The authors would like to thank the following funding sources NIH ES020353 and the Colgate-Palmolive Alternative Research Grant award for making this work possible.

1. إعداد البكتيريا تغذية ملاحظة: يصف هذا القسم إعداد البكتيريا تغذية (E. القولونية سلالة OP50). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل مستعمرة واحدة من E. القولونية سلالة OP50 من مرق استذابة (LB) لوحة أجار وجو معقم و مطهر تطعيم في 300 مل من مرق LB تعقيمها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للثقافة تلقيح لتنمو بين عشية وضحاها في شاكر في 200 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية، حتى يتم التوصل التشبع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل OP50 إلى 6 العقيمة، 50 مل أنابيب مخروطية وزنه مسبقا. بيليه البكتيريا عن طريق الطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 6،000 دورة في الدقيقة (5،000 x ج). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل طاف ويغسل البكتيريا مع 50 مل من العقيمة M9. كرر مرتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل الثاني إزالة M9 المتبقية، وضمان أن لا M9 المتبقي في الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وزن بيليه عن طريق وزن الأنبوب الذي يحتوي على بيليه البكتيريا وطرح وزن 50 مل أنبوب مخروطي الشكل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend وأنا بيليهن M9 بتركيز 100 ملغ / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين حل OP50 في 4 درجات مئوية حتى يتم استخدامه للثقافة دودة. </li></ol> 2. إعداد نيماتودا النمو المتوسطة لوحات (NGM) بيتري ملاحظة: يصف هذا القسم إعداد لوحات NGM بيتري، والتي هي لوحات حيث C. تتم المحافظة على الديدان ايليجانس بشكل روتيني في المختبر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف آغار المتوسطة NGM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الإجراءات العقيمة، والاستغناء 17 مل من NGM حل أجار إلى 6 سم لوحات بيتري باستخدام مضخة تمعجية. ملاحظة: هناك كمية ثابتة من أجار في لوحات يقلل من الحاجة إلى إعادة تركيز المجهر عند التبديل من لوحة إلى أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك لوحات في درجة حرارة الغرفة لمدة 2-3 أيام قبل الاستخدام للسماح للأجار يصلب والسماح للرطوبة الزائدة لتتبخر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البذور لوحات NGM باستخدام تقنية معقمة. تطبيق 1-2 قطرات من الثقافة السائلة OP50 وتنتشر باستخدام قضيب الزجاج. تأكد من عدملنشر العشب البكتيريا على طول الطريق إلى حواف الصفائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسمحوا العشب OP50 لتنمو لمدة 1-2 أيام في درجة حرارة الغرفة قبل استخدام لوحات لتنمو الديدان. </li></ol> 3. إعداد السكان دودة متزامن ملاحظة: دورة حياة C. وتتألف ايليجانس من المرحلة الجنينية، وأربع مراحل اليرقات (L1-L4) والبلوغ. يصف هذا القسم إعداد السكان في سن متزامن من الديدان. جميع المواد القادمة في اتصال مع C.elegans بعد العلاج التبييض يجب أن تكون معقمة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم 1 - إعداد حامل دودة السكان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام لوحات NGM فيها غالبية السكان دودة تتكون من تجويع اليرقات L1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع اليرقات L1 مع دودة تعقيمها انتقاء ونقلها إلى الطازج 6 لوحات سم NGM المصنف مع OP50. احتضان لمدة ما يقرب من 65 ساعة على 20 درجة مئوية حتى غالبية الديدان هم من البالغين حامل. إلىتجنب لوحة الاكتظاظ والسماح للديدان أن ينمو دون استنفاد البكتيريا، لا نقل أكثر من واحد أو اثنين مجموعات من L1 اليرقات إلى كل لوحة NGM الطازجة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم 4 - إنشاء المتزامنة L1 اليرقات السكان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الديدان الحاملة للبيض من لوحات NGM من قبل غسلها مع 1-2 مل من M9 ونقلها إلى أنبوب مخروطي 15 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للديدان الحاملة للبيض الرواسب في قاع 15 مل أنبوب مخروطي لحوالي 5-10 دقيقة. إزالة طاف دون الإخلال بيليه دودة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل بيليه الدودة إلى 2-4 أنابيب microcentrifuge وإضافة 1 مل من التبييض / هيدروكسيد الصوديوم الحل. احتضان لمدة 2-3 دقيقة في RT. رصد التقدم المحرز في رد الفعل تحت stereomicroscope لتأكيد كل الديدان قد لقوا حتفهم. لا التبييض أطول من 5 دقائق كما الأجنة يمكن أن يموت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الديدان بواسطة الطرد المركزي لمدة 1 دقيقة في 3،000 دورة في الدقيقة (900 x ج). إزالة طاف وإضافة 1 مل من العقيمة M9 لتحييد رد فعل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الديدان مرتين من قبل الطرد المركزي لمدة 1 دقيقة في 3،000 دورة في الدقيقة (900 x ج). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة طاف وإضافة M9 ليصل الى 100-200 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الزجاج ماصة باستير إضافة قطرة من دودة / M9 مزيج لمسح لوحات NGM واحتضان لهم لمدة 24 ساعة على الأقل عند 20 درجة مئوية للسماح للأجنة ليفقس. ملاحظة: بدون الغذاء سيتم توقف نمو اليرقات في المرحلة L1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 5 - إنشاء المتزامنة L4 اليرقات السكان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع اليرقات L1 من لوحات NGM واضحة من قبل غسل لوحات مع 1-2 مل من M9 ونقلها إلى أنبوب مخروطي 15 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للالديدان البالغة ميت الرواسب إلى أسفل أنبوب 15 مل المخروطية لمدة 5 دقائق تقريبا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع طاف، حيث الديدان L1 هي، في الجديد مخروطي 15 مل أنبوب، ويعجل الديدان بواسطة الطرد المركزي لمدة 2 دقيقة في 2،600 دورة في الدقيقة (1،000 x ج). