فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور جون Harbell لدعمه العلمي والوقت المخصص للمشروع تمر اقتصاداتها بمرحلة انتقال. أيضا فإن الكتاب أود أن أشكر بيرسدورف AG (ألمانيا)، IIVS (الولايات المتحدة الأمريكية)، ماري كاي شركة (الولايات المتحدة)، آفون منتجات شركة (الولايات المتحدة الأمريكية)، وبروكتر أند غامبل / Cosmital (سويسرا)، مختبر بيار فابر (فرنسا)، مختبرات هارلان (المملكة المتحدة)، وLVMH برفوم (فرنسا) للمشاركة في موضوع الوسط الدولي قبل التحقق والتحقق دراسات عن تجارب تهيج العين 15.

<ol>
	<li>National Toxicology Program (NTP) Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Request+for+Ocular+Irritancy+Test+Data+From+Human,+Rabbit,+and+In+Vitro+Studies+Using+Standardized+Testing+Methods.">Request for Ocular Irritancy Test Data From Human, Rabbit, and In Vitro Studies Using Standardized Testing Methods.</a> Federal Register. 72 (109), 31582-31583 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+(EC)+No+1907/2006+of+the+European+Parliament+and+of+the+Council+of+18+December+2006+concerning+the+Registration,+Evaluation,+Authorisation+and+Restriction+of+Chemicals+(REACH),+establishing+a+European+Chemicals+Agency,+amending+Directive+1999/45/EC+and+repealing+Council+Regulation+(EEC)+No+793/93+and+Commission+Regulation+(EC)+No+1488/94+as+well+as+Council+Directive+76/769/EEC+and+Commission+Directives+91/155/EEC,+93/67/EEC,+93/105/EC+and+2000/21/EC.">Regulation (EC) No 1907/2006 of the European Parliament and of the Council of 18 December 2006 concerning the Registration, Evaluation, Authorisation and Restriction of Chemicals (REACH), establishing a European Chemicals Agency, amending Directive 1999/45/EC and repealing Council Regulation (EEC) No 793/93 and Commission Regulation (EC) No 1488/94 as well as Council Directive 76/769/EEC and Commission Directives 91/155/EEC, 93/67/EEC, 93/105/EC and 2000/21/EC.</a> OJ. L396 (49), 1-849 (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (GHS). , (2013).</li><li>Draize, J. H., Woodard, G., Calvery, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+the+Study+of+Irritation+and+Toxicity+of+Substances+Applied+Topically+to+the+Skin+and+Mucous+Membranes.">Methods for the Study of Irritation and Toxicity of Substances Applied Topically to the Skin and Mucous Membranes.</a> J Pharmacol Exp Ther November. 82, 377-390 (1944).</li><li>Adriaens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+analysis+of+the+Draize+test+for+serious+eye+damage/eye+irritation:+importance+of+understanding+the+in+vivo+endpoints+under+UN+GHS/EU+CLP+for+the+development+and+evaluation+of+in+vitro+test+methods.">Retrospective analysis of the Draize test for serious eye damage/eye irritation: importance of understanding the in vivo endpoints under UN GHS/EU CLP for the development and evaluation of in vitro test methods.</a> Arch tox. 88, 701-723 (2014).</li><li>Balls, M., Botham, P. A., Bruner, L. H., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EC/HO+international+validation+study+on+alternatives+to+the+Draize+eye+irritation+test.">The EC/HO international validation study on alternatives to the Draize eye irritation test.</a> Toxicol in Vitro. 9, 871-929 (1995).</li><li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+safety:+a+silent+(in+vitro)+success+story.">Ocular safety: a silent (in vitro) success story.</a> Altern Lab Anim. 30, 69-74 (2002).</li><li>Wilhelmus, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Draize+Eye+Test.">The Draize Eye Test.</a> Survey of Ophthalmology. 45, 493-515 (2001).</li><li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+alternatives+for+ocular+irritation.">In vitro alternatives for ocular irritation.</a> Environ health persp. 106, 485-492 (1998).</li><li>McCain, N. E., Binetti, R. R., Gettings, S. D., Jones, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+ocular+irritation+ranges+of+market-leading+cosmetic+and+personal-care+products+using+an+in+vitro+tissue+equivalent.">Assessment of ocular irritation ranges of market-leading cosmetic and personal-care products using an in vitro tissue equivalent.</a> Toxicologist. 66, 243 (2002).