تم تمويل هذا العمل جزئيا من قبل مؤسسة PhRMA وجائزة البحث والباحث من جامعة ماريلاند ، كوليدج بارك. نشكر البروفيسور داريل إيرفين على دعم العمل الأولي الذي تم إجراؤه في الانتهاء من "الهندسةالموقعية للجسم المجهري للعقدة الليمفاوية عن طريق الحقن داخل الأنف لجسيمات البوليمر المساعد". 5

تم الانتهاء من جميع الدراسات الحيوانية في هذا البروتوكول وفقا للمبادئ التوجيهية الاتحادية، والدولة، والمحلية، وذلك باستخدام بروتوكولات استعرضتها ووافقت عليها لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للحيوانات في جامعة ميريلاند (IACUC).
1. تركيب الجسيمات الدقيقة والنانوية المثبتة بالدهون
<ol><li>في قارورة زجاجية 7 مل (ق)، والجمع بين DOPC، DSPE-PEG، والدهون DOTAP في نسبة الضرس 60:20:20 لإعداد مزيج الدهون الرئيسية.<ol>
<li>لتجميع عينة واحدة: نقل 242.9 ميكرولتر، 287.4 ميكرولتر، و 71.9 ميكرولتر، من DOPC، DSPE-PEG، وDOTAP على التوالي، في القارورة باستخدام 2 مل من الماصة المصلية الزجاجية.</li>
		<li>لتجميع عينات متعددة: مضاعفة كل حجم الدهون أعلاه من قبل عدد من العينات والجمع في قارورة واحدة، ثم نقل aliquots متساوية من هذا الخليط الدهون في قوارير المقابلة لكل عينة ليتم إعدادها.</li>
		<li>الدهون الجافة تحت تيار لطيف من غاز النيتروجين لمدة 10 دقائق، أو وضعها في فرن فراغ بين عشية وضحاها.</li>
	</ol>
</li>
	<li>في قارورة زجاجية واحدة فارغة سعة 20 مل، قم بإذابة 80 ملغ من PLGA في 5 مل من ثنائي كل كلوروميثان لكل عينة جسيم لتوليد محلول مخزون بوليمر 16 ملغ/مل.</li>
	<li>أضف 5 مل من محلول البوليمر إلى القارورة (القارورات) التي تحتوي على الدهون المجففة والغطاء والدوامات لمدة 30 ثانية.</li>
	<li>لتجميع الجسيمات الدقيقة:<ol>
<li>ابدأ في سونيكينج المرحلة العضوية التي تحتوي على البوليمر والدهون وغيرها من البضائع غير القابلة للذوبان في الماء على الجليد في 12 W باستخدام sonicator.</li>
		<li>إنشاء مستحلب الماء في النفط (ث / س) باستخدام ماصة لإضافة 500 ميكروغرام من المقطر H2O، أو H2O تحتوي على 1 ملغ من الببتيد والبروتين، أو غيرها من البضائع القابلة للذوبان في الماء.</li>
		<li>مواصلة سونيكاتينج لمدة 30 ثانية في 12 W على الجليد، هزاز بلطف القارورة صعودا وهبوطا وجانب إلى جنب حول طرف سونيكاتور لضمان استحلاب كامل.</li>
		<li>إنشاء مستحلب الماء في النفط في الماء (ث / س / ث) عن طريق صب مستحلب ث / س في 40 مل من H2O في كوب 150 مل.</li>
		<li>تجانس لمدة 3 دقائق في 16،000 دورة في الدقيقة باستخدام المتجانس الرقمي.</li>
		<li>إضافة شريط اثارة المغناطيسي، ونقل الكأس إلى لوحة اثارة، والسماح للمستحلب ث / س / ث لتحريك بين عشية وضحاها لإزالة المذيبات الزائدة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>لتجميع الجسيمات النانوية:<ol>
<li>بدء sonicating المرحلة العضوية التي تحتوي على البوليمر والدهون، وغيرها من البضائع غير القابلة للذوبان في الماء على الجليد في 14 W.</li>
		<li>إنشاء مستحلب ث / س باستخدام ماصة لإضافة 500 ميكروغرام من المقطر H2O، أو H2O تحتوي على 1 ملغ من الببتيد والبروتين، أو غيرها من البضائع القابلة للذوبان في الماء.</li>
		<li>مواصلة سونيكاتيينج لمدة 30 ثانية في 14 واط على الجليد.</li>
		<li>إنشاء مستحلب ث / س / ث عن طريق صب مستحلب ث / س إلى 40 مل من H2O في كوب 150 مل و sonicating لمدة 5 دقائق في 16 واط على الجليد. صخرة بلطف القارورة صعودا وهبوطا وجانبا إلى جنب حول طرف sonicator لضمان استحلاب كامل.</li>
		<li>إضافة شريط اثارة المغناطيسي، ونقل القارورة إلى لوحة اثارة والسماح للمستحلب ث / س / ث لتحريك بين عشية وضحاها لإزالة المذيبات الزائدة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>في صباح اليوم التالي، غسل وجمع الجسيمات:<ol>
<li>صب مستحلب من خلال 40 ميكرومتر نايلون شبكة مصفاة الخلية في أنبوب مخروطي 50 مل.</li>
		<li>جزيئات الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 5000 × ز للجسيمات الدقيقة أو 5 دقائق في 24000 × غرام للجسيمات النانوية.</li>
		<li>decant الجسيمات العملاقة وغسل عن طريق إعادة تعليق في 1 مل من H2O.</li>
		<li>نقل الجسيمات المعلقة إلى أنبوب 1.5 مل من أجهزة الطرد المركزي الدقيق.</li>
		<li>جهاز طرد مركزي لمدة 5 دقائق عند 5000 × غرام للجسيمات الدقيقة أو 5 دقائق عند 24500 × غرام للجسيمات النانوية.</li>
		<li>غسل الجسيمات مرتين أكثر عن طريق إزالة supernatant، وإعادة تعليق في 1 مل H2O، والطرد المركزي كما هو الحال في الخطوة 1.6.5. بعد الغسيل، تعليق الجسيمات في 1 مل H2O للاستخدام الفوري، أو lyophilize للتخزين الموسع.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. قياس العائد التوليفي
<ol><li>Preweigh فارغة 20 مل قارورة زجاجية. إضافة 100 ميكرولتر من تعليق الجسيمات إلى القارورة preweighed بعد pipetting صعودا وهبوطا مع micropipette لخلط.</li>
	<li>Lyophilize الجسيمات أو الجافة تحت تيار لطيف من النيتروجين.</li>
	<li>وزن القارورة التي تحتوي على البوليمر المجفف. تحديد إنتاجية الجسيمات في القارورة عن طريق طرح الوزن الأصلي للقارورة من كتلة القارورة التي تحتوي على الجسيمات المجففة.</li>
	<li>تحديد العائد الكلي للجسيمات عن طريق ضرب كتلة الجسيمات في القارورة بعامل التخفيف. لتحديد نسبة العائد، قم بتقسيم كتلة الجسيمات على الحد الأقصى لكتلة الإدخال النظري واضرب بنسبة 100٪.</li>
</ol>3. تحديد حجم الجسيمات
<ol><li>تنظيف خلية كسر الزجاج على غرار cuvette الموردة عن طريق ملء مع الماء deionized ومسح مع مسحة القطن يميل. نقل 10 مل من المقطر H2O إلى الخلية فصيل تنظيفها، إضافة المغناطيسية الصغيرة اثارة شريط، وتحميل الخلية كسر في جبل الخلية من محلل حجم الجسيمات.</li>
	<li>ضبط سرعة التحريك المغناطيسي في محلل الجسيمات لتحقيق خلط كامل في خلية الكسر وإغلاق باب المقصورة.</li>
	<li>محاذاة الليزر إلى خلية الكسر باستخدام واجهة برنامج الصك.</li>
	<li>استخدم واجهة برنامج الأداة لتسجيل قراءة خط الأساس مع الخلية الكسرية التي تحتوي على H2O المقطر فقط.</li>
	<li>ماصة تعليق الجسيمات الأصلي صعودا وهبوطا مع micropipette لخلط.</li>
	<li>ماصة 10 ميكرولتر من تعليق الجسيمات (عادة ما يقرب من 0.5 ملغ) في خلية الكسر. تأكد من أن حجم عينة الجسيمات المضافة إلى الخلية كافية لتوليد قوة الإشارة في النطاق المناسب كما هو مبين في واجهة برنامج الجهاز. تعتمد الكتلة الفعلية للجسيمات المطلوبة على نسبة العائد والخصائص البصرية لعينة الجسيمات.</li>
	<li>أغلق باب حجرة محلل حجم الجسيمات وقاس حجم الجسيمات باستخدام مؤشر انكساري قدره 1.60 ل PLGA.</li>
	<li>استخدام واجهة البرنامج لحساب قطر الجسيمات باستخدام أساس عدد.</li>
</ol>4. تصور الجسيمات
<ol><li>تعليق الجسيمات ماصة صعودا وهبوطا مع micropipette لخلط. تخفيف تعليق الجسيمات إلى 1 ملغ / مل في الماء deionized.</li>
	<li>إعداد شريحة المجهر بإضافة 3 ميكرولتر من تعليق الجسيمات المخففة وتركيب غطاء بزاوية 45 درجة لتجنب تكوين الفقاعة. ضع الشريحة على مرحلة المجهر والصورة باستخدام مجموعات التصفية المناسبة لكل شحنة فلورية.</li>
</ol>5. إعداد الفئران ل I.LN. حقن
<ol><li>إعداد محلول صبغ التتبع:<ol>
<li>إعداد محلول 0.1٪ (ث / v) من صبغة التتبع عن طريق حل 10 ملغ من مسحوق الصبغة مع 10 مل من H2O المقطر.</li>
		<li>تعقيم محلول الصبغة في قارورة زجاجية باستخدام فلتر حقنة 0.2 ميكرومتر.</li>
	</ol>
</li>
	<li>قبل يوم واحد من الحقن، تخدير الماوس باستخدام isoflurane وفقا لبروتوكول IACUC الحيوانية المعتمدة. لتقييم عمق التخدير، قم بإجراء اختبار انعكاس قرصة إصبع القدم ومراقبة معدل التنفس لضمان معدل تنفس يبلغ حوالي 100-140 نفسا في الدقيقة.</li>
	<li>حلق الشعر في قاعدة الذيل و hindquarter باستخدام المقصات في حين يتم تخدير الماوس. إزالة الشعر من الجانب البطني للحيوان وجانبيا حولها إلى الجانب الظهري فقط فوق مفصل الساق الخلفية (الورك).</li>
	<li>حقن صبغة التتبع.<ol>
<li>لكل حقنة صبغة، استخدم ميكروبايت لنقل 10 ميكرولتر من محلول الصبغة إلى أنبوب طرد دقيق، وتوبيخ كامل 10 ميكرولتر إلى إبرة 31G متصلة بحقنة 1 مل.</li>
		<li>حقن 10 ميكرولتر من محلول صبغ تحت الجلد على كل جانب من قاعدة الذيل حيث قص الشعر، وإعادة تحميل بين الحقن.</li>
	</ol>
</li>
	<li>إزالة الشعر المتبقي عن طريق تطبيق كريم مزيل الشعر خفيفة عن طريق مسحات القطن. تأكد من تغطية المنطقة بين الفخذ الخلفي والبطن.</li>
	<li>السماح كريم إزالة الشعر لاحتضان على الجلد لمدة 3 دقائق. بعد الحضانة، يد قفاز مبللة مع H2O الدافئ وفرك بلطف كريم إزالة الشعر في الجلد.</li>
	<li>إزالة كريم مزيل الشعر على الفور عن طريق التبول يد قفاز مع H2O الدافئة وفرك قاعدة الذيل و hindquarter. كرر حتى تتم إزالة إزالة الشعر الزائد، مع التأكد من الحفاظ على اليد الرطب لتجنب تهيج.</li>
	<li>إزالة إزالة الشعر المتبقية من الماوس عن طريق التبول قطعة قماش ناعمة أو منشفة ورقية مع H2O الدافئة وفي حركة واحدة، ومسح الجزء السفلي من الماوس. تجنب حركة فرك لمنع الكشط أو تلف الجلد إلى الماوس.</li>
	<li>السماح الماوس لاسترداد تحت مصباح الحرارة والعودة إلى عقد.</li>
</ol>6. I.LN. حقن الجسيمات
<ol><li>في اليوم التالي، تخدير الماوس باستخدام isoflurane وفقا لبروتوكول IACUC الحيوانية المعتمدة.</li>
	<li>فحص الماوس للتأكد من تصريف صبغة التتبع في كل عقدة الليمفاوية الأربية. يجب أن تكون العقدة الليمفاوية مرئية ك بقعة مظلمة بالقرب من الفخذ الخلفي والبطن.</li>
	<li>إعداد محلول حقن الجسيمات:<ol>
<li>إعادة ضغط الجسيمات في المقطر H2O في تركيز الحقن المطلوب. لكل حقنة، استخدم ميكروبايت لنقل 10 ميكرولتر من محلول الجسيمات إلى أنبوب طرد دقيق.</li>
		<li>يستنشق كامل 10 ميكرولتر في إبرة الأنسولين 31G تعلق على حقنة 1 مل.</li>
	</ol>
</li>
	<li>حقن جرعة الجسيمات:<ol>
<li>بعد تصور LN، تشديد الجلد حول LN باستخدام الإبهام والسبابة، والإصبع الأوسط لسحب السخرية الجلد والسماح لوضع تسيطر عليها من حجم الحقن.</li>
		<li>اقترب من LN مع الإبرة بزاوية 90 درجة إلى الجلد واختراق الجلد عبر LN المصبوغ إلى عمق 1 مم.</li>
		<li>قم بحقن وحدة التخزين بالكامل ببطء. أثناء الحقن، لاحظ حجم LN من خلال الجلد لتأكيد الحقن عن طريق توسيع LN مرئية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>السماح للفأر بالاسترداد تحت مصباح حراري والعودة إلى عقد أو إجراء اختبارات إضافية.</li>
</ol>لتقنيات التحليل ذات الصلة(مثل علم الأنسجة، قياس التدفق الخلوي) انظر JoVE المقالات 265، 1743، و 3054 والبروتوكولات الحالية في علم المناعة،الفصلين 5 و 2115-22.

