يؤدي تلف الإقفاري إلى بيئة معادية معادية للالتهابات تؤثر على بقاء الخلايا المزروعة. بروتوكولنا يقدم طريقة بديلة لتوفير البيولوجيا من خلال التحايل على الاستجابة المناعية الأولية للإصابة. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أنه يجعل من الممكن لإدارة العلاجية أسبوع واحد بعد الإصابة، وتقليد العلاج في البيئة السريرية.
ينصب تركيزنا الأساسي على نموذج إصابة إعادة ضخ الإقفار وزرع الخلايا الجذعية. ومع ذلك، يمكن أيضا استخدام هذا النهج لنماذج من الأمراض الالتهابية التي تنطوي على إدخال العلاجات البيولوجية. تبدأ autoclaving جميع الأدوات الجراحية.
إذا كانت العمليات الجراحية المتعددة التي يتعين إجراؤها في جلسة واحدة، تنظيف الأدوات بعد كل وإعادة تعقيمها باستخدام خرز الساخنة التعقيم. تحت الجلد إدارة مسكن، تزن الحيوان، وإدخال الوزن في جهاز التنفس الصناعي. يحلق الجانب الأيسر من الصدر من القص إلى مستوى الكتف وتطبيق كريم إزالة الشعر لإزالة الفراء الزائد.
لمنع انهيار الرئة، والحفاظ على الضغط النهائي النهائي الموجب عند سنتيمترين من الماء لإجراء إعادة التروية وتغييره إلى ثلاثة سنتيمترات من الماء للحقن المتأخر من إجراء الخلايا. بعد تخدير الماوس، intubate ذلك مع أنبوب 20 قياس endotracheal ونقلها إلى وسادة التدفئة التي تسيطر عليها للحفاظ على درجة حرارة الجسم من 35 إلى 37 درجة مئوية. ضع الفأر في اِرْقَة شغل جانبية مع نهاية الجمجمة على اليسار ونهاية الكودال على اليمين.
فرك منطقة جراحية بالتناوب بين بوديندون اليود والكحول مسحات ثلاث مرات وتطبيق مرهم العيون على كلتا العينين. استخدم مشرط نصلي رقم 10 لعمل شق عمودي 2.5 ملليمتر إلى يمين الحلمة في أقصى اليسار في مجال الرؤية، ثم استخدم المقص لقطع طبقات العضلات السطحية حتى تظهر العضلات الوربية والأضلاع. أثناء رفع الأضلاع والأنسجة المحيطة بها ، تقطع من خلال الفضاء الوربي بين الأضلاع الرابعة والخامسة ، ثم أدخل مُسَاَدِع الجفن في الفضاء المفتوح.
سحب pericardium باستخدام ملقط منحني، تحريك الرئة صعودا والخروج من وجهة النظر. تمرير خياطة النايلون 9-0 من خلال عضلة القلب تحت الشريان LAD 2.5 ملليمتر إلى اليسار auricle الحفاظ على حركة سلسة ومتسقة لمنع تمزق الأنسجة أو ثقب الأوعية الدموية الرئيسية. ربط عقدة مربعة فضفاضة، ثم ضع سنتيمتر واحد من أنابيب البولي إيثيلين داخل عقدة فضفاضة.
تأمين خياطة حول الأنابيب وتأكيد نقص التروية عن طريق شحوب وعدم انتظام ضربات القلب البطين، ثم الافراج بعد 35 دقيقة. بعد إزالة الأنابيب، انتظر لمدة خمس دقائق لتأكيد إعادة ضخ عضلة القلب. ضع أنبوب قسطرة الرابع 24 في تجويف الصدر مسافة نترية واحدة إلى يمين الفتحة.
استخدام 6-0 خياطة قابلة للامتصاص لإغلاق شق الوربي في نمط انقطاع بسيط وطبقة العضلات في نمط خياطة مستمرة. بعد إغلاق طبقة العضلات السطحية ، قم بإزالة أنبوب الصدر أثناء سحب الهواء من تجويف الصدر باستخدام حقنة درنة درنة ميليلتر واحد. أغلق شق الجلد مع خياطة قابلة للامتصاص 6-0 في نمط فراش أفقي مستمر.