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة طاف جنيهأفينغ ما يقرب من 500 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد تركيز الديدان في حل M9 عن طريق حساب عدد من الديدان في 10 ميكرولتر قطرات باستخدام stereomicroscope. عدد لا يقل عن 5 قطرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط تركيز الديدان إلى 20-25 الديدان / ميكرولتر وإضافة 50 ميكرولتر من دودة / M9 مزيج لوحات NGM المصنف مع OP50. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 65 ساعة على 15 درجة مئوية (للحضانة من خلال نهاية الأسبوع) السماح للسكان متزامنة L1 لتنمو حتى تصل إلى مرحلة L4. </li></ol></li></ol> 4. التعرض للديدان للمواد الكيميائية في لوحات 96-جيدا ملاحظة: يصف هذا القسم استخدام Pxol1 :: مراسل النسخي GFP تحتوي على C. سلالة ايليجانس للكشف عن تحريض عدم توازن الصبغيات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع اليرقات L4 من لوحات NGM واضحة من قبل غسل لوحات مع 1-2 مل من M9 ونقلها إلى أنبوب مخروطي 15 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للL4 الديدان الرواسب إلى أسفل15 مل أنبوب مخروطي لحوالي 5-10 دقيقة. إزالة طاف دون الإخلال بيليه دودة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 3-5 مل من M9 وتحديد تركيز الديدان في حل M9 عن طريق حساب عدد من الديدان في 10 ميكرولتر قطرات باستخدام stereomicroscope. عدد لا يقل عن 5 قطرات لكل عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend والديدان بتركيز 1،000 الديدان / مل في M9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع البكتيريا OP50 من الباب 1 10 أضعاف مع M9. تأكد من أن البكتيريا معلق تصل درجة حرارة الغرفة لانخفاض درجة الحرارة تؤثر تطوير دودة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة الأقنية، أولا إضافة 100 ميكرولتر من دودة / M9 مزيج (من الخطوة 4.4) ثم قم بإضافة 400 ميكرولتر من البكتيريا OP50 المخفف (من الخطوة 4.5) إلى كل بئر من 2 مل جولة عميقة أسفل لوحة 96-جيدا. في النهاية، سوف يكون كل بئر 100 الديدان في 500 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.5 ميكرولتر من إما الكيميائية الاختبار أو عنصر التحكم المناسب إلى آبار المطلوب، لتحقيق concentr النهائي المقترحأوجه من 100 ميكرومتر، وتركيز تستخدم عادة في شاشات الكيميائية في C. ايليجانس 12. كشف الإيثانول أو DMSO الضوابط المذيبات في تركيز النهائي من 0.1٪. ملاحظة: نوصي استخدام نوكودازول (100 ميكرومتر)، ومراقبة إيجابية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم لوحة باستخدام فيلم لاصقة. تأكد من ختم لوحة جيدا لمنع التلوث المتبادل بين الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التفاف لوحة مع رقائق الألومنيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل لوحة لشاكر (170-180 دورة في الدقيقة) من درجة حرارة مناسبة لطول مناسب من الزمن (24 أو 65 ساعة). درجة حرارة الغرفة يؤثر على نمو الديدان. الحفاظ على درجة الحرارة نحو 20 درجة مئوية. </li></ol> 5. اكتساب صورة حامل الديدان في لوحة 384 جيدا ملاحظة: يصف هذا القسم استخدام المجهر نسبة عالية لصورة Pxol1 يتعرض :: الديدان GFP، لتصور التعبير عن GFP في الأجنة داخل الرحم من المنحرفين الكبار. إلىكل لوحة 384 جيدا ليتم عرضه، واستخدام الديدان من لوحات 4 × 96-جيدا. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التعرض للمواد الكيميائية في شاكر، والسماح للوحة 96-جيدا بقية لمدة 10-15 دقيقة للسماح للالديدان البالغة من رسوبيات إلى الجزء السفلي من لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة متعدد القنوات، وإزالة 350 ميكرولتر من M9، والحرص جدا على عدم تعكير صفو الديدان في الجزء السفلي من لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الديدان مع 1 مل من M9 وكرر الخطوة 5.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة متعدد القنوات، وإزالة 1 مل من M9، والحرص على VEY عدم تعكير صفو الديدان في الجزء السفلي من لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة الأقنية، resuspend والديدان في M9 المتبقية وجمع 100 ميكرولتر من دودة / M9 مزيج من لوحات 96-جيدا وتحميله في الآبار من الجدران السوداء / واضحة أسفل لوحة 384 جيدا. كرر العملية باستخدام الديدان من لوحات 4 × 96-جيدا، حتى يتم تحميل جميع الآبار من لوحة 384 جيدا. ملاحظة: من المهم لجميع الآبار لديهم نفس حجم من أجل زيادةكفاءة وسرعة ضبط تلقائي للصورة أثناء عملية الحصول على الصور. وينبغي أن تتضمن كل بئر بين 80 و 100 الديدان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 ميكرولتر من الليفاميزول (100 ميكرومتر) إلى كل بئر والسماح للديدان احتضان لحوالي 30 دقيقة. ملاحظة: الليفاميزول بمثابة مستقبلات ناهض أستيل ويشل الديدان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل لوحة إلى أعلى مستوى المجهر المحتوى widefield قادرة على توفير التصوير الآلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لاقتناء الصور، واستخدام عالية المحتوى الحصول على الصور وتحليل البرامج وفقا للمبادئ التوجيهية للشركة المصنعة. حدد الهدف 4X لاكتساب 1 صورة لكل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء في الحصول على الصور، وضبط المعلمات التصوير GFP إلى 45 ميللي ثانية من التعرض ودقة وضوح الصورة إلى 2،160 X 2،160. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع البيانات مثل عدد الديدان إيجابية GFP مقسوما على إجمالي عدد الديدان في البئر، هذا الاجراء الأخير هو ثابت نسبيا بين الآبار. </li></ol>