<ol>
	<li>Swartz, M. A., Hirosue, S., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+Approaches+to+Immunotherapy.">Engineering Approaches to Immunotherapy.</a> Sci. Transl. Med. 4, (2012).</li><li>Adamina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranodal+immunization+with+a+vaccinia+virus+encoding+multiple+antigenic+epitopes+and+costimulatory+molecules+in+metastatic+melanoma.">Intranodal immunization with a vaccinia virus encoding multiple antigenic epitopes and costimulatory molecules in metastatic melanoma.</a> Mol. Ther. 18, 651-659 (2010).</li><li>Ribas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Lymph+Node+Prime-Boost+Vaccination+against+Melan+A+and+Tyrosinase+for+the+Treatment+of+Metastatic+Melanoma:+Results+of+a+Phase+1.">Intra-Lymph Node Prime-Boost Vaccination against Melan A and Tyrosinase for the Treatment of Metastatic Melanoma: Results of a Phase 1.</a> Clinical Trial. Clin. Cancer Res. 17, 2987-2996 (2011).</li><li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+allergen+administration+renders+specific+immunotherapy+faster+and+safer:+a+randomized+controlled+trial.">Intralymphatic allergen administration renders specific immunotherapy faster and safer: a randomized controlled trial.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 17908-17912 (2008).</li><li>Jewell, C. M., Lopez, S. C. B., Irvine, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+engineering+of+the+lymph+node+microenvironment+via+intranodal+injection+of+adjuvant-releasing+polymer+particles.">In situ engineering of the lymph node microenvironment via intranodal injection of adjuvant-releasing polymer particles.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15745-15750 (2011).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+kinetics+determines+immune+reactivity.">Antigen kinetics determines immune reactivity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5189-5194 (2008).</li><li>Randolph, G. J., Angeli, V., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic-cell+trafficking+to+lymph+nodes+through+lymphatic+vessels.">Dendritic-cell trafficking to lymph nodes through lymphatic vessels.</a> Nat. Rev. Immunol. 5, 617-628 (2005).</li><li>Irvine, D. J., Jewell, C. M., Ducheyne, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+132.">Ch. 132.</a> Comprehensive Biomaterials. , (2011).</li><li>Moon, J. J., Huang, B., Irvine, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+Nano-+and+Microparticles+to+Tune+Immunity.">Engineering Nano- and Microparticles to Tune Immunity.</a> Adv. Mater. 24, 3724-3746 (2012).</li><li>Reddy, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+lymphatic+transport+and+complement+activation+in+nanoparticle+vaccines.">Exploiting lymphatic transport and complement activation in nanoparticle vaccines.</a> Tissue Eng. Part A. 14, 734-735 (2008).</li><li>Bershteyn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer-supported+lipid+shells,+onions,+and+flowers.">Polymer-supported lipid shells, onions, and flowers.</a> Soft Matter. 4, 1787-1791 (2008).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intralymphatic+injection+of+peptide+vaccines+enhances+immunogenicity.">Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity.</a> Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).</li><li>Mohanan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+routes+affect+the+quality+of+immune+responses:+A+cross-sectional+evaluation+of+particulate+antigen-delivery+systems.">Administration routes affect the quality of immune responses: A cross-sectional evaluation of particulate antigen-delivery systems.</a> J. Controlled Release. 147, 342-349 (2010).</li><li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+mapping+in+the+mouse.">Lymph node mapping in the mouse.</a> J. Immunol. Methods. 332, 170-174 (2008).</li><li>He, H., Courtney, A. N., Wieder, E., Sastry, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolor+Flow+Cytometry+Analyses+of+Cellular+Immune+Response+in+Rhesus+Macaques.">Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques.</a> J. Vis. Exp. , 1743 (2010).</li><li>Matheu, M. P., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+2-Photon+Imaging+of+Peripheral+Lymph+Nodes+in+Mice.">Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice.</a> J. Vis. Exp. e265. , 265 (2007).</li><li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Imaging+of+T+Cells+in+Murine+Lymph+Node+Slices+with+Widefield+and+Confocal+Microscopes.">Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes.</a> J. Vis. Exp. , 3054 (2011).</li><li>Donaldson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Current Protocols in Immunology: Immunofluorescence Staining. , (2001).</li><li>Hofman, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Current Protocols in Immunology: Immunohistochemistry. , (2001).</li><li>Holmes, K., Lantz, L. M., Fowlkes, B. J., Schmid, I., Giorgi, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Current Protocols in Immunology: Preparation of Cells and Reagents for Flow Cytometry. , (2001).</li><li>Sharrow, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Current Protocols in Immunology: Overview of Flow Cytometry. , (2001).</li><li>Sharrow, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Current Protocols in Immunology: Analysis of Flow Cytometry Data. , (2001).</li><li>Anderson, J. M., Shive, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradation+and+biocompatibility+of+PLA+and+PLGA+microspheres.">Biodegradation and biocompatibility of PLA and PLGA microspheres.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 28, 5-24 (1997).</li><li>Danhier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PLGA-based+nanoparticles:+an+overview+of+biomedical+applications.">PLGA-based nanoparticles: an overview of biomedical applications.</a> J. Controlled Release. 161, 505-522 (2012).</li></ol>

