكافئة. هذه الظروف ستسمح للقطاعات البوليمرية المعقد المسؤول محايد الناتجة عن تهمةتحييد لفصل وتشكل جوهر الجسيمات، والبوليمر الزائد لتشكيل الغلاف الخارجي 1. المقصود من تلك الجسيمات غليكان الموصوفة في هذا البروتوكول للتسليم الرئوي، وتهدف إلى أن تكون صافية سالبة الشحنة، وذات أبعاد نانومتر. التهمة سطح السلبي يقلل من احتمال امتصاص الخلايا للجسيمات 2،3. الجسيمات البعد نانومتر تسهيل المرور عبر الممرات الهوائية البعيدة. لتحقيق هذا الهدف، ومقدار DS المستخدمة في هذا المستحضر هو ما يزيد من CS (نسبة الوزن 3: 1)؛ وعالية الوزن الجزيئي DS (الوزن المتوسط ​​MW 500،000) ومنخفضة الوزن الجزيئي CS (المدى MW 50-190 كيلو دالتون، 75-85٪ deacetylated) وتستخدم. SDF-1α عامل صاروخ موجه الخلايا الجذعية، والذي يمارس وظيفة صاروخ موجه من خلال نشاطها الكيميائي. SDF-1α يلعب دورا هاما في صاروخ موجه وصيانة الخلايا الجذعية المكونة للدم في نخاع العظام، وتوظيف PROGEخلايا nitor إلى الأنسجة الطرفية لإصلاح إصابة 4،5. SDF-1α له موقع ملزم الهيبارين في تسلسل البروتين، مما يسمح للبروتين لربط الهيبارين / كبريتات heparan، dimers النموذج، تكون محمية من البروتيني (CD26 / DPPIV) تعطيل، وتتفاعل مع الخلايا المستهدفة من خلال مستقبلات سطح الخلية 6-8. DS له خصائص هيكلية مماثلة الهيبارين / كبريتات heparan. وبالتالي فإن الربط من قوات الدفاع الذاتى-1α لDS تكون مماثلة لتلك التي بروابط لها البوليمرية الطبيعية. في بروتوكول التالية، ونحن تصف إعداد النانوية SDF-1α-DS-CS. وتمثل الإجراءات احدة من الصيغ التي تم دراستها سابقا 9. ويتم تكييف البروتوكول في الأصل من التحقيق النانوية VEGF-DS-CS 10. ووصف إعداد نطاق ضيق، والتي يمكن زيادتها بسهولة مع حلول الأسهم نفسها وظروف التحضير. بعد التحضير، وتتميز الجزيئات بذ فحص حجمها، وإمكانات زيتا ومدى التأسيس SDF-1α، في المختبر الافراج عن الوقت، ونشاط دمج قوات الدفاع الذاتى-1α.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="489">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:255px;">Name</td>
			<td style="width:136px;">Company</td>
			<td style="width:99px;">Catalog number</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dextran sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP1585-100</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Chitosan, low molecular weight&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>448869</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Zinc sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>204986</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">D-Mannitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9546</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">UltraPure water&#160;</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td>10977-023</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SDF-1&#945;</td>
			<td>Prepared according to reference 8.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringe filter, PES membrane 0.22 um.&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Magnetic Micro Stirring Bars (2 x 7 mm)</td>
			<td>Fisher&#160;</td>
			<td>14-513-63</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass vial Kit; SUN-SRi</td>
			<td>Fisher&#160;</td>
			<td>14-823-182</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Delsa Nano C Particle Analyzer&#160;</td>
			<td>Backman Coulter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eppendorf UVette Cuvets</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>952010069</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">4&#8211;20% Mini-PROTEAN TGX Gel</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>456-1096</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GelCode Blue Safe Protein Stain</td>
			<td>Fisher&#160;</td>
			<td>PI-24592</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Molecular Imager VersaDoc MP 4000 System</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>170-8640</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Corning Transwell Permeable Supports</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3421</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accuri C6 Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pyrogent plus kit</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9753738</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and characterization of sdf-1&#945;-chitosan-dextran sulfate nanoparticles