<ol>
	<li>Office, U. G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+No.+GAO-06-1032T.">Report No. GAO-06-1032T.</a> Actions are needed to improve the effectiveness of EPA&#8217;s chemical review program. Testimony before the Committee on Environment and Public Works. US Senate. , (2009).</li><li>Fragouli, E., Wells, D., Delhanty, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+abnormalities+in+the+human+oocyte.">Chromosome abnormalities in the human oocyte.</a> Cytogenet Genome Res. 133 (2-4), 107-118 (2011).</li><li>Hassold, T., Hunt, P. A., Sherman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trisomy+in+humans:+incidence,+origin+and+etiology.">Trisomy in humans: incidence, origin and etiology.</a> Curr Opin Genet Dev. 3 (3), 398-403 (1993).</li><li>Heron, M., Hoyert, D. L., Murphy, S. L., Xu, J., Kochanek, K. D., Tejada-Vera, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths:+final+data+for+2006.">Deaths: final data for 2006.</a> Natl Vital Stat Rep. 57 (14), 1-134 (2009).</li><li>Hunt, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meiosis+in+mammals:+recombination,+non-disjunction+and+the+environment.">Meiosis in mammals: recombination, non-disjunction and the environment.</a> Biochem Soc Trans. 34 (Pt 4), 574-577 (2006).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS.Genetics. 91 (1), 67-94 (1979).</li><li>Nicoll, M., Akerib, C. C., Meyer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-chromosome-counting+mechanisms+that+determine+nematode+sex.">X-chromosome-counting mechanisms that determine nematode sex.</a> Nature. 388 (6638), 200-204 (1997).</li><li>Kelly, K. O., Dernburg, A. F., Stanfield, G. M., Villeneuve, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+msh-5+is+required+for+both+normal+and+radiation-induced+meiotic+crossing+over+but+not+for+completion+of+meiosis.">Caenorhabditis elegans msh-5 is required for both normal and radiation-induced meiotic crossing over but not for completion of meiosis.</a> Genetics. 156 (2), 617-630 (2000).</li><li>Allard, P., Kleinstreuer, N. C., Knudsen, T. B., Colaiacovo, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Screening+Platform+for+the+Rapid+Assessment+of+Chemical+Disruption+of+Germline+Function.">A Screening Platform for the Rapid Assessment of Chemical Disruption of Germline Function.</a> Environ Health Perspect. 121 (6), 717-724 (2013).</li><li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Toxicity Testing in the 21st Century: A Vision and a Strategy. , (2007).</li><li>Boyd, W. A., Smith, M. V., Kissling, G. E., Freedman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medium-+and+high-throughput+screening+of+neurotoxicants+using+C.+elegans.">Medium- and high-throughput screening of neurotoxicants using C. elegans.</a> Neurotoxicol Teratol. 32 (1), 68-73 (2010).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

الطريقة الموصوفة هنا يشكل أول استراتيجية واسعة النطاق لتحديد المواد السامة الجرثومية. ويتطلب ذلك استخدام المعدلة وراثيا GFP Pxol-1 :: GFP تحتوي على السلالة التي تقارير بأمانة تحريض عدم توازن الصبغيات في الأجنة المبكرة والذي يستخدم كبديل لضعف الجرثومية. ينطوي على طري?...