وقد رعت شركة HORIBA المحدودة جزئيا تكاليف الإنتاج ورسوم الوصول لهذه المقالات.

وتسمح التقنية الموصوفة في هذا البروتوكول بتوصيل اللقاحات الخاضعة للرقابة إلى ال LNs وخلايا تقديم المستضد المقيم في LN. ويمكن توطين الشحنات المغلفة بالمواد الحيوية داخل ال LN، مما يتيح التلاعب بجرعات نوع أو أكثر من البضائع التي يتم تسليمها إلى البيئة الدقيقة ل LN. وقد ثبت أن التعريب والإطلاق المراقب من جزيئات البوليمر يولد استجابة مناعية خلوية وروح الدعابة قوية بجرعات أقل بكثير من النهج التقليدية. علاوة على ذلك ، من خلال التلاعب بحجم حامل المواد الحيوية ، يمكن تعديل الوضع الأساسي للمعالجة الخلوية بين الإقبال المباشر على الجسيمات النانوية أو إطلاق الشحن خارج الخلية من الجسيمات الدقيقة الأكبر5. وتحدد هذه النتائج جدوى إيصال المواد الحيوية من ال I.LN. كمنصة لإيصال اللقاحات العلاجية.
وقد تم تركيب جزيئات PLGA مستحلب / تبخر المذيبات تستخدم على نطاق واسع في تطبيقات تسليم المخدرات23،24. وبالتالي فإن التحديات المحتملة المرتبطة بهذه التقنية تتعلق في معظمها بنجاح تحديد اللقاحات وترسبها في الموقع المستهدف للN. على الرغم من أن استخدام صبغة التتبع يسهل تصور ال LNs الأربية المستهدفة ، فإن الحجم والعمق المستهدفين تحت الجلد صغيران. وهكذا ، يوصي المؤلفون بتخصيص الوقت والفئران لممارسة إعداد وحقن الفئران. أثناء إعداد الحيوان(أي الحلاقة وتطبيق إزالة الشعر) ، يجب الحرص على عدم قطع الفئران على الجانب البطني للحيوان حيث تجعل زاوية الساق مع البطن الجلد أكثر عرضة للإصابة من المقصات. بالإضافة إلى ذلك، يجب إزالة جميع مزيل الشعر بالماء الدافئ لمنع الحيوانات من تناول الكريم أثناء سلوك الاستمالة العادي. لممارسة حقن LN، يمكن إعطاء تركيز صبغة تتبع أعلى وممارسة الحيوانات يمكن القتل الرحيم، ومن ثم حقنها عدة مرات. يمكن أن تكون نخر الفئران حقن التالية ويمكن مقارنة حجم LNs من الحيوانات المحقونة مع LN السيطرة غير مصححة. أحد قيود هذه التقنية هو الحد المادي لحجم الحقن التي يمكن تحميلها في بنية LN. يقترح بروتوكولنا حجم حقن قدره 10 ميكرولتر في الفئران ، على الرغم من أن دراسات أخرى أبلغت عن أحجام حقن أكبر على الأقل يصل إلى 20 ميكرولتر.13 ومع ذلك ، فإن التسليم المباشر لللقاحات عن طريق حقن I.LN. يسمح بتجنيب الجرعة بشكل كبير لذلك لا ينبغي أن تكون وظيفة هذه اللقاحات محدودة بشكل عام بقيود الحجم.
وكما لوحظ، فإن تغيير الخاصية المادية للجسيمات(أي الحجم) هو آلية فعالة لتغيير المسار أو النتائج الناجمة عن المواد الحيوية والشحنات المغلفة في أنسجة LN. يمكن بسهولة تعديل بروتوكول التبخر المستحلب / المذيبات لتغيير الخصائص الفيزيائية أو الكيميائية مثل الشحنة السطحية أو الوظيفة ، ومعدل التحلل الحيوي / إطلاقالشحنة 23،24. على سبيل المثال، يمكن ضبطها الحركية الإفراج من خلال التراكيب البوليمر البديلة، ويمكن تغيير وظيفة السطح باستخدام التراكيب الدهنية المعدلة أو بولي (الفينيل الكحول). ويمكن بسهولة التلاعب بالشحنة المحملة في جزيئات لاحتواء مستضدات أو مواد مضادة مختلفة لمسببات الأمراض المستهدفة. وتتحقق ميزة هذا النهج من خلال الجمع بين تسليم i.LN. وإطلاق البضائع المحلية الخاضعة للرقابة من المواد الحيوية. هذا التآزر يؤسس منصة التي يمكن استغلالها لتوليد بكفاءة الاستجابات المناعية التكيفية باستخدام جرعات دقيقة ومع انخفاض الآثار الجانبية غير محددة / الجهازية.