</li><li>Niranjan, P., Dang, A. H., January, B. G., Gomez, C., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+EpiOcular+assay+for+preclinical+qualification+of+formulas+for+human+clinical+studies.">Use of the EpiOcular assay for preclinical qualification of formulas for human clinical studies.</a> Toxicologist. 96, 249 (2007).</li><li>Yin, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+ocular+irritation+potential+of+surfactants-based+formulations+at+different+concentrations+using+the+EpiOcular+model.">Prediction of ocular irritation potential of surfactants-based formulations at different concentrations using the EpiOcular model.</a> Toxicologist. 108, 378 (2009).</li><li>Harbell, J., Curren, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+methods+for+the+prediction+of+ocular+and+dermal+toxicity.">In vitro methods for the prediction of ocular and dermal toxicity.</a> Handbook of Toxicology. , (2001).</li><li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+EpiOcular(TM)+eye+irritation+test+for+hazard+identification+and+labelling+of+eye+irritating+chemicals+in+response+to+the+requirements+of+the+EU+cosmetics+directive+and+REACH+legislation.">Development of the EpiOcular(TM) eye irritation test for hazard identification and labelling of eye irritating chemicals in response to the requirements of the EU cosmetics directive and REACH legislation.</a> Altern Lab Anim. 39, 339-364 (2011).</li><li>Pfannenbecker, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cosmetics+Europe+Multi-Laboratory+Pre-Validation+of+the+EpiOcular+Reconstituted+Human+Tissue+Test+Method+for+the+Prediction+of+Eye+Irritation.">Cosmetics Europe Multi-Laboratory Pre-Validation of the EpiOcular Reconstituted Human Tissue Test Method for the Prediction of Eye Irritation.</a> Toxicol in vitro. , (2013).</li><li>MatTek Corporation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> EpiOcular™ Eye Irritation Test (OCL-200-EIT) for the prediction of acute ocular irritation of chemicals for use with Reconstructed Human EpiOcular Model (OCL-200-EIT). Protocol#MK-24-007-0055. , (2014).</li><li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EpiOcular+Eye+Irritation+Test+(EIT)+for+Hazard+Identification+and+Labeling+of+Eye+Irritating+Chemicals:+Protocol+Optimization+for+Solid+Materials+and+Extended+Shipment+Times.">EpiOcular Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification and Labeling of Eye Irritating Chemicals: Protocol Optimization for Solid Materials and Extended Shipment Times.</a> Altern Lab Anim. 43 (2), 101-127 (2015).</li><li>Kolle, S. N., Kandarova, H., Wareing, B., van Ravenzwaay, B., Landsiedel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-house+validation+of+the+EpiOcular(TM)+eye+irritation+test+and+its+combination+with+the+bovine+corneal+opacity+and+permeability+test+for+the+assessment+of+ocular+irritation.">In-house validation of the EpiOcular(TM) eye irritation test and its combination with the bovine corneal opacity and permeability test for the assessment of ocular irritation.</a> Altern Lab Anim. 39, 365-387 (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstructed+Human+Cornea-like+Epithelium+(RhCE)+Test+Method+for+Identifying+Chemicals+Not+Requiring+Classification+and+Labelling+for+Eye+Irritation+or+Serious+Eye+Damage.+Draft+proposal+for+a+new+test+guideline..">Reconstructed Human Cornea-like Epithelium (RhCE) Test Method for Identifying Chemicals Not Requiring Classification and Labelling for Eye Irritation or Serious Eye Damage. Draft proposal for a new test guideline..</a> OECD Guideline for the Testing of Chemicals. , (2014).</li><li>Blazka, M. E., Harbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+the+ocular+irritation+potential+of+54+test+articles+using+the+EpiOcular+Human+tissue+Construct+Model.">Evaluating the ocular irritation potential of 54 test articles using the EpiOcular Human tissue Construct Model.</a> Toxicol. In Vitro. , (2003).</li><li>Kandarova, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+Upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests+&#8212;+An+Assessment+of+the+Performance+of+the+Optimised+Test.">The EpiDerm Test Protocol for the Upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests &#8212; An Assessment of the Performance of the Optimised Test.</a> Altern Lab Anim. 33, 351-367 (2005).</li></ol>