هناك ما يقرب من 87،000 من المواد الكيميائية المسجلة للتجارة في الولايات المتحدة، ولكن فقط عدد قليل من هذه قد تم اختبارها للآثار الصحية المحتملة 1. من تلك التي تم اختبارها، تم تقييم سوى جزء للآثار الصحية الإنجابية ويرجع ذلك جزئيا إلى صعوبة في تحديد تحوير الأحداث الإنجابية المبكرة في الثدييات، وخصوصا خلال الإناث تطوير الخلية الجرثومية والتمايز. في الواقع، أول الأحداث الانتصافي تجري خلال المراحل الأولى من التطور الجنيني في الثدييات الإناث، وبالتالي فهي صعبة للوصول إلى وجمع بأعداد مناسبة لأغراض الفحص. يوفر الجرثومية على الرابط الحاسم بين الأجيال، وظيفتها المناسبة تعتمد على التنفيذ الدقيق للبرنامج معقد من الانقسام الخلوي والكروموسومات يسمى الانقسام الاختزالي. ديسريغولاتيون عملية الانتصافي قد يؤدي إلى انخفاض الخصوبة وإنتاجالأمشاج والأجنة مع عدد غير طبيعي من الكروموسومات، وصفته حالة عدم توازن الصبغيات. أخطاء العزل الصبغي في الانقسام الاختزالي هي ذات أهمية كبيرة لصحة الإنسان. شذوذ صبغي شائعة، مع تردد من 1 في 150 ولادة حية، تثلث الصبغي 21 و 18 و 13 وكذلك X و Y أخطاء كروموسوم يجري أنواع الأكثر انتشارا 2،3. وعلاوة على ذلك، والتشوهات الخلقية، بما في ذلك أصول الكروموسومات، هي السبب الرئيسي للوفاة الرضع في الولايات المتحدة 4 إن فكرة أن التأثيرات البيئية يمكن أن تؤثر على الفصل الكروموسومات والسلوك ليس جديدا 5، ولكن لا تزال غير مفهومة. ولذا فمن الأهمية بمكان لتحقيق أي من المواد الكيميائية التي أدخلت بيئتنا تتداخل مع خصوبة الإنسان والتنمية في وقت مبكر والصحة الإنجابية الشاملة. في ضوء هذه القيود المفروضة على نماذج الثدييات، وقد وضعنا شاشة الفحص الإنتاجية العالية لاختبار سمية الإنجابية في الدودة &lt;م&gt; C. ايليجانس. لقد حشدت العديد من الميزات الهامة التي يوفرها هذا النظام النموذجي الوراثية التي يشيع استخدامها مثل صغر حجمها، وانخفاض التكلفة، ودورة التكاثر قصيرة، نسبة عالية من الخلايا الجرثومية وسهولة التلاعب 6. يمكن زراعتها الديدان في لوحات 96-جيدا أو في الثقافات السائل حجم عالية وذلك بسبب شفافيتها يمكن تصوير مباشرة على لوحات للكشف عن صحفيين الفلورسنت. الفحص هو موضح أدناه يستفيد من هذه الخصائص ويستفيد من سلالة دودة تحتوي على مراسل الفلورسنت Pxol-1 :: GFP للكشف عن انقطاع سلالة الجرثومية وتحريض عدم توازن الصبغيات الجنينية. ويستند استخدام هذه السلالة المراسل على البروز نادر عموما من الذكور في السكان دودة خنثوي في المقام الأول. هذه الذكور (&lt;0.2٪) تنشأ بشكل طبيعي من خطأ في الفصل بين كروموسوم X 7. لكن، وكما تعطل الجرثومية يؤدي في كثير من الأحيان إلى أخطاء في فصل الجسميةوheterochromosomes، فإنه يرتبط على حد سواء مع ارتفاع معدل انتشار الإصابة الذكور النمط الظاهري (X missegregation)، وكذلك الفتك الجنينية (صبغي جسدي missegregation). للكشف بسهولة تحريض من الذكور في حين الالتفاف على قضية الفتك الجنينية، ويستخدم مروج المحدد لذكر (XOL-1) لدفع التعبير عن GFP في الأجنة المبكرة لا يزال الواردة في الرحم الدودة. على هذا النحو، ويستخدم ظهور الأجنة، معربا عن GFP كبديل لوجود الأجنة مختل الصيغة الصبغية. تم عرض هذه الطريقة تستخدم في السابق لتحديد الجينات المتورطة في صيانة سلالة الجرثومية والانقسام الاختزالي 8،9. تكييفها لفحص الكيميائي، وتوظيف هذه السلالة في المتوسط ​​إلى شاشة عالية الإنتاجية. الأهم من ذلك أن سلالة تقارير بأمانة aneugenicity من المواد الكيميائية وبالتالي فهي ذات الصلة لنقاط النهاية الإنجابية الثدييات 10. سوف مقايسة الموصوفة هنا تكون مفيدة بشكل خاص لعلماء السموم في إعدادات صناعة الكيماويات الدوائية وتبحثلتقييم بسرعة سمية المواد الكيميائية نحو النهاية الإنجابية. وعلاوة على ذلك، هذا الاختبار محاذاة تماما مع الأولويات الحكومية سلط عليها الضوء في سمية في 21 تقرير القرن الحادي و11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="975">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:129px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:255px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">60mm vented, sharp edge Petri Dishes</td>
			<td style="width:129px;">Tritech</td>
			<td>T3315</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Agar</td>
			<td>Apex</td>
			<td>20-274</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:473px;">Axygen 96 Well Clear Round Bottom 2mL Polypropylene Deep Well Plate</td>
			<td style="width:129px;">Corning</td>
			<td>P-DW-20-C-S</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Bactopeptone</td>
			<td style="width:129px;">Apex</td>
			<td>20-261</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Bacto-tryptone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP1421-2</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Bleach</td>
			<td style="width:129px;">Clorox</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium Chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>AA12316-A1</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cholesterol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>ICN10138225</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">DMSO</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>IC19018680</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">E. coli (OP50)</td>
			<td style="width:129px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Ethanol 200 proof</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>EM-4455S</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Greiner CELLSTAR 384 well plates</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1937-32EA</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageXpress Micro XLS System&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Levamisole hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Fluka</td>
			<td style="width:119px;">31742</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate Anhydrous (MgSO4)</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>97061-438</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MetaXpress High Content Image Acquisition &#38; Analysis Software&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Rayon Films for Biological Cultures</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>60941-086</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:473px;">Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S318</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:473px;">Sodium Phosphate Dibasic (Na2HPO4)</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>BDH0316</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:473px;">Stereomicroscope&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ 745</td>
			<td style="width:255px;">This microscope has a total magnification form 3.35x to 300x. Any microscope with similar characteristics will work.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:473px;">TY2441 C. elegans, Pxol-1::GFP reporter strain&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Yeast extract</td>
			<td style="width:129px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">212750</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