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under appropriate conditions. The glycan nanoparticles are useful carriers for protein factors, which facilitate the in vivo delivery of the proteins and sustain their retention in the targeted tissue. The glycan polyelectrolyte complexes are also ideal for protein delivery, as the incorporation is carried out in aqueous solution, which reduces the likelihood of inactivation of the proteins. Proteins with a heparin-binding site adhere to dextran sulfate readily, and are, in turn, stabilized by the binding. These particles are also less inflammatory and toxic when delivered in vivo. In the protocol described below, SDF-1&#945; (Stromal cell-derived factor-1&#945;), a stem cell homing factor, is first mixed and incubated with dextran sulfate. Chitosan is added to the mixture to form polyelectrolyte complexes, followed by zinc sulfate to stabilize the complexes with zinc bridges. The resultant SDF-1&#945;-DS-CS particles are measured for size (diameter) and surface charge (zeta potential). The amount of the incorporated SDF-1&#945; is determined, followed by measurements of its in vitro release rate and its chemotactic activity in a particle-bound form.

يتم تحديد حجم وزيتا إمكانات مستعدة الجسيمات SDF-1α-DS-CS مع محلل الجسيمات الشكل 1 يوضح تحليل قياس الحجم. من نتائج cumulants تم الحصول عليها من أربعة القياسات المتكررة، فإن متوسط ​​قطرها الهيدروديناميكية من الجسيمات SDF-1α-DS-CS هو 661 ± 8.2 (نانومتر) والتشتت المتعدد هو 0.23 ± 0...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Characterization of SDF-1Î±-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles at JoVE.com

Preparation and Characterization of SDF-1&amp;#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

The objective of this protocol is to incorporate SDF-1&#945;, a stem cell homing factor, into dextran sulfate-chitosan nanoparticles. The resultant particles are measured for their size and zeta potential, as well as the content, activity, and in vitro release rate of SDF-1&#945; from the nanoparticles.

إعداد وتوصيف SDF-1α-الشيتوزان-ديكستران سلفات النانوية

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

preparation-characterization-sdf-1-chitosan-dextran-sulfate

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

12.3K Views.  Brigham and Women's Hospital and Harvard Medical School. The objective of this protocol is to incorporate SDF-1α, a stem cell homing factor, into dextran sulfate-chitosan nanoparticles. The resultant particles are measured for their size and zeta potential, as well as the content, activity, and in vitro release rate of SDF-1α from the nanoparticles.

Video: Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Preparation of Silica Nanoparticles Through Microwave-assisted Acid-catalysis

Microwave-assisted synthetic techniques were used to quickly and reproducibly produce silica nanoparticle sols using an acid catalyst with nanoparticle diameters ranging from 30-250 nm by varying the reaction conditions. Through the selection of a microwave compatible solvent, silicic acid precursor, catalyst, and microwave irradiation time, these microwave-assisted methods were capable of overcoming the previously reported shortcomings associated with synthesis of silica nanoparticles using microwave reactors. The siloxane precursor was hydrolyzed using the acid catalyst, HCl. Acetone, a low-tan &#948; solvent, mediates the condensation reactions and has minimal interaction with the electromagnetic field. Condensation reactions begin when the silicic acid precursor couples with the microwave radiation, leading to silica nanoparticle sol formation. The silica nanoparticles were characterized by dynamic light scattering data and scanning electron microscopy, which show the materials&#39; morphology and size to be dependent on the reaction conditions. Microwave-assisted reactions produce silica nanoparticles with roughened textured surfaces that are atypical for silica sols produced by St&#246;ber&#39;s methods, which have smooth surfaces.

