دراسة مناطق الدماغ المتميزة هي نقطة انطلاق نحو فهم التعقيد الجزيئي والهيكلي للدماغ. يصف هذا البروتوكول تشريحا منهجيا لدماغ الفأر لعزل مناطق الدماغ المتميزة. في منظور تشريح الدماغ ، إنه نهج من أعلى إلى أسفل يمكن استنساخه بسهولة.
مزايا هذا البروتوكول ذات شقين. أولا، يوفر هذا النهج فرصة لفهم الأسس الجزيئية لمناطق الدماغ الصغيرة ولكن الحرجة. ثانيا، عملية التشريح بأكملها قصيرة بما فيه الكفاية لضمان الحفاظ على السلامة الجزيئية، وهو شرط أساسي حاسم للفحوصات الخلفية والجزيئية.
يتضمن هذا الإجراء الممارسة والتعامل الدقيق. التوقيت حاسم للغاية هنا للحفاظ على المعالم الهيكلية ، ويمكن تحقيقه من خلال التدريب والممارسة المناسبين. سيوضح إجراء إزالة دماغ الفئران سيد محيي ، وهو كيميائي أبحاث ومعلوماتي حيوي من مختبرنا.
علاوة على ذلك ، سيوضح إجراء تشريح دماغ الفئران جيمس ميرهوف ، عالم الأعصاب من مختبرنا. للبدء ، قم بتنظيف وإزالة الجلد للحصول على قبضة جيدة. قم بتثبيت الفك العلوي للرأس المقطوع الرأس باستخدام مرقئ واستخدم شاشا ليعكس فروة الرأس بشكل كبير.
أدخل المقص المنحني الناعم في الثقبة العظمية لفصل السحايا الملتصقة. ثم أدخل المقص عند فتحة قاعدة الجمجمة حيث يمر الحبل الشوكي مع توجيه الشفرة عموديا ، ولكن بالتوازي مع السطح الداخلي لعظم الصفيحة القاعدية والضغط عليه ، مع تدوير الشفرة 45 درجة إلى الجانب الأيسر ثم إلى الجانب الأيمن. إزالة العظم القذالي في العظم داخل الجداري لفضح المخيخ.
قم بتحريك المقص بشكل كبير على طول الخيط السهمي الأوسط حتى الدريجما ، وقطعه عن طريق رفعه لأعلى لتجنب تمزق القشرة الدماغية. عندما يتم رفع العظام الجدارية ، حدد وقطع المرفقات السحائية المتبقية. قم بإجراء قطعتين متوازيتين في المستوى السهمي وإزالة شظايا العظم الأمامي ، وتجنب تمزيق سطح الدماغ.
أثناء قطع المرفقات السحائية والأعصاب القحفية، قم بعكس الجمجمة للسماح للجاذبية بالمساعدة في إزالة الدماغ إلى كوب صغير مملوء مسبقا بمحلول ملحي. حافظ على سلامة الثور السمعي حتى يمكن التعرف على تشريح الغدة النخامية. قم بعمل قطع صغير للغاية على كلا الجانبين في حافة الخيمة الغشائية التي تحمل الغدة النخامية في مكانها ، وارفع الفص الخلفي للغدة النخامية باستخدام ملقط دقيق للغاية.
قم بعمل قطع سهمي بين الهوامش الجانبية للفص الأمامي للنخامة في أقرب عصب ثلاثي التوائم ، ثم ارفع الفص الأمامي للنخامة. توجيه مصدر الضوء الأبيض فوق الأنسجة. ضع الدماغ على كتلة من الفولاذ المقاوم للصدأ مبردة مسبقا وحافظ على برودة الكتلة عن طريق إحاطتها بالثلج في محلول ملحي بارد مثلج.
قم بترطيب الأنسجة بشكل دوري بمحلول ملحي بارد للحفاظ على الهياكل. ضع الدماغ بحيث تكون القشرة الدماغية متجهة لأعلى. باستخدام ملقط منحني صغير ، قم بإزالة المخيخ.
باستخدام النهج الظهري ، انزلق الشفرات المغلقة لملقط منحني صغير أسفل الجسم الثفني ، وانشره بلطف لسحب القشرة المخية الجديدة بشكل ثنائي للحفاظ على معالم خط الوسط البارزة بشكل حرج. في نهاية المطاف الجانب لأعلى ، ستكون الهياكل مثل chiasm البصري ، تحت المهاد ، المصابيح الشمية ، النخاع المستطيل ، مخزون الغدة النخامية ، وجسر بونتين مرئية. حاول فصل نصفي الكرة الأرضية.