comprehensive assessment of germline chemical toxicity using the nematode caenorhabditis elegans

لقد كان تحديد سمية الإنجابية من آلاف المواد الكيميائية الموجودة في بيئتنا واحدة من أكثر التحديات محيرة في مجال الصحة البيئية. ويرجع ذلك جزئيا إلى ندرة نظم النموذج الذي يمكن (1) تلخيص بدقة ملامح مفاتيح العمليات الإنجابية و(2) القيام بذلك في المتوسط ​​إلى الإنتاجية العالية الموضة، من دون الحاجة إلى وجود عدد كبير من الحيوانات الفقارية. وصفنا هنا مقايسة في C. الخيطية ايليجانس التي تسمح للالتعرف السريع على المواد السامة الجرثومية من خلال رصد تحريض الأجنة مختل الصيغة الصبغية. من خلال الاستفادة من خط مراسل GFP، وأخطاء في العزل الصبغي الناجمة عن انقطاع سلالة الجرثومية وتصور بسهولة وكميا بواسطة المجهر الآلي مضان. وهكذا فإن فحص مجموعة معينة من المركبات لسميتها يمكن أن يؤديها في شكل لوحة 96- إلى 384 جيدا في غضون أيام. تحليل ثانوي للح إيجابيةلها يمكن القيام بها لتحديد ما إذا كان الشذوذ الصبغي نشأت من اختلال الانتصافي أو من أوائل الجنينية أخطاء كروموسوم الفصل. وإجمالا، يمثل هذا الاختبار استراتيجية مرور الأول-سريعة للتقييم السريع من اختلال وظيفي الجرثومية التالية التعرض للمواد الكيميائية.

التعرض للPxol-1 :: GFP مراسل سلالة لعوامل كيميائية مثل أنيبيب السم نوكودازول (الشكل 1) يؤدي إلى تحريض على نسبة عالية من الأجنة، معربا عن GFP في الرحم من المنحرفين الكبار يتعرض مقارنة السيطرة DMSO. الأجنة GFP إيجابية هي أكثر إشراقا بكثير من ضعف مضان الخلفية التي لوح...

Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

We describe the detailed steps of a high-throughput chemical assay in the nematode Caenorhabditis elegans used to assess germline toxicity. In this assay, disruption of germline function following chemical exposure is monitored using a fluorescent reporter specific to aneuploid embryos.

تقييم شامل من سلالة الجرثومية الكيماوية السمية باستخدام نيماتودا<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

comprehensive-assessment-germline-chemical-toxicity-using-nematode

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

8.0K Views.  University of California, Los Angeles. We describe the detailed steps of a high-throughput chemical assay in the nematode Caenorhabditis elegans used to assess germline toxicity. In this assay, disruption of germline function following chemical exposure is monitored using a fluorescent reporter specific to aneuploid embryos.