Silica nanoparticles were prepared using acid-catalysis of a siloxane precursor and microwave-assisted synthetic techniques resulting in the controlled growth of nanomaterials ranging from 30-250 nm in diameter. The growth dynamics can be controlled by varying the initial silicic acid concentration, time of the reaction, and temperature of reaction.

Microwave-assisted synthetic techniques were used to quickly and reproducibly produce silica nanoparticle sols using an acid catalyst with nanoparticle ...

Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles

Amphiphilic block copolymers like polyethyleneglycol-block-polylactic acid (PEG-b-PLA) can self-assemble into micelles above their critical micellar concentration forming hydrophobic cores surrounded by hydrophilic shells in aqueous environments. The core of these micelles can be utilized to load hydrophobic, poorly water soluble drugs like docetaxel (DTX) and everolimus (EVR). Systematic characterization of the micelle structure and drug loading capabilities are important before in vitro and in vivo studies can be conducted. The goal of the protocol described herein is to provide the necessary characterization steps to achieve standardized micellar products. DTX and EVR have intrinsic solubilities of 1.9 and 9.6 &#181;g/ml respectively Preparation of these micelles can be achieved through solvent casting which increases the aqueous solubility of DTX and EVR to 1.86 and 1.85 mg/ml, respectively. Drug stability in micelles evaluated at room temperature over 48 hr indicates that 97% or more of the drugs are retained in solution. Micelle size was assessed using dynamic light scattering and indicated that the size of these micelles was below 50 nm and depended on the molecular weight of the polymer. Drug release from the micelles was assessed using dialysis under sink conditions at pH 7.4 at 37 oC over 48 hr. Curve fitting results indicate that drug release is driven by a first order process indicating that it is diffusion driven.

The goal of this protocol is to describe the preparation and characterization of physically entrapped, poorly water soluble drugs in micellar drug delivery systems composed of amphiphilic block copolymers.

إعداد وتوصيف الفردية والمتعددة المخدرات تحميل جسديا شرك البوليمرية المذيلات

Amphiphilic block copolymers like polyethyleneglycol-block-polylactic acid (PEG-b-PLA) can self-assemble into micelles above their critical micellar ...

Synthesis, Characterization, and Functionalization of Hybrid Au/CdS and Au/ZnS Core/Shell Nanoparticles

Plasmonic nanoparticles are an attractive material for light harvesting applications due to their easily modified surface, high surface area and large extinction coefficients which can be tuned across the visible spectrum. Research into the plasmonic enhancement of optical transitions has become popular, due to the possibility of altering and in some cases improving photo-absorption or emission properties of nearby chromophores such as molecular dyes or quantum dots. The electric field of the plasmon can couple with the excitation dipole of a chromophore, perturbing the electronic states involved in the transition and leading to increased absorption and emission rates. These enhancements can also be negated at close distances by energy transfer mechanism, making the spatial arrangement of the two species critical. Ultimately, enhancement of light harvesting efficiency in plasmonic solar cells could lead to thinner and, therefore, lower cost devices. The development of hybrid core/shell particles could offer a solution to this issue. The addition of a dielectric spacer between a gold nanoparticles and a chromophore is the proposed method to control the exciton plasmon coupling strength and thereby balance losses with the plasmonic gains. A detailed procedure for the coating of gold nanoparticles with CdS and ZnS semiconductor shells is presented. The nanoparticles show high uniformity with size control in both the core gold particles and shell species allowing for a more accurate investigation into the plasmonic enhancement of external chromophores.

The synthesis of uniform gold nanoparticles coated with semiconductor shells of CdS or ZnS is performed. The semiconductor coating is conducted by first depositing a silver sulfide shell and exchanging the silver cations for zinc or cadmium cations.

التوليف، وتوصيف، وFunctionalization الهجين الاتحاد الافريقي / أقراص مدمجة والاتحاد الافريقي / ZnS الأساسية / شل النانوية

Plasmonic nanoparticles are an attractive material for light harvesting applications due to their easily modified surface, high surface area and large ...