الغدد الليمفاوية (LNs) هي مراكز القيادة في الجهاز المناعي. في هذا الموقع المناعي، مستضد تقديم الخلايا رئيس الخلايا الليمفاوية السذاجة ضد مستضدات أجنبية محددة لتنشيط الاستجابات المناعية الخلوية والفكاهية. وهكذا أصبحت ال LNs هدفا جذابا لإيصال اللقاحات و العلاجات المناعية. لسوء الحظ ، فإن معظم استراتيجيات اللقاح تؤدي إلى تسليم مستضد ومطهرات غير فعالة وعابرة إلى الأنسجة اللمفاوية1. ولذلك يمكن أن يكون للنهج التي تحسن استهداف مكونات اللقاحات والاحتفاظ بها في اللقاحات المضادة للنواة تأثير كبير على فعالية وكفاءة اللقاحات الجديدة.
استراتيجية واحدة للتحايل على التحدي المتمثل في استهداف LN التي أظهرت اهتماما كبيرا في التجارب السريرية الجديدة مباشرة، داخل LN(i.LN.) حقن2-4. استخدمت هذه التجارب إرشادات بالموجات فوق الصوتية لتوصيل اللقاحات إلى LNs كإجراء بسيط للمرضى الخارجيين. بالمقارنة مع طرق الحقن الطرفية التقليدية، أدى هذا النهج إلى تجنيب جرعة كبيرة وتحسين فعالية في السياقات العلاجية بما في ذلك الحساسية والسرطان2-4. استخدمت هذه الدراسات حقن I.LN. من اللقاحات القابلة للذوبان(أي خالية من المواد الحيوية) التي تم تطهيرها بسرعة عن طريق التصريف اللمفاوي. لذلك، حقن متعددة- أو دورات من حقن متعددة- تدار لتحقيق هذه الآثار العلاجية المثيرة للإعجاب. تحسين الاحتفاظ في LN يمكن أن تعزز التفاعل بين مستضد و / أو الخلايا المساعد والمناعية، وزيادة تحسين فعالية فتيلة الخلايا المناعية. ويدعم هذه الإمكانات من الدراسات الحديثة التي تظهر الحركية من مستضد والتسليم المساعد تلعب دورا حاسما في تحديد الاستجابة المناعية المحددة ولدت5-7. وعلاوة على ذلك، فإن توطين الجرعات الدوائية وجرعات اللقاح وتقليلها إلى أدنى حد يمكن أن يقلل أو يزيل الآثار الجهازية، مثل الالتهاب المزمن.
وقد درست المواد الحيوية على نطاق واسع لتعزيز فعالية وكفاءة اللقاحات1،8،9. ويمكن للتغليف أو الامتزاز على ناقلات المواد الحيوية أن يحمي البضائع ماديا من التدهور وأن يتغلب على قيود الذوبان. ومن السمات البارزة الأخرى لحاملات المواد الحيوية، مثل الجسيمات الدقيقة أو النانوية البوليمرية، القدرة على تحميل عدة فئات من البضائع، ثم إطلاق هذه الشحنات على فترات خاضعة للرقابة. ومع ذلك، فإن أحد القيود الكبيرة التي لا تزال تعوق لقاحات المواد الحيوية والمواد المناعية في الجسم الحي هو الاستهداف غير الفعال للخلايا المناعية والاتجار المحدود بالغدد الليمفاوية. على سبيل المثال، الحقن المحيطي للقاحات المواد الحيوية من خلال الطرق التقليدية(مثل داخل الجلد، العضلي) عادة ما تظهر استهداف LN الفقراء، مع ما يصل إلى 99٪ من المواد المحقونة المتبقية في موقع الحقن4،10. وفي الآونة الأخيرة، تم ضبط حجم حاملات اللقاحات ذات المواد الحيوية لتحسين الاتجار التفضيلي بهذه اللقاحات أو تصريفها إلى ال LNs من خلال التدفق الخلالي8,10. وقد أدت هذه التطورات إلى تعزيز الاستجابات المناعية الخلوية والفكاهية، مما يؤكد على أهمية استهداف وهندسة بيئة ال LN للقاحات الجديدة.
تقدم هذه الورقة بروتوكول التطعيم الذي يجمع بين جزيئات البوليمر المثبتة بالدهون وتسليم I.LN. لتوليد مستودعات لقاح الإطلاق الخاضعة للرقابة5,11. بناء على الدراسات الحديثة التي تستخدم التقنيات الجراحية ل I.LN. في الفئران6,7,12,13, وضعنا استراتيجية سريعة وغير جراحية لحقن لقاحات المواد الحيوية فيالحيواناتالصغيرة 5 . الجمع بين تسليم i.LN. مع ناقلات لقاح المواد الحيوية عززت بقوة CD8 استجابة الخلايا التائية في غضون 7 أيام بعد حقنة واحدة من مستودعات لقاح الإطلاق الخاضعة للرقابة5. كما تم توليد استجابة فكاهة قوية(أي تيترز الأجسام المضادة) ؛ وارتبطت كلا التعزيزتين بزيادة الاحتفاظ بمكونات اللقاح في العقد اللمفاوية التي تم التوسط فيها عن طريق الإطلاق المراقب من ناقلات المواد الحيوية. ومن المثير للاهتمام أن حجم جزيئات اللقاح غير مصير هذه المواد مرة واحدة في LNs: أظهرت الجسيمات النانوية امتصاصا مباشرا متزايدا من قبل الخلايا ، في حين بقيت الجسيمات الدقيقة الأكبر في بيئة LN خارج الخلية وأطلقوا الشحنات(على سبيل المثال المساعد) التي تناولها مستضد مقيم في LN يقدم الخلايا5. وتشير هذه البيانات إلى مسارين يمكن استغلالهما للحصول على لقاحات جديدة عن طريق التحكم في حجم المواد الحيوية التي يتم حقنها بال i.LN.
في هذه المقالة يتم تصنيع جزيئات البوليمر القابلة للتحلل الحيوي المستقرة بالدهون (الصغرى والنوانوية) باستخدام استراتيجية مستحلب مزدوجمعدلة 5،11. خصائص الجسيمات تتميز الحيود الليزر والمجهر. ثم يتم حقن هذه الجسيمات مباشرة في LNs الإربية التي تم تحديدها غير جراحيا باستخدام صبغة التتبع الشائعة غير التكسينية14. يمكن استخدام تحليل ما بعد الحقن للشبكات غير الرقمية حسب الأنسجة أو قياس التدفق الخلوي للتحقق من توزيع الجسيمات داخل بيئة LN ، وكذلك لمراقبة امتصاص الخلايا والاحتفاظ بالجسيمات بمرور الوقت. للبروتوكولات التي تفصل المعالجة النسيجية وقياس التدفق الخلوي ، تتم إحالة القراء إلى مقالات JoVE الأخيرة وتقارير المجلات15-22. وتبين النتائج النموذجية استهداف ال LN المحلي لهذه المستودعات التي يمكن استغلالها لتحقيق استجابات مناعية فعالة وفعالة أو لتكييف المناعة لمسببات الأمراض المستهدفة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOPC)</td>
			<td style="width:71px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:119px;">850375</td>
			<td style="width:167px;">10 mg/ml stock in chloroform</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] ammonium salt (DSPE-PEG)</td>
			<td style="width:71px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:119px;">880128</td>
			<td style="width:167px;">10 mg/ml stock in chloroform</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">1,2-Dioleoyl-3-trimethylammonium-propane chloride salt (DOTAP)</td>
			<td style="width:71px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:119px;">890890</td>
			<td style="width:167px;">10 mg/ml stock in chloroform</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Polylactic-co-glycolic acid (PLGA)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2191</td>
			<td style="width:167px;">Lactide:Glycolide (50:50). MW 30,000-60,000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dichloromethane (DCM)</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BDH1113</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:71px;">Vetone</td>
			<td style="width:119px;">502017</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nair</td>
			<td style="width:71px;">Nair</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Evans blue tracer dye</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">AAA16774-09</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">U-100 BD Ultra-Fine Short Insulin Syringes, 31 G 5/16 in needle</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD328418</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Single-Use Needles, BD Medical, 21 G, 1.5 in needle</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD305167</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringes with BD Luer-Lok Tip, BD Medical, 1 ml</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BD309628</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Falcon Cell Strainers, Sterile, Corning, 40 &#181;m</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">21008-949</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vybrant DiD Cell-Labeling Solution</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">V-22887</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fluoresbrite YG Microspheres 6.00 &#181;m</td>
			<td style="width:71px;">Polysciences</td>
			<td style="width:119px;">17149</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fluoresbrite YG Microspheres 0.05 &#181;m</td>
			<td style="width:71px;">Polysciences</td>
			<td style="width:119px;">17156</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Ovalbumin, Purified</td>
			<td style="width:71px;">Worthington Biochemical</td>
			<td style="width:119px;">LS003056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:71px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Qsonica Sonicator Ultrasonic Processor Q125</td>
			<td style="width:71px;">Qsonica</td>
			<td style="width:119px;">Q125</td>
			<td style="width:167px;">1/8 in diameter microtip probe</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ultra-Turrax T 25 digital homogenizer</td>
			<td style="width:71px;">IKA</td>
			<td style="width:119px;">YO-04739-22</td>
			<td style="width:167px;">10 G dispersing element</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fluorescent Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">IX-83</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Laser Diffraction Particle Size Distribution Analyzer</td>
			<td style="width:71px;">Horiba</td>
			<td style="width:119px;">LA-950</td>
			<td style="width:167px;">Including provided cuvette-style glass fraction cell</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Professional 8685 Peanut Classic Clippers</td>
			<td style="width:71px;">Wahl</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intra-lymph node injection of biodegradable polymer particles