Video: Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Human Pluripotent Stem Cell Based Developmental Toxicity Assays for Chemical Safety Screening and Systems Biology Data Generation

Efficient protocols to differentiate human pluripotent stem cells to various tissues in combination with -omics technologies opened up new horizons for in vitro toxicity testing of potential drugs. To provide a solid scientific basis for such assays, it will be important to gain quantitative information on the time course of development and on the underlying regulatory mechanisms by systems biology approaches. Two assays have therefore been tuned here for these requirements. In the UKK test system, human embryonic stem cells (hESC) (or other pluripotent cells) are left to spontaneously differentiate for 14 days in embryoid bodies, to allow generation of cells of all three germ layers. This system recapitulates key steps of early human embryonic development, and it can predict human-specific early embryonic toxicity/teratogenicity, if cells are exposed to chemicals during differentiation. The UKN1 test system is based on hESC differentiating to a population of neuroectodermal progenitor (NEP) cells for 6 days. This system recapitulates early neural development and predicts early developmental neurotoxicity and epigenetic changes triggered by chemicals. Both systems, in combination with transcriptome microarray studies, are suitable for identifying toxicity biomarkers. Moreover, they may be used in combination to generate input data for systems biology analysis. These test systems have advantages over the traditional toxicological studies requiring large amounts of animals. The test systems may contribute to a reduction of the costs for drug development and chemical safety evaluation. Their combination sheds light especially on compounds that may influence neurodevelopment specifically.

The protocols describe two in vitro developmental toxicity test systems (UKK and UKN1) based on human embryonic stem cells and transcriptome studies. The test systems predict human developmental toxicity hazard, and may contribute to reduce animal studies, costs and the time required for chemical safety testing.

الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة وبناء التنموي سمية فحوصات للسلامة الكيميائية الفحص وبيولوجيا الأنظمة توليد البيانات

Efficient protocols to differentiate human pluripotent stem cells to various tissues in combination with -omics technologies opened up new horizons for in ...

Salinity-dependent Toxicity Assay of Silver Nanocolloids Using Medaka Eggs

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and seawater. Tests of the toxicity of chemicals and assessments of their ecological risks to aquatic organisms are frequently performed in freshwater, but the toxicity of chemicals to aquatic organisms depends on pH, temperature, and salinity. There is no method, however, for testing the salinity dependence of toxicity to aquatic organisms. Here, we used medaka (Oryzias latipes) because they can adapt to freshwater, brackish water, and seawater. Different concentrations of embryo-rearing medium (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, and 30x) were employed to test the toxicity of silver nanocolloidal particles (SNCs) to medaka eggs (1x ERM and 30x ERM have osmotic pressures equivalent to freshwater and seawater, respectively). In six-well plastic plates, 15 medaka eggs in triplicate were exposed to SNCs at 10 mg/L&#8722;1 in different concentrations of ERM at pH 7 and 25 &#176;C in the dark.
We used a dissecting microscope and a micrometer to measure heart rate per 15 sec and eye diameter on day 6 and full body length of the larvae on hatching day (section 4). The embryos were observed until hatching or day 14; we then counted the hatching rate every day for 14 days (section 4). To see silver accumulation in embryos, we used inductively coupled plasma mass spectrometry to measure the silver concentration of test solutions (section 5) and dechorionated embryos (section 6).The toxicity of the SNCs to medaka embryos obviously increased with increasing salinity. This new method allows us to test the toxicity of chemicals in different salinities.

Embryonic stages are the most susceptible to xenobiotics. Although chemical toxicity depends on salinity, no method exists to test the salinity dependence of toxicity to aquatic organisms. Here, we describe a new and high-throughput method for determining the salinity dependence of toxicity to aquatic embryos.

التي تعتمد على ملوحة سمية الفحص من الفضة Nanocolloids عن طريق الميداكا البيض

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple cellular and developmental processes principally via activation of ERK, the terminal kinase of the pathway. Tight regulation of ERK activity is essential for normal development and homeostasis; overly active ERK results in excessive cellular proliferation, while underactive ERK causes cell death. C. elegans is a powerful model system that has helped characterize the function and regulation of RTK-RAS-ERK signaling pathway during development. In particular, the RTK-RAS-ERK pathway is essential for C. elegans germline development, which is the focus of this method. Using antibodies specific to the active, diphosphorylated form of ERK (dpERK), the stereotypical localization pattern can be visualized within the germline. Because this pattern is both spatially and temporally controlled, the ability to reproducibly assay dpERK is useful to identify regulators of the pathway that affect dpERK signal duration and amplitude and thus germline development. Here we demonstrate how to successfully dissect, stain, and image dpERK within the C. elegans gonad. This method can be adapted for spatial localization of any signaling or structural protein in the C. elegans gonad, provided an antibody compatible with immunofluorescence is available.

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

We present an immunofluorescence&#160;imaging-based method for spatial and temporal localization of active ERK in the dissected C. elegans gonad. The protocol described here can be adapted for visualization of any signaling or structural protein in the C. elegans gonad, provided a suitable antibody reagent is available.