Synthesis and Characterization of Supramolecular Colloids

Control over colloidal assembly is of utmost importance for the development of functional colloidal materials with tailored structural and mechanical properties for applications in photonics, drug delivery and coating technology. Here we present a new family of colloidal building blocks, coined supramolecular colloids, whose self-assembly is controlled through surface-functionalization with a benzene-1,3,5-tricarboxamide (BTA) derived supramolecular moiety. Such BTAs interact via directional, strong, yet reversible hydrogen-bonds with other identical BTAs. Herein, a protocol is presented that describes how to couple these BTAs to colloids and how to quantify the number of coupling sites, which determines the multivalency of the supramolecular colloids. Light scattering measurements show that the refractive index of the colloids is almost matched with that of the solvent, which strongly reduces the van der Waals forces between the colloids. Before photo-activation, the colloids remain well dispersed, as the BTAs are equipped with a photo-labile group that blocks the formation of hydrogen-bonds. Controlled deprotection with UV-light activates the short-range hydrogen-bonds between the BTAs, which triggers the colloidal self-assembly. The evolution from the dispersed state to the clustered state is monitored by confocal microscopy. These results are further quantified by image analysis with simple routines using ImageJ and Matlab. This merger of supramolecular chemistry and colloidal science offers a direct route towards light- and thermo-responsive colloidal assembly encoded in the surface-grafted monolayer.

A protocol for the synthesis and characterization of colloids coated with supramolecular moieties is described. These supramolecular colloids undergo self-assembly upon the activation of the hydrogen-bonds between the surface-anchored molecules by UV-light.

توليف وتوصيف المواد الغروية Supramolecular

Control over colloidal assembly is of utmost importance for the development of functional colloidal materials with tailored structural and mechanical ...

Sulfate Separation by Selective Crystallization with a Bis-iminoguanidinium Ligand

A simple and effective method for selective sulfate separation from aqueous solutions by crystallization with a bis-guanidinium ligand, 1,4-benzene-bis(iminoguanidinium) (BBIG), is demonstrated. The ligand is synthesized as the chloride salt (BBIG-Cl) by in situ imine condensation of terephthalaldehyde with aminoguanidinium chloride in water, followed by crystallization as the sulfate salt (BBIG-SO4). Alternatively, BBIG-Cl is synthesized ex situ in larger scale from ethanol. The sulfate separation ability of the BBIG ligand is demonstrated by selective and quantitative crystallization of sulfate from seawater. The ligand can be recycled by neutralization of BBIG-SO4 with aqueous NaOH and crystallization of the neutral bis-iminoguanidine, which can be converted back into BBIG-Cl with aqueous HCl and reused in another separation cycle. Finally, 35S-labeled sulfate and &#946; liquid scintillation counting are employed for monitoring the sulfate concentration in solution. Overall, this protocol will instruct the user in the necessary skills to synthesize a ligand, employ it in the selective crystallization of sulfate from aqueous solutions, and quantify the separation efficiency.

A protocol for in situ aqueous synthesis of a bis(iminoguanidinium) ligand and its utilization in selective separation of sulfate is presented.

فصل كبريتات التي كتبها الانتقائية تبلور مع يجند مكرر iminoguanidinium

A simple and effective method for selective sulfate separation from aqueous solutions by crystallization with a bis-guanidinium ligand, ...

Preparation and In Vitro Characterization of Dendrimer-based Contrast Agents for Magnetic Resonance Imaging