يعتمد توليد الاستجابة المناعية التكيفية على الصرف الفعال أو الاتجار بالمضاد إلى الغدد الليمفاوية لمعالجة وعرض هذه الجزيئات الغريبة على الخلايا الليمفاوية T و B. وهكذا أصبحت الغدد الليمفاوية أهدافا حاسمة لللقاحات الجديدة و العلاجات المناعية. وتتمثل إحدى الاستراتيجيات الحديثة لاستهداف هذه الأنسجة في حقن العقدة الليمفاوية مباشرة بمكونات اللقاح القابل للذوبان، وكانت التجارب السريرية التي تنطوي على هذه التقنية واعدة. كما تم بحث العديد من استراتيجيات المواد الحيوية لتحسين استهداف العقد الليمفاوية، على سبيل المثال، ضبط حجم الجسيمات للصرف الأمثل لجسيمات لقاح المواد الحيوية. في هذه الورقة نقدم طريقة جديدة تجمع بين حقن العقدة الليمفاوية المباشرة مع جزيئات البوليمر القابلة للتحلل الحيوي التي يمكن أن تكون محملة بمضاد أو المساعد أو مكونات اللقاح الأخرى. في هذه الطريقة يتم تصنيع الجسيمات الدقيقة البوليمرية أو الجسيمات النانوية من خلال بروتوكول مستحلب مزدوج معدل يتضمن مثبتات الدهون. يتم تأكيد خصائص الجسيمات(مثل الحجم وتحميل البضائع) عن طريق الحيود بالليزر والمجهر الفلوري على التوالي. ثم يتم تحديد الغدد الليمفاوية الماوس عن طريق الحقن الطرفي للصبغة التتبع غير السامة التي تسمح التصور من موقع الحقن الهدف وترسب لاحقة من جزيئات البوليمر في الغدد الليمفاوية. وتسمح هذه التقنية بالتحكم المباشر في جرعات وتركيبات المواد الحيوية ومكونات اللقاح التي يتم توصيلها إلى الغدد الليمفاوية ويمكن تسخيرها في تطوير لقاحات جديدة قائمة على المواد الحيوية.

يمكن تقسيم النتائج المتوقعة للبروتوكولات المعروضة في هذه المخطوطة إلى ثلاث فئات: تخليق الجسيمات، وإعداد الحيوانات، وحقن الجسيمات.
يصور الشكل 1 تركيب وتوصيف جزيئات البوليمر القابلة للتحلل الحيوي، المثبتة بالدهون الأمفيتامينية. نتائج مستحلب / المذيبات بروتوكول تخليق التبخر (الشكل 1A) يمكن تقييمها نوعيا عن طريق الفحص البصري للمحلبات النهائية المتولدة. يجب أن تكون دفعات الجسيمات مستحلبات متجانسة ومستقرة ذات مظهر معتم. وتشمل المضاعفات المستحلبات التي كريم أو flocculate، وغالبا ما يرجع ذلك إلى التخزين غير السليم للمثبتات الدهون. لتجنب عدم الاستقرار هذا، يجب تخزين الدهون عند -80 درجة مئوية في حالة جفاف أو في قارورة مغلقة مطهرة بالنيتروجين. يمكن إجراء تقييم كمي لتركيب الجسيمات باستخدام حيود الليزر أو تشتت الضوء الديناميكي لتحليل توزيع الحجم(الشكل 1B). وتشمل النتائج المتوقعة أحجام الجسيمات أحادية الوسائط الموزعة بإحكام، مما يشير إلى وجود مجموعة موحدة من الجسيمات. تولد معلمات التجميع الموصوفة في هذه المخطوطة متوسط توزيعات متوسطة تركزت على حوالي 100 نانومتر أو 3 ميكرومتر للجسيمات النانوية والجسيمات الدقيقة على التوالي. ويمكن تحقيق مزيد من التقييم النوعي لتركيب الجسيمات من خلال تعديل البروتوكول المذكور أعلاه ليشمل فئات متعددة من البضائع الفلورية. في الشكل 1C، صور المجهر من الجسيمات الدقيقة محملة الببتيد الفلوري (FITC ، الأخضر) ، وصبغة ليبوفيليك (دي دي ، الأحمر) ، وصورة تراكب (الأصفر) تأكيد خلق جزيئات ضمن نطاق الحجم المطلوب وتغليف الببتيد داخل حجم الجسيمات.
يلخص الفريقان الأولان من الشكل 2 النتائج المتوقعة لإعداد الحيوانات لاستراتيجية حقن I.LN. الموصوفة في هذه الورقة. تتضمن المنهجية وضع علامات على LNs الإربية عن طريق الحقن المحيطي لمتتبع غير السموم لتحديد موقع حقن الجسيمات اللاحقة I.LN. (الشكل 2A)5. كما لوحظ، فإن تصريف صبغة التتبع بعد الحقن تحت الجلد في قاعدة الذيل سيمكن من تصور LNs الإربية(الشكل 2B)5. يمكن أن يشكل تناول الكريمات مزيلة الشعر المعتمدة مخاطر على الفئران. وهكذا، ينبغي الحرص على إزالة بدقة جميع كريم تطبيقها، مع إيلاء اهتمام خاص إلى الكفوف، والجانب البطني من الفئران. يجب إزالة مزيل الشعر باستخدام قطعة قماش مبللة أو ناعمة أو منشفة ورقية مبللة في حركة واحدة ناعمة. تجنب فرك لإزالة كريم، لأن هذا يمكن أن يؤدي إلى سحجات على الجلد المكشوفة من الفئران.
يمكن تقييم تأكيد التسليم المحلي إلى LN الأربي من خلال الملاحظة أو علم الأنسجة. يمكن مراقبة حجم LN بصريا أثناء الحقن كمؤشر على الحقن الناجح. وتشمل النتائج المتوقعة التوزيع الفعال للشحنات في جميع أنحاء هيكل ال LN، دون تسرب كبير إلى الأنسجة أو الخلايا المجاورة. علاوة على ذلك ، كما السائل المحقون يزيح / يخفف التتبع في LN ، يجب أن يصبح تركيز الصبغة / التلوين أقل كثافة بعد الحقن. يجب أن تكشف مراقبة الأنسجة عن LN سليم ، ولكن موسع بسبب حقن السوائل. وتشمل التحديات المحتملة حقن بسرعة كبيرة جدا أو فقدان LN، وكلاهما يمكن أن يسبب elution من حجم في الأنسجة تحت الجلد المحيطة بها. ويمكن تأكيد هذه النتائج غير المرغوب فيها عن طريق التشريح أو الأنسجة، حيث سيتم ملاحظة تعليق الجسيمات ينتشر إلى الخلايا والأنسجة البعيدة عن العقد المستهدفة للحقن. وعلى النقيض من ذلك، ستكون النتيجة المتوقعة هي تحديد LN أربي موسع بسبب احتواء الجسيمات داخل بنية LN. المعالجة النسيجية لل LNs المقتطعة يمكن أن تؤكد بشكل قاطع تسليم البضائع إلى الأنسجة اللمفاوية ، كما هو موضح في الشكلين 2C و 2D. لاحظ أن الجسيمات في الشكل 2 تتضمن شحنة فلورية للسماح بتصور الشحن أثناء الحقن ، وكذلك أثناء المعالجة النسيجية والمجهر الفلوري.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50984/50984fig1.jpg" width="600px"> الشكل 1 - الأرقام 1- الأرقام 1 توليف وتوصيف الجسيمات المثبتة الدهون. أ)مخطط تخطيطي يصف تركيب الجسيمات المثبتة بالدهون التي أعدها مستحلب / تبخر المذيبات. ب)توزيعات الحجم من الجسيمات الدقيقة (خط صلب، قطر = 2.8 ميكرومتر) والجسيمات النانوية (خط متقطع، قطر = 113 نانومتر). ج)صور المجهر الفلورية من الجسيمات المحملة الببتيد المسمى الفلورسنت وصبغة الجسيمات الفلورية. التسميات: الببتيد (الأخضر) والجسيمات (الأحمر). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50984/50984fig1highres.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض صورة أكبر</a>.
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50984/50984fig2.jpg" width="600px"> الشكل 2 - الأرقام 2- الأرقام التي تم i.LN. حقن وتوزيع الجسيمات القابلة للتحلل الحيوي داخل LN. أ)منهجية لحقن i.LN. ب)تصور LNs في الماوس من خلال الجلد (الصورة العليا) وبعد necropsy (الصورة السفلى)5. ج)تلطيخ النسيجية من LN تأكيد ترسب وتوزيع الجسيمات الدقيقة البوليمر المسمى الفلورسنت (الجسيمات، الأخضر؛ تي الخلايا، الأحمر؛ الخلايا البائية، الزرقاء). د)الجسيمات النانوية ذات العلامات الفلورية (50 نانومتر، الصورة اليسرى) والجسيمات الدقيقة (6 ميكرومتر، الصورة اليمنى) في LNs 24 ساعة بعد الحقن. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50984/50984fig2highres.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض صورة أكبر</a>.