تحليل المكاني والزماني لأحدث إرك في<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; الخط الجرثومي

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein are molecular motors that regulate anterograde and retrograde transport, respectively. These motors use microtubule networks as rails. Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a powerful model organism to study axonal transport and IFT in vivo. Here, I describe a protocol to observe axonal transport and IFT in living C. elegans. Transported cargo can be visualized by tagging cargo proteins using fluorescent proteins such as green fluorescent protein (GFP). C. elegans is transparent and GFP-tagged cargo proteins can be expressed in specific cells under cell-specific promoters. Living worms can be fixed by microbeads on 10% agarose gel without killing or anesthetizing the worms. Under these conditions, cargo movement can be directly observed in the axons and cilia of living C. elegans without dissection. This method can be applied to the observation of any cargo molecule in any cells by modifying the target proteins and/or the cells they are expressed in. Most basic proteins such as molecular motors and adaptor proteins that are involved in axonal transport and IFT are conserved in C. elegans. Compared to other model organisms, mutants can be obtained and maintained more easily in C. elegans. Combining this method with various C. elegans mutants can clarify the molecular mechanisms of axonal transport and IFT.

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a good model to study axonal and intracellular transport. Here, I describe a protocol for in vivo recording and analysis of axonal and intraflagellar transport in C. elegans.

التثبيت من ايليجانس كاينورهابديتيس "تحليل النقل داخل الخلايا" في الخلايا العصبية

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein ...

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are facilitated by the transparency of the animal, the ability to do forward and reverse genetic assays, the relative ease of generating fluorescently labeled proteins, and the use of fluorescent dyes that can either be microinjected into the early embryo or incorporated into its food (E. coli strain OP50) to label cellular organelles (e.g. 9-diethylamino-5H-benzo(a)phenoxazine-5-one and (3-{2-[(1H,1&#39;H-2,2&#39;-bipyrrol-5-yl-kappaN(1))methylidene]-2H-pyrrol-5-yl-kappaN}-N-[2-(dimethylamino)ethyl]propanamidato)(difluoro)boron). Here, we present the use of a fluorescent pH-sensitive dye that stains intestinal lysosomes, providing a visual readout of dynamic, physiological changes in lysosomal acidity in live worms. This protocol does not measure lysosomal pH, but rather aims to establish a reliable method of assessing physiological relevant variations in lysosomal acidity. cDCFDA is a cell-permeant compound that is converted to the fluorescent fluorophore 5-(and-6)-carboxy-2&#39;,7&#39;-dichlorofluorescein (cDCF) upon hydrolysis by intracellular esterases. Protonation inside lysosomes traps cDCF in these organelles, where it accumulates. Due to its low pKa of 4.8, this dye has been used as a pH sensor in yeast. Here we describe the use of cDCFDA as a food supplement to assess the acidity of intestinal lysosomes in C. elegans. This technique allows for the detection of alkalinizing lysosomes in live animals, and has a broad range of experimental applications including studies on aging, autophagy, and lysosomal biogenesis.

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

A step-by-step guide to probe loss of lysosomal acidity in the intestine of C. elegans using the pH-sensitive vital dye 5(6)-carboxy-2&#39;,7&#39;-dichlorofluorescein diacetate (cDCFDA)

تقييم "الليزوزومية الغدق" في "الأمعاء ومن يعيش" ايليجانس كاينورهابديتيس

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and chromosome dynamics. While the germline is an excellent model, the analysis is often two dimensional due to the time and labor required for three-dimensional analysis. Major readouts in such studies are the number/position of nuclei and protein distribution within the germline. Here, we present a method to perform automated analysis of the germline using confocal microscopy and computational approaches to determine the number and position of nuclei in each region of the germline. Our method also analyzes germline protein distribution that enables the three-dimensional examination of protein expression in different genetic backgrounds. Further, our study shows variations in cytoskeletal architecture in distinct regions of the germline that may accommodate specific spatial developmental requirements. Finally, our method enables automated counting of the sperm in the spermatheca of each germline. Taken together, our method enables rapid and reproducible phenotypic analysis of the C. elegans germline.

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

We present an automated method for three-dimensional reconstruction of the Caenorhabditis elegans germline. Our method determines the number and position of each nucleus within the germline and analyses germline protein distribution and cytoskeletal structure.

التحليل الحسابي ل Germline ايليجانس كاينورهابديتيس دراسة توزيع الأنوية، والبروتينات، وسيتوسكيليتون

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

Cell cycle analysis in eukaryotes frequently utilizes chromosome morphology, expression and/or localization of gene products required for various phases of the cell cycle, or the incorporation of nucleoside analogs. During S-phase, DNA polymerases incorporate thymidine analogs such as EdU or BrdU into chromosomal DNA, marking the cells for analysis. For C. elegans, the nucleoside analog EdU is fed to the worms during regular culture and is compatible with immunofluorescent techniques. The germline of C. elegans is a powerful model system for the studies of signaling pathways, stem cells, meiosis, and cell cycle because it is transparent, genetically facile, and meiotic prophase and cellular differentiation/gametogenesis occur in a linear assembly-like fashion. These features make EdU a great tool to study dynamic aspects of mitotically cycling cells and germline development. This protocol describes how to successfully prepare EdU bacteria, feed them to wild-type C. elegans hermaphrodites, dissect the hermaphrodite gonad, stain for EdU incorporation into DNA, stain with antibodies to detect various cell cycle and developmental markers, image the gonad and analyze the results. The protocol describes the variations in the method and analysis for the measurement of S-phase index, M-phase index, G2 duration, cell cycle duration, rate of meiotic entry, and rate of meiotic prophase progression. This method can be adapted to study the cell cycle or cell history in other tissues, stages, genetic backgrounds, and physiological conditions.