اقلب الموقع البطني للدماغ لأعلى وقم بعمل قطع سهمي متوسط بدءا من الظهرية بين المصابيح الشمية في نصفي الكرة المخية. إزالة النخاع ، ثم فصل نصفي الكرة الأرضية بلطف. بعد ذلك ، قم بعمل قطع إكليلي على الهامش الداخلي للبرك للحصول على الدماغ الخلفي وفصل النخاع عند الهامش الخلفي للبرك.
اقلب أنسجة المخ للفصل الدقيق بين نصفي الكرة المخية. قم بإزالة المصباح الشمي في هذه الخطوة. قم بعمل قطع إكليلي بمقدار ملليمتر واحد أمامي لجنس الجسم الثفني ، وقم بإزالة المصابيح الشمية الملحقة ، متبوعا بفصل قشرة الفص الجبهي الإنسي والجانبي.
قطع جزئيا أفقيا أو كورونيا من خلال الجزء المستعرض من الوصلة الأمامية من خط الوسط أسفل القرن الأمامي للبطين الجانبي لتحرير نواة الحاجز ظهريا والمخطط البطني البطني. قم بإزالة الكمية الصغيرة من القشرة من السطح الجانبي لإزالة استسلام النواة والدرنات الشمية. افصل الجزء العلوي من مخطط الجسم عن القشرة العلوية عبر مشرط منحني مقطوع خارج الكبسولة الخارجية مباشرة.
تحديد نوى الحاجز أو الحاجز وعزلها عن هذا القسم. قم بعمل قطع منحني لفصل منطقة ما تحت المهاد في هذه الخطوة. سيتم ذلك باستخدام قطع إكليلي جزئي خلفي لأجسام الثدييات يمتد فقط بشكل جانبي مثل التلم تحت المهاد.
ثم حرر المقطع العرضي تحت المهاد بقطع شبه سهمي على طول التلم تحت المهاد. قم بتفريغ البطين الجانبي للكشف عن اتصالات إضافية داخل الأطراف في مكونات الجهاز الحوفي المتبقية. في الجزء الداخلي من القشرة الداخلية ، لوحظ وجود بنية تشبه المروحة بعد فتح البطين.
استخدم البنية الشبيهة بالمروحة في القشرة الأنفية لتحديد الهوامش لغرض التشريح ، ثم تحديد وإزالة اللوزة الدماغية والقشرة الأنفية والقشرة الحزامية الخلفية والحصين. تأكد من تحديد المهاد عن طريق تصور النخاع الشرطي على سطحه الظهري الممتد في المستوى القشري السطحي الأوسط. افصل المهاد تماما عن الدماغ الأوسط عن طريق قطع إكليلي.
يمكن استخدام هذا البروتوكول لإزالة الدماغ فورا من الجمجمة ، يليه تشريح. يمكن الحفاظ على الأنسجة التشريحية ومعالجتها لاحقا اعتمادا على متطلبات الدراسة. يمكن فحص الحمض النووي الريبي المستخرج من أنسجة تشريح متعددة للتعبير الجيني.
تم الحصول على النتائج التمثيلية باستخدام الأدمغة المحصودة التي تم تخزينها عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لعدة أشهر قبل استخراج الحمض النووي الريبي. تم جمع مناطق الدماغ المتميزة جنبا إلى جنب مع بيانات الوزن في إطار نموذج الإجهاد الاجتماعي المكشوف للمعتدي من اضطراب ما بعد الصدمة. يتم عرض تركيزات الحمض النووي الريبي والقراءات الطيفية الضوئية هنا.
عند اتباع هذا البروتوكول ، تأكد من تبريد الأنسجة في جميع الأوقات عن طريق إبقاء الدماغ على كتلة فولاذية مثلجة ، وغمر الأنسجة بشكل دوري بمحلول ملحي مثلج. بمجرد جمع الأنسجة وتجميدها على الفور ، يمكن استخدامها للمقايسات مثل النسخ والتمثيل الغذائي والبروتيوميات في وقت لاحق.