تم دفع رسوم النشر لهذه المادة من قبل شركة ماتيك.

لقد قدم تهيج اختبار العين (الشكل 1) التي وضعت لنموذج الأنسجة EpiOcular. وEIT غير قادرة على فصل المهيجات والمواد المسببة للتآكل العين (GHS فئات 1 و 2 معا) من المواد التي لا تتطلب وضع العلامات (GHS لا الفئة) مع درجة عالية من الحساسية والنوعية 17. وEIT كما وردت في هذه الوثيقة لا تميز بين GHS الفئة 1 من الفئة 2 الكيميائية. تم التحقق من صحة EIT لتصنيف ووضع العلامات على احتمال تهيج العين من مجموعة واسعة من المواد الكيميائية، بما في ذلك مستحضرات التجميل والأدوية المكونات. بالتزامن مع الآخر في اختبارات المختبر، فإن EIT بمثابة بديل للفي الجسم الحي الأرنب العين اختبار تهيج. يستخدم EIT بروتوكولين مماثلة ولكن متميزة للمواد السائلة والصلبة، والتي تختلف في طول التعرض وفترات الحضانة بعد التعرض لل(الشكل 1). نقطة النهاية المستخدمة في EITهي حيوية الأنسجة، والتي تحددها فحص MTT، والتي تم استخدامها سابقا في التحقق من صحة نماذج الأنسجة الظهارية الإنسان 20،21. لإجراء هذا الاختبار، ليس هناك حاجة إلى معدات خاصة بالإضافة إلى المعدات القياسية ثقافة الخلية. نظرا لمستوى عال من الأنسجة إلى أنسجة استنساخ، ن = 2 الأنسجة بدلا من عادة يوصى ن = تستخدم 3. القدرة على استخدام ن = 2 الأنسجة هو الجانب الحاسم من البروتوكول، لأنه يسمح للعامل من ذوي الخبرة لمعالجة اثنين من الأنسجة في وقت واحد، وبالتالي التقليل من تقلب الفحص التي يمكن أن تنشأ بسبب التعامل مختلفة من الأنسجة الفردية 14. أيضا، باستخدام ن = 2 الأنسجة في اختبار المادة، وتهيج من 10 مواد الاختبار من نفس الحالة الفيزيائية (سائلة أو صلبة)، جنبا إلى جنب مع الضوابط الإيجابية والسلبية، يمكن تقييمها باستخدام مجموعة واحدة (24 الأنسجة). النقاط الرئيسية الأخرى التي تضمن تصنيف موثوق بها من مواد هي المواصفات لمراقبة إيجابية سوbstance (قابلية الأنسجة ≤50.0٪)، واستنساخ بين أنسجة مكررة (الفرق &lt;20.0٪)، ومراقبة سلبية قراءات OD (&gt; 0.8 و &lt;2.5). عند إجراء اختبار تمر اقتصاداتها بمرحلة انتقال، من المهم أن تلتزم بروتوكول التحقق من صحة والجرعات المقترحة والشطف جداول (الجداول 3 و 4)، لأن الانحراف عن بروتوكول أو تغييرات في فترات الحضانة قد يؤدي إلى نتائج غيرت. وبالمثل، فإن الانحرافات من الوقت 3 ساعات لMTT الحضانة يؤدي إلى قراءات مختلفة MTT ويمكن أن تؤثر نتيجة الفحص. في بعض الأحيان، قد يكون مادة كيميائية اختبار الخصائص البصرية أو غيرها التي قد تتداخل مع الأنسجة MTT جدوى فحص أو سبب خفض MTT. على سبيل المثال، وهي مادة كيميائية اختبار قد يقلل بشكل مباشر MTT إلى الأزرق الأرجواني ناتج التفاعل، أو قد يكون عبارة عن مادة الملونة التي تمتص الضوء في نفس النطاق كما MTT formazan (~ 570 نانومتر). ومع ذلك، فإن هذه المواد الكيميائية اختبار العلاقات العامةESENT مشكلة فقط، إذا كان في ذلك الوقت من فحص MTT، كمية كافية من المواد لا تزال موجودة على (أو استيعابها من قبل) الأنسجة. لتجنب هذا التدخل، تدرج الإجراءات الشطف واسعة في بروتوكول تمر اقتصاداتها بمرحلة انتقال. إذا الشطف لا يزيل TA TA ويتداخل مع خفض MTT، يجب استخدام عناصر تحكم إضافية للكشف عن وصحيحة لذلك. باختصار، إذا كان يشتبه خفض MTT المباشر للمادة الكيميائية الاختبار، 50 ميكرولتر (أو 50 ملغ المواد الصلبة) من هذه المادة الكيميائية في السؤال هو المحتضنة لمدة 3 ساعات مع العمل الحل MTT في SCC (NC، 50 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات معقمة، يجب أن يكون تشغيل في نفس الوقت). إذا كان هذا الحل MTT إلى اللون الأزرق الأرجواني، يفترض المقال اختبار لقد قلل من MTT. في هذه الحالة فحص وظيفي باستخدام عناصر تحكم الأنسجة قتل تجميد ينبغي إجراء تقييم ما إذا كانت مادة الاختبار ملزما للأنسجة ويؤدي إلى تخفيض كاذبة إشارة MTT. إذا كان هناك انخفاض ملموس في MTT، ومراقبة الأنسجة TA مكشوفة قتل(نسبة لكمية في أنسجة قابلة للحياة غير المعالجة)، لا بد من تصحيح يعني بقاء الأنسجة من هذه المادة الاختبار عن طريق طرح الجدوى المتوسطة للسيطرة قتل. وEIT يخطئ على جانب السلامة، كما يدل على ذلك حدوث انخفاض التصنيفات السلبية الكاذبة 14،15،18. الأهم من ذلك، أيا من المواد الكيميائية GHS الفئة 1، والتي هي تآكل للعين والتي تمثل الخطر العين الأكثر خطورة، تم تصنيفها على أنها غير مزعجة في هذا الاختبار 14،15،18،19. وأخيرا، واحدة من المزايا الرئيسية للRHCE في طريقة الاختبار في المختبر هو إمكانية اختبار السائل أنيق والمواد الصلبة (وهو أمر غير ممكن مع ثنائي الأبعاد، مزارع الخلايا المغمورة). سوف EIT تسهم إسهاما كبيرا في تحديد احتمال تهيج العين من مجموعة واسعة من المواد وفقا لتصنيف ووسم منظومة الأمم المتحدة GHS. استبدال الحيوانات لتحديد سوكانت دائرية سمية هدف البحث السمية لسنوات عديدة. طريقة الاختبار تمر اقتصاداتها بمرحلة انتقال أكملت دراسة المصادقة الرسمية المعتمدة من قبل EURL ECVAM في عام 2014 ونفذ EpiOcular EIT في المبادئ التوجيهية اختبار OECD كما OECD TG 492 في عام 2015.

