يصف بروتوكولنا تخليق هيدروجيل لاصق جديد ، الجيلاتين o-nitrosobenzaldehyde ، بالتفصيل. انها تحل أساسا مشكلة كيفية تعظيم التصاق هيدروجيل. في تقنيتنا ، يتم تعديل المجموعات الكيميائية في الهيدروجين ، وبالتالي يكون نشاط التفاعل الكيميائي مع المجموعات الكيميائية على سطح الأنسجة الحيوانية لتحقيق الانحناء والاهتمام الوثيق.
يمكن للمنتج الذي تم تصنيعه بواسطة تقنيتنا الحفاظ على اهتمام قوي طويل الأمد على سطح الأنسجة الحيوانية ، وبالتالي تعزيز إصلاح الضرر وتجديد الأنسجة بشكل فعال. يمكن أن توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة للطب التجديدي ، بما في ذلك الأضرار في النظم الحيوية. لقد أبلغنا سابقا عن تطبيق المنتجات التي تم تصنيعها بهذه الطريقة في إصابة القرنية ومرض التهاب الأمعاء.
للبدء ، قم بإذابة المركبات المحضرة كما هو موضح في المخطوطة في 40 ملليلتر من N ، N-dimethylformamide ، وحركها في درجة الحرارة المحيطة لمدة 16 ساعة. ثم أضف 200 ملليلتر من الماء صفر درجة مئوية إلى الخليط وترسيب الخليط للحصول على المنتج الخام. قم بإذابة المنتج الخام بشكل متكرر في N ، N-dimethylformamide ثم ترسب لمدة خمس دورات.
بعد ترسيب المنتج الخام ، جففه عند 80 درجة مئوية لمدة ساعتين للحصول على المنتج المبكر. قم بإجراء استبدال ipso لإستر ميثيل حمض الميثيل 4-بوتانويك بإضافة 9.4 جرام من ميثيل 4-بيوتانوات ببطء إلى محلول ما قبل التبريد من حمض النيتريك 70٪ وحركه عند سالب درجتين مئويتين لمدة ثلاث ساعات. ثم تترسب الخليط.
قم بالتصفية باستخدام 200 ملليلتر من الماء ذي درجة صفر مئوية وقم بتنقيته في N ، N-dimethylformamide لترسيب منتج صلب. تحلل المنتج الصلب في حمض ثلاثي فلورو أسيتيك عند 90 درجة مئوية ووضعه في مبخر دوار قبل تجفيفه في الفرن. بعد إذابة الناتج الوسيط في رباعي هيدروفيوران، أضف 1.43 جرام من بوروهيدريد الصوديوم ببطء عند صفر درجة سلزية.
بعد ثلاث ساعات ، قم بإزالة جميع المذيبات تحت فراغ وقم بتعليق البقايا في محلول ماء واحد إلى واحد / ثنائي كلورو الميثان. تحضير ثنائي كلورو الميثان لاستخراج المنتج من الطبقة المائية أثناء إزالة الطبقة العضوية وتجفيفه فوق كبريتات المغنيسيوم. ثم تنقية المنتج الخام عن طريق كروماتوغرافيا عمود هلام السيليكا باستخدام ميثانول ثنائي كلورو الميثان بنسبة 10: 1.
أخيرا ، احصل على 5.31 جرام من مسحوق مصفر نقي نسبيا NB carboxy. تحضير محلول جيلاتيني متجانس عن طريق إذابة خمسة جرامات من الجيلاتين في 100 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات وتخزينه عند 37 درجة سلزية لدفعة واحدة من التعديل. بعد تحديد نسبة التغذية كما هو موضح في المخطوطة ، قم بإذابة 1،060 ملليغرام من كربوكسي NB في خمسة ملليلتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد.
لتنشيط مجموعات الكربوكسيل من كربوكسي NB ، أضف 746 ملليغرام من 1-3-إيثيل كربوديميد هيدروكلوريد في محلول NB carboxy methylsulfoxide وحركه لمدة خمس دقائق. بعد إذابة 1-3-إيثيل كربوديميد هيدروكلوريد ، أضف 448 ملليغرام من N-hydroxysuccinimide وحركه لمدة خمس دقائق. استخدم قمع إسقاط لإسقاط الخليط ببطء بمعدل 0.5 ملليلتر في الدقيقة في محلول الجيلاتين المذاب مع التقليب القوي للتفاعل عند 45 درجة سلزية لمدة أربع ساعات.
بعد غسيل محلول الجيلاتين NB ضد الماء الزائد منزوع الأيونات لمدة ثلاثة أيام على الأقل ، قم بجمعه وتجميده وتجفيفه بالتجميد للحصول على رغاوي الجيلاتين-NB. احتفظ بالرغاوي في مكان مجفف في الظلام لاستخدامها مرة أخرى. قم بإذابة رغاوي الجيلاتين-NB الجافة المجمدة في ماء منزوع الأيونات عند 37 درجة مئوية قبل الاستخدام مباشرة.
تم الحصول على صور SEM لسطح القرنية المصاب الجيلاتين وطلاء بروتين الجيلاتين-NB-4 سطح القرنية المعالج ، مما يدل على أن مورفولوجيا بروتين الجيلاتين-NB-4 المستقرة تلتصق بسطح القرنية. ومع ذلك ، فإن سطح القرنية المصاب المعالج بأي شيء أو الجيلاتين يبدو أملسا. تظهر الصور الفلورية لسطح القولون للفئران المسمى بالجيلاتين والجيلاتين-NB أن الجيلاتين-NB المسمى بالفلورسنت لديه القدرة على الالتصاق بالأنسجة المعوية وتشكيل طلاء كثيف.
ومع ذلك ، فإن شدة مضان مجموعة الجيلاتين ضعيفة للغاية ، مما يشير إلى أنها تفشل في الالتصاق بقوة بجدار الأمعاء. تظهر الصور الفلورية لملصق الجيلاتين والصفائح الأمينية المعالجة بالطلاء الجزيئي للجيلاتين-NB عند الصفر و 24 ساعة أن كلاهما يمكن أن يلتصق في البداية باللوحة. بعد صب PBS وتغيير اللوحة الأمينية كل أربع ساعات لمدة 24 ساعة ، يحافظ الجيلاتين-NB فقط على مضان قوي ، مما يشير إلى أنه يلتصق بشدة.
أظهر التحليل الطيفي لفوتون الأشعة السينية للترابط الجيلاتين-NB-4 أن أطياف سطح القرنية والسطح المعالج بالجيلاتين متماثلان. ومع ذلك ، تظهر ذروة إضافية عند 400 إلكترون فولت ، مما يشير إلى تكوين العديد من روابط CN في الأنسجة بعد العلاج بالجيلاتين-NB المنشط بالأشعة فوق البنفسجية. أهم شيء يجب تذكره هو أنه عند تجميع الجيلاتين-NB في ظروف تطبيق مختلفة ، من الضروري إعداد تدرج FR قبل التجربة لاستكشاف أفضل تأثير للانتباه.
قد تمهد هذه التقنية الطريق لتطوير الطب الحيوي والتجديدي. يمكن للباحثين الرجوع إلى الفيديو لتعديل المجموعة لتلبية الاحتياجات الطبية الحيوية.
