يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في الفيزيولوجيا المرضية لتصلب الشرايين المبكر في الفئران. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي الكفاءة والسرعة التي يؤدي بها الألدوستيرون إلى تطوير لويحات تصلب الشرايين في نمو البالغين. العرض التوضيحي المرئي لهذه الطريقة أمر بالغ الأهمية لأن بعض الخطوات التقنية يصعب تعلمها من خلال تعليم النص وحده.
إثبات الإجراء سيكون كاترينا مامي، عالمة من مختبري. ارتداء قفازات جراحية، إرفاق أنبوب ملء مضخة صغيرة إلى حقنة ملليلتر واحد وتحميل الأنبوب مع 125 ميكرولتر من الألدوستيرون أو حل السيارة. أدخل أنبوب التعبئة من خلال الثقب في الجزء العلوي من المضخة المصغرة حتى يمكن أن تقدم أي مزيد من وملء ببطء المضخة مع حل الألدوستيرون.
التوقف عن ملء المضخة عندما حبة من السوائل ترتفع من الجسم مضخة وإزالة بعناية أنبوب ملء. أدخل منظم التدفق في جسم المضخة الصغيرة ، مع الحرص على أن المنظم هو بذر بإحكام ضد جسم المضخة ورئيس المضخة المملوءة في منبر يحتوي على محلول ملحي معقمة عند 37 درجة مئوية ، لمدة تصل إلى 24 ساعة قبل الزرع. لزرع المضخات، واستخدام شفرة حلاقة لإزالة الشعر من موقع الجراحة وتطهير الجلد المكشوف مع 70٪ من الكحول isopropyl غارقة، غير المنسوجة مادة وسادة.
بعد ذلك، قم بعمل شق من 0.8 إلى سنتيمتر واحد من خلال الجلد، ولكن ليس الأنسجة الأساسية واستخدم ملقط لفتح الشق. باستخدام التروكر في اليد الأخرى، انتشار الجلد لخلق جيب للمضخة من شق نحو الكتف وإدراج المضخة في شق، مع رئيس المنظم الموجهة نحو الجزء الأمامي من الماوس، ودفع بلطف المضخة تماما في الجيب بحيث يكون هناك ما يكفي من الجلد لإغلاق الجرح دون توتر أو تمتد. مرة واحدة وقد تم إدراج المضخة، خياطة شق مع سلك الجراحة واستخدام مسحة نظيفة لتطبيق موضعي، 10٪ povidone اليود المرهم.
ثم تسمح للماوس لاسترداد على مرحلة الاحترار مع مراقبة حتى إعادة شغل كامل. عند نقطة النهاية التجريبية المناسبة، اثقب الماوس عبر البطين الأيسر باستخدام الضخ للجاذبية مع 10 إلى 15 ملليلتر من الجليد البارد DPBS، تليها 40 إلى 50 ملليلتر من 10٪ من صياغة المخزنة مؤقتًا. بعد 10 إلى 20 دقيقة، ضع الماوس تحت المجهر الاستريو واستخدم ملقط ومقص لإزالة الأنسجة الدهنية الوديلية والرادية الزائدة.
عقد القلب ثابت مع ملقط وقطع عموديا على وصول القوس الأبهري، أقرب ما يمكن إلى القلب، دون التسبب في ضرر. مرة واحدة وقد تم فصل القلب من الشريان الأبهر, استخدام مشرط لقطع عرضية على طول خط مستقيم, الانضمام إلى النقاط السفلية من الأذين الأيمن والأيسر وملء الجزء العلوي من القلب المفتوح مع مجمع درجة حرارة القطع الأمثل. ضع النسيج المُجَرَّح مع قالب بلاستيكي من المقطع المبرد مع محور الشريان الأورطي الموضوع عموديًا على قاعدة القالب المستطيل وغطّي الأنسجة بـ OCT الطازج.
الخلفية القالب لضمان أن الأنسجة موجهة بشكل صحيح، ثم وضع بعناية القالب على لوحة معدنية على الجليد الجاف، والتفاف القالب كله مع احباط الفضة للتخزين ناقص 80 درجة مئوية عندما يتحول أوكت الأبيض. عندما يصل معدّات التبريد إلى ناقص 20 درجة مئوية، قم بتركيب كتلة القلب المجمدة على حامل العينة مع البطين الذي يواجه الخارج وأدخل حامل العينة في رأس توجيه العينة. ضبط اتجاه حامل العينة إلى قسم كتلة مع عمودي جذر الأبهري على شفرة وقطع كتلة حتى يتم التوصل إلى الجذر الأبهري.
جمع المقاطع التسلسلية على الشرائح الزجاجية، ورصد التشكيل الجانبي التشريحي الجذر الأبهري، حتى تظهر جميع الصمامات الأبهري الثلاثة. ثم جمع ستة إلى ثمانية، 10 ميكرومتر سميكة أو حتى يختفي أحد الصمامات الثلاثة أو لم يعد سليما. لزيت أحمر O الدهون محايدة تلطيخ، إصلاح المقاطع في 70 ملليلتر من 37٪ الفورمالديهايد لمدة خمس دقائق، تليها غسل شامل في مياه الصنبور.
بعد دقيقتين إلى ثلاث دقائق، لطخة قبالة الوصول إلى المياه وصمة عار المقاطع في 70 ملليلتر من 0.3٪ النفط الأحمر O لمدة 10 دقائق. في نهاية الحضانة، وغسل الشرائح في ماء الصنبور لمدة 10 دقائق وصمة عار الخلايا لمدة دقيقة واحدة في 70 ملليلتر من الهماوكسيلين ماير، تليها غسل المياه دقيقة واحدة وemersion دقيقة واحدة في 70 ملليلتر من 0.5٪ كربونات الليثيوم. ثم غسل الخلايا في الماء لمدة دقيقة واحدة النهائي وجبل المقاطع مع المتوسطة المائية تصاعد للتصوير عن طريق المجهر الخفيفة.
بعد أربعة أسابيع من العلاج، أظهرت الفئران خروج المغلوب apolipoprotein-E زيادة كبيرة في محتوى الدهون، مقارنة بالحيوانات من النوع البرية التحكم. وعلاوة على ذلك، يزيد علاج الألدوستيرون من محتوى الضامة في الحيوانات بالضربة القاضية كما يتضح من تلطيخ ماك-3 ويشير إلى لوحة تصلب الشرايين أكثر التهابا في هذه الحيوانات مقارنة بالفئران المعالجة بالمركبات. ومع ذلك، لا يغير علاج الألدوستيرون محتوى الكولاجين من لويحات تصلب الشرايين.
أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر أن هذه الطريقة يتم التحقق من صحتها فقط لفئران apolipoprotein التي هي عرضة بشكل طبيعي لتطوير تصلب الشرايين عند تغذية صبغة atherogenic. ولذلك، لا يمكن تطبيقه على نماذج حيوانية مختلفة. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل التلطيخ بالأشعة لتحديد تصلب الشرايين في منطقة الأبهري الأخرى وتحديد إجمالي العبء تصلب الشرايين.
بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال تصلب الشرايين لاستكشاف آلية مبكرة لتنشأة الشرايين ، مثل الالتهاب والتفكك البطانية. لا تنس أن العمل مع المركبات المتطايرة مثل إيسوفان و الفورستين يمكن أن تكون خطرة للغاية وأن الاحتياطات، مثل ارتداء قناع الوجه مختبر السلامة ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