Paramagnetic complexes of gadolinium(III) with acyclic or macrocyclic chelates are the most commonly used contrast agents (CAs) for magnetic resonance imaging (MRI). Their purpose is to enhance the relaxation rate of water protons in tissue, thus increasing the MR image contrast and the specificity of the MRI measurements. Current clinically approved contrast agents are low molecular weight molecules that are rapidly cleared from the body. The use of dendrimers as carriers of paramagnetic chelators can play an important role in the future development of more efficient MRI contrast agents. Specifically, the increase in local concentration of the paramagnetic species results in a higher signal contrast. Furthermore, this CA provides a longer tissue retention time due to its high molecular weight and size. Here, we demonstrate a convenient procedure for the preparation of macromolecular MRI contrast agents based on poly(amidoamine) (PAMAM) dendrimers with monomacrocyclic DOTA-type chelators (DOTA &#8211; 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetate). The chelating unit was appended by exploiting the reactivity of the isothiocyanate (NCS) group towards the amine surface groups of the PAMAM dendrimer to form thiourea bridges. Dendrimeric products were purified and analyzed by means of nuclear magnetic resonance spectroscopy, mass spectrometry, and elemental analysis. Finally, high resolution MR images were recorded and the signal contrasts obtained from the prepared dendrimeric and the commercially available monomeric agents were compared.

Preparation and In Vitro Characterization of Dendrimer-based Contrast Agents for Magnetic Resonance Imaging

This protocol describes the preparation and characterization of a dendrimeric magnetic resonance imaging (MRI) contrast agent that carries cyclen-based macrocyclic chelates coordinating paramagnetic gadolinium ions. In a series of MRI experiments in vitro, this agent produced an amplified MRI signal when compared to the commercially available monomeric analogue.

إعداد و<em&gt; في المختبر</em&gt; توصيف وكلاء التباين القائم Dendrimer للتصوير بالرنين المغناطيسي

Paramagnetic complexes of gadolinium(III) with acyclic or macrocyclic chelates are the most commonly used contrast agents (CAs) for magnetic resonance ...

Preparation and Characterization of C60/Graphene Hybrid Nanostructures

Physical thermal deposition in a high vacuum environment is a clean and controllable method for fabricating novel molecular nanostructures on graphene. We present methods for depositing and passively manipulating C60 molecules on rippled graphene that advance the pursuit of realizing applications involving 1D C60/graphene hybrid structures. The techniques applied in this exposition are geared towards high vacuum systems with preparation areas capable of supporting molecular deposition as well as thermal annealing of the samples. We focus on C60 deposition at low pressure using a homemade Knudsen cell connected to a scanning tunneling microscopy (STM) system. The number of molecules deposited is regulated by controlling the temperature of the Knudsen cell and the deposition time. One-dimensional (1D) C60 chain structures with widths of two to three molecules can be prepared via tuning of the experimental conditions. The surface mobility of the C60 molecules increases with annealing temperature allowing them to move within the periodic potential of the rippled graphene. Using this mechanism, it is possible to control the transition of 1D C60 chain structures to a hexagonal close packed quasi-1D stripe structure.

Preparation and Characterization of C60/Graphene Hybrid Nanostructures

Here we present a protocol for the fabrication of C60/graphene hybrid nanostructures by physical thermal evaporation. Particularly, the proper manipulation of deposition and annealing conditions allow the control over the creation of 1D and quasi 1D C60 structures on rippled graphene.

إعداد وتوصيف ج60/Graphene الهجين النانو

Physical thermal deposition in a high vacuum environment is a clean and controllable method for fabricating novel molecular nanostructures on graphene. We ...

Ligand-Mediated Nucleation and Growth of Palladium Metal Nanoparticles

The size, size distribution and stability of colloidal nanoparticles are greatly affected by the presence of capping ligands. Despite the key contribution of capping ligands during the synthesis reaction, their role in regulating the nucleation and growth rates of colloidal nanoparticles is not well understood. In this work, we demonstrate a mechanistic investigation of the role of trioctylphosphine (TOP) in Pd nanoparticles in different solvents (toluene and pyridine) using in situ SAXS and ligand-based kinetic modeling. Our results under different synthetic conditions reveal the overlap of nucleation and growth of Pd nanoparticles during the reaction, which contradicts the LaMer-type nucleation and growth model. The model accounts for the kinetics of Pd-TOP binding for both, the precursor and the particle surface, which is essential to capture the size evolution as well as the concentration of particles in situ. In addition, we illustrate the predictive power of our ligand-based model through designing the synthetic conditions to obtain nanoparticles with desired sizes. The proposed methodology can be applied to other synthesis systems and therefore serves as an effective strategy for predictive synthesis of colloidal nanoparticles.