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

An imaging-based method is described that can be used to identify S-phase and analyze cell cycle dynamics in the C. elegans hermaphrodite germline using the thymidine analog EdU. This method requires no transgenes and is compatible with immunofluorescent staining.

تحليل دورة الخلية في Germline C. ايليجانس مع إيدو التناظرية Thymidine

Cell cycle analysis in eukaryotes frequently utilizes chromosome morphology, expression and/or localization of gene products required for various phases ...

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented protocol uses this model to determine the pathogenicity caused by the mitis group streptococci via the production of H2O2. The mitis group streptococci are an emerging threat that cause many human diseases such as bacteremia, endocarditis, and orbital cellulitis. Described here is a protocol to determine the survival of these worms in response to H2O2 produced by this group of pathogens. Using the gene skn-1 encoding for an oxidative stress response transcription factor, it is shown that this model is important for identifying host genes that are essential against streptococcal infection. Furthermore, it is shown that activation of the oxidative stress response can be monitored in the presence of these pathogens using a transgenic reporter worm strain, in which SKN-1 is fused to green fluorescent protein (GFP). These assays provide the opportunity to study the oxidative stress response to H2O2 derived by a biological source as opposed to exogenously added reactive oxygen species (ROS) sources.

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans is an excellent model to dissect host-pathogen interactions. Described here is a protocol to infect the worm with members of the mitis group streptococci and determine activation of the oxidative stress response against H2O2 produced by this group of organisms.

دراسة "عنصر مؤكسد الإجهاد الناجم عن العقديّات المجموعة ميتس" في ايليجانس كاينورهابديتيس

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented ...

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female reproductive tract. While in vitro studies suggest that sperm of internally fertilizing animals can respond to various cues from their surroundings, the inability to visualize their behavior inside the female reproductive tract creates a challenge for understanding sperm migration and mobility in its native environment. Here, we describe a method using C. elegans that overcomes this limitation and takes advantage of their transparent epidermis. C. elegans males stained with a mitochondrial&#160; dye are mated with adult hermaphrodites, which act as modified females, and deposit fluorescently labeled sperm into the hermaphrodite uterus. The migration and motility of the labeled sperm can then be directly tracked using an epi-fluorescence microscope in a live hermaphrodite. In wild-type animals, approximately 90% of the labeled sperm crawl through the uterus and reach the fertilization site, or spermatheca. Images of the uterus can be taken 1 h after mating to assess the distribution of the sperm within the uterus and the percentage of sperm that have reached the spermatheca. Alternatively, time-lapse images can be taken immediately after mating to assess sperm speed, directional velocity and reversal frequency. This method can be combined with other genetic and molecular tools available for the C.elegans to identify novel genetic and molecular mechanisms that are important in regulating sperm guidance and motility within the female reproductive tract.

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Sperm must successfully navigate through the oviduct to fertilize an oocyte. Here, we describe an assay for measuring sperm migration within the C. elegans hermaphrodite uterus. This assay can provide quantitative data on sperm distribution within the uterus after mating, as well as on speed, directional velocity, and reversal frequency.

قياس الإرشاد المنوي والحركية داخل الجهاز التناسلي المخنث

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female ...

Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

During the aging process, many cells accumulate high levels of damage leading to cellular dysfunction, which underlies many geriatric and pathological conditions. Post-mitotic neurons represent a major cell type affected by aging. Although multiple mammalian models of neuronal aging exist, they are challenging and expensive to establish. The roundworm Caenorhabditis elegans is a powerful model to study neuronal aging, as these animals have short lifespan, an available robust genetic toolbox, and well-cataloged nervous system. The method presented herein allows for seamless isolation of specific cells based on the expression of a transgenic green fluorescent protein (GFP). Transgenic animal lines expressing GFP under distinct, cell type-specific promoters are digested to remove the outer cuticle and gently mechanically disrupted to produce slurry containing various cell types. The cells of interest are then separated from non-target cells through fluorescence-activated cell sorting, or by anti-GFP-coupled magnetic beads. The isolated cells can then be cultured for a limited time or immediately used for cell-specific ex vivo analyses such as transcriptional analysis by real time quantitative PCR. Thus, this protocol allows for rapid and robust analysis of cell-specific responses within different neuronal populations in C. elegans.

Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

Here, we present a protocol for simple isolation of specific groups of live neuronal cells expressing green fluorescent protein from transgenic Caenorhabditis elegans lines. This method enables a variety of ex vivo studies focused on specific neurons and has the capacity to isolate cells for further short-term culturing.

عزل مجموعات الخلايا العصبية المحددة من الدودة المستديرة Caenorhabditis elegans

During the aging process, many cells accumulate high levels of damage leading to cellular dysfunction, which underlies many geriatric and pathological ...