عند الانتهاء، قم بإدارة 1.5 ملليلتر من تحت الجلد الملحي الدافئ وتطبيق مرهم المضادات الحيوية الثلاثي على موقع الشق لمنع العدوى. نقل الماوس إلى قفص الفراش مجانا أو قفص مع الفراش مغطاة على وسادة دافئة ودرجة حرارة من 35 إلى 37 درجة مئوية حتى يتم استردادها تماما. بعد إعداد الماوس وتنبيبه كما سبق وصفه، قم بإزالة الغرز من طبقة الجلد بمقص وملقط، ثم استخدم مشرطًا رقم 10 لإجراء شق في نفس موقع الجراحة السابقة.
الاستمرار في قطع من خلال ندبا حتى خياطة طبقة العضلات مرئية، ثم استخدام مقص والملقط لإزالة خياطة وقطع طبقة العضلات مفتوحة. إزالة الغرز عقد الأضلاع معا ومواصلة قطع من خلال العضلات الوربية من الشق السابق. ضع مُناسِّر الجفن في الفضاء الوربي وحدد مكان منطقة الربط السابق.
تحميل 300،000 mesenchymal الخلايا الجذعية علقت في 20 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في حقنة الأنسولين قياس 30 وثني الإبرة قليلا لتحقيق زاوية مناسبة للحقن. تتحرك في الاتجاه من القمة نحو قاعدة القلب، أدخل الحقنة في المنطقة شبه الحمراء حتى فتحة الإبرة تماما داخل عضلة القلب، ثم حقن الخلايا ببطء في عضلة القلب، والانتظار ثلاث ثوان وإزالة الإبرة. مراقبة القلب عن كثب لمدة ثلاث دقائق للتأكد من عدم وجود رد فعل غير طبيعي للخلايا مثل الرجفان البطيني.
بعد ثلاث دقائق، ضع أنبوب قسطرة 24 قياس الرابع في تجويف الصدر مسافة واحدة الوربي إلى يمين الفتحة. أغلق العضلات الوربية وطبقات الجلد وأزل أنبوب الصدر كما سبق وصفه. إدارة 1.5 ملليلتر من الحارة المالحة تحت الجلد وتطبيق مرهم المضادات الحيوية الثلاثي إلى موقع شق لمنع العدوى.
نقل الماوس إلى قفص الفراش الحرة أو قفص مع الفراش مغطاة على وسادة دافئة حتى يتم استردادها بالكامل. تم إجراء مخطط صدى القلب بعد الجراحة وتخطيط القلب في اليوم الذي يتم فيه زرع الخلايا الجذعية الجذعية ، مما يؤكد احتشاء وانخفاض وظيفة الانقباض البطيني. وأظهر مزيد من الفحص للبيانات أن كسر القذف وتقصير الكسور قد انخفضا في الفئران التي تلقت إصابة إقفارية، في حين زادت أحجام الانبساطي والانقباضي في نهاية المطاف.
ماسون ثلاثية الألوان تلطيخ من الأنسجة عضلة القلب سبعة أيام بعد الإصابة أظهرت زيادة ترسب الكولاجين وترقق من جدار البطين الأيسر في قلوب الفئران التي تلقت إصابة الإقفاري. في التصوير الإنارة الحيوية في الجسم الحي أو BLI تم تنفيذها في اليوم التالي لزرع الخلايا الجذعية الوسيمني. ويتمثل نجاح التسليم في حالات العسران في الانبعاثات في إشارة BLI مقارنة بالفئران التي تسببت في إصابة إعادة ضخ الإقفار ولكنها لم تتلقَّ هذه الإصابات.
عند محاولة هذا البروتوكول، نضع في اعتبارنا أن الحركات الصغيرة المتعمدة عند قطع من خلال النترات، وربط الأوعية، وحقن الخلايا أمر حيوي لمنع الضرر غير المبرر للقلب أو الرئة في مجال الرؤية. هذه الإجراءات توفر القدرة على رصد وظيفة القلب بعد زرع من خلال الموجات فوق الصوتية، والخلايا الحيوية من خلال التصوير الاحتقاني، أو مزيد من التقنيات الجزيئية أو البيوكيميائية اعتمادا على العلاج المستخدم.