Watch this Scientific Journal Video about Intra-lymph Node Injection of Biodegradable Polymer Particles at JoVE.com

Intra-lymph Node Injection of Biodegradable Polymer Particles

الغدد الليمفاوية هي الأنسجة المناعية التي تنسق الاستجابة المناعية وهي هدف حاسم لللقاحات. وقد استخدمت المواد الحيوية لاستهداف الغدد الليمفاوية بشكل أفضل والتحكم في تسليم المستضدات أو المساعدين. تصف هذه الورقة تقنية تجمع بين هذه الأفكار لحقن جزيئات البوليمر المتوافقة بيولوجيا في الغدد الليمفاوية.

حقن العقدة داخل الليمفاوية من جزيئات البوليمر القابلة للتحلل الحيوي

Generation of adaptive immune response relies on efficient drainage or trafficking of antigen to lymph nodes for processing and presentation of these ...

intra-lymph-node-injection-of-biodegradable-polymer-particles

Research

JoVE Journal

Bioengineering

14.3K Views.  University of Maryland, College Park. الغدد الليمفاوية هي الأنسجة المناعية التي تنسق الاستجابة المناعية وهي هدف حاسم لللقاحات. وقد استخدمت المواد الحيوية لاستهداف الغدد الليمفاوية بشكل أفضل والتحكم في تسليم المستضدات أو المساعدين. تصف هذه الورقة تقنية تجمع بين هذه الأفكار لحقن جزيئات البوليمر ال?...

Video: Intra-lymph Node Injection of Biodegradable Polymer Particles

A Microfluidic-based Hydrodynamic Trap for Single Particles

The ability to confine and manipulate single particles in free solution is a key enabling technology for fundamental and applied science. Methods for particle trapping based on optical, magnetic, electrokinetic, and acoustic techniques have led to major advancements in physics and biology ranging from the molecular to cellular level. In this article, we introduce a new microfluidic-based technique for particle trapping and manipulation based solely on hydrodynamic fluid flow. Using this method, we demonstrate trapping of micro- and nano-scale particles in aqueous solutions for long time scales. The hydrodynamic trap consists of an integrated microfluidic device with a cross-slot channel geometry where two opposing laminar streams converge, thereby generating a planar extensional flow with a fluid stagnation point (zero-velocity point). In this device, particles are confined at the trap center by active control of the flow field to maintain particle position at the fluid stagnation point. In this manner, particles are effectively trapped in free solution using a feedback control algorithm implemented with a custom-built LabVIEW code. The control algorithm consists of image acquisition for a particle in the microfluidic device, followed by particle tracking, determination of particle centroid position, and active adjustment of fluid flow by regulating the pressure applied to an on-chip pneumatic valve using a pressure regulator. In this way, the on-chip dynamic metering valve functions to regulate the relative flow rates in the outlet channels, thereby enabling fine-scale control of stagnation point position and particle trapping. The microfluidic-based hydrodynamic trap exhibits several advantages as a method for particle trapping. Hydrodynamic trapping is possible for any arbitrary particle without specific requirements on the physical or chemical properties of the trapped object. In addition, hydrodynamic trapping enables confinement of a "single" target object in concentrated or crowded particle suspensions, which is difficult using alternative force field-based trapping methods. The hydrodynamic trap is user-friendly, straightforward to implement and may be added to existing microfluidic devices to facilitate trapping and long-time analysis of particles. Overall, the hydrodynamic trap is a new platform for confinement, micromanipulation, and observation of particles without surface immobilization and eliminates the need for potentially perturbative optical, magnetic, and electric fields in the free-solution trapping of small particles.

In this article, we present a microfluidic-based method for particle confinement based on hydrodynamic flow. We demonstrate stable particle trapping at a fluid stagnation point using a feedback control mechanism, thereby enabling confinement and micromanipulation of arbitrary particles in an integrated microdevice.

A فخ هيدرودينامي ميكروفلويديك المستندة للجسيمات واحدة

The ability to confine and manipulate single particles in free solution is a key enabling technology for fundamental and applied science.  Methods for ...

A Chitosan Based, Laser Activated Thin Film Surgical Adhesive, 'SurgiLux': Preparation and Demonstration

Sutures are a 4,000 year old technology that remain the 'gold-standard' for wound closure by virtue of their repair strength (~100 KPa). However, sutures can act as a nidus for infection and in many procedures are unable to effect wound repair or interfere with functional tissue regeneration.1 Surgical glues and adhesives, such as those based on fibrin and cyanoacrylates, have been developed as alternatives to sutures for the repair of such wounds. However, current commercial adhesives also have significant disadvantages, ranging from viral and prion transfer and a lack of repair strength as with the fibrin glues, to tissue toxicity and a lack of biocompatibility for the cyanoacrylate based adhesives. Furthermore, currently available surgical adhesives tend to be gel-based and can have extended curing times which limit their application.2 Similarly, the use of UV lasers to facilitate cross-linking mechanisms in protein-based or albumin 'solders' can lead to DNA damage while laser tissue welding (LTW) predisposes thermal damage to tissues.3 Despite their disadvantages, adhesives and LTW have captured approximately 30% of the wound closure market reported to be in excess of US $5 billion per annum, a significant testament to the need for sutureless technology.4
In the pursuit of sutureless technology we have utilized chitosan as a biomaterial for the development of a flexible, thin film, laser-activated surgical adhesive termed 'SurgiLux'. This novel bioadhesive uses a unique combination of biomaterials and photonics that are FDA approved and successfully used in a variety of biomedical applications and products. SurgiLux overcomes all the disadvantages associated with sutures and current surgical adhesives (see Table 1).
In this presentation we report the relatively simple protocol for the fabrication of SurgiLux and demonstrate its laser activation and tissue weld strength. SurgiLux films adhere to collagenous tissue without chemical modification such as cross-linking and through irradiation using a comparatively low-powered (120 mW) infrared laser instead of UV light. Chitosan films have a natural but weak adhesive attraction to collagen (~3 KPa), laser activation of the chitosan based SurgiLux films emphasizes the strength of this adhesion through polymer chain interactions as a consequence of transient thermal expansion.5 Without this 'activation' process, SurgiLux films are readily removed.6-9 SurgiLux has been tested both in vitro and in vivo on a variety of tissues including nerve, intestine, dura mater and cornea. In all cases it demonstrated good biocompatibility and negligible thermal damage as a consequence of irradiation.6-10

A Chitosan Based, Laser Activated Thin Film Surgical Adhesive, &#039;SurgiLux&#039;: Preparation and Demonstration

The fabrication of a novel, flexible thin film surgical adhesive from FDA approved ingredients, chitosan and indocyanine green is described. Bonding of this adhesive to collagenous tissue through a simple activation process with a low-powered infra-red laser is demonstrated.

