يمكن استخدام هذا البروتوكول لل التوثيق الحيوي للرقم البوسبورين من خلال التخمير الميكروبي ، والتي بدورها يمكن استخدامها لتجميع التقلبات التي تحتوي على النيتروجين في الظروف الخضراء والمعتدل. ميزة هذه التقنية هو أنه يمكن استخدامه كجسر بين أساليب التخمير الميكروبي والعمليات العضوية توليفها. التقلبات التي تحتوي على النيتروجين ليست فقط هيكلاً عظمياً هاماً للعديد من المنتجات الطبيعية مع الأنشطة الحيوية، ولكنها سلائف اصطناعية للعديد من المواد الكيميائية الزراعية والمخدرات.
إظهار الإجراء مع فيليب Icyishaka سيكون يان تشانغ ، وهو فني من مختبري. لإعداد ألفا هالو-ن-أسيل-هيدرازون, تزن 10 ملليمتر من الكيتون و 10 ملليمتر من هيدرازين البنزويل في قارورة. أضف 20 ملليلتر من الميثانول إلى القارورة، واجهز القارورة ببار مقلب وقدولة مطاطية.
حقن ببطء 250 ميكرولترات من حمض الهيدروكلوريك في الخليط، واحتضان القارورة في الهواء في درجة حرارة الغرفة. بعد ساعة واحدة، وجمع الترسب بعد رد فعل عن طريق الترشيح، وغسل المنتج مع الأسيتون. ثم جفف العجلة عن طريق الفراغ ، وتحديد المنتج بواسطة NMR.
لإعداد cercosporin، تهمة قارورة هزة ثلاثة لتر مع لتر واحد من S-7 المتوسطة، وتطعيم سلالة إنتاج cercosporin في قارورة يهز. ثقافة الخليط تحت ظروف خفيفة في 135 ثورات لكلّ دقيقة و25 درجة مئويّة لاثنان أسابيع. في نهاية الحضانة، واستخدام مضخة فراغ لإخضاع مرق التخمير لترشيح فراغ، واستخراج بيليه وsupernatant بشكل منفصل مع ثلاثة 50 ملليلتر من وحدات التخزين من ثنائي كلورو الميثان.
جمع بيليه للتجفيف في مجفف الفريزر، والجمع بين مراحل العضوية. غسل مراحل العضوية بالماء مرتين إلى ثلاث مرات، والتركيز على الحل تحت فراغ. Redissolve بقايا مع الميثانول التحليلية، وتصفية المنتج من خلال 18 ميكرومتر، العضوية غشاء الترشيح الدقيق.
ثم تنقية cercosporin مع عمود سيخاديكس LH-20، وتحديد المنتج من قبل HPLC وفقا للبروتوكولات القياسية. لإعداد 1، 2، 3-الثياديازول، إضافة كامل حجم ألفا هالو-N-acyl-هيدرازون، ملليغرام واحد من cercosporin، 27 ملليغرام من البوتاسيوم ثالث بوتوكسيد، و 39 ملليغرام من thiocyanate البوتاسيوم في أنبوب شلينك 10 ملليمتر مجهزة سدادة مطاطية وشريط اثارة. تطهير أنبوب شلينك مع الأكسجين ثلاث مرات قبل حقن مليلترين من الأسيتونيتريل الجاف في الأنبوب.
إخضاع الأنبوب لميد LED أزرق من القاع لمدة خمسة واط لمدة 16 ساعة قبل غسله أربع مرات مع 15 ملليلتر من محلول كلوريد الصوديوم المشبع. بعد الغسيل الأخير، والجمع بين المرحلة مائي، وإعادة استخراج المرحلة مائي مع أربعة 15 ملليلتر مجلدات من خلات الإيثيل. الجمع بين المرحلة العضوية، وجاف مع كبريتات الصوديوم اللامائية.
إزالة المذيب مع متبخر فراغ. لتنقية المنتج مع الكروماتوغرافيا طبقة رقيقة، ورسم خط مستقيم على لوحة السيليكا، وإضافة المنتج المذاب إلى الخط. وضع لوحة السيليكا في اسطوانة الكروماتوغرافيا مع 10 إلى PE واحد إلى EA. بعد, حل السيليكا في DCM.
إزالة السيليكا من المنتج عن طريق الترشيح، وتجفيف DCM مع المبخر الدوارة. ثم تحديد المركب بواسطة NMR وفقا للبروتوكول القياسي. لإعداد 1، 4، 5، 6-tetrahydropyridazine، إضافة كامل حجم ألفا هالو-N-acyl-هيدرازون، 2.7 ملليغرام من cercosporin، و 195 ملليغرام من كربونات السيزيوم في أنبوب شلينك 10 ملليلتر مجهزة سدادة مطاطية وشريط التحريك.
تطهير أنبوب شلينك ثلاث مرات مع النيتروجين، وحقن مليلترين من الأسيتونيتريل في الماء في الأنبوب. إخضاع أنبوب شلينك لميد LED أزرق خمسة واط من الأسفل لمدة 16 ساعة متبوعاً بأربع غسولات مع 15 ملليلتر من كلوريد الصوديوم المشبع في كل غسل. الجمع بين المرحلة مائي، وإعادة استخراج المرحلة مائي مع أربعة 15 ملليلتر مجلدات من خلات الإيثيل.
الجمع بين المرحلة العضوية، وجاف مع كبريتات الصوديوم اللامائية. إزالة المذيب مع متبخر فراغ. لتنقية المنتج مع الكروماتوغرافيا طبقة رقيقة، ورسم خط مستقيم على لوحة السيليكا، وإضافة المنتج المذاب إلى الخط.
وضع لوحة السيليكا في اسطوانة الكروماتوغرافيا مع 10 إلى PE واحد إلى EA. بعد, حل السيليكا في DCM. إزالة السيليكا من المنتج مع الترشيح، وتجفيف DCM مع المبخر الدوارة. ثم تحديد المركب بواسطة NMR وفقا للبروتوكول القياسي.
هذه النتائج التمثيلية توضح كيف يمكن توليفها بشكل ملائم 4-aryl-1, 2, 3-thiadiazoles و 1, 4, 5, 6-tetrahydropyridazines يمكن توليفها بشكل ملائم من قبل cercosporin-catalyzed ردود الفعل الضوئية من ألفا-هالو-N-acyl-hydrazone. الإجراء اكتساب 4-aryl-1, 2, 3-thiadiazoles مناسبة لركائز تحمل كل من المجموعات التبرع بالإلكترون وقبول الإلكترون في حلقة الفينيل, توفير المنتجات المطلوبة مع متوسطة إلى جيدة من الغلة. تذكر دائما لاستخدام النيتروجين والأكسجين لفئتين مختلفتين من ردود الفعل.