المنتجات الاستهلاكية مثل مستحضرات التجميل والمنظفات، والمنظفات المنزلية وتشمل مجموعة متنوعة من المواد الكيميائية التي يمكن أن تسبب أضرارا خطيرة إذا ما اتصل العينين. لذلك، لا بد من اختبار هذه العوامل لتهيج العين من قبل الهيئات التنظيمية الأمريكية والاتحاد الأوروبي لضمان سلامة المستهلك 1. تقييما لاحتمال تهيج العين من الخلطات والتركيبات هو أيضا شرط للامتثال REACH (التسجيل والتقييم والتفويض، وتقييد المواد الكيميائية) تشريع لوضع العلامات من مكونات مستحضرات التجميل تحت توجيه الاتحاد الأوروبي مستحضرات التجميل لنقل المواد الكيميائية، ولل وسم المبيدات الحشرية والمنتجات المنزلية 2. حاليا، تتطلب الهيئات التنظيمية تقييم المخاطر العين باستخدام النظام المنسق عالميا لتصنيف المواد الكيميائية ووسمها (GHS) 3. ويستند GHS أساسا على اختبار دريز تهيج العين، وتهيج العين الأكثر استخداما على نطاق واسع في فحص المواد التي الأجنبية وميليتم إدخال xtures مباشرة في كيس الملتحمة من العين أرنب 4. وفقا لتصنيف GHS، GHS الفئة 1 (المواد المسببة للتآكل العين) يشير لاختبار المواد الكيميائية التي تسبب الإصابة الأولية الشديدة للأنسجة العين أو أضرار خطيرة للعين والرؤية التي ليس عكسها تماما في غضون 21 يوما بعد التعرض 3،5. GHS الفئة 2 يشير إلى اختبار المواد الكيميائية التي تنتج تغييرات كبيرة في العين التي هي عكسها تماما في غضون 21 يوما من التعرض. ويشار إلى المواد الكيميائية الاختبار التي ليست المواد المسببة للتآكل أو المهيجات باسم GHS لا الفئة. لأكثر من 40 عاما، وقد انتقد اختبار أرنب العين دريز لافتقارها للاستنساخ، المبالغة في تقدير ردود فعل الإنسان، واستخدام الحيوانات الحية 5-8. وقد شجعت هذه المخاوف العديد من المقترحات لتحسينها، والحد، واستبدال اختبار في الجسم الحي 9. وتعززت الحاجة إلى بدائل غير حيوانية المصادق مزيدقبل اعتماد التعديل السابع لتوجيه مستحضرات التجميل، والتي حظرت استخدام الحيوانات في تقييم سلامة منتجات التجميل (في عام 2005) والمكونات (في عام 2009) 2. منذ عام 1996، وقد نموذج الأنسجة مثل القرنية أعيد استخدامها على نطاق واسع من قبل صناعة مستحضرات التجميل لتقييم إمكانات تهيج المواد الخام، ومستحضرات القائم السطحي، وتتفاقم الخلطات التي تم تصميمها للاستخدام في، أو في محيط، والعين 10-13. استخدام نموذج الأنسجة RHCE يسمح التطبيق الموضعي المباشر للمواد الاختبار على سطح الأنسجة في شكله مخفف الأصلي. وبهذه الطريقة، يمكن اختبار تركيبات قابلة للذوبان غير المياه دون تمييعها مع المذيبات. ردا على EURL ECVAM في (المركز الأوروبي مختبر الاتحاد الأوروبي المرجعي للتحقق من الطرق البديلة) طلب طريقة للتطبيق على نطاق واسع، واضحة، والاقتصادي وتهيج اختبار العين (EIT) الذي يستخدم سينغلوقد وضعت ه وقت التعرض وغير قادرة على فصل المهيجات العين والمواد المسببة للتآكل من المواد التي لا تتطلب وضع العلامات (الشكل 1) 14. وبناء على نتائج 83 المواد الكيميائية (44 السوائل و39 المواد الصلبة)، حقق EIT 95.5 / 68.2 / و 81.8٪ الحساسية / خصوصية ودقة (SS &amp; A) للسوائل، 100.0 / 68.4 / و84،6٪ SS &amp; A للمواد الصلبة، و97،6 / 68.3 / 83.1٪ وعن العام SS &amp; A. في عام 2007، ودراسة ما قبل المصادقة متعددة مختبر ترعاه مستحضرات التجميل أوروبا (COLIPA سابقا) تحت رعاية ECVAM EURL تقييم مدى ملاءمة وموثوقية EIT بهدف الوصول بها إلى المصادقة رسميا 15. في هذه الدراسة، تم تنفيذ 298 محاكمات مستقلة في سبعة مختبرات مستقلة. وأظهرت نتائج الدراسة اتفاق 99،7٪ في التنبؤ مع معاملات منخفضة من الاختلاف في جميع المختبرات المشاركة 15. ونتيجة لذلك، في عام 2010 دخل بروتوكول تمر اقتصاداتها بمرحلة انتقال لEURL ECVAM رسميةبرنامج التحقق من الصحة. استخدمت الدراسة التحقق من صحة 104 الكيماويات اختبار مشفرة، بما في ذلك المواد الفردية والخلائط الكيميائية، والتي كانت في الجسم الحي البيانات المرجعية (دريز البيانات تهيج العين) المتاحة. وبناء على نجاح هذا العمل، قدم مشروع اختبار OECD التوجيهي في عام 2014. ومن المتوقع أن EIT سوف تسهم إسهاما كبيرا في تصنيف احتمال تهيج العين من مجموعة واسعة من المواد وفقا لتصنيف ووسم منظومة الأمم المتحدة GHS.

eye irritation test (eit) for hazard identification of eye irritating chemicals using reconstructed human cornea-like epithelial (rhce) tissue model

ليتوافق مع التعديل السابع لقانون مستحضرات التجميل التوجيه والاتحاد الأوروبي REACH الاتحاد الأوروبي، وهناك حاجة إلى طرق بديلة غير حيوانية التحقق من صحة لتقييم موثوق ودقيق للسمية العين في الإنسان. لتلبية هذه الحاجة، قمنا بتطوير اختبار تهيج العين (EIT) الذي يستخدم الأبعاد أعيد بناؤها مثل القرنية الطلائية (RHCE) نموذج الأنسجة البشرية الثلاث التي تقوم على الخلايا البشرية العادية. وEIT غير قادرة على فصل المهيجات والمواد المسببة للتآكل العين (GHS فئات 1 و 2 معا) وتلك التي لا تتطلب وضع العلامات (GHS لا الفئة). اختبار يستخدم بروتوكولين منفصلين، أحدهما مصمم للمواد الكيميائية السائلة و، والبروتوكول الثاني مماثل لاختبار المواد الصلبة. يستخدم نموذج التنبؤ تمر اقتصاداتها بمرحلة انتقال فترة واحدة تعرض (30 دقيقة للسوائل، 6 ساعة للمواد الصلبة) وقابلية النسيج قطع واحد (60.0٪ كما يحددها فحص MTT). وبناء على نتائج 83 المواد الكيميائية (44 السوائل والمواد الصلبة 39) حقق EIT 95.5 / 68.2 / 81.8٪ والسناتورitivity / خصوصية ودقة (SS &amp; A) للسوائل، 100.0 / 68.4 / 84.6٪ وSS &amp; A للمواد الصلبة، و97.6 / 68.3 / 83.1٪ وعن العام SS &amp; A. سوف EIT تسهم إسهاما كبيرا في تصنيف إمكانيات تهيج العين من مجموعة واسعة من المواد الكيميائية السائلة والصلبة من دون استخدام الحيوانات لتلبية متطلبات الاختبار التنظيمية. تم تنفيذ طريقة EpiOcular EIT في عام 2015 إلى المبادئ التوجيهية اختبار OECD كما TG 492.

Watch this Scientific Journal Video about Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model at JoVE.com

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

لقد قمنا بتطوير اختبار تهيج العين التي تستخدم نموذج الأنسجة ثلاثي الأبعاد أعيد بناؤها مثل القرنية الطلائية البشري (RHCE). الاختبار هو قادرا على التمييز بين توتر العين والمواد المسببة للتآكل (GHS فئات 1 و 2 معا) وتلك التي لا تتطلب وضع العلامات (GHS لا الفئة).

العين تهيج اختبار (EIT) لتحديد مخاطر العين مهيج للمواد الكيميائية باستخدام يعيد الإنسان القرنية مثل الظهارية (RHCE) الأنسجة نموذج

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

eye-irritation-test-eit-for-hazard-identification-eye-irritating

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

37.0K Views.  MatTek Corporation.  لقد قمنا بتطوير اختبار تهيج العين التي تستخدم نموذج الأنسجة ثلاثي الأبعاد أعيد بناؤها مثل القرنية الطلائية البشري (RHCE). الاختبار هو قادرا على التمييز بين توتر العين والمواد المسببة للتآكل (GHS فئات 1 و 2 معا) وتلك التي لا تتطلب وضع العلامات (GHS ...

Video: Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a technology for regenerative medicine2. Unlike viruses, which have significant safety issues, polymeric nanoparticles can be designed to be non-toxic, non-immunogenic, non-mutagenic, easier to synthesize, chemically versatile, capable of carrying larger nucleic acid cargo and biodegradable and/or environmentally responsive. Cationic polymers self-assemble with negatively charged DNA via electrostatic interaction to form complexes on the order of 100 nm that are commonly termed polymeric nanoparticles. Examples of biomaterials used to form nanoscale polycationic gene delivery nanoparticles include polylysine, polyphosphoesters, poly(amidoamines)s and polyethylenimine (PEI), which is a non-degradable off-the-shelf cationic polymer commonly used for nucleic acid delivery1,3 . Poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are a newer class of cationic polymers4 that are hydrolytically degradable5,6 and have been shown to be effective at gene delivery to hard-to-transfect cell types such as human retinal endothelial cells (HRECs)7, mouse mammary epithelial cells8, human brain cancer cells9 and macrovascular (human umbilical vein, HUVECs) endothelial cells10.
A new protocol to characterize polymeric nanoparticles utilizing nanoparticle tracking analysis (NTA) is described. In this approach, both the particle size distribution and the distribution of the number of plasmids per particle are obtained11. In addition, a high-throughput 96-well plate transfection assay for rapid screening of the transfection efficacy of polymeric nanoparticles is presented. In this protocol, poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are used as model polymers and human retinal endothelial cells (HRECs) are used as model human cells. This protocol can be easily adapted to evaluate any polymeric nanoparticle and any cell type of interest in a multi-well plate format.

A protocol for nanoparticle tracking analysis (NTA) and high-throughput flow cytometry to evaluate polymeric gene delivery nanoparticles is described. NTA is utilized to characterize the nanoparticle particle size distribution and the plasmid per particle distribution. High-throughput flow cytometry enables quantitative transfection efficacy evaluation for a library of gene delivery biomaterials.

تقييم توصيل الجينات البوليمرية الجسيمات النانوية من تحليل تتبع جسيمات متناهية الصغر وعالية الإنتاجية قياس التدفق الخلوي

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide. Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture systems, which inadequately reflect physiological conditions in vivo. Biological 3D matrices provide cells an environment in which cells can self-organize, allowing the study of tissue organization and cell differentiation. Such scaffolds can be seeded with a mixture of different cell types to study direct 3D cell-cell-interactions. To mimic the 3D complexity of cancer tumors, our group has developed a 3D in vitro tumor test system.	
	Our 3D tissue test system models the in vivo situation of malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs), which we established with our decellularized porcine jejunal segment derived biological vascularized scaffold (BioVaSc). In our model, we reseeded a modified BioVaSc matrix with primary fibroblasts, microvascular endothelial cells (mvECs) and the S462 tumor cell line. For static culture, the vascular structure of the BioVaSc is removed and the remaining scaffold is cut open on one side (Small Intestinal Submucosa SIS-Muc). The resulting matrix is then fixed between two metal rings (cell crowns).	
	Another option is to culture the cell-seeded SIS-Muc in a flow bioreactor system that exposes the cells to shear stress. Here, the bioreactor is connected to a peristaltic pump in a self-constructed incubator. A computer regulates the arterial oxygen and nutrient supply via parameters such as blood pressure, temperature, and flow rate. This setup allows for a dynamic culture with either pressure-regulated pulsatile or constant flow.	
	In this study, we could successfully establish both a static and dynamic 3D culture system for MPNSTs. The ability to model cancer tumors in a more natural 3D environment will enable the discovery, testing, and validation of future pharmaceuticals in a human-like model.

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Methods to create human 3D tumor tissues as test systems are described. These technologies are based on a decellularized Biological Vascularized Scaffold (BioVaSc), primary human cells and a tumor cell line, which can be cultured under static as well as under dynamic conditions in a flow bioreactor.

هندسة الأنسجة ل3D الإنسان<em&gt; في المختبر</em&gt; نظام ورم اختبار

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and regenerative medicine. With digital control&#160;cells, scaffolds, and growth factors can be precisely deposited to the desired two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) locations rapidly. Therefore, this technology is an ideal approach to fabricate tissues mimicking their native anatomic structures. In order to engineer cartilage with native zonal organization, extracellular matrix composition (ECM), and mechanical properties, we developed a bioprinting platform using a commercial inkjet printer with simultaneous photopolymerization capable for 3D cartilage tissue engineering. Human chondrocytes suspended in poly(ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) were printed for 3D neocartilage construction via layer-by-layer assembly. The printed cells were fixed at their original deposited positions, supported by the surrounding scaffold in simultaneous photopolymerization. The mechanical properties of the printed tissue were similar to the native cartilage. Compared to conventional tissue fabrication, which requires longer UV exposure, the viability of the printed cells with simultaneous photopolymerization was significantly higher. Printed neocartilage demonstrated excellent glycosaminoglycan (GAG) and collagen type II production, which was consistent with gene expression. Therefore, this platform is ideal for accurate cell distribution and arrangement for anatomic tissue engineering.

The methods described in this paper show how to convert a commercial inkjet printer into a bioprinter with simultaneous UV polymerization. The printer is capable of constructing 3D tissue structure with cells and biomaterials. The study demonstrated here constructed a 3D neocartilage.

الغضروف الإنسان الأنسجة التصنيع باستخدام ثلاثي الأبعاد تكنولوجيا الطباعة النافثة للحبر

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

Assessing Leukocyte-endothelial Interactions Under Flow Conditions in an Ex Vivo Autoperfused Microflow Chamber Assay

Leukocyte-endothelial interactions are early and critical events in acute and chronic inflammation and can, when dysregulated, mediate tissue injury leading to permanent pathological damage. Existing conventional assays allow the analysis of leukocyte adhesion molecules only after the extraction of leukocytes from the blood. This requires the blood to undergo several steps before peripheral blood leukocytes (PBLs) can be ready for analysis, which in turn can stimulate PBLs influencing the research findings. The autoperfused micro flow chamber assay, however, allows scientists to study early leukocytes functional dysregulation using the systemic flow of a live mouse while having the freedom of manipulating a coated chamber. Through a disease model, the functional expression of leukocyte adhesion molecules can be assessed and quantified in a micro-glass chamber coated with immobilized endothelial adhesion molecules ex vivo. In this model, the blood flows between the right common carotid artery and left external jugular vein of a live mouse under anesthesia, allowing the interaction of native PBLs in the chamber. Real-time experimental analysis is achieved with the assistance of an intravital microscope as well as a Harvard Apparatus pressure device. The application of a flow regulator at the input point of the glass chamber allows comparable physiological flow conditions amongst the experiments. Leukocyte rolling velocity is the main outcome and is measured using the National Institutes of Health open-access software ImageJ. In summary, the autoperfused micro flow chamber assay provides an optimal physiological environment to study leukocytes endothelial interaction and allows researchers to draw accurate conclusions when studying inflammation.

Assessing Leukocyte-endothelial Interactions Under Flow Conditions in an Ex Vivo Autoperfused Microflow Chamber Assay

Here, we present a protocol that allows the investigator to assess leukocyte recruitment dynamics ex vivo by connecting a chamber coated with endothelial-derived adhesion molecules to the circulatory system of a mouse. This method offers significant advantages since it allows for leukocyte assessment under relative biological conditions.

تقييم التفاعلات الكريات البيض البطانية تحت ظروف التدفق في<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الفحص Autoperfused غرفة Microflow

Leukocyte-endothelial interactions are early and critical events in acute and chronic inflammation and can, when dysregulated, mediate tissue injury ...

Production, Characterization and Potential Uses of a 3D Tissue-engineered Human Esophageal Mucosal Model

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore esophageal adenocarcinoma generally has a poor prognosis, with little improvement in survival rates in recent years. These are difficult conditions to study and there has been a lack of suitable experimental platforms to investigate disorders of the esophageal mucosa.
A model of the human esophageal mucosa has been developed in the MacNeil laboratory which, unlike conventional 2D cell culture systems, recapitulates the cell-cell and cell-matrix interactions present in vivo and produces a mature, stratified epithelium similar to that of the normal human esophagus. Briefly, the model utilizes non-transformed normal primary human esophageal fibroblasts and epithelial cells grown within a porcine-derived acellular esophageal scaffold. Immunohistochemical characterization of this model by CK4, CK14, Ki67 and involucrin staining demonstrates appropriate recapitulation of the histology of the normal human esophageal mucosa.
This model provides a robust, biologically relevant experimental model of the human esophageal mucosa. It can easily be manipulated to investigate a number of research questions including the effectiveness of pharmacological agents and the impact of exposure to environmental factors such as alcohol, toxins, high temperature or gastro-esophageal refluxate components. The model also facilitates extended culture periods not achievable with conventional 2D cell culture, enabling, inter alia, the study of the impact of repeated exposure of a mature epithelium to the agent of interest for up to 20 days. Furthermore, a variety of cell lines, such as those derived from esophageal tumors or Barrett&#8217;s Metaplasia, can be incorporated into the model to investigate processes such as tumor invasion and drug responsiveness in a more biologically relevant environment.

This manuscript describes the production, characterization and potential uses of a tissue engineered 3D esophageal construct prepared from normal primary human esophageal fibroblast and squamous epithelial cells seeded within a de-cellularized porcine scaffold. The results demonstrate the formation of a mature stratified epithelium similar to the normal human esophagus.

إنتاج وتوصيف والمحتملة استخدامات الأنسجة المهندسة-3D الإنسان المريء المخاطي نموذج

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, typically via intravitreal injections. Encapsulated cells expressing the biologic of choice are becoming a tool for local protein production and release (e.g., via long-term drug delivery). In addition, encapsulation systems utilize permeable materials that allow diffusion of nutrients, waste, and therapeutic factors into and out of cells. This occurs while masking the cells from the host immune response, avoiding the need for suppression of the host immune system. This protocol describes the use of alginate as a polymer in microencapsulation coupled with the electrospray method as a microencapsulation technique. ARPE-19 cells, a spontaneously arising human RPE cell line, has been used in long-term cell therapy experiments due to its lifetime functionality, and it is used here for encapsulation and delivery of the capsules to mouse eyes. The manuscript summarizes the steps for cell microencapsulation, quality control, and ocular delivery.

Presented here is a protocol for the use of alginate as a polymer in microencapsulation of immortalized cells for long-term delivery of biologics to rodent eyes.

تكنولوجيا الخلية المغلفة لتسليم البيولوجيا إلى العين الماوس

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

Growth of Human and Sheep Corneal Endothelial Cell Layers on Biomaterial Membranes

Corneal endothelial cell cultures have a tendency to undergo epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) after loss of cell-to-cell contact. EMT is deleterious for the cells as it reduces their ability to form a mature and functional layer. Here, we present a method for establishing and subculturing human and sheep corneal endothelial cell cultures that minimizes the loss of cell-to-cell contact. Explants of corneal endothelium/Descemet&#39;s membrane are taken from donor corneas and placed into tissue culture under conditions that allow the cells to collectively migrate onto the culture surface. Once a culture has been established, the explants are transferred to fresh plates to initiate new cultures. Dispase II is used to gently lift clumps of cells off tissue culture plates for subculturing. Corneal endothelial cell cultures that have been established using this protocol are suitable for transferring to biomaterial membranes to produce tissue-engineered cell layers for transplantation in animal trials. A custom-made device for supporting biomaterial membranes during tissue culture is described and an example of a tissue-engineered graft composed of a layer of corneal endothelial cells and a layer of corneal stromal cells on either side of a collagen type I membrane is presented.

This protocol describes the critical steps required to establish and grow corneal endothelial cell cultures from explants of human or sheep tissue. A method for subculturing corneal endothelial cells on membranous biomaterials is also presented.

نمو الإنسان والأغنام القرنية خلايا الخلايا الانبذيلية على الأغشية الحيوية

Corneal endothelial cell cultures have a tendency to undergo epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) after loss of cell-to-cell contact. EMT is ...

In Vitro Model of Human Cutaneous Hypertrophic Scarring using Macromolecular Crowding

It has been shown that in vivo tissues are highly crowded by proteins, nucleic acids, ribonucleoproteins, polysaccharides, etc. The following protocol applies a macromolecular crowding (MMC) technique to mimic this physiological crowding through the addition of neutral polymers (crowders) to cell cultures in vitro. Previous studies using Ficoll or dextran as crowders demonstrate that the expression of collagen I and fibronectin in WI38 and WS-1 cell lines are significantly enhanced using the MMC technique. However, this technique has not been validated in primary hypertrophic scar-derived human skin fibroblasts (hHSFs). As hypertrophic scarring arises from the excessive deposition of collagen, this protocol aims to construct a collagen-rich in vitro hypertrophic scar model by applying the MMC technique with hHSFs. This optimized MMC model has been shown to possess more similarities with in vivo scar tissue compared to traditional 2-dimensional (2-D) cell culture systems. In addition, it is cost-effective, time-efficient, and ethically desirable compared to animal models. Therefore, the optimized model reported here offers an advanced &#8220;in vivo-like&#8221; model for hypertrophic scar-related studies.

This protocol describes the use of macromolecular crowding to create an in vitro human hypertrophic scar tissue model that resembles in vivo conditions. When cultivated in a crowded macromolecular environment, human skin fibroblasts exhibit phenotypes, biochemistry, physiology, and functional characteristics resembling scar tissue.

في النموذج الفيترو من الإنسان التشعب التشعبي تندب باستخدام الزحام الجزيئي الكلي

It has been shown that in vivo tissues are highly crowded by proteins, nucleic acids, ribonucleoproteins, polysaccharides, etc. The following protocol ...

Cultivating a Three-dimensional Reconstructed Human Epidermis at a Large Scale

A three-dimensional human epidermis model reconstructed from neonatal primary keratinocytes is presented. Herein, a protocol for the cultivation process and the characterization of the model is described. Neonatal primary keratinocytes are grown submerged on permeable polycarbonate inserts and lifted to the air-liquid interface three days after seeding. After fourteen days of stimulation with defined growth factors and ascorbic acid in high calcium culture medium, the model is fully differentiated. Histological analysis revealed a completely stratified epidermis, mimicking the morphology of native human skin. To characterize the model and its barrier functions, protein levels and localization specific for early-stage keratinocyte differentiation (i.e., keratin 10), late-stage differentiation (i.e., involucrin, loricrin, and filaggrin) and tissue adhesion (i.e., desmoglein 1), were assessed by immunofluorescence. The tissue barrier integrity was further evaluated by measuring transepithelial electrical resistance. Reconstructed human epidermis was responsive to proinflammatory stimuli (i.e., lipopolysaccharide and tumor necrosis factor alpha), leading to increased cytokine release (i.e., interleukin 1 alpha and interleukin 8). This protocol represents a straightforward and reproducible in vitro method to cultivate reconstructed human epidermis as a tool to assess environmental effects and a broad range of skin-related studies.

This protocol describes a straightforward method to cultivate three-dimensional reconstituted human epidermis in a reproducible and robust manner. Additionally, it characterizes the structure-function relationship of the epidermal barrier model. The biological responses of the reconstituted human epidermis upon proinflammatory stimuli are also presented.

زراعة بشرة بشرية ثلاثية الأبعاد أعيد بناؤها على نطاق واسع

A three-dimensional human epidermis model reconstructed from neonatal primary keratinocytes is presented. Herein, a protocol for the cultivation process ...

Quantifying Fibrillar Collagen Organization with Curvelet Transform-Based Tools

Fibrillar collagens are prominent extracellular matrix (ECM) components, and their topology changes have been shown to be associated with the progression of a wide range of diseases including breast, ovarian, kidney, and pancreatic cancers. Freely available fiber quantification software tools are mainly focused on the calculation of fiber alignment or orientation, and they are subject to limitations such as the requirement of manual steps, inaccuracy in detection of the fiber edge in noisy background, or lack of localized feature characterization. The collagen fiber quantitation tool described in this protocol is characterized by using an optimal multiscale image representation enabled by curvelet transform (CT). This algorithmic approach allows for the removal of noise from fibrillar collagen images and the enhancement of fiber edges to provide location and orientation information directly from a fiber, rather than using the indirect pixel-wise or window-wise information obtained from other tools. This CT-based framework contains two separate, but linked, packages named &#8220;CT-FIRE&#8221; and &#8220;CurveAlign&#8221; that can quantify fiber organization on a global, region of interest (ROI), or individual fiber basis. This quantification framework has been developed for more than ten years and has now evolved into a comprehensive and user-driven collagen quantification platform. Using this platform, one can measure up to about thirty fiber features including individual fiber properties such as length, angle, width, and straightness, as well as bulk measurements such as density and alignment. Additionally, the user can measure fiber angle relative to manually or automatically segmented boundaries. This platform also provides several additional modules including ones for ROI analysis, automatic boundary creation, and post-processing. Using this platform does not require prior experience of programming or image processing, and it can handle large datasets including hundreds or thousands of images, enabling efficient quantification of collagen fiber organization for biological or biomedical applications.

Here, we present a protocol to use a curvelet transform-based, open-source MATLAB software tool for quantifying fibrillar collagen organization in the extracellular matrix of both normal and diseased tissues. This tool can be applied to images with collagen fibers or other types of line-like structures.

قياس القياس فيبريلار منظمة الكولاجين مع Curvelet تحويل القائم على أدوات

Fibrillar collagens are prominent extracellular matrix (ECM) components, and their topology changes have been shown to be associated with the progression ...