(أ) استنادا الشيتوزان، ليزر المنشط لاصق رقيقة الجراحية، &#39;SurgiLux&#39;: إعداد ومظاهرات

Sutures are a 4,000 year old technology that remain the 'gold-standard' for wound closure by virtue of their repair strength (~100 KPa). However, sutures ...

Polymer Microarrays for High Throughput Discovery of Biomaterials

The discovery of novel biomaterials that are optimized for a specific biological application is readily achieved using polymer microarrays, which allows a combinatorial library of materials to be screened in a parallel, high throughput format1. Herein is described the formation and characterization of a polymer microarray using an on-chip photopolymerization technique 2. This involves mixing monomers at varied ratios to produce a library of monomer solutions, transferring the solution to a glass slide format using a robotic printing device and curing with UV irradiation. This format is readily amenable to many biological assays, including stem cell attachment and proliferation, cell sorting and low bacterial adhesion, allowing the ready identification of 'hit' materials that fulfill a specific biological criterion3-5. Furthermore, the use of high throughput surface characterization (HTSC) allows the biological performance to be correlated with physio-chemical properties, hence elucidating the biological-material interaction6. HTSC makes use of water contact angle (WCA) measurements, atomic force microscopy (AFM), X-ray photoelectron spectroscopy (XPS) and time-of-flight secondary ion mass spectrometry (ToF-SIMS). In particular, ToF-SIMS provides a chemically rich analysis of the sample that can be used to correlate the cell response with a molecular moiety. In some cases, the biological performance can be predicted from the ToF-SIMS spectra, demonstrating the chemical dependence of a biological-material interaction, and informing the development of hit materials5,3.

A description of the formation of a polymer microarray using an on-chip photopolymerization technique. The high throughput surface characterization using atomic force microscopy, water contact angle measurements, X-ray photoelectron spectroscopy and time of flight secondary ion mass spectrometry and a cell attachment assay is also described.

[ميكروأرس] البوليمر لاكتشاف إنتاجية عالية من المواد الحيوية

The discovery of novel biomaterials that are optimized for a specific biological application is readily achieved using polymer microarrays, which allows a ...

Protocol for Relative Hydrodynamic Assessment of Tri-leaflet Polymer Valves

Limitations of currently available prosthetic valves, xenografts, and homografts have prompted a recent resurgence of developments in the area of tri-leaflet polymer valve prostheses. However, identification of a protocol for initial assessment of polymer valve hydrodynamic functionality is paramount during the early stages of the design process. Traditional in vitro pulse duplicator systems are not configured to accommodate flexible tri-leaflet materials; in addition, assessment of polymer valve functionality needs to be made in a relative context to native and prosthetic heart valves under identical test conditions so that variability in measurements from different instruments can be avoided. Accordingly, we conducted hydrodynamic assessment of i) native (n = 4, mean diameter, D = 20 mm), ii) bi-leaflet mechanical (n= 2, D = 23 mm) and iii) polymer valves (n = 5, D = 22 mm) via the use of a commercially available pulse duplicator system (ViVitro Labs Inc, Victoria, BC) that was modified to accommodate tri-leaflet valve geometries. Tri-leaflet silicone valves developed at the University of Florida comprised the polymer valve group. A mixture in the ratio of 35:65 glycerin to water was used to mimic blood physical properties. Instantaneous flow rate was measured at the interface of the left ventricle and aortic units while pressure was recorded at the ventricular and aortic positions. Bi-leaflet and native valve data from the literature was used to validate flow and pressure readings. The following hydrodynamic metrics were reported: forward flow pressure drop, aortic root mean square forward flow rate, aortic closing, leakage&#160;and regurgitant volume, transaortic closing, leakage, and total energy losses. Representative results indicated that hydrodynamic metrics from the three valve groups could be successfully obtained by incorporating a custom-built assembly into a commercially available pulse duplicator system and subsequently, objectively compared to provide insights on functional aspects of polymer valve design.

There has been renewed interest in developing polymer valves. Here, the objectives are to demonstrate the feasibility of modifying a commercial pulse duplicator to accommodate tri-leaflet geometries and to define a protocol to present polymer valve hydrodynamic data in comparison to native and prosthetic valve data collected under near-identical conditions.

بروتوكول لتقييم هيدرودينامي النسبية للثلاثي النشرة بوليمر صمامات

Limitations of currently available prosthetic valves, xenografts, and homografts have prompted a recent resurgence of developments in the area of ...

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, heart attack or peripheral arterial diseases. Direct delivery of angiogenic growth factors has the potential to stimulate new blood vessel growth, but is often associated with limitations such as lack of targeting and short half-life in vivo. Gene therapy offers an alternative approach by delivering genes encoding angiogenic factors, but often requires using virus, and is limited by safety concerns. Here we describe a recently developed strategy for stimulating vascular growth by programming stem cells to overexpress angiogenic factors in situ using biodegradable polymeric nanoparticles. Specifically our strategy utilized stem cells as delivery vehicles by taking advantage of their ability to migrate toward ischemic tissues in vivo. Using the optimized polymeric vectors, adipose-derived stem cells were modified to overexpress an angiogenic gene encoding vascular endothelial growth factor (VEGF). We described the processes for polymer synthesis, nanoparticle formation, transfecting stem cells in vitro, as well as methods for validating the efficacy of VEGF-expressing stem cells for promoting angiogenesis in a murine hindlimb ischemia model.

We describe the method of programming stem cells to overexpress therapeutic factors for angiogenesis using biodegradable polymeric nanoparticles. Processes described include polymer synthesis, transfecting adipose-derived stem cells in vitro, and validating the efficacy of programmed stem cells to promote angiogenesis in a murine hindlimb ischemia model.

الخلايا الجذعية العلاجية البرمجة لتكوين الأوعية الدموية عن طريق تحلل البوليمر النانوية

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

Manufacturing Of Robust Natural Fiber Preforms Utilizing Bacterial Cellulose as Binder

A novel method of manufacturing rigid and robust natural fiber preforms is presented here. This method is based on a papermaking process, whereby loose and short sisal fibers are dispersed into a water suspension containing bacterial cellulose. The fiber and nanocellulose suspension is then filtered (using vacuum or gravity) and the wet filter cake pressed to squeeze out any excess water, followed by a drying step. This will result in the hornification of the bacterial cellulose network, holding the loose natural fibers together.
Our method is specially suited for the manufacturing of rigid and robust preforms of hydrophilic fibers. The porous and hydrophilic nature of such fibers results in significant water uptake, drawing in the bacterial cellulose dispersed in the suspension. The bacterial cellulose will then be filtered against the surface of these fibers, forming a bacterial cellulose coating. When the loose fiber-bacterial cellulose suspension is filtered and dried, the adjacent bacterial cellulose forms a network and hornified to hold the otherwise loose fibers together.
The introduction of bacterial cellulose into the preform resulted in a significant increase of the mechanical properties of the fiber preforms. This can be attributed to the high stiffness and strength of the bacterial cellulose network. With this preform, renewable high performance hierarchical composites can also be manufactured by using conventional composite production methods, such as resin film infusion (RFI) or resin transfer molding (RTM). Here, we also describe the manufacturing of renewable hierarchical composites using double bag vacuum assisted resin infusion.

We present a novel method of manufacturing rigid and robust short natural fiber preforms using a papermaking process. Bacterial cellulose acts simultaneously as the binder for the loose fibers and provides rigidity to the fiber preforms. These preforms can be infused with a resin to produce truly green hierarchical composites.

صناعة قوية التشكيل الاستفادة من الألياف الطبيعية السليلوز البكتيرية كما بيندر

A novel method of manufacturing rigid and robust natural fiber preforms is presented here. This method is based on a papermaking process, whereby loose ...

Fabrication of a Bioactive, PCL-based "Self-fitting" Shape Memory Polymer Scaffold

Tissue engineering has been explored as an alternative strategy for the treatment of critical-sized cranio-maxillofacial (CMF) bone defects. Essential to the success of this approach is a scaffold that is able to conformally fit within an irregular defect while also having the requisite biodegradability, pore interconnectivity and bioactivity. By nature of their shape recovery and fixity properties, shape memory polymer (SMP) scaffolds could achieve defect &#8220;self-fitting.&#8221; In this way, following exposure to warm saline (~60 &#186;C), the SMP scaffold would become malleable, permitting it to be hand-pressed into an irregular defect. Subsequent cooling (~37 &#186;C) would return the scaffold to its relatively rigid state within the defect. To meet these requirements, this protocol describes the preparation of SMP scaffolds prepared via the photochemical cure of biodegradable polycaprolactone diacrylate (PCL-DA) using a solvent-casting particulate-leaching (SCPL) method. A fused salt template is utilized to achieve pore interconnectivity. To realize bioactivity, a polydopamine coating is applied to the surface of the scaffold pore walls. Characterization of self-fitting and shape memory behaviors, pore interconnectivity and in vitro bioactivity are also described.

Fabrication of a Bioactive, PCL-based &quot;Self-fitting&quot; Shape Memory Polymer Scaffold

Scaffolds capable of fitting within cranio-maxillofacial (CMF) bone defects while exhibiting osteoconductivity and bioactivity are of interest. This protocol describes the preparation of a shape memory scaffold based on polycaprolactone diacrylate (PCL-DA) using a solvent-casting particulate-leaching (SCPL) method employing a fused salt template and application of a bioactive polydopamine coating.

تصنيع يستند إلى PCL النشطة بيولوجيا، &quot;تركيب الذاتي&quot; الشكل الذاكرة البوليمرات سقالة

Tissue engineering has been explored as an alternative strategy for the treatment of critical-sized cranio-maxillofacial (CMF) bone defects. Essential to ...

TAPE: A Biodegradable Hemostatic Glue Inspired by a Ubiquitous Compound in Plants for Surgical Application

This video describes the simplest protocol for preparing biodegradable surgical glue that has an effective hemostatic ability and greater water-resistant adhesion strength than commercial tissue adhesives. Medical adhesives have attracted great attention as potential alternative tools to sutures and staples due to their convenience in usage with minimal invasiveness. Although there are several protocols for developing tissue adhesives including those commercially available such as fibrin glues and cyanoacrylate-based materials, mostly they require a series of chemical syntheses of organic molecules, or complicated protein-purification methods, in the case of bio-driven materials (i.e., fibrin glue). Also, the development of surgical glues exhibiting high adhesive properties while maintaining biodegradability is still a challenge due to difficulties in achieving good performance in the wet environment of the body. We illustrate a new method to prepare a medical glue, known as TAPE, by the weight-based separation of a water-immiscible supramolecular aggregate formed after a physical mixing of a plant-derived, wet-resistant adhesive molecule,&#160;Tannic Acid (TA), and a well-known biopolymer, Poly(Ethylene) glycol (PEG). With our approach, TAPE shows high adhesion strength, which is 2.5-fold more than commercial fibrin glue in the presence of water. Furthermore, TAPE is biodegradable in physiological conditions and can be used as a potent hemostatic glue against tissue bleeding. We expect the widespread use of TAPE in a variety of medical settings and drug delivery applications, such as polymers for muco-adhesion, drug depots, and others.

We describe the simplest protocol to prepare biodegradable medical glue that has an effective hemostatic ability. TAPE is a water-immiscible supramolecular aggregate prepared by mixing of tannic acid, a ubiquitous compound found in plants, and poly(ethylene) glycol, yielding a 2.5 times greater water-resistant adhesion compared with commercial fibrin glue.

الشريط: والقابلة للتحلل مرقئ الغراء مستوحاة من مجمع في كل مكان في النباتات لتطبيق الجراحي

This video describes the simplest protocol for preparing biodegradable surgical glue that has an effective hemostatic ability and greater water-resistant ...

Sustained Administration of &#946;-cell Mitogens to Intact Mouse Islets Ex Vivo Using Biodegradable Poly(lactic-co-glycolic acid) Microspheres

The development of biomaterials has significantly increased the potential for targeted drug delivery to a variety of cell and tissue types, including the pancreatic &#946;-cells. In addition, biomaterial particles, hydrogels, and scaffolds also provide a unique opportunity to administer sustained, controllable drug delivery to &#946;-cells in culture and in transplanted tissue models. These technologies allow the study of candidate &#946;-cell proliferation factors using intact islets and a translationally relevant system. Moreover, determining the effectiveness and feasibility of candidate factors for stimulating &#946;-cell proliferation in a culture system is critical before moving forward to in vivo models. Herein, we describe a method to co-culture intact mouse islets with biodegradable compound of interest (COI)-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres for the purpose of assessing the effects of sustained in situ release of mitogenic factors on &#946;-cell proliferation. This technique describes in detail how to generate PLGA microspheres containing a desired cargo using commercially available reagents. While the described technique uses recombinant human Connective tissue growth factor (rhCTGF) as an example, a wide variety of COI could readily be used. Additionally, this method utilizes 96-well plates to minimize the amount of reagents necessary to assess &#946;-cell proliferation. This protocol can be readily adapted to use alternative biomaterials and other endocrine cell characteristics such as cell survival and differentiation status.

Sustained Administration of &amp;#946;-cell Mitogens to Intact Mouse Islets &lt;em&gt;Ex Vivo&lt;/em&gt; Using Biodegradable Poly(lactic-co-glycolic acid) Microspheres

Here, we present methodology to generate and administer compound of interest-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres to intact mouse islets in culture with subsequent immunofluorescence analysis of &#946;-cell proliferation. This method is suitable for determining the efficacy of candidate &#946;-cell mitogens.

إدارة مستدامة للMitogens β-خلية لالفشوت ماوس سليمة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; عن طريق تحلل بولي (حامض اللبنيك في-ك-الجليكوليك) الجزئي

The development of biomaterials has significantly increased the potential for targeted drug delivery to a variety of cell and tissue types, including the ...

Film Extrusion of Crambe abyssinica/Wheat Gluten Blends

Crambe abyssinica is a plant with potential for use in industrial (non-food) plant oil production. The side stream from this oil production is a high-protein crambe meal that has limited value, as it is not fit for food or feed use. However, it contains proteins that could potentially make it a suitable raw material for higher-value products. The purpose of this study was to find methods of making this side stream into extruded films, showing that products with a higher value can be produced. The study mainly considered the development of material compositions and methods of preparing and extruding the material. Wheat gluten was added as a supportive protein matrix material, together with glycerol as a plasticizer and urea as a denaturant. The extrudate was evaluated with respect to mechanical (tensile testing) and oxygen barrier properties, and the extrudate structure was revealed visually and by scanning electron microscopy. A denser, more homogeneous material had a lower oxygen transmission rate, higher strength, and higher extensibility. The most homogeneous films were made at an extruder die temperature of 125-130 &#176;C. It is shown here that a film can be extruded with promising mechanical and oxygen barrier properties, the latter especially after a final compression molding step.

Film Extrusion of Crambe abyssinica/Wheat Gluten Blends

The side stream from plant oil production of Crambe abyssinica has limited value. The purpose of this study was to find methods for extruding materials based on this side stream, demonstrating that products with a higher value can be produced. The extrudates were found to have promising properties.