الحصول على كسور الأوعية الدموية السترومية، أو SVFs، من lipoaspirates يتطلب الهضم مع الكولاجيناز، مما يزيد من خطر التلوث البيولوجي. وينبغي تطوير طريقة أفضل للحصول على SVF دون collagenase. هذه التقنيات تمكننا من الحصول على SVF في مصفوفة خارج الخلية الأصلي من خلال عملية ميكانيكية بسيطة.
إثبات الإجراء سيكون شيهانغ تشن، طالب غراد من مختبرنا. بعد الحصول على عينات الدهون، ونقل lipoaspirates في أنبوب واحد 50 ملليلتر، والسماح للدهون المقطوعة لتكدير لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، استخدم ماصة تلميح واسعة لسحب الدهون من الطبقة العليا من الأنبوب إلى أنبوب جديد 50 ملليلتر وتدور أسفل الدهون عن طريق الطرد المركزي.
الطبقة العليا في الأنبوب هي جزء الدهون كولمان. نقل 2/3 العليا من الدهون كولمان إلى أنبوب جديد 15 ملليلتر. ويعتبر هذا الجزء من الدهون منخفضة الكثافة.
نقل الثلث السفلي من الدهون كولمان إلى أنبوب 15 ملليلتر الثانية. ويعتبر هذا الجزء من الدهون عالية الكثافة. لإنتاج مصفوفة خارج الخلية الرمال الكسر هلام الأوعية الدموية من الدهون منخفضة الكثافة، استخدم اثنين من الحقن 20 ملليلتر متصلة من قبل أنثى لأنثى luer قفل موصل إلى 10 ملليلتر intershift من الدهون منخفضة الكثافة.
هذه هي الخطوة الرئيسية لتدمير الخلايا الشحمية. السرعة والوقت الذي يتم تنفيذ التحول بين intersyringe يساهم في جودة المنتج النهائي. بعد الدورة الفاصلة الأخيرة، وجمع الدهون عن طريق الطرد المركزي ونقل طبقة النفط العليا إلى أنبوب 15 ملليلتر.
ثم نقل لزجة المصفوفة خارج الخلية الوسطى stromal الأوعية الدموية كسر طبقة هلام في أنبوب جديد 15 ملليلتر المخروطية. لإنتاج مصفوفة خارج الخلية الكسر العضادي الكسر هلام من الدهون عالية الكثافة، إضافة ملليلتر من الكسر النفط منخفض الكثافة إلى خمسة ملليلتر من عينة الدهون عالية الكثافة. Intershift الدهون المختلطة كما هو موضح حتى لوحظ flocculate داخل مستحلب.
جمع flocculate عن طريق الطرد المركزي والتخلص من طبقة النفط العلوي. ثم جمع طبقة الأوسط لزجة وخلط هذا الكسر مع المصفوفة خارج الخلية الكثافة المنخفضة عينة هلام كسر الأوعية الدموية. بعد معالجة الدهون كولمان إلى مصفوفة خارج الخلية الرمال الكسر الأوعية الدموية هلام، وحجم النفط التخلص يستغرق 80٪ من الحجم النهائي، ويعتبر فقط 20٪ من الأنسجة الدهنية المحفوظة تحت طبقة النفط مصفوفة خارج الخلية الكسر الأوعية الدموية الكسر.
مصفوفة خارج الخلية stromal الأوعية الدموية الجل الكسر لديه الملمس السائل مثل السلس الذي يتيح لها أن تمر من خلال إبرة دقيقة قياس 27. ومع ذلك، يتكون دهون كولمان من بنية الدهنية المتكاملة مع ألياف كبيرة التي يمكن أن تمر فقط من خلال قنية قياس 18. في اليوم الثالث بعد الزرع ، تظهر أعداد كبيرة من الخلايا الدهنية قبل الصغيرة الحجم مع قطرات الدهون المتعددة داخل الخلايا ، والأنسجة الضامة واسعة الأوعية الدموية ، والخلايا الالتهابية المتسللة.
ابتداء من اليوم 15 ، يبدأ عدد الخلايا الالتهابية في التقلص تدريجيا ، وتبدأ الخلايا الشحمية في النضج. بحلول اليوم 90، تم استبدال معظم النسيج الضام الوعائي في الطعوم بالكتابيت الدهنية الناضجة. مصفوفة خارج الخلية strocular الكسر الأوعية الدموية الجل الطعوم تحتوي أيضا على بعض perilipin adipocytes إيجابية بعد ثلاثة أيام من زرع, مع الصغيرة الحجم قبل adipocytes, مع قطرات الدهون داخل الخلايا متعددة بداية لتظهر في اليوم 15.
كل حقل من اليوم 90 مصفوفة خارج الخلية مصفوفة strocular الأوعية الدموية الكسر الجل أقسام الكسب غير المشروع المعرض العديد من adipocytes إيجابية perilipin والأوعية الدموية شكلت حديثا. يمكن إجراء عملية استئصال الخلايا في التدفق لتحديد السكان الخلويين في المنتج. ويمكن إجراء المسح المجهري الإلكترون لتصور المجهرية للمنتج.
هذه التقنية يوفر طريقة بسيطة للجراحين والباحثين للحصول على منتج مع تركيز عال من خلايا SVF مع ألياف مصفوفة خارج الخلية الأصلية من الأنسجة الدهنية.
