يقيس هذا البروتوكول نشاط التمثيل الضوئي للطحالب المرفقة ، بينما لا تزال مرتبطة بالعوالق ، تماما كما هو الحال في الطبيعة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن قياس الفيزيولوجيا الضوئية في الوقت الفعلي دون تشتيت العينة. لدراسة آثار أفراد العوالق الحيوانية على التألق الأساسي ، قم بإعداد scapholeberis mucronata البالغ من الثقافة دون أي كائنات حية مرفقة.
الآن تجويع الأفراد في FLW عند 20 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة على الأقل لتجنب التألق من محتوى الأمعاء. صب 1.5 ملليلتر من FWL في كوفيت. التقط العدد المطلوب من s.
الأفراد mucronata باستخدام ماصة تحت المجهر الضوئي في تكبير 100 مرة ونقلها إلى cuvette. أضف FLW لجعل حجم العينة يصل إلى 2 ملليلتر والسماح لها بالتأقلم تحت الإضاءة المنخفضة عند 20 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة قبل قياس مقياس الفلورومتر لمعدل التكرار السريع. ثم انقر فوق الفعل للتشغيل"لبدء القياس وتكرار القياسات أكثر من ثلاث مرات لكل عينة.
اقرأ قيمة F0 من المخطط الناتج. التقط أنواع الكولاسيوم باستخدام كارابيس منصهر باستخدام ماصة تحت المجهر الضوئي عند تكبير 100 مرة واغسلها باستخدام FLW. قم بتلقيح أنواع الكولاسيوم بشكل معقم في وسط AF-6 في أنبوب زجاجي سعة 10 ملليلتر على مقعد نظيف.
حافظ على الثقافة عند درجة حرارة NC2 في غرفة النمو ، وهز الأنبوب الزجاجي بلطف باليد مرة واحدة على الأقل يوميا لمنع استقرار الخلايا. لدراسة آثار أفراد العوالق الحيوانية على الكلوروفيل التألق من أنواع الكولاسيوم ، استخدم البالغين s. mucronata دون أي كائنات حية مرفقة.
لتجنب التألق من محتويات الأمعاء ، تجويع الأفراد في FLW لمدة 90 دقيقة على الأقل. قم بإعداد مقياس فلورومتر معدل تكرار سريع من نوع cuvette. الآن صب 1.5 ملليلتر من عينة فرعية من أنواع الكولاسيوم قبل استزراعها في كوفيت.
ثم انقل العدد المطلوب من أفراد s. mucronata إلى هذه الكوفيت واجعل حجم العينة يصل إلى 2 ملليلتر مع الوسط الذي تمت تصفيته. تأقلم الأفراد تحت الإضاءة المنخفضة عند 20 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة قبل أخذ قياس الفلورومتر بمعدل التكرار السريع.
انقر فوق الفعل للتشغيل"لبدء القياس ، وتكرار القياسات أكثر من ثلاث مرات لكل عينة. اقرأ قيم F0 وFM من المخطط الناتج. لتصحيح التألق الأساسي، قم بتصفية وسط الاستزراع باستخدام مرشح بحجم 0.2 ميكرومتر وقياس التألق.
اطرح F0 من عينة خط الأساس من F0 و FM لأنواع الكولاسيوم أو عدل قيمة التصحيح الفارغة في الإعدادات في علامة تبويب الخيارات.
ثم يغسل s. mucronata باستخدام FLW. نقل ق.
mucronata في 100 ملليلتر من FLW والاحتفاظ بها تحت ظروف مظلمة في درجة حرارة NC2 لمدة 90 دقيقة للمجاعة. صب 1.5 ملليلتر من FLW في كوفيت. نقل حوالي عشرة ثوان.
الأفراد mucronata مع أنواع colacium في cuvette وإضافة FLW لجلب عينة تصل إلى 2 ملليلتر. تأقلم الأفراد تحت الإضاءة المنخفضة في درجة حرارة N2C لمدة 15 دقيقة وقياس الكلوروفيل التألق ، كما هو مذكور في مخطوطة النص. لتعداد عدد الخلايا المرفقة ، قم بإصلاح العينة بنسبة 2٪ glutaraldehyde بعد أخذ قياس الفلورومتر السريع لمعدل التكرار.
ثم التقط صورا على عدة أعماق بؤرية ومواقع s. mucronata تحت المجهر الضوئي. لم يكن هناك تأثير كبير على التألق الأساسي أو الكلوروفيل التألق بواسطة s.
mucronata ما يصل إلى 5 أفراد لكل ملليلتر. ومع ذلك ، تأثرت الكفاءة الكيميائية الضوئية القصوى والتبريد غير الكيميائي الضوئي بشكل كبير عندما كانت كثافة s. mucronata 7.5 فرد لكل ملليلتر.
أظهر التباين الموسمي في الفيزيولوجيا النباتية لأنواع الكولاسيوم خلال مرحلة التعلق ومرحلة العوالق للمرحلة الثابتة في وسط AF-6 متوسطا مماثلا للكفاءة الكيميائية الضوئية القصوى والتبريد غير الكيميائي الضوئي. بالنسبة للمرحلة المرفقة من أنواع الكولاسيوم في ظل الظروف المظلمة ، لم يكن هناك فرق كبير في المعلمات الفسيولوجية الضوئية ، باستثناء أن التبريد غير الكيميائي الضوئي أعلى بالنسبة للمنغنيز من الكالسيوم بعد ثلاث ساعات ، وبكثافة إضاءة منخفضة عند 21 ساعة. بالنسبة لمرحلة العوالق ، كان المقطع العرضي لامتصاص PS2 أقل بكثير في المنغنيز من علاج الكالسيوم في ثلاث ساعات.
كانت الكفاءة الكيميائية الضوئية الفعالة أعلى بكثير ، لكن التبريد غير الكيميائي الضوئي كان أقل في معالجة المنغنيز من التحكم في 21 ساعة. تحت الضوء المتزايد ، يميل المنغنيز إلى تقليل المقطع العرضي لامتصاص PS2 في ثلاث ساعات ، في التبريد غير الكيميائي الضوئي في 21 ساعة ، مع زيادة الكفاءة الكيميائية الضوئية الفعالة في ثلاث ساعات. الكالسيوم تحسن قليلا التبريد غير الكيميائي الضوئي تحت زيادة الضوء.
ومع ذلك ، فقد قلل من الكفاءة الكيميائية الضوئية الفعالة في ثلاث ساعات. الشيء الأكثر أهمية هو تأثير الكائنات الحية الركيزة. إذا كانت الطحالب مرتبطة بأنواع أو مواد مختلفة ، فقد يكون التأثير مختلفا.
بالإضافة إلى هذا البروتوكول ، يعد قياس تثبيت الكربون أو معدلات إنتاج الأكسجين مفيدا لتوضيح استجابة إنتاجية الكالسيوم للتلاعبات التجريبية. يمكننا هذا البروتوكول من توضيح كيفية استجابة نشاط التمثيل الضوئي للطحالب المرفقة للتغيرات البيئية.