The main goal of this work is to elucidate the role of capping agents in regulating the size of palladium nanoparticles by combining in situ small angle x-ray scattering (SAXS) and ligand-based kinetic modeling.

يجند بوساطة التنو ونمو البلاديوم معدنية جسيمات نانوية

The size, size distribution and stability of colloidal nanoparticles are greatly affected by the presence of capping ligands. Despite the key contribution ...

High Resolution Physical Characterization of Single Metallic Nanoparticles

Individual molecules can be detected and characterized by measuring the degree by which they reduce the ionic current flowing through a single nanometer-scale pore. The signal is characteristic of the molecule&#39;s physicochemical properties and its interactions with the pore. We demonstrate that the nanopore formed by the bacterial protein exotoxin Staphylococcus aureus alpha hemolysin (&#945;HL) can detect polyoxometalates (POMs, anionic metal oxygen clusters), at the single molecule limit. Moreover, multiple degradation products of 12-phosphotungstic acid POM (PTA, H3PW12O40) in solution are simultaneously measured. The single molecule sensitivity of the nanopore method allows for POMs to be characterized at significantly lower concentrations than required for nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. This technique could serve as a new tool for chemists to study the molecular properties of polyoxometalates or other metallic clusters, to better understand POM synthetic processes, and possibly improve their yield. Hypothetically, the location of a given atom, or the rotation of a fragment in the molecule, and the metal oxidation state could be investigated with this method. In addition, this new technique has the advantage of allowing the real-time monitoring of molecules in solution.&#160;

Here, we present a protocol to detect discrete metal oxygen clusters, polyoxometalates (POMs), at the single molecule limit using a biological nanopore-based electronic platform. The method provides a complementary approach to traditional analytical chemistry tools used in the study of these molecules.

التوصيف الفيزيائي عالي الاستبانة للجسيمات النانوية المعدنية المفردة

Individual molecules can be detected and characterized by measuring the degree by which they reduce the ionic current flowing through a single ...

Synthesis and Characterization of Amphiphilic Gold Nanoparticles

Gold nanoparticles covered with a mixture of 1-octanethiol (OT) and 11-mercapto-1-undecane sulfonic acid (MUS) have been extensively studied because of their interactions with cell membranes, lipid bilayers, and viruses. The hydrophilic ligands make these particles colloidally stable in aqueous solutions and the combination with hydrophobic ligands creates an amphiphilic particle that can be loaded with hydrophobic drugs, fuse with the lipid membranes, and resist nonspecific protein adsorption. Many of these properties depend on nanoparticle size and the composition of the ligand shell. It is, therefore, crucial to have a reproducible synthetic method and reliable characterization techniques that allow the determination of nanoparticle properties and the ligand shell composition. Here, a one-phase chemical reduction, followed by a thorough purification to synthesize these nanoparticles with diameters below 5 nm, is presented. The ratio between the two ligands on the surface of the nanoparticle can be tuned through their stoichiometric ratio used during synthesis. We demonstrate how various routine techniques, such as transmission electron microscopy (TEM), nuclear magnetic resonance (NMR), thermogravimetric analysis (TGA), and ultraviolet-visible (UV-Vis) spectrometry, are combined to comprehensively characterize the physicochemical parameters of the nanoparticles.

Amphiphilic gold nanoparticles can be used in many biological applications. A protocol to synthesize gold nanoparticles coated by a binary mixture of ligands and a detailed characterization of these particles is presented.

تركيب وتوصيف جسيمات نانوية الذهب أمفيفيليك

Gold nanoparticles covered with a mixture of 1-octanethiol (OT) and 11-mercapto-1-undecane sulfonic acid (MUS) have been extensively studied because of ...