إزالة التأين الناجمة عن مجموعات ثاني أكسيد الكبريت المحايدة التي نسميها في DINeC قصيرة، هو طريقة تيونية ناعمة وفعالة. نستخدمها من بين أمور أخرى لقياس الطيف الشامل للجزيئات الحيوية ، مثل الببتيدات والبروتينات. كما DINeC، جزيئات desorption سليمة من أسطح العينة، يتم الكشف عن التغيرات الكيميائية خفية في هذه الجزيئات بسهولة في أطياف الكتلة.
ويتضح من هذه العملية في المحاكاة التالية. وتحطمت المجموعات الواردة من خلال تأثير سطحي داخل المجموعة. يتم حل النظائر السطحية dipeptide في واحدة من شظايا الكتلة وd desorpted بواسطة هذه العملية.
في التجربة، يتم إنتاج شعاع مجموعات SO2 عن طريق التوسع الأسرع من الصوت من فوهة نبضية. يتم نقل الجزيئات التي تذوب وتأين خلال تأثير سطح الكتلة إلى فخ أيون لقياس الطيف الكتلي. الأطياف الكتلة النموذجية تظهر فقط قمم في MO مجموعة القيم من جزيء سليمة.
سوف يكون إثبات الإجراء كارولين بومهارت، وباسكال شنايدر، اثنين من طلاب الدكتوراه في مختبري. بالنسبة للعينات القياسية، قطع الركائز من رقائق السيليكون بسماكة 0.5 إلى ملليمتر واحد في قطع سنتيمتر مربع واحد. تنظيف ركائز السيليكون في حمام الموجات فوق الصوتية من الإيثانول والأسيتون لمدة 15 دقيقة لكل من.
جفف الركائز في تيار من غاز النيتروجين الجاف. ثم، إسقاط يلقي خمسة إلى 30 ميكرولترات من حل عينة على الركيزة. اعتمادا على ضغط البخار من المذيبات، والسماح للعينة الجافة تحت الظروف المحيطة أو في مجفف حتى تم تبخر جميع المذيبات و قد تشكلت فيلم جاف.
النظر في أبسط مخطط إعداد. على سبيل المثال ، للتحقيق من الحبر تمييز ، مجرد رسم نقطة على سطح الركيزة. قم بتركيب العينات على حامل العينة مع شريط لاصق أو المشابك التي شددتها المسامير.
بالإضافة إلى ذلك تحميل عينة مرجعية مثل فيلم سميك ميكرومتر من أنجيوتنسين الثاني على حامل العينة. ثم، اضغط على قفل تحميل تنفيس للتنفيس عن نظام قفل التحميل. انتظر لمدة خمس دقائق، أو حتى يتم الوصول إلى الضغط الجوي.
افتح قفل التحميل ثم قم بتركيب حامل العينة. إغلاق قفل الحمل وضخ أسفل غرفة قفل الحمل إلى ضغط أقل من مرتين 10 إلى ميليبار الخمسة السلبية. افتح الصمام إلى غرفة DINeC ونقل حامل العينة مع قضيب النقل إلى المتلاعب الرئيسي.
إرفاق حامل العينة إلى المتلاعب. سحب قضيب نقل وإغلاق صمام بين قفل الحمل وغرفة DINeC. افتح الصمام بين أسطوانة الغاز والفتحة.
ضبط ضغط خليط غاز ثاني أكسيد الكبريت والهيليوم في الخطوط العريضة لنظام خلط الغاز إلى 15 بار. تعيين موضع المتلاعب إلى موضع نموذج المرجع. لقياس أطياف الكتلة الموجبة، تعيين العينة والشبكة التحيز إلى زائد 40 فولت، بالإضافة إلى سبعة فولت على التوالي.
لدفع فوهة النبض والمطياف كتلة فخ أيون، تعيين مولد وظيفة خارجية إلى اثنين من هيرتز. مع مولد تأخير، تعيين تأخير الوقت بين إشارة فخ واضح من فخ أيون وإشارة الزناد لفوهة نبض إلى خمسة مللي ثانية. في برنامج التحكم Bruker، في صفحة الوضع من نافذة الحوار الرئيسية، حدد دقة محسّن لوضع المسح الضوئي.
نوع في M عبر Z 50 إلى 3000 للنطاق، اكتب في 0.1 ميلي ثانية لوقت التراكم، اكتب في 10 دورات للمتوسط، وللاقطبية، حدد إيجابية لقياس أطياف الكتلة الموجبة والسلبية لقياس الأطياف anionic. مرة واحدة الضغط أقل من ثلاث مرات 10 إلى المليبار الستة السلبية التي تم التوصل إليها في غرفة DINeC، بدء القياس. تعيين قيمة M على Z إلى كتلة كل من أجل اتباع إشارة الكروماتوغرام الوقت تعتمد.
اضغط على "التشغيل" في برنامج التحكم. ابدأ في تسجيل القياسات بالضغط على الزر Record. قياس طيف الاختبار من عينة مرجعية، مثل أنجيوتنسين الثاني لمدة 300 ثانية تقريباً.
تحسين كثافة الإشارة عن طريق ضبط تأخير الوقت بين إشارة الفخ الواضحة والإشارة التي تؤدي إلى فوهة النبض. مع تأخير الوقت الأمثل، نقل المتلاعب إلى موضع العينة التي يمكن قياسها. انقر على زر تسجيل للحصول على أطياف الكتلة على مدى فترة زمنية من الفائدة.
بعد الانتهاء من القياس، قم بتحميل مجموعة البيانات الخاصة بها في برنامج تحليل البيانات كما هو موضح هنا لقياس المرجع. حدد الفترة الزمنية للاهتمام في الكروماتوجرام مع الزر الأيمن من الماوس. يتم عرض متوسط الطيف في إطار منفصل.
انقر على تصدير كملف ASCII لتصدير الطيف كملف بيانات لمزيد من المعالجة في برنامج من اختيار. تغير طيف كتلة DINeC من عينة أنجيوتنسين الثاني مع مرور الوقت حيث تم تسخين العينة إلى حوالي 140 درجة مئوية. بمجرد أن وصلت درجة الحرارة إلى القيمة النهائية ، انخفضت ذروة الجزيء البروتين الهجومي في M over Z الذي يعادل 1047 ولوحظت قمم جديدة.
وتتلخص العملية في هذه الرسوم البيانية الثلاثة. وقد لوحظت جيداً القمم الإضافية في M على Z التي تساوي 932 و1012 و1029. تحليل حركية التفاعل يوضح أن الكيان مع M على Z يساوي 1029 هو وسيطة التي كانت متحللة إلى أجزاء أصغر مع زيادة كثافة أولا ثم انخفضت.
أهم ملامح DINeC هي الطبيعة الناعمة لعملية التمدد والكفاءة وحساسية السطح العالية. أنها تأتي جميعا مع متطلبات منخفضة فيما يتعلق بإعداد العينة. وبالتالي يمكن تطبيق نظام DINeC على مجموعة واسعة من العينات المختلفة التي تتراوح بين مواد اللحاء العضوية إلى المازد السطحي المعقد في منطقة الطبقة الفرعية.
وفي جميع الحالات، يمكن الحصول على معلومات كيميائية كاملة في الوقت الحقيقي.
