يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في حقل الحد التجريبي، مثل كيفية تقليل المرتبطة بهذه النماذج، وكيفية تحسين قابلية التكاثر. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بإعادة التسريب عبر الشريان السباتي المشترك ، وبالتالي لا تعتمد على دائرة ويليس ، والتي يمكن أن تختلف تشريحًا بين الحيوانات ، وبالتالي قد تساهم في التباين الذي شوهد في مقاييس النتائج التجريبية. إن البرهان المرئي على هذه الطريقة أمر بالغ الأهمية، حيث يصعب تعلم خطوات إصلاح السفن CCA بسبب الصعوبة التقنية التي ينطوي عليها استخدام مانع التسرب لضمان أن CCA هي براءة اختراع كاملة ، بعد الإصلاح.
للبدء، وإعداد و التخدير الماوس وفقا لبروتوكول اختبار. ثم استخدم شفرة مشرط رقم 15 لصنع شق متوسط 1.5 سم على الرقبة البطنية المكشوفة. باستخدام تقنيات التشريح الحاد، تراجع بلطف الغدد اللعابية إلى الجانب، لفضح القصبة الهوائية.
ثم تشريح الشريان السباتي المشترك، أو CCA، خالية من الأنسجة المحيطة بها والعصب المبهم. بعد ذلك، تمرير قسمين صغيرين من خياطة غير قابلة للذوبان 6-0 تحت CCA، دورسال إلى CCA، وبطني إلى العصب المبهم. رسم واحد ربطة عنق الحرير أقرب إلى الجراح، وربطها فضفاضة حول CCA.
ثم ربط فضفاضة التعادل الحرير الثاني نحو تشعب الشرايين السباتية الداخلية والخارجية. بعد ذلك ، قم بتطبيق مقطع microvascular فوق ربطة العنق البعيدة ، مما يضمن عدم إعاقة التشعب. استخدام مقص الوريدي الصغير لجعل ثقب صغير في CCA.
أدخل خيوط صغيرة مغلفة بـ 7-0 من السيليكون في CCA، وتقدمها نحو المقطع المجهري الأوعية الدموية. ثم تشديد التعادل القاصي لربط خيوط في مكان. واستخدام أصحاب مقطع لإزالة مقطع microvascular.
بعد ذلك، تقدم خيوط في الشريان السباتي الداخلي، أو ICA. بمجرد أن يمر رأس خيوط التعادل، وسحب التعادل أكثر إحكاما، لمنع فقدان الدم. باستخدام ربطة عنق الحرير، ورفع وسحب CCA إلى الجانب الخارجي من جسم الماوس، وتوجيه خيوط إلى منعطف، الماضي افتتاح الشريان pterygopalatine، أو PPA.
بمجرد أن تكون خيوط في مكانها ، وتأمينه عن طريق تشديد التعادل الحرير البعيدة أكثر من ذلك. في نهاية فترة MCAO، تراجع خيوط حتى رئيس خيوط بيضاء مرئية بوضوح. ثم تخفيف التعادل CCA القاصي فقط بما فيه الكفاية لإزالة رئيس خيوط معظم الطريق، للخروج من السفينة.
بعد ذلك، إزالة رئيس خيوط تماما من السفينة. بعد ذلك، ضع مقطع microvascular في الوضع الأفقي، نحو CCA التشعب، وبجواب التعادل. ثم ضع مقطع آخر أسفل ربطة عنق CCA القريبة ، تجاه الجراح.
استخدم بعناية 5 دومون ملقط لإزالة كل من ربطات العنق الحريرية. وتجفيف المنطقة باستخدام براعم القطن العقيمة. ثم أضف محلولي فيبرينوجين وثرومبين للتسرب واحد واثنان، إلى طبق بيتري معقمة.
باستخدام مقص وريدي الصغرى وتقنية تشريح حادة، والحصول على شريحة بطنية رقيقة من العضلات sternocleidomastoid. ثم، وذلك باستخدام دومون 5 ملقط، واتخاذ وسادة الأنسجة ومزجها بالتساوي عبر فيبرينوجين وثرومبين مانع التسرب الحلول. هنا من المهم التأكد من وسادة الأنسجة كبيرة بما يكفي لتغطية شق CCA.
وبمجرد أن يتم خلطه عبر الحلين ، يجب وضعه على الفور على الشق ، لمنع الإفراط في التخثر والالتصاق الضعيف. مرة واحدة مختلطة بين الحلين, إزالة وسادة الأنسجة إلى شق CCA. ضع وسادة الأنسجة مسطحة على الشق مع الضغط المتوسط، والملباب مفتوحة.
إزالة بسرعة مقطع الأوعية الدموية الدقيقة، في حين عقد وسادة الأنسجة في مكان. بعد ذلك، تخفيف الضغط ببطء من وسادة الأنسجة، والسماح للدم بالتدفق تحت منطقة شق. الآن، ببطء وبلطف الإفراج عن الضغط من مقطع microvascular القريبة، ثم إزالة تماما.
إزالة مقطع أعلى يسمح لكمية صغيرة من الدم لتنشيط تسرب. يسمح إصدار ثابت للمقطع القاصي بزيادة الضغط التدريجي في موقع الشق ، مما ينشط أكثر ويساعد على منع فشل الإصلاح. وأخيرا، بمجرد أن يتم إغلاق السفينة، خياطة الجرح مع خياطة 6-0 dissolvable.
في هذا البروتوكول ، تم إجراء انسداد الشريان الدماغي الأوسط ، أو MCAO ، على 24 فأرًا ذكرًا بالغًا. وأظهر تجنب الربط بين اللجنة الاقتصادية لأفريقيا وإضافة المسكنات اتجاها نحو انخفاض الوزن في 48 ساعة بعد MCAO. بعد خمس دقائق من إزالة خيوط, تدفق الدم الدماغي الإقليمية زادت بشكل ملحوظ في منطقة الدماغ من MCA.
وقد تم الحفاظ على الضخ حتى تصل إلى إصلاح السفينة، مع زيادة في الضخ إلى أراضي MCA، بعد إصلاح السفن CCA. وهذا يشير إلى أن إصلاح CCA سمح بزيادة ضخ الدم إلى الأراضي الإقفاري، مقارنة بالاعتماد على دائرة ويليس وحدها. تم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي المرجح T2 لتحديد إجمالي مسح LV و DTI لتحديد LV الأساسية في 48 ساعة بعد MCAO.
ولم يكن هناك فرق كبير بين هاتين المجموعتين. ومن المثير للاهتمام، أن التباين لمجموع وLV الأساسية قد انخفض بشكل كبير في مجموعة إصلاح CCA. وأشار تحليلنا إلى أن عددا أقل من الحيوانات لكل مجموعة المعالجة سوف تكون هناك حاجة لإثبات انخفاض 30٪ في LV، بعد MCAO، وذلك باستخدام إصلاح CCA، مقابل الإجراء CCA ligated نموذجي.
أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر التأكد من أن حزمة الأنسجة ذات حجم كاف لتغطية شق CCA. أيضا، والسرعة هو المهم، لمنع التسرب التخثر المفرط، قبل وضع لوحة على CCA